Las infecciones del tracto digestivo se caracterizan por su gran

uniformidad en cuanto a los sntomas y signos que provocan,

independientemente del agente responsable. Casi siempre se
presentan simultneamente diarrea y/o vmitos as como fiebre.
Con sntomas tan generales el diagnstico etiolgico slo se
alcanza mediante el estudio microbiolgico.
Lo ms importante en el diagnstico de laboratorio es diferenciar
entre infeccin gastrointestinal e intoxicacin. En el primer caso
los microorganismos acceden al hospedador y desarrollan dentro
de l su accin patgena. En las intoxicaciones las responsables
del dao son toxinas preformadas por los patgenos en el exterior
del hospedador y que son ingeridas por este posteriormente. En
las intoxicaciones los sntomas digestivos comienzan muy
rpidamente, casi inmediatamente tras la ingestin. Sin embargo
en las infecciones las bacteria debe fijarse a la mucosa intestinal y
multiplicarse antes de provocar dao tisular, por eso los sntomas
aunque similares se desarrollan ms tarde. El trmino toxinfeccin
alimentaria se refiere a infecciones o intoxicaciones adquiridas en
el alimento o la bebida.

A grandes rasgos los patgenos intestinales se

clasifican segn sus mecanismos de accin:
Microorganismos que producen toxinas que
provocan
diarrea
sin
provocar
inflamacin.
Pertenecen a este grupo Staphyllococcus aureus,
Bacillus cereus, Escherichia coli enterotoxignica,
Vibrio cholerae y Clostridium perfringens. Todas son
capaces de producir toxinas pero slo los dos
primeros pueden hacerlo fuera del hospedador, es
decir provocar intoxicaciones.

Microorganismos que adems de diarrea

inducen inflamacin. Aparecen leucocitos
polimorfonucleares en heces. No producen
toxinas. Los ms importantes son E.coli
enteroinvasiva,
Salmonella,
Shigella,
Campylobacter jejuni y Clostridium difficile.

Microorganismos que perforan y penetran

en la mucosa intestinal produciendo
diarreas
sanguinolentas.
Provocan
reacciones inflamatorias muy fuertes y
fiebre elevada. Es lo que se conoce como
disentera
bacilar.
Cabe
destacar
a
Salmonella typhi y Yersinia.

Los factores que determinan en mayor medida la

gravedad de la infeccin gastrointestinal son la dosis
infectiva y el estado de salud del hospedador. Yersinia
y Shigella pueden producir sntomas con inculos muy
pequeos (102-104 clulas), E.coli y Salmonella sin
embargo requieren 107-108 clulas. El estado de la
flora habitual en el intestino determina tambin el
desarrollo de infecciones. La flora normal compite con
las patgenos y los mantiene en nmero lo
suficientemente bajo como para que no causen
problemas.

Ante

un proceso diarreico lo ms importante es la rehidratacin del paciente. Si el cuadro dura

ms de un da o bien se hace recurrente, es decir aparece y desaparece sucesivamente debe
valorarse el tratamiento antibitico emprico y el diagnstico microbiolgico. En las intoxicaciones
no est indicado el cultivo porque no se encuentra el agente causal. Pueden aplicarse tcnicas de
deteccin de toxinas especificas. Si se trata de infeccin deben investigarse al menos las
etiologas ms frecuentes: Salmonella, Shigella y Campylobacter.
En las heces la flora normal es muy abundante, por tanto la observacin directa no aporta nada.
La muestra se recoge en recipientes con medio de conservacin adecuado para el coprocultivo.
Se siembra una placa general (agar sangre) y placas selectivas y diferenciales. Se utilizan medios
que inhiben la flora gram positiva como el medio CIN para Yersinia y medio especfico para
Campylobacter. Tambin es frecuente el uso de medios lquidos de enriquecimiento para
Salmonella y Shigella. Es el caso del medio de Selenito que evita que queden enmascaradas por
las bacterias saprofitas. Las placas de agar McConkey permiten diferenciar a las enterobacterias
en principio saprofitas de otras especies en principio patgenas como Salmonella , Shigella y
Campylobacter. (las primeras son lactosa positivas y las segundas lactosa negativas).

Bacilo Gram negativo perteneciente al gpo. de las enterobacterias.

Especies como S.enteritidis, S.typhimurium y S.paratyphi son
patgenas para el hombre y provocan salmonelosis, una infeccin
alimentaria. S.typhi es la responsable de las fiebres tifoideas, cuadro
mucho ms grave que el anterior.

La identificacin puede hacerse con pruebas

bioqumicas (la ms significativa es la produccin
de cido sulfhdrico) o mediante la deteccin de
antgenos somticos y flagelares. Existen ms de
2000 serotipos de Salmonella lo que limita la
identificacin
de
antgenos
completa
a
laboratorios especializados.
Las salmonelosis suelen remitir por si solas sin
tratamiento antibitico. Si es necesario se utilizan
quinolonas (ciprofloxacino). La fiebre tifoidea es
ms grave y siempre es candidata a tratamiento
antibitico.

Semeja a la anterior: es inmvil, no produce cido sulfhdrico. Se utilizan

las mismas pruebas bioqumicas que para Salmonella. Existe posibilidad
de detectar antgenos especficos. Es responsable de la shigelosis, cuadro
digestivo con diarrea fiebre elevada y heces mucosas y sanguinolentas.
Especie ms representativa es S.sonnei. Slo si el proceso no remite
espontneamente se recomienda el tratamiento antibitico.

El cuadro que produce se denomina yersiniosis y se caracteriza por los

mismos sntomas que la shigelosis. La especie ms frecuente es
Y.enterocolitica. mvil cuando se incuba a 22C e inmvil a 37C. La nica
enterobacteria capaz de crecer a 4C. Suele identificarse por pruebas
bioqumicas. Se han desarrollado medios selectivos para Yersinia que
facilitan su aislamiento. Como tratamiento puede usarse una cefalosporina
aunque en la practica se emplea mucho ms las quinolonas porque
constituyen el tratamiento de eleccin de casi todas las diarreas
independientemente de la etiologa.

Es un bacilo gram negativo mvil a travs de flagelo polar. El gnero Vibrio

se caracteriza por fermentar la glucosa como las enterobacterias aunque a
diferencia de estas es oxidasa positivo. Producen infecciones intestinales
V.cholerae y V.parahaemolyticus. El primero es responsable del clera, un
cuadro muy grave de diarrea severa con deshidratacin y prdida de
electrolitos. La toxina colrica provoca la secrecin masiva de agua y sales
a la luz intestinal. Se forman heces muy acuosas y puede llegar a ser
mortal. El clera es endmica en Asia.

El aislamiento de estas bacterias suele requerir medios

de enriquecimiento y medios selectivos. El medio TCBS
es especfico para Vibrio e incluso puede distinguir las
dos especies patgenas. La identificacin bioqumica
incluye la reduccin de nitratos y el crecimiento en
medios con alta concentracin salina. La identificacin
a travs de antgenos permite caracterizar las cepas
en serotipos asociados a mayor o menor grado de
virulencia. El serotipo 01 de V.cholerae es el ms
virulento y causa la mayora de los brotes epidmicos
de clera.
Esta establecida la utilizacin de ampicilina como
tratamiento antibitico.

Bacilo gram negativo curvado , casi espirilo, con caracterstica forma de ese
en la tincin de gram. Es muy mvil y crece mal in vitro. Necesita para crecer
una atmsfera microaerfila, es decir con poco oxgeno y mucho CO2. La
especie ms patgena es C.jejuni que produce cuadros de diarrea sin
ninguna caracterstica especial. Es muy habitual aunque su frecuencia est
infravalorada debido a su dificultad para crecer en medios artificiales de
cultivo.
El cultivo requiere siempre de medios de enriquecimiento seguidos de
medios especficos muy selectivos. Forma colonias pequeas y traslcidas
tras varios das de incubacin. Si las colonias que crecen en los medios
selectivos tienen el gram caracterstico se consideran como Campylobacter
sp sin necesidad de ninguna otra prueba. Para alcanzar un diagnstico a nivel
de especie se necesita acudir a galeras especializadas de identificacin. Se
han comercializado sondas para la identificacin rpida de C.jejuni.
El tratamiento de eleccin adems de la rehidratacin como siempre, es la
eritromicina. Campylobacter es uno de los pocos grmenes intestinales con

Es un bacilo gram positivo grande y grueso. En la tincin de gram tiene

forma de caja. Es capaz de formar esporas subterminales y deformantes y
se comporta como anaerobio estricto, aunque a veces puede sobrevivir en
microaerofilia. Las esporas de resistencia soportan el oxgeno. Es el
responsable de la colitis pseudomembranosa, que se caracteriza por diarrea
con presencia de placas mucosas en el colon.
Pertenece a la flora normal y produce infecciones cuando el resto de las
bacterias habituales son eliminadas por un tratamiento prolongado con
antibiticos orales. La patogeneicidad se debe a la produccin de toxina que
lisa enterocitos produciendo necrosis y hemorragias.

l transporte de la muestra y los cultivos deben realizarse en

anaerobiosis. Puede realizarse pretratamiento de la muestra con
etanol o calor para eliminar el resto de flora normal. (C.difficile
resiste por estar esporulado). Pueden tambin usarse medios
selectivos como el medio EYFA con yema de huevo en el que
esta bacteria forma colonias amarillas. Las pruebas de la
lecitinasa y la lipasa se emplean mucho en la identificacin a
nivel de especie dentro de este gnero. C.difficile ofrece
resultado negativo en ambas. A efectos de diagnstico es ms
prctico y sensible detectar la toxina que el patgeno es si.
Existen para ello varios kits ya comercializados.
En la colitis psuedomembranosa el tratamiento principal es
eliminar si es posible los antibiticos de tipo cefalosporinas y
vancomicina para restaurar la flora normal. C.difficile puede
tratarse con metronidazol.

Bacillus cereus
Morfolgicamente muy similar al anterior. La
diferencia principal es su carcter aerobio.
Tambin forma esporas y es responsable de
intoxicaciones alimentarias debido a la
ingestin de toxina. Es relativamente
frecuente en el arroz. No suele hacerse
diagnstico de laboratorio porque el patgeno
no se encuentra dentro del hospedador. Si
puede buscarse en el alimento si se sospecha
el reservorio.

Est muy relacionado con Campylobacter. Se parecen mucho morfolgica

y bioqumicamente. Vive en el estmago y se relaciona con lcera
gstrica. Posee una potente actividad ureasa que le ayuda a soportar la
intensa acidez de su hbitat.
Puede diagnosticarse mediante una tcnica que utiliza urea marcada
radioactivamente conocida como prueba del aliento. Tambin puede
cultivarse aunque la nica muestra vlida es la biopsia gstrica. El medio
Skirrow, muy parecido a los utilizados para Campylobacter, es selectivo
para Helicobacter. Es menos exigente en sus necesidades nutricionales y
crece bien en las placas de cultivo, sin embargo dada la dificultad en la
obtencin de la muestra idnea su aislamiento es poco frecuente

El tratamiento antibitico frente a esta bacteria incluye

siempre dos o tres frmacos, entre los que se encuentran
ampicilina y tetraciclina. Recientemente se han descrito
casos de imposibilidad de erradicacin de Helicobacter de
la mucosa gstrica y se sospecha la implicacin de
mecanismos de resistencia antimicrobiana.
Muchas otras bacterias se han descrito como responsables
de infecciones gastrointestinales, aunque con menor
frecuencia. Entre ellas se encuentran residentes
habituales del tracto digestivo como diversos serotipos de
Escherichia coli, y bacterias que acceden a l de manera
accidental como Aeromonas y Plesiomonas, (bacilos gram
negativos relacionados filogenticamente con el gnero
Vibrio).

Contacto: Puede ser directo persona-persona o bien

persona-animal y tambin indirecto a travs de
gotculas.
Vehculo inanimado: Los microorganismos acceden
al cuerpo a travs del agua, suelo o alimentos.
Vectores: Son organismos que funcionan como
intermediarios entre el reservorio y el hospedador
definitivo. Son hospedadores intermediarios porque
no sufren la enfermedad pero son imprescindibles
en el ciclo vital del microorganismo patgeno.

Tcnicas directas de diagnstico

microbiolgico
El diagnstico microbiolgico directo
consiste en poner de manifiesto la
presencia de patgenos en las muestras
clnicas responsables de las lesiones en los
pacientes infectados. En trminos generales
puede realizarse de cuatro formas
diferentes:

Cultivo en medios adecuados e identificacin del agente causal.

Visualizacin directa del patgeno en el caso de organismos macroscpicos (tenias y
tremtodos) o mediante microscopa para microorganismos.
Deteccin de antgenos especficos del patgeno. Requiere la utilizacin de tcnicas
inmunolgicas y/o de biologa molecular.
Deteccin de secuencias especficas en los cidos nucleicos del patgeno. Pueden
realizarse sondas de ADN/ARN o bien aplicar tcnicas de amplificacin gnica.
La visualizacin del microorganismo y el cultivo son en general las tcnicas ms
utilizadas en el diagnstico microbiolgico. Son ms fciles de realizar, requieren
menor infraestructura y son ms baratas. Sin embargo algunos microorganismos no
pueden ser observados al microscopio y otros no crecen en los medios de cultivo, por
lo que se hace necesario acudir a tcnicas moleculares de diagnstico o bien al
diagnstico indirecto.
Las tcnicas moleculares aunque ms complicadas ofrecen una capacidad de
discriminacin mucho mayor y son de utilidad en la precisin del diagnstico cuando
la visualizacin y el cultivo no son suficientemente resolutivos. Si es posible, el
diagnstico a travs de cultivo es el ms deseable porque permite recuperar las
cepas viables para su estudio en trminos de resistencia o con fines epidemiolgicos.
En la deteccin de antgenos y de cidos nucleicos no es posible recuperar la cepa.
No obstante alcanzan un diagnstico preciso cuando el patgeno no crece en el
cultivo o se encuentra en concentraciones muy bajas. Es su principal ventaja. Otra
virtud de estas tcnicas es su rapidez. Presentan un tiempo de respuesta mucho
menor porque no necesitan que crezca el patgeno. Considerando que del
diagnstico puede depender la curacin del paciente la premura es fundamental.

La aplicacin de unas u otras tcnicas de diagnstico directo

depender del tipo de infeccin, del agente implicado y sobre todo
de los medios materiales de que se disponga. Desgraciadamente
los mtodos moleculares no estn al alcance de muchos
laboratorios de microbiologa. Por tanto se tiene a utilizar
microscopa y cultivo para el grueso de las determinaciones,
reservando la biologa molecular para microorganismos no
cultivables o con dificultades de recuperacin. No obstante cada
vez son ms los sistemas validados de identificacin microbiana
basados en tcnicas moleculares, especialmente los que utilizan la
reaccin de PCR por su gran versatilidad.

La visualizacin de los microorganismos es el camino de diagnstico microbiolgico

ms evidente. Desgraciadamente el pequeo tamao de los patgenos y su enorme
homologa estructural generan complicaciones. Para paliar el problema del tamao
se utilizan sistemas de ampliacin de imagen, lupas y microscopios. Las tinciones
diferenciales y las especficas de determinadas estructuras bacterianas nos ayudan a
discriminar siquiera someramente entre unos grupos bacterianos y otros.
Normalmente la visualizacin microscpica de los microorganismos slo nos orienta
en la identificacin. nicamente en casos muy puntuales la deteccin de estructuras
completamente especficas puede ofrecer un diagnstico definitivo.
Las bacterias tienen un tamao medio de un micrmetro (10-6 metros). Las
levaduras son unas tres o cuatro veces mayores. Los virus son mucho ms pequeos,
se mueven en el orden de 20 a 250 nanmetros (10-9 metros). Los parsitos tienen
una variabilidad enorme de tallas; los protozoos son los ms pequeos y tienen el
tamao aproximado de una clula eucariota (10-20 micrmetros). Las tenias son las
ms grandes y pueden alcanzar varios metros de longitud.
Exceptuando tenias y trematodos la visualizacin de patgenos requiere tcnicas de
ampliacin de la imagen. Los microscopios pticos ofrecen hasta 100 aumentos, y
permiten ver bacterias, hongos y protozoos. Para ver virus es necesaria una
resolucin mucho mayor que slo alcanza el microscopio electrnico.

Las tcnicas de identificacin fenotpicas se basan

en la observacin de la apariencia microscpica y
macroscpica de las microorganismos, as como
en la composicin bioqumica, requerimientos
nutricionales y resistencia antibitica de los
microorganismos. Son las tcnicas clsicas de
identificacin. Por separado cada una de ellas no
ofrece un diagnstico definitivo, por eso suele ser
necesario combinar todas ellas para llegar a
resultados suficientemente precisos.

Mtodos de identificacin. Criterios genotpicos

Los mtodos genotpicos de identificacin se basan en el estudio
del material gentico de los microorganismos, no en sus
caractersticas externas. Aunque en general son ms complicados,
los mtodos genotpicos permiten solventar limitaciones de las
tcnicas fenotpicas:
Microorganismos que no crecen en el cultivo.
Microorganismos que no son viables fuera del cuerpo humano y
por tanto tampoco pueden cultivarse.
Microorganismos que crecen tan despacio que provocan enormes
retrasos en el diagnstico.
Microorganismos para los que no existe suficiente experiencia
previa que establezca criterios fenotpicos de identificacin.
En ocasiones el diagnstico fenotpico puede suponer grandes
gastos de tiempo y dinero que hacen que el proceso no sea costeefectivo.
Hasta hace unos aos estas limitaciones hacan a veces imposible
el diagnstico microbiolgico. Sin embargo el desarrollo de
tcnicas de biologa molecular abri el camino de nuevas
estrategias en la microbiologa clnica.

Todos los organismos vivos se caracterizan por su

material gentico. El ADN o ARN que contienen sus
clulas posee secuencias que caracterizan cada
especie. En consecuencia no existe mejor sistema de
diagnstico que la deteccin de esas secuencias
especficas. Muchas de estas tcnicas son complicadas
y costosas y por tanto estn menos implantadas en los
laboratorios. No obstante cada vez es mayor la
comercializacin de kits de diagnstico asequibles a
laboratorios con poca dotacin en infraestructura y
personal entrenado.

GRACIAS