UNIVERSIDAD SAN PEDRO

DOCENTE:
DEYBIS TORRES

INTEGRANTES:
CHIROQUE JUAREZ ERIKA PAOLA
HUANCAS VANESA
TUME TUME JUNIORS
VILLEGAS ANDRADE CINDY

PIURA-PERU
2015

Objetivo
Establecer conceptos, fundamentos y clasificacin
de cromatografa.
Establecer a la cromatografa en columna en una
de ellas.
Diferenciar sus clasificaciones y entender claramente
el porqu y para que se utiliza este mtodo de
separacin de mezclas complejas,
Establecer ventajas y desventajas al utilizar este
mtodo de separacin.

Cromatografa en Columna

Definicin:
Tcnica de separacin que se
lleva a cabo en una columna
empacada (gel de slice o
almina) y con un soporte.

Cromatografa en Columna
Fase estacionaria:
Silica gel (polar)

Carbonato de calcio
Almidn
Almina (polar)

Tamao
40 - 63 m.
63 200 m.

Dimetro:
5 - 50 mm
Longitud:
5 cm 1 m

Cromatografa en Columna
Fase mvil: Solventes utilizados en cromatografa en
capa fina, funcionan adecuadamente.
Pentano
ter de petrleo
Hexano
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Tolueno
Xileno
Benceno
Cloroformo
Acetona
Acetato de etilo
Acetonitrilo
Iso-propanol
Eetanol Rubinson & Rubison Qumica Analtica Contempornea
Agua

REACTIVOS Y MATERIALES
Eluyente:
destilada

etanol 96% ,Agua

Absorvente:

Alumina activada

Muestra:
anaranjado

Disolucion de etanol de
de metilo y azul de

metileno.

MATERIALES

SOPORTE
COLUMNA DE VIDRIO CON LLAVE
VASO DE PRECIPITADOS
VARILLA
PINZAS
MATRAZ ERLENMEYER
PIPETA PASTEUR
PROBETA
LANA DE VIDRIO
TAPON ESMERILADO HEMBRA

En este tipo de cromatografa la

silicagel se introduce en el interior
de una pieza de vidrio denominada
columna de cromatografa.
Una columna de cromatografa
consta de un tubo de vidrio que
termina en una llave.
El tubo de vidrio puede ser de
diversos grosores (habitualmente
entre 1 y 10 cm) en funcin de la
cantidad
de
silicagel
que
querramos introducir.

Entre el final del tubo y la llave suelen estar

equipadas con una placa filtrante o en su defecto
se coloca un algodn que permita retener el gel
de slice que se introduce por la parte superior de
la columna.
En la parte de arriba del tubo de vidrio se suele
soldar un esmerilado hembra, imprescindible si
queremos acelerar la elucin utilizando aire a
presin.

Fases del procedimiento experimental para realizar una

separacin por cromatografa en columna

Primera fase:
Consiste en la preparacin del lecho
de silicagel
Para ello, se prepara una suspensin
de
silicagel
y
eluyente
lo
suficientemente fluida para que
pueda ser depositada con facilidad
en el interior de la columna por la
parte superior de la misma.
A continuacin se pasa eluyente
hasta que el lecho de gel de slice
quede perfectamente compactado.

Segunda fase:
Introduccin completa de la
muestra en el interior del
lecho de gel de slice
El procedimiento estndar
consiste
en
disolver
la
muestra
en
la
mnima
cantidad posible de eluyente y
aadir la disolucin resultante
con sumo cuidado por la parte
superior de la columna con el
objeto de no distorsionar la
planaridad
del
lecho
de
silicagel.

Tercera fase:
Se procede a efectuar la elucin de
la columna.
Para ello se llena con eluyente la
parte del tubo situado por encima
del lecho de silicagel, se abre la
llave inferior y el eluyente se va
recogiendo en varios erlenmeyers.

Durante
la
elucin,
los
componentes de la mezcla se van
desplazando a velocidades distintas
por el interior del lecho de silicagel
y
se
intenta
recogerlos
en
fracciones separadas a medida que

Los compuestos menos polares

se retienen menos y son los
primeros en eluir; mientras que
los ms polares quedan ms
retenidos
en
la
fase
estacionaria, su avance a lo
largo del lecho de silicagel es
ms lento y eluyen ms tarde.
En algunos casos, es necesario
incrementar la polaridad del
eluyente para lograr la elucin
total de los compuestos ms
polares, lo que se denomina
elucin en gradiente.

La elucin de la columna
puede realizarse a presin
atmosfrica (por gravedad) o
a presiones ms elevadas, lo
que
se
denomina
cromatografa tipo flash,
en cuyo caso se conecta la
columna cromatogrfica a
una
fuente
de
aire
comprimido a travs del
esmerilado superior.
La cromatografa de tipo
flash utiliza gel de slice de
tamao de partcula inferior,
lo
que
da
lugar
a
separaciones ms eficaces.

Por norma general, una

columna de cromatografa se
rellena con gel de slice
hasta alcanzar una altura de
unos 20 cm por trmino
medio.
La altura del lecho de gel
de slice se suele
incrementar si los valores de
Rf de los compuestos a
separar son muy prximos
(Rf relativos inferiores a 0,2).
El dimetro de la columna a
elegir est relacionado con la
cantidad de muestra a

A mayor cantidad de muestra mayor cantidad de

gel de slice hay que introducir en la columna
para no perder eficacia en la separacin; lo que
obliga a utilizar columnas de mayor dimetro.
Por norma general, se suele introducir en la
columna unos 30 gramos de silicagel por cada
gramo de muestra a separar