ENZIMAS

CATALIZADORES BIOLGICOS QUE:

Velocidades de reaccin 106-1012 > que las reacciones no
catalizadas y varios rdenes de magnitud ms que la catlsis
qumica.
Requieren condiciones de reaccin suaves:
<100C, P atm, pH (+/-) neutro
ESPECIFICIDAD: no hay productos secundarios
Mecanismos de regulacin:
Alosterismo, modificacin covalente, cantidad de enzima

Enzimas : Catalizadores biolgicos

Disminuyen energa de activacin e incrementan la velocidad de
reaccin

Catalasa.
2H2O2 -> 2H2O + O2
Una molcula de catalasa rompe 40
millones molculas de perxido por
segundo.

Factores que influyen en la actividad enzimtica

Concentracin de sustrato [S]

Temperatura
Inhibidores
Competitivos: unen mismo sitio de l sustrato
No competitivos: unen sitio diferente pero disminuyen
capacidad cataltica
pH. Afecta conformacin

Actividad enzimtica

Estructura terciaria: fuerzas no covalentes

pH
Cambios en pH alteran el
estado de ionizacin de aa
cargados (e.g., Asp, Lys):
unin a sustrato o accin
cataltica

Temperatura C
Puentes de hidrgeno se rompen por
incrementos de temperatura
: altera la conformacin 3D

Estereoespecificidad: proteasas: L-aa

D-glucosa
Especificidad geomtrica: pocos compuestos
relacionados

PRINCIPALES REACCIONES DE LAS ENZIMAS

COFACTORES ENZIMTICOS
NO PROTICOS

Pueden ser:
Iones metlicos : Zn2+,Cu2+, Mn2+, K+, Na+ , Ca+2
Molculas orgnicas pequeas:coenzimas.
tiamina (B1)
Tiaminpirofosfato (transf. Aldehdo)
riboflavina (B2)
FAD (transf. H+)
Nicotinamida
NAD (transf. H+)
CoA
Acarrea acilo
Coenzimas se unen covalentemente a la apoenzima:
Grupo prosttico
Otras slo transitoriamente durante la catlisis

CINTICA ENZIMTICA

Estudio de las velocidades a las que ocurren las reacciones

Permite dilucidar Mecanismos de reaccin

Se pueden conocer:
Afinidades de unin a sustratos e inhibidores
Mxima velocidad cataltica
Mecanismo cataltico
Papel de una enzima en la va
Velocidad a cantidad de enzima: condiciones de
Medicin de las enzimas para BQ y Anlisis clnicos

ECUACIONES DE VELOCIDAD
REACCIONES ELEMENTALES

A
A

P
I1

I2

INTERMEDIARIOS

A TEMPERATURA CONSTANTE:
LA VELOCIDAD DE REACCIN VARA CON LA
CONCENTRACIN DE LOS REACTIVOS
aA + bB + cC + ...+ nN

La velocidad es proporcional a la frecuencia de

Choques simultneos entre los reactivos
Velocidad = K[A]a [B]b [C]c... [N]n
Cte. Proporcionalidad
Cte. De velocidad

ORDEN DE LA REACCIN
EXPONENTES DE LA EC. DE VELOCIDAD
Velocidad = K[A]a [B]b [C]c... [N]n
(a+b+c...+n)
Para

A
P
Orden = molecularidad=

#molculas que deben chocar simultneame

Reaccin de primer orden
Unimolecular

Para

2A

o A+B

Reaccin de segundo orden

Bimolecular
3er. Raro

4??????!!!!!

Para determinar orden de la reaccin se mid

[A] o [P] en f (tiempo)
velocidad= -d[A]/dt = dP/dt

ECUACIN DE MICHAELIS- MENTEN

1902: ADRIAN BROWN :
SACAROSA + H2O

GLUCOSA+ FRUCTOSA
INVERTASA

CUANDO SACAROSA>>>ENZIMA
REACCIN INDEPENDIENTE DE SACAROSA:
ORDEN CERO

k1

Sk

-1

k2

ES

COMPLEJO
ENZIMA-SUSTRATO

k1
k-1

k2

ES

Cuando [S] es
suficientemente
alta para que toda E

Se vuelve el paso
limitante

Insensible a ms adicin de [S]

V= d[P]/ dt= k2[ES]
d[ES]/dt= k1[E][S]-k-1[ES]-k2[ES]
No es integrable!!!!!!!!!!

Sustrato est en exceso

constante

Briggs y Haldane 1925

V= d[P]/ dt= k2[ES]

d[ES]/dt= k1[E][S]-k-1[ES]-k2[ES]
d[ES]/dt=0 edo estacionario

[E] T= [E] +[ES

No medibles

[ES]= [E]T[S] / KM + [S]

Donde KM = (k-1 + k2)/ k1= cte. de Micha

Entonces:
Vo= (d[P]/dt)t=0 = k2[ES]= k2 [E]T [S] / KM + [S]
medibles

Porqu considerar nicamente tiempos iniciales?

Vo: minimiza efectos de reversibilidad
inhibicin por producto
inactivacin enzimtica
Vmax: ocurre a alta [S]: enzima est saturada: [ES]
0
[E]T=[E]+[ES]
Vo=k2[ES]
Vmax= k2[E]T

Si

Vo= k2 [E]T [S] / KM + [S]

Vmax= k2[E]T

Vo= Vmax [S] / KM + [S]

ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN

HIPERBOLA
RECTANGULAR

=CTE. MICHAELIS

Cuando [S]=KM
Vo= Vmax / 2

KM = [S] a la que la velocidad de reaccin

Es la mitad de la velocidad mxima

KM = [S] a la que la velocidad de reaccin

Es la mitad de la velocidad mxima
Si KM es pequea: requiero poco sustrato
para alcanzar la mitad de Vmax:
Se logra mxima eficiencia cataltica a baja [S]
KM depende de cada enzima
sustrato
temperatura y pH

k1
k-1

k2

ES

KM = (k-1 + k2)/ k1

KM = (k-1 / k1)+ (k2 / k1)

Cte. de Disociacin de [ES] = Ks

Ks= 1 / 0.1 = 10

Ks= 1 /10 = 0.1

[E] + [S]

[E] + [S]

[ES]

>disociacin < afinidad X S

[ES]

<disociacin >afinidad X S

KM = (k-1 + k2)/ k1
KM = Ks +(k2 / k1)
Si es pequeo
predomina Ks
KM es una medida de afinidad

Clculo de parmetros
Poco preciso
Lineweaver-Burk
Ec. Doble recprocos

Vo= Vmax [S] / KM + [S]

1
KM
1
1
Vo= Vmax [S] + Vmax

ECUACIN DE
MICHAELIS-MENTEN

ECUACIN DE
LineweaverBurk

1
KM
1
1
Vo= Vmax [S] + Vmax
Y=

x +

b
=m

=b