Tema 14

Citogentica
Estudio del cariotipo humano.
Descripcin y metodologa.
Criterios de clasificacin.
Tcnicas de bandeo.
Hibridacin in situ (FISH)
-Tipos de sondas
- Multifish (SKY), (CGH).

Citogentica humana
Estudia el conjunto de cromosomas de un individuo
Cromosomas metafsicos

1956 Tjio y Levan Demuestran que el

ncleo de las clulas humanas hay 46
cromosomas
1959 Lejeune & cols Asocian una
alteracin cromosmica con un Sndrome
clnico: Trisoma 21- Sndrome de Down
Desde entonces se han descrito muchas
alteraciones cromosmicas como
responsables de la etiologa de muchos
sndromes polimalformativos

Cromosomas metafsicos
Son cromosomas formados por dos cromtidas
hermanas = dos molculas de ADN idnticas

Pedculos

Cromosoma metafsico

Cromtida

Centrmero
Microscopia
electrnica de
barrido

Cariotipo: conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie.

Cariotipo humano
46 cromosomas
23 pares de homlogos

22 pares de autosomas
1 par de gonosomas
24 tipos cromosmicos

24 tipos cromosmicos
Se clasifican de mayor a
menor tamao y segn su
morfologa en 8 grupos

Cada cromosomas metafsico esta formado

por dos cromtidas hermanas y equivale a dos
molculas de ADN idnticas asociadas a
protenas
Cada cromosoma interfsico equivale a
una molcula de ADN asociada a
protenas

Las molculas de ADN de los

cromosomas tienen entre 50 y 250 Mb

Un gen tiene entre 15 Kb y 2000 Kb

la media es 28 Kb

Metodologa citogentica
Linfocitos de sangre
perifrica
Mdula sea
Lquido amnitico
Vellosidades coriales
Piel

Material

Mtodo

Directo:
Indirecto: cultivo antes
del procesamiento

Procesamiento

Fotografa
Cariotipo
Tincin
Sembrar en 125
ml de RPMI +
fitohemaglutinina

Incubar a 37 C
durante 3 das

Aadir colchicina

Solucin
hipotnica
salina
ClK 0,075M

Dispersin celular
sobre un portaobjetos
por goteo

Fijacin de
las clulas
Carnoy

Criterios de clasificacin
Denver 1960

-Tamao
-Posicin del centrmero
-Presencia o ausencia de satlites

Pars 1971
-Patrn especfico
de bandas

Bandas Q:
(Casperson y cols., 1970)

Tratamiento con Quinacrina

Regiones ricas en AT, cromosoma Y

Bandas G:
(Seabright, 1971)

Tratamiento con tripsina + Giemsa

Regiones ricas en AT (bandas oscuras)

Patrn de
Bandas Q y G
(1971)

Idiograma con bandas G

Frmula cromosmica: 46, XY

Bandas R:
(Dutrillaux y Lejeune, 1971)

Patrn reverso al de bandas Q y G

Regiones ricas en CG (bandas oscuras)

Par 3

Par 16

Bandas:

(Reverso)

Bandas C:
(Arrighi y Hsu, 1971)

Heterocromatina constitutiva

Bandas C

Patrn de
Bandas C
(1971)

Idiograma con bandas C

Frmula cromosmica: 47, XY, +13

Limitaciones de la Citogentica Convencional :

Requiere metafases
No siempre la calidad de las metafases es optima

Resolucin limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb )

Alternativa : Citogentica Molecular

1. FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)
Requiere saber lo que se busca
Tener la sonda adecuada
2. Otras tcnicas:
Requieren equipos muy sofisticados y apoyo
informtico
SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish)
CGH (Hibridacin Genmica Comparada)

FISH (Hibridacin in situ con fluorescencia)

Se puede realizar en
ncleos interfsicos o
en divisin
Se suelen utilizar
simultneamente
distintas sondas,
marcadas con
flurorocromos de
diferentes colores :
Rojo: rodamina
Verde: fluorescena
Azul: dapi

Tipos de sondas

Especificas de regiones: Sondas telomricas

Sondas centromricas
Especificas de cromosomas: Pintados cromosmicos
Especificas de secuencia: Sondas nicas, Sondas gnicas

Sondas telomricas
Especificas de regiones

Sondas centromricas
Repeticiones Alfoides:
(secuencias repetidas del
centrmero que son
especficas de cromosomas)
tiles para localizar
cromosomas concretos

Centrmero del
cromosoma 21

Pintados
cromosmicos
Especificas de cromosomas

Pintan completamente el
cromosoma elegido
tiles en la deteccin
de reorganizaciones
cromosmicas

t (2;8)
cromosoma 8 rosa
cromosoma 2 verde

Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas

pintado del cromosoma Y

en rosa, el resto con dapi

Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas

Pintado del
cromosoma X

Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas

cromosoma X rosa
cromosoma Y verde

Pintados cromosmicos
Especificas de cromosomas

Pintado del
cromosoma 22

Sondas especficas
de secuencia
Dirigidas a una regin
concreta

tiles para detectar

sndromes por
microdeleccin

7q11.23 rojo, centrmero

cromosoma 7 verde
Sndrome de Williams
(del 7q11.23)

Cariotipo Espectral Multicolor (SKY)

Hibridacin in situ con sondas especficas de

cada cromosoma (El aparato es capaz de
diferenciar 24 colores).
Identificacin unvoca del material cromosmico
reordenado en translocaciones y marcadores
complejos

Hibridacin Genmica Comparada (CGH)

Deteccin de prdidas y ganancias genmicas por

hibridacin competitiva de ADN tumoral y normal de
referencia

Utilidad clnica de la citogentica

Uno de cada 150 o 160 recin nacidos
tiene una anomala cromosmica
Al menos el 50% de los abortos
espontneos durante el primer trimestre
tiene una anomala cromosmica
Aproximadamente el 2% de los
embarazos en mujeres de ms de 35
aos tiene una anomala cromosmica