UNIVERSIDAD AUTNOMA DE

TLAXCALA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
MUESTRAS Y EXAMENES PARA IDENTIFICACIN DE PARSITOS

MCB S. ROSALA CRUZ LUMBRERAS

MARZO 2008

Generalidades de parasitologa
Parasitologa:

Dependencia de los seres vivos

Organismos que pueden vivir sobre seres humanos:

bacterias, virus, hongos y parsitos
Parasitologa mdica: Protozoos y metazoos que
afectan al hombre
Problemas de Salud pblica

Conocimiento global

Protozoarios de inters mdico

(Unicelulares)

Sarcodinos:

Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar

Blastocistis hominis

Mastigoforos, flagelados: Tisulares - Trypanosoma, Leishmanias

Luminales - Guiardia intestinales, Trichomonas
Chilomastix, Retortamonas
Dientamoeba fragilis

Apicomplexa:

Coccidios no intest Plasmodium

Toxoplasma gondii
Coccidios intestinales - Isospora belli, Sarcocystis,
Cryptosporidium parvum

Ciliophora:

Balantidium coli

CV: Trofozoitos (T) Quiste (Q), R: Sexual/Asexual, Criterios de

clasificacin

Helmintos
( Pluricelulares)

Nematelmintos: Trichuris trichiura, Trichinella spiralis, E. vermicularis

A. lumbricoides, Toxocara canis, Strongiloides stercoralis
Necator americanus, Ancylostoma duodenale
Platelmintos:

Cestodos intestinales
Taenia solium, Taenia saginata, Echinococcus granulosus
Trematodos
Fasciola heptica, Schistosoma

Filarias:

Linfticas
Wucheria bancrofti, Bruga malayi, Brugia timori
Cutaneas/ subcutaneas
Onchocerca volvulus, Loa loa, Mansonella streptocerca
Cavidades y tejidos profundos
Mansonella perstans, M ozzari

Asociaciones entre los seres vivos

INQUILINISMO: cuando un ser se aloja en otro (husped) sin daarlo y sin

depender de l para alimentarse al que no le ofrece ningn beneficio.

COMENSALISMO: asociacin de dos organismos de diferentes especies y solo

una de las dos obtiene beneficio y ninguna sufre dao;
ej: Entamoeba coli y el hombre.

MUTUALISMO: Ambos reciben beneficio sin que tenga dependencia necesaria

para su existencia; ej: anmonas de mar y glifidodones (pez payaso).

SIMBIOSIS: existe dependencia necesaria para la supervivencia; ej:

hipermastiginos (protozoos flagelados) y termitas.

PARASITISMO: cuando un ser vivo (parsito) se aloja en otro de especie

diferente (huesped) del cual se alimenta.

HIPERPARASITISMO: Un parsito infecta a otro; bacterias patgenas.

Diagnstico de las enfermedades

parasitarias

Manifestaciones clnicas

Eosinofilia perifrica

Antecedentes de la historia clnica

Ciclos biolgicos y las caractersticas morfolgicas

Interpretacin correcta

Entamoeba histolytica

Balantidium coli

Diagnstico en el laboratorio

Proceso en laboratorio: preciso, sensible y reproducible

morfologa general macroscpica y microscpica

Comunicacin Mdico-Laboratorio

Interpretacin correcta

Mtodos de alternativos de Dx

Mtodos de laboratorio para el Dx de

parasitosis

Examen parasitoscpico y coproparasitoscpico (CPS)

Examen macroscpico (heces): aspecto, color, consistencia

Examen microscpico:

Serologa:

Sondas de cido nucleico

Cultivo

Inoculacin en animales

Xenodiagnstico

Preparacin directa o en fresco

Tincin permanente
Concentrado de heces

Respuesta de anticuerpos
Deteccin de antgenos

Obtencin, manejo y conservacin de

las muestras

Materia fecal
Recoleccin: expulsin natural, purgantes y por
cucharilla rectal
Consistencia: slidas, semislidas y lquidas
Manejo: cantidad y recipiente adecuado
Conservacin: formol 10%, APV, MIF y PAF, Temp 4 C

Orina, exudados vaginal y uretral

Sedimento urinario
Hisopo en SSI
Cepillado uretral

 Esputo
Recoleccin: espectoracin provocada
Broncoscopa
Lavado bronquial
Manejo: recipiente limpio

Sangre: Frote sanguneo, gota grueza

Recoleccin: puncin endovenosa
Manejo: tubos con anticoagulante y s/a
Conservacin: azida de sodio 0.1%

Tejidos
Recoleccin: Biopsias, extirpaciones y necropcias
Manejo: recipientes adecuados
Conservacin: formaldehido 10%

Parsitos

Paciente
Formol o alcohol

Soluciones Conservadoras

Solucin de lugol

MIF
PAF
PVA

Solucin lugol

5 ml formaldehdo
50 ml de agua destilada
40 ml timerosal
1 ml de glicerina
Frasco color mbar

SOLUCIN / FIJADOR MIF

Merthiolate-Yodo-Formol

Formalina 37%

Solucin lugol

Timerosal
Mezclar: 15ml formaldehido + 1ml lugol + 7,5 ml timerosal.

Poner 1 o 2 gotas de MIF en porta y agregar heces (2mg),

poner cubre y observar a microscopio.

SOLUCIN / FIJADOR PAF

Fenol-Alcohol-Formol

SHAUDINN.
4.5G DE BICLORURO DE MERCURIO
ALCOHOL ETILICO AL 95%
ACIDO ACETICO

SOLUCIN / FIJADOR PVA

Alcohol de Polivinilo
Cristales de cloruro de mercurio (HgCl2)
Alcohol etlico al 95%
cido actico glacial
Glicerina

Parsitos intestinales: trofozoitos !

Fija proporcin: 3 partes de PVA y 1 parte de heces

Recomendaciones

Es importante respetar el tamao indicado de las muestras, dado

que la cantidad total no debe sobrepasar la mitad del recipiente,
porque de lo contrario se invalida el estudio

Evitar comer manteca, frutas de hollejo, verduras de hoja y

legumbres durante los tres das previos a la recoleccin y hasta
finalizar la misma

Evitar la contaminacin con orina y/o agua del inodoro, tierra

No tomar purgantes oleosos, antiparasitarios o compuestos con

bismuto, bario o carbn 72 horas antes de comenzar la recoleccin
de materia fecal y hasta terminar la misma.

Mantener la muestra a temperatura ambiente hasta su entrega al

laboratorio.

Clasificacin de los mtodos de DX

Clasificacin de Coproparasitoscpicos
POR EL TIPO DE
PROCESO

1.
2.
3.

Directo o en fresco
Macroscpico o
microscpico
Concentracin:

POR SUS CARACTERSTICAS

1.

a.
b.
c.

Flotacin
Sedimentacin

Termotropismo

1.
2.
3.
4.

Dilucin
Cultivo
Aclaramiento
Tincin

CUALITATIVOS

d.
e.

2.

En fresco
Cucharilla rectal
Centrifugacin
Flotacin (Faust)
Flotacin (Willis)
Sedimentacin (Ritchie)

CUANTITATIVOS:
a.
b.

MTODOS ESPECIALES

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Tamizado
Graham
Baermann
Harada-Mori
Coloracin Khon
Biopsia tejidos
Microscopia electrnica

Concentracin (Ferreira)
Dilucin (Stoll)

POR APLICACIN DE COLORANTES

1.
2.

Preparaciones hmedas
Preparaciones fijas:
a.
b.

Temporales
Permanentes

POR EL MOMENTO DE SU
REALIZACIN
1.
2.

Inmediato o en fresco
Mediato: de muestra preservada o
no preservada

CUALITATIVOS
FLOTACIN
Faust
Sacarosa
Willis

SEDIMENTACIN
Ritchie
Sedimento en copas
Charles-Barthelemy

CUANTITATIVOS
Stoll
Ferreira
Kato-kats

ESPECIALES

Tamizado
Graham
Cpsula duodenal
Baerman

MTODOS DE CONCENTRACIN

Mtodos fsicos

Dilucin minuciosa de heces en lquido o solucin de mayor

densidad:

Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin)

Superior (Tcnicas de flotacin)

Ventajas:

Realizacin muy simple

Precisan poco material

Inconvenientes:

Procesos largos
Exigen mucha manipulacin
No aplicables a series grandes de muestras

Bibliografa

Prats
Romero
Basualdo y cols. Microbiologa
biomdica. Ed Atlante 1996
Flisher

Mtodo de concentracin por flotacin

de Willis (1921)

Concentracin: Flotacin

Fundamento: Soluciones de mayor densidad hacen

flotar objetos menos densos

Solucin: Salmuera (sol sat de NaCl, d 1.200)

Aplicacin: Para la investigacin de GEO-helmintos

Muestra: Materia fecal

Procedimiento
Add 2 a 3 g de Heces

5 ml de salmuera

Homogenizar

Add salmuera y llevar

hasta el borde

Colocar un cubreobjetos
Dejar en reposo 15 a30 min

Recomendaciones

Este mtodo es de alta sensibilidad

en el diagnstico de huevos
livianos de helmintos: A.
duodenale, N. americanus, A.
lumbricoides, H. nana.

No indicado en la bsqueda de
huevos pesados ni de larvas.

Mtodo de concentracin-Flotacin de
Faust.

Este mtodo se utiliza solucin de Sulfato

de Zn, cuya densidad especfica es de
1.180 que conforma un medio de
densidad ms alta que la de los huevos:
Necator 1.055, Tricocfalo 1.150, Ascaris
frtil 1.110 y facilita que los huevos
livianos de estos helmintos, con menor
peso especfico que la solucin, se
concentren y floten.

Tcnica:
1) Mezclar bien una porcin de
materia fecal para preparar una
superficie en 10 partes de agua
destilada.
2) Filtrar la suspensin a travs de
una gasa doblada en cuatro, sobre un
tubo de centrfuga, ayudndose con
un embudo pequeo.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm
por 1 min.
4) Decantar el lquido sobrenadante
y completar con agua hasta igualar la
medida anterior, centrifugar
nuevamente . Resuspender el
sedimento.
5) Repetir el procedimiento 2 veces
hasta que el lquido sobrenadante

6) Decantar nuevamente el
lquido sobrenadante
reemplazndolo por igual
cantidad de solucin de sulfato
de Zn al 33%. Mezclar bien la
solucin con el sedimento.
Centrifugar durante 1 minuto a
1500 rpm.
7) Tomar 3-4 gotas de las
partculas que flotan en la
superficie del lquido. Colocarlos
en un porta-objeto y mezclarla
con 1-2 gotas de lugol, colocar
cubre-objeto.
8)
Examinar al microscopio y
reporte sus resultados.

Mtodo indicado para el

Metodo de Ritchie

+ Se utiliza para observar huevos, quistes

y larvas de helmintos si importan la
densidad que tengan. (Entamoeba

hystolitica Ascaris lumbricoides

Trichuris trichuria Necatur
americanus Giardia lamblia
Strongyloides stercolaris
Hymenolepis nana)
+ elimina los detritos orgnicos (ter),
elimina material lipdico y coloidal

Metodo de Ritchie
Procedimiento:
5 ml de SSI en un tubo de ensaye + (abate
lenguas) 2g de materia fecal +
homogeneizar.
Pasar la suspensin a travs de una gasa
colocada en un embudo a otro tubo
Centrifugar a 2000 rpm por 1 min
Decantar en sobrenadante y suspender en
SSI. Centrifugar, decantar y resuspender
= sobrenadante claro.

Mtodo de Ritchie

2.5 ml de sol. De formaldehdo al 10%,

mezclar u reposar 10 min.
1.25 ml de ter, tapar, agitar durante 30
s.
Centrifugar 2 min a 1500 rpm.
Cuatro capas:
ter (superficie)
restos fecales
formaldehdo
sedimento (contenido de elementos

=
Pipeta pasteur tomar sedimento, extraer

Pipeta pasteur tomar sedimento, extraer

una gota y colocar en un porta objetos.
+ lgol parasotologico, colocar cubre
objetos , homogenizar.
Observar a 10 y 40X

Mtodo de Carles Barthelem

Se utiliza para identificar quistes, huevecillos

o larvas.

=
Carles I
formol 10 ml
Cloruro de sodio al 0.85% 90 ml

Carles II
Ac. Citrico cristalizodo 12 g
Agua destilada 100 ml
Formol 2 ml

Mtodo de concentracin por sedimentacin

con MIF

1955
No se utiliza formol por que es una muestra
previamente preservada.
Permite hacer una concentracin de
huevos, quistes y larvas y trofozoitos
(pueden ser destruidos con el ter a pesar
de que hallan sido preservados y fijados
con MIF merthiolate, yodo y formol

Procedimiento:
Mezclar la suspensin fecal y pasarla a
traves de una gasa humedecida en MIF
a un tubo conico y se coloca en la
centrifuga.
+ 3 ml de ter, tapar y agitar
vigorosamente durante 1 min.
Centrifugra a 1500rpm un min.
Cuatro capas
Eter
Restos fecales solucion Mif
Sedimeto con las formas parasitaris

=
Pipeta pasteur tomar muestra de la parte
sup. del sediment porta u cubre objetos.

MTODO DE STOLL
Agregar heces
hasta 60ml
10 perlas de vidrio

56 ml de NaOH 0.1 N

Mezclar

Observar 40X

Tomar 0.075ml

Clculo
1.- La disolucin fecal original es de 1:15 (4ml/60ml). Como se contaron los
huevos en un volumen total de 0.15 ml, el nmero total de stos en 1ml de
heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x
100=1).
2.-Multiplicar x 100 g de materia fecal
3.- Nmero de parsitos hembras presentes, se divide el nmero diario de
huevecillos que hay en las heces entre el nmero promedio de
hembra de la especie Necator: 7000 huevos/da
hembra de la especie Ascaris: 200000 huevos /da
hembra de la especie Trichuris: 7500 huevo/da
Resultados ms exactos. Multiplicar el nmero que se obtiene en el paso
uno por el factor apropiado. Heces formadas= 1, blandas formadas=1.5,
blandas diarreicas=3, fluidas diarreicas=4, muy lquidas=5.

MTODO DE FERREIRA

4 g de heces

16ml de
formaldehdo
Homogenizar

2000r.p.m. 1 min

2-3ml de
ZnSO4

2 veces (agua)

Campana
de Ferreira

2000 r.p.m.
1min

+ gasa

Observar a 40X

Huevo de Ascari

Huevo Himenolepys nana

Huevo de Necator

Huevo de Trichuris

Huevo de Tenia

MTODO DE KATO

Examen CPS de frotis grueso

Cuantitativo
Utiliza un rectngulo de celofn
Dx de Helmintos y concentracin de
huevecillos/gramo de heces

1.

Procedimiento
Con un aplicador de madera, se toman
50 mg de materia fecal y se depositan
en un porta objetos.

2.

Se cubre con el rectngulo de celofn,

que previamente se dejo 24 hrs en
solucin de verde de malaquita y
glicerina

3. La preparacin se coloca sobre papel

absorbente y se presiona hasta que cubra
25 mm2
4. Se deja reposar 1 hora a temperatura
ambiente o a 37C por media hora
5. Se observa al microscopio
Contando todos los huevos y larvas

Resultados
50mg de muestra---------1 huevo
1000mg ---------------------X huevos
X= 1000 x 1 x 20 = huevos/g de heces
5

TAMIZADO

Anlisis cualitativo mtodo mecnico

OBJETIVO: Recuperacin de parsitos o

segmentos de estos en materia fecal

UTILIDAD:
saginata.

Taenia solium y Taenia

TAMIZADO

MTODO

TAMIZADO

C/solucin salina
Tincin o aclaramiento

GRAHAM
Clsico mtodo de raspado repianal

OBJETIVO: Mtodo ms efectivo para la

bsqueda de huevos de Enterobius
vermicularis

UTILIDAD: Encontrar huevos de Ascaris

lumbricoides,
Trichuris trichura e
Hymenolepis nana.

GRAHAM

MTODO

GRAHAM

CPSULA DUODENAL

OBJETIVO: Demostrar la presencia de

parsitos que se alojan en duodeno y en
su momento crean dificultades para el Dx.

UTILIDAD: Giardia lamblia, Strongyloides

stercoralis y Fasciola hepatica.

CPSULA DUODENAL

MTODO

30a 1
hora

C/solucin salina

Extrae - exprime

VERDE AMARILLENTO

CPSULA DUODENAL

Mtodo de Baermann

Tcnica especial para identificar larvas de

Strongyloides

Procedimiento

1.- Se coloca un embudo sobre un soporte

circular, unida al embudo un tubo de caucho o
manguera, que se cierra en su extremo con
una pinza.

2.- Se cubre con dos capas de gasa un crculo

de alambre, cuyo dimetro sea ligeramente
inferior al embudo, y de modo que los
extremos de la gasa permanezcan doblados
dentro del anillo, sobresalir, y se coloca

3.- El embudo se llena con agua templada

de 37 hasta un nivel que cubra a la gasa,
y la muestra de heces se coloca sobre
ella, parcialmente en contacto con el
agua.

4.- El dispositivo se mantiene a

temperatura ambiente durante 8-12 hrs,
despus de ello se recogen unas gotas
de lquido del tubo del embudo, en una
caja de Petri pequea.

5.- Se examina buscando las larvas al