Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR)

High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Tipos de Cromatografa Lquida

Cromatografa

de Particin Cromatpografa de Adsorcin Cromatografa de intercambio Ionico Cromatografa por exclusion molecular

Aplicaciones de la Cromatografa lquida

Proteinas cidos nucleicos Vitaminas Farmacos Colorantes Carotenos Flavonoides tensoactivos

Pesticidas Carbohidratos Esteroides Polimeros sinteticos Antioxidantes Micotoxinas aminocidos Etc.

Aplicaciones de cromatografa lquida

Efecto del tamao de Particulas

Esquema de un cromatografo Lquido

Columna y fitting utilizados En HPLC

Polares

RP

Intercambio Inico

Sistema de Bombeo Bomba Reciprocante

Valvulas de Inyeccin

UV-Detector Cell Single wavelength

CROMATOGRAFIA DE FASE NORMAL

Se trata de cromatografa de adsorcin o de particin (reparto). La naturaleza de la fase estacionaria es altamente polar (slice) o silice modificada qumicamente. Empaquetamientos que tienen grupos funcionales unidos covalentemente a la slice tipo -CN, -NH2. La fase mvil es menos polar que la estacionaria (hexano, cloroformo, acetato de etilo etc).

Cromatografa de fase inversa

Procedimiento utilizado en cromatografa Lquida en el cual la fase mvil es ms polar que la fase estacionaria. Mtodo ms ampliamente utilizado:

Permite usar fases mviles acuosas. Particin entre fase estacionaria y regin no polar del analito. Hidroflico a hidrofbico. (Polar a no polar)
Acetonitrilo, metanol, THF, Agua, Isopropanol.

Orden de elucin:

Fases mviles ms comunes:

Separa compuestos de muy diferente polaridad. La fase estacionaria generalmente de silice esta recubierta por cadena de 8 o 18 carbones.

Reverse Phase

Stationary phase with different chain lengths

Mtodos de Elucin

Propiedades de las fases moviles ms comunes

Separation of Steroids

Ejemplos de Fase Reversa

HPLC en fase reversa

Control de la ionizacin Las especies inicas pueden ser cromatografiadas sobre fase reversa utilizando tampn para suprimir la ionizacin del analito.

Cromatografa de par inico

La cromatografa de par inico es utilizada para separar cidos y bases que no se puede controlar su ionizacin. Un compuesto inico soluble en agua puede ser adicionado a la fase mvil el cual intereccionar con el analito para formar un par inico neutro, el cual ser substancialmente ms retenido, en cambio, los compuestos no inicos presentes en la muestra no sufrirn mayores cambios en sus tiempos de retencin. Contraiones ms comunes Heptansulfonato Hexansulfonato SO SO SO SO SO SO SO SO tetrametilamonio cido trifluoroactico
3 3 3 3 3 3 3 3