Clulas rojas humanas sensibilizadas con anti D (Ig.

G), utilizadas para producir reaccinfuerte de aglutinacin en la presencia de reactivos activos de antiglobulina humana PROCEDIMIENTO: 1) Seleccione muestras de sangre O POSITIVO con anticoagulantes, centrifuguepor 5min a 3400rpm descarte el sobrenadante con pipeta Pasteur. 2) Lave las clulas 4veces con solucin salina fisiolgica, y centrifugue a 3400rpm por 5min.Antes de cada centrifugacin mezcle unas 10 veces por inversin hasta que no seobserven clulas adheridas al fondo del tubo. Descarte siempre la sol. Salina con pipetapasteur y en la ultima lavada eliminarla completamente. 3) Pipetear 750l de paquete globular (para un frasco de 10ml) y colquelos en unErlenmeyer de 25ml, o en un tubo de ensayo 16x100mm y agregue la cantidad deanti-D necesaria para la sensibilizacin de acuerdo a su potencia (observando lapresencia de grumos). 4) Agregue por cada 0.5ml de clulas la cantidad de 4.5ml de solucin salinafisiolgica. Mezcle bien y colquelo en bao Mara a 37C por 30min, mezclndolocada 5min. RENE RAMOS 2008RENE RAMOS 2008

Saque del bao Maria luego de la incubacin y si la preparacin se realiza en tubode 16x100mm proceda de una vez a la centrifugacin. Si las clulas estn en elErlenmeyer traslade a tubos de ensayo con tapn. 6) Centrifugue por 2min a 3400rpm, descarte el sobrenadante y lave el paquete declulas 4veces igual que en el paso 2 . 7) Coloque 0.4ml de paquete globular en un frasco gotero previamente esterilizado yetiquetado, destinado para su almacenamiento. Agregue 9.6ml de solucin depreservacin o en su defecto solucin salina fisiolgica. 8) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como reserva y el otro para trabajo diario. 9) Almacene a temperatura de 4C (no dejarlos a temperatura ambiente si no seutilizan, ya que tienden a Hemolizarse). 10) Coloque en un tubo de ensayo 12x75mm.1 gota de reactivo de anti-globulinahumana y agregue 1 gota de clulas control de coombs recin preparadas.Centrifugue a 3400rpm por 15seg. La reaccin obtenida deber ser de 3+. VIGENCIA DE 21DAS. EN SOL. SALINA MXIMO 7DIAS O HASTA PRESENTAR HEMLISIS.VIGENCIA DE 21DAS. EN SOL. SALINA MXIMO 7DIAS O HASTA PRESENTAR HEMLISIS. RENE RAMOS 2008RENE RAMOS 2008

POOL DE CELULAS O . Clulas Rojas preparadas en Vitro para utilizacin en el Coombs indirecto, las cuales nospermiten determinar la presencia de anticuerpos irregulares (anti. Rh) en el suero de lospacientes luego de una sensibilizacin.

PROCEDIMIENTO: 1) Seleccione de 4-5 muestras de sangre O POSITIVO con anticoagulante EDTA,centrifugue por 5min a 3400rpm descarte el sobrenadante con pipeta Pasteur. 2) Coloque 1ml de paquete globular en un tubo 12x75mm y lave las clulas 4vecescon solucin salina fisiolgica por 3min. Descartando el sobrenadante en cada lavada con pipeta Pasteur y mezclando entre lavadoobservando que no se encuentren clulas adheridas al fondo del tubo. En el ltimo lavado descartar toda la solucin salina. 3) Coloque 0.4ml del paquete lavado en un frasco previamente esterilizado yetiquetado, destinado para su almacenamiento. Agregue 9.6ml de solucin depreservacin o en su defecto con solucin salina fisiolgica. 4) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como stock y el otro para el trabajodiario. 5) Almacene a temperatura de 4C (Si no se utilizan, no dejarlos a temperaturaambiente ya que las clulas con altas temperaturas tienden a Hemolizarse). RENE RAMOS 2008RENE RAMOS 2008