CODIGO GENETICO Y TRADUCCIN

QF-PhD Sinthia Pagano Siepierski

QU SON LAS PROTENAS?

Son polmeros lineales construidos a partir de monmeros llamados aminocidos, los cuales se unen entre s para formar una estructura en cadena. Son macromolculas de PM muy elevados.

FORMULA GENERAL DE LOS AMINOACIDOS

grupo a-amino grupo carboxilo

Ca
Son a-amino cidos

ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS

estructura primaria estructura secundaria estructura terciaria estructura cuaternaria

secuencia de aminocidos

a-hlice

plegamiento tridimensional

ensamblaje de subunidades

El cdigo gentico: la clave de traduccin entre dos lenguajes

La secuencia de bases del ADN codifica la informacin de la clula El sentido inmediato de la secuencia de bases del ADN es especificar la secuencia aminoacdica de las protenas. Estas son las ejecutoras del programa, quienes especifican la maquinaria celular Entonces:
cul es la clave de traduccin? cmo la traduccin ocurre en la prctica?

Caractersticas del cdigo gentico

Establecidas experimentalmente por Fancis Crick, Sydney Brenner y colaboradores en 1961

El cdigo gentico est organizado en tripletes o codones

El cdigo gentico es degenerado

El cdigo gentico es no solapado o sin superposiciones La lectura es sin comas

El cdigo gentico nuclear es universal

Cdigo organizado en tripletes o codones

Con las 4 bases del ARN (U, C, A, G) se deben especificar 20 aa

El cdigo gentico es degenerado

Estructura del ARNt

Lugar de unin a la aminoacil ARN-t sintetaza

Lugar de enlace al ribosoma

Los ARN-t suelen presentar bases nitrogenadas poco frecuentes como son la pseudouridina (), metilguanosina (mG), dimetilguanosina (m2G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH2)

La degeneracin del cdigo se explica teniendo en cuenta dos motivos:

Algunos aminocidos pueden ser transportados por distintas especies moleculares (tipos) de ARN transferentes (ARN-t) que contienen distintos anticodones. Algunas especies moleculares de ARN-t pueden incorporar su aminocido especfico en respuesta a varios codones, de manera que poseen un anticodn que es capaz de emparejarse con varios codones diferentes. Este emparejamiento permisivo se denomina Flexibilidad de la 3 base del anticodn o tambaleo.

Flexibilidad de la tercera base del anticodn: tambaleo

Emparejamientos codn-anticodn permitidos por la regla del tambaleo:

Emparejamientos codn-anticodn permitidos Extremo 5' del anticodn Extremo 3' del codn (ARN(ARN-t) m) G UoC C slo G A slo U U AoG I U, C o A
I = Inosina

El cdigo gentico es no solapado o sin superposiciones

Diferencias entre un cdigo solapado y uno no solapado

Cdigo solapado: restricciones en la secuencia de aminocidos

La lectura del cdigo gentico es sin comas

Secuencia normal: ejemplo con una frase UNO MAS UNO SON DOS Adicin de una A despus de la primera N: cambia el cuadro de lectura UNA OMA SUN OSO NDO S

Delecin (prdida) de la primera O: cambia el cuadro de lectura UNM ASU NOS OND OS

Adicin de A y delecin de A: se recupera el cuadro de lectura

UNA UNO

OMS AAA

UNO MAS

SON UNO

DOS SON DOS

Adicin de tres letras (AAA)

Desciframiento del cdigo gentico

Severo Ochoa

Marshall W. Nirenberg

Har Gobind Khorana

El cdigo gentico es universal

Excepciones a la universalidad del cdigo

El cdigo gentico mitocondrial es la nica excepcin a la universalidad del cdigo, de manera que en algunos organismos los aminocidos determinados por el mismo triplete o codn son diferentes en el ncleo y en la mitocondria.

Marcos de lectura
El cdigo gentico no es solapado pero puede leerse en 3 marcos de lectura diferentes Slo uno de esos marcos es el correcto para dar lugar a una protena dada El marco de lectura queda establecido por un codn de iniciacin

 Codn de iniciacin: AUG

Codn de terminacin: UAA, UAG, UGA

Efectos de cambios en una secuencia de ADN que codifica para una protena

1.- mutacin silenciosa

2.- cambio de sentido

3.- sin sentido

4.- insercin y corrimiento del marco de lectura

5.- deleccin y corrimiento del marco de lectura

RECORDAR

Sntesis de protenas
Ocurre en forma semejante en todas las clulas Se utilizan 3 tipos de ARN ARNm transportador de la informacin ARNr asociado a protenas forma el ribosoma ARNt portadores de aminocidos, lectores del mensaje El orden de los aminocidos en la cadena proteica (secuencia) est determinado por la secuencia (orden) de los nucletidos El orden de los aminocidos en la cadena proteica (secuencia) determina la funcin de la nueva protena Es necesario un cdigo bilinge para pasar la informacin de la secuencia de bases a aminocidos (cdigo gentico)

Traduccin

es el paso de la informacin transportada por el ARNm a protena Elementos fundamentales:

aa ARNt Ribosomas ARNr ARNm Enzimas Factores proteicos Nucletidos trifosfato (ATP,GTP)

Sitios funcionales importantes del ribosoma

Ribosomas: plataforma donde se realiza la sntesis proteica

Subunidades de los ribosomas procariticos y eucariticos

La activacin de los aminocidos y formacin de los complejos de transferencia

Consiste en la unin de cada aminocido a su ARN-t especfico mediante la intervencin de un enzima, la aminoacil-ARN-t sintetasa y el aporte de energa del ATP.
aa1 + ARN-t1 + ATP ARN-t1-aa1 + AMP + PPi

Aminocido activado por unin a su ARNt especfico

Sitios crticos de las aminacil-ARNt sintetasas

3 sedes distintas:
Para el reconocimiento del aa Para el ARNt Para el ATP

Debe existir al menos una aminoacil-ARNt sintetasa diferente por cada ARNt distinto

Discriminacin de los ARNt por las aminoacilARNt sintetasas

Cargado de los ARNt

Cada ARNt es reconocido por una aminoacil-tRNAsintetasa especfica Estas enzimas reconocen el aa correcto y el ARNt correcto

Algunas aminoacil ARNt sintetasas corrigen errores

Presentan sitios de correccin de errores las sintetasas que incorporan aminocidos muy parecidos

Los aminocidos incorrectos ajustan perfectamente en el sitio de correccin y la actividad correctora hidroliza su enlace con el ARNt

La traduccin o sntesis proteica se divide en 3 fases:

Iniciacin Elongacin Terminacin

Durante la iniciacin se ensamblan todos los componentes requeridos para la sntesis proteica:

1. El ARNm
2. La subunidad grande y pequea del ribosoma 3. Factores de iniciacin 4. ARNt iniciador con la N-formil-metionina unida

5. GTP

En la fase de iniciacin todo el proceso se prepara para llevar a cabo la sntesis proteica:

El ARNm se une por su extremo 5 a la subunidad menor del ribosoma gracias a un factor proteico IF3.
IF3

Subunidad menor del ribosoma.

NH2
F-Met IF2
Aminoacil ARNt

Anticodn UAC Codn Iniciador AUG 5 Sitio P

ARNm

Sitio A

Se une el primer aminoacilARNt al ARNm, a travs de puentes de hidrgeno entre sus bases complementarias.El primer codn es 5 AUG 3 por lo que el anticodn del primer ARNt es UAC. El aminocido unido al primer ARNt es siempre formil metionina. Este posteriormente puede formar parte de la protena o ser eliminado al final de este proceso.Para que esta unin se produzca es necesaria la presencia del factor de iniciacin IF2

Se produce el acoplamiento de la subunidad mayor del ribosoma, para lo cual se precisa otro factor de iniciacin diferente (IF1). A todo esto se le une el siguiente aminocido transportado por su ARNt.
NH2
F-Met NH2

Arg

IF1

UAC UAC Codn Iniciador AUG 5

Anticodn

CGU ARNm

GCA

NH2

Enlace

Peptdico

NH2

Anticodn UAC Codn Iniciador AUG 5

GCA CGU

ARNm
Sitio P Sitio A

Se forma el enlace peptdico entre los aminocidos

Procariotas: secuencias consenso Shine-Dalgarno situadas entre 6 a 10 nucletidos antes del codn AUG del ARN-m; son complementarias de secuencias del extremo 3 del ARN-R de la subunidad pequea 30S.

Eucariotas: traduccin comienza por AUG ms cercano al extremo 5 del ARNm.

Secuencia del extremo final 3' del ARN-r 16S de la subunidad pequea complementaria de la secuencias Shine-Dalgarno situadas antes del codn AUG.

Iniciacin de la traduccin en clulas eucariotas

Los organismos eucariotas necesitan muchos factores proteicos para la colocacin de la subunidad pequea del ribosoma en el primer codn AUG de iniciacin del mRNA.

Elongacin
En esta etapa, la cadena peptdica se sintetiza por la unin de los sucesivos aminocidos que se van situando en el ribosoma trasportados por los correspondientes ARNt. En este proceso se pueden diferenciar tres etapas:

NH2
F-Met NH2

Arg

GTP

Anticodn

UAC UAC CGU

EF-TS

Codn Iniciador AUG 5 Sitio P

EF-Tu ARNm
GCA

Sitio A

Unin de un aminoacil ARNt a un sitio A: Esto solo es posible si el anticodn del ARNt es complementario al codn del ARNm. Es necesario, GTP para proporcionar la energa necesaria y dos factores proteicos de elongacin (EF-Ts y EF-Tu).

Una vez situados los dos aminocidos, a travs de sus ARNt, uno en el sitio P y otro en el sitio A, se produce la unin entre ellos, gracias a la enzima peptidil transferasa, localizada en la subunidad mayor del ribosoma. Enlace
NH2 NH2
Peptdico

T P R E A P N T S I F D E

Anticodn

I R L A S

Codn Iniciador

UAC AUG

GCA CGU

5
Sitio P Sitio A

ARNm

Al unirse el primer aminocido al segundo: Se forma un dipptido que permanece unido al segundo ARNt, el cual se localiza en el sitio A

Unin del primer aminocido al segundo, el primer aminocido se desprende de su ARNt, el cual se libera del ribosoma y,
NH2 F-Met

Arg

Traslocacin del dpetido al sitio P. Se produce el desplazamiento del ribosoma sobre el ARNm en sentido 5 3. As el siguiente codn con el ARNt fijado sobre l, pasa del sitio A al sitio P quedando libre el sitio A, que es ocupado por el tercer codn del ARNm.

UAG 5 Sitio P

GCA CGU

UUU

Sitio A

NH2

Formacin de F-Met nuevos enlaces peptdicos. Mientras el Arg ribosoma recorre el ARNm, los sucesivos aminoacil ARNt que se van fijando al sitio A van incorporando los nuevos aminocidos

Val
Leu Phe

CAA GAU

AAA

AUG

GCA CGU

UUU

CUA

GUU

UAA

Sitio P

Sitio A

Regeneracin del factor de elongacin Tu

Despus de cada ciclo de liberacin del aa en el sitio A del ribosoma, el factor Tu es regenerado con la ayuda del factor Ts que promueve la salida del GDP y su intercambio por GTP

Terminacin de la traduccin
Existen 3 codones de terminacin: UAA, UAG, UGA. No hay ARNt con los anticodones correspondientes. Cuando el ribosoma llega a uno de ellos, la cadena peptdica se acaba. Factores de terminacin: reconocen los codones stop
RF1: reconoce los codones UAA y UAG RF2: reconoce los codones UAA y UGA RF3

Phe Leu Val

NH2

Fin de la sntesis de protenas

AUG

CGU

UUU

GAU CUA

CAA GUU

Codn de terminacin
UAA

Sitio P

Sitio A

ARNm

Los codones de terminacin (UAA,UAG,UGA) marcan el final de la sntesis de protenas.

Cuando un ribosoma llega a un codn de terminacin, no se situa R1 F ningun aminoacil ARNt en COOH el sitio A y la cadena R2 F peptdica se acaba. En Val esta fase intervienen unos factores de Leu liberacin: R1F para los codones de terminacin Phe UAA y UAG, R2F para los codones UAA y UGA. Al Protena sintetizada situarse en el sitio A estos Arg factores hacen que la CAA F-Met GUU enzima peptidl transferasa libere el NH2 pptido del ARNt al que 5 est unido, al hacer que ARNm reaccione el grupo carboxilo del ltimo aminocido con agua.

T P R

E A
P N T S I F D E I R L A S A

UAA

Codn de terminacin

Diferencias entre procariotas y eucariotas

De un ARNm procariota se pueden traducir varias protenas:
ribosoma ribosoma ribosoma

ARNm

5
Mensaje A Mensaje B Mensaje C

traduccin

Polipptido A

Polipptido B

Polipptido C

plegamiento

Diferencias entre procariotas y eucariotas

Eucariotas:
Transcripcin en el ncleo Traduccin en el citosol

Procariotas:
Transcripcin y traduccin en el citosol

Acoplamiento transcripcin-traduccin en procariotas

La traduccin en bacterias se inicia sobre trnscriptos que an no terminaron su sntesis. Esta coordinacin entre ambos procesos permite una regulacin ms precisa de la sntesis proteica bacteriana.

Polirribosomas

Una serie de ribosomas pueden traducir simultneamente a la misma molcula de ARNm. La consecuencia de esto es la amplificacin del mensaje.

Procesamiento de protenas

Protenas secretadas por la clula: eliminacin del pptido seal (secuencia corta de aa en el extremo N-terminal)

Corte y unin de segmentos de protenas

Procesamiento de las protenas mediante eliminacin de secuencias proteicas interpuestas

Antibiticos y sntesis proteica

La mayora son bacteriostticos

Selectividad debida a diferencias entre ribosomas procariotas y eucariotas

Actan a diferente nivel en la sntesis proteica

Inhibidores de la iniciacin

Aminoglicsidos: unin irreversible a ARNr 16S, bloqueo en complejo 30SARNm-ARNt

Estreptomicina, kanamicina, gentamicina, neomicina

Inhibidores de la elongacin