CAPTULO 2.3.10.

VIRUELA AVIAR

RESUMEN
La viruela aviar es una enfermedad de los pollos y los pavos causada por un virus con ADN del gnero Avipoxvirus, de la familia Poxviridae. Su distribucin es mundial. Es una enfermedad de dispersin lenta que se caracteriza por formar lesiones proliferativas y costras en la piel, y lesiones de tipo diftrico en la porcin superior de los tractos digestivo y respiratorio. Por lo general, en el caso de la forma cutnea, la tasa de mortalidad es baja y las aves afectadas tienen una mayor probabilidad de recuperarse que las afectadas por la forma diftrica. En la forma diftrica, las lesiones proliferativas en los conductos nasales, y en la laringe y la trquea, pueden causar dificultades respiratorias y la muerte por asfixia. La viruela aviar causa una disminucin transitoria de la produccin de huevos y una ralentizacin del crecimiento de los pollos jvenes. Identificacin del agente: Cuando ocurren erupciones en la piel de reas descubiertas, debe sospecharse que se trata de la viruela aviar. El examen histolgico de las lesiones cutneas o diftricas revela una hiperperplasia epitelial con inclusiones intracitoplsmicas en las clulas afectadas. En los frotis de las lesiones se pueden detectar cuerpos elementales utilizando el mtodo de Gimnez. Mediante la tincin negativa o los cortes ultrafinos de la lesin, en la microscopa electrnica, se detectan partculas vricas con la morfologa caracterstica de los poxvirus. La forma diftrica de la viruela aviar, con efectos sobre la trquea, debe diferenciarse de la laringotraqueitis, que est causada por un herpesvirus y que se caracteriza por la presencia de cuerpos de inclusin intranucleares. El aislamiento del virus se realiza por inoculacin en membranas corioalantoideas de embriones de pollo de 912 das de desarrolllo, o en cultivo de clulas aviares. Pruebas serolgicas: Se pueden demostrar respuestas inmunes a la viruela aviar mediante pruebas de neutralizacin vrica, inmunodifusin en gel de agar, inmunofluorescencia, hemaglutinacin pasiva, enzimoinmunoensayo o inmunotransferencia. Requisitos para las vacunas y el material de diagnstico: Se han comercializado vacunas vivas modificadas de viruela aviar o viruela de las palomas obtenidas en embrin de pollo o en cultivo de clulas aviares. El uso de las vacunas est recomendado en las reas endmicas de la enfermedad o en los lugares en que se ha diagnosticado una infeccin.

A. INTRODUCCIN
La morfologa del virus de la viruela aviar es idntica a la de los otros virus de la familia Poxviridae. El virus maduro (cuerpo elemental) tiene forma de ladrillo y mide aproximadamente 330 280 200 nm. La cubierta externa consta de distribuciones aleatorias de tbulos superficiales. El virin consta de un centro o nucleoide bicncavo centralizado y denso a los electrones con dos cuerpos laterales en cada concavidad y rodeados por una envuelta. El genoma del virus de la viruela aviar de 288 kpb codifica ms de 250 genes. La viruela aviar tiene una distribucin mundial y est causada por un virus ADN del gnero Avipoxvirus de la familia Poxviridae (17, 21). Su incidencia es variable en reas diferentes debido a las diferencias climticas, de administracin y de higiene, o a la prctica de una vacunacin regular. La enfermedad puede originar una disminucin de la puesta de huevos o un retraso en el crecimiento de los pollos ms jvenes.

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Captulo 2.3.10. Viruela aviar

La viruela aviar es una enfermedad vrica de pollos y pavos de difusin lenta, que en la forma cutnea (viruela seca) se caracteriza por la aparicin de lesiones proliferativas, que varan de pequeos ndulos a alteraciones rugosas sobre la piel de la cresta, barbillas y otras reas sin plumas. En la forma diftrica (viruela hmeda), se desarrollan en las mucosas ndulos opacos blancos, ligeramente elevados, cuyo tamao aumenta con rapidez hasta formar una membrana diftrica amarillenta. Las lesiones se presentan en las mucosas de la boca, esfago, laringe o trquea. La tasa de mortalidad es mayor en la forma diftrica que en la cutnea, alcanzando a veces el 50% (19), sobre todo en las aves jvenes. En el genoma del virus de la viruela aviar se ha observado la integracin de secuencias del virus de la reticuloendioteliosis (REV) (11, 13). Es interesante que este caso de insercin ocurriera hace ms de 50 aos (7). Mientras que la mayora de las cepas naturales contienen el provirus del REV, las cepas vacunales solo tienen residuos de las largas repeticiones terminales (13). La virulencia de las cepas naturales del virus de la viruela aviar aumenta con la presencia del provirus del REV en el genoma. Se ha secuenciado por completo el genoma de una cepa similar a la cepa vacunal del virus de la viruela aviar (1). Actualmente se ignora cules son las funciones de la mayor parte de los genes. Sin embargo resulta interesante el hecho de que el virus tiende a persistir durante largos periodos de tiempo en un entorno de aves en el que otros virus no pueden sobrevivir. Parece ser que el gen de la fotoliasa y el gen con cuerpos de inclusin de tipo A del genoma vrico protegen al virus de las agresiones ambientales (15, 16). Se observa una reaccin cruzada antignica entre los virus de la viruela aviar y parece que muchos genes son preservados. Estn disponibles varios estudios breves sobre la comparacin del virus de la viruela de las aves de corral con otros virus de la viruela aviar, sobre todo los que infectan a las aves silvestres. Desde hace poco tiempo est disponible la secuenciacin completa del genoma del virus de la viruela de los canarios.

B. TCNICAS DE DIAGNSTICO
1. Identificacin del agente

El virus de la viruela aviar se multiplica en el citoplasma de las clulas epiteliales formando grandes cuerpos de inclusin intracitoplsmica (cuerpos de Bollinger) que contienen cuerpos elementales ms pequeos (cuerpos de Borrel). Las inclusiones se pueden demostrar en los cortes de lesiones cutneas y diftricas utilizando tincin con hematoxilina y eosina (H&E), con naranja de acridina o con Giemsa (19). Los cuerpos elementales se pueden detectar en los frotis de lesiones, por ejemplo, por el mtodo de Gimnez (18) que se describe ms adelante. Se puede utilizar la microscopa electrnica para demostrar las partculas vricas con morfologa tpica de los poxvirus, mediante la tincin negativa o en cortes ultrafinos de tejidos infectados (3).

a)

Tcnica de frotis para la viruela aviar

i) ii) iii) Se coloca en un porta limpio una gota de agua destilada y la lesin (cutnea o diftrica). Se prepara un frotis fino presionando la lesin con otro porta limpio y rotando varias veces el porta superior. Se seca al aire y se fija el frotis con cuidado a la llama. Se tie el frotis durante 510 minutos con un colorante recin preparado (8 ml de solucin stock1 de fucsina bsica mezclada con 10 ml de tampn fosfato2, pH 7,5, y filtrado por papel de filtro Whatman nmero 1). Se lava cuidadosamente con agua del grifo. Se colorea para tincin de contraste con verde malaquita (0,8% en agua destilada) durante 30 60 segundos. Se lava el frotis con agua del grifo y se seca a continuacin. Se examina el frotis con aceite de inmersin. Los cuerpos elementales aparecen rojos y de un tamao aproximado de 0,20,3 m.

iv) v) vi) vii)

b)

Aislamiento del virus

El virus de la viruela aviar se puede aislar inoculando el material sospechoso en huevos embrionados. Se inoculan la membranas corioalantoideas (MCA) de embriones de pollo de 912 das de desarrollo con aproximadamente 0,1 ml de de suspensin del tejido cutneo o de la lesin diftrica con la concentracin adecuada de antibiticos. Los huevos se incuban a 37C durante 57 das y despus se examinan para observar la aparicin de focos blancos de lesiones o un engrosamiento generalizado de las MCA. El

Solucin stock: Se aade lentamente una solucin de fucsina bsica (5 g) en etanol al 95% (100 ml) a una segunda solucin de fenol cristalino (10 g) en agua destilada (900 ml). Esta solucin stock se mantiene en una botella de cristal con tapn de rosca bien cerrada y se incuba durante 48 horas a 37C; luego se mantiene a temperatura ambiente. Tampn fosfato, pH 7,5: En 1000 ml de agua destilada se aade NaH2PO4H2O (2,47g) y Na2HPO4 (11,65 g) y se mantiene a 4C.

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examen histolgico de las lesiones en la MCA revelar cuerpos de inclusin intracitoplsmicos y eosinfilos tras la tincin con H&E (19, 22). Para propagar el virus de la viruela aviar, tambin pueden utilizarse fibroblastos primarios de embrin de pollo, clulas renales de embrin de pollo, clulas drmicas de embrin de pollo o la lnea celular permanente QT-35 de codorniz (6, 10). La adaptacin de las cepas de virus a los cultivos celulares es un requisito importante para la formacin de placas o calvas, y no todas las cepas formarn placas inicialmente.

c)

Mtodos moleculares
El anlisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP) puede utilizarse para comparar los aislamientos naturales y las cepas vacunales del virus de la viruela aviar (6, 10). Sin embargo, este procedimiento no se utiliza para el diagnstico rutinario. Los fragmentos genmicos clonados del virus de la viruela aviar se pueden emplear con eficacia como sondas de cido nucleico para el diagnstico. El ADN vrico aislado de lesiones puede detectarse por hibridacin con sondas genmicas, marcadas radioactivamente o sin marcar. Este mtodo es especialmente til para diferenciar infecciones de viruela aviar y de laringotraqueitis cuando se presentan lesiones traqueales (5). Las secuencias genmicas de ADN de varios tamaos se pueden ampliar utilizando cebadores especficos (4) mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Esta tcnica es til cuando solo se dispone de una cantidad muy pequea de ADN vrico en la muestra.

2.

Pruebas serolgicas

Aunque en las infecciones por poxvirus tanto la inmunidad mediada por clulas (IMC) como la inmunidad humoral desarrollan un papel importante, no resulta conveniente utilizar rutinariamente las pruebas de la IMC. Por tanto, se usan pruebas serolgicas para medir la respuesta de anticuerpos humorales especficos, del tipo de la neutralizacin vrica (NV), inmunodifusin en gel de agar (IGDA), hemaglutinacin pasiva y las pruebas con anticuerpos fluorescentes as como los enzimoinmunoensayos. La evidencia de una inmunizacin favorable por la vacuna se puede demostrar examinando una bandada a los 710 das de la vacunacin para tomas. Una toma consiste en un hinchamiento de la piel o una costra en el sitio de inoculacin de la vacuna, y su presencia denota una inmunizacin acertada.

a)

Neutralizacin vrica
Despus de la interaccin entre el virus y el suero, la actividad de los virus residuales puede probarse en huevos embrionados o en cultivos celulares (9). Esta prueba es tcnicamente exigente y puede no resultar conveniente para el diagnstico de rutina. Solo unas cuantas cepas de virus tienen capacidad para formar placas en clulas de embrin de pollo. Los anticuerpos neutralizantes aparecen a las 12 semanas de la infeccin.

b)

Inmunodifusin en gel de agar

Los anticuerpos precipitantes se pueden detectar haciendo reaccionar los sueros con los antgenos vricos. El antgeno puede derivar de lesiones de piel infectada o de lesiones de MCA despus de la sonicacin y homogenizacin, as como de los cultivos celulares infectados tratados como se describe ms adelante en la seccin B.2.f. Se centrifuga la suspensin lisada y el sobrenadante se utiliza como antgeno. El medio de difusin se prepara con 1% de agar, 8% de cloruro sdico y 0,01% de tiomersol. El antgeno vrico se coloca en el pocillo central y los sueros problema en los pocillos perifricos. Es importante incluir un control de suero negativo y otro de suero positivo. Las placas se incuban a temperatura ambiente y las lneas de precipitacin aparecen a las 2448 horas despus de la incubacin del antgeno con el anticuerpo contra cepas homlogas o estrechamente relacionadas. La prueba es menos sensible que el ELISA (2) o que la prueba de la hemaglutinacin pasiva (23).

c)

Hemaglutinacin pasiva
Los eritrocitos de oveja o de caballo se sensibilizan con un antgeno parcialmente purificado de la viruela aviar (20). El antgeno se prepara de las MCA infectadas o de clulas como se describe ms adelante en la seccin B.2.f. La hemaglutinacin pasiva es ms sensible que la IGDA. La prueba origina reacciones cruzadas entre los poxvirus aviares.

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d)

Pruebas de inmunofluorescencia
Las pruebas de inmunofluorescencia directa o indirecta revelan una fluorescencia intracitoplsmica especfica en las clulas infectadas. La prueba indirecta es de uso comn y consta de dos pasos: el anticuerpo contra el virus de la viruela aviar reacciona primero con el antgeno en las clulas infectadas y despus con un anticuerpo secundario marcado con isotiocianato de fluorescena contra la gammaglobulina de pollo (por ejemplo, suero anti-pollo obtenido en cabra). Estos anticuerpos marcados estn comercializados. A este respecto, para pruebas con anticuerpos fluorescentes se pueden utilizar con eficacia los cortes de tejidos fijados con formalina.

e)

Inmunoperoxidasa
La tincin especfica de las inclusiones citoplsmicas es el resultado de la reaccin de un anticuerpo policlonal especfico contra la viruela aviar, que est conjugado con peroxidasa de rbano, y los cortes hidratados de tejidos (MCA o piel) o de cultivos fijados e infectados con viruela aviar. Se obtienen resultados similares cuando se utilizan anticuerpos policlonales o monoclonales en una prueba indirecta. Una ventaja de la tcnica es que los cortes se pueden observar por microscopa de luz visible y se pueden guardar durante mucho tiempo sin prdida de color (19).

f)

Enzimoinmunoensayo
Se han elaborado pruebas de ELISA para detectar anticuerpos humorales contra el virus de la viruela aviar. Son capaces de detectar anticuerpos 710 das despus de la infeccin (2), pero estas pruebas todava no se han comercializado. Los antgenos del virus de la viruela aviar se preparan de monocapas de clulas QT-35 infectadas, o de lesiones de MAC. Las clulas QT infectadas se precipitan (700 g durante 10 minutos a 4C), se lavan con tampn isotnico (Tris 10 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, etiln diamino tetra-actico [EDTA] 5 mM), y se lisan en tampn hipotnico (Tris 10 mM, pH 8,0, KCl 10 mM, EDTA 5 mM) con Triton X-100 al 0,1% y betamercaptoetanol al 0,025%. Los ncleos y los restos celulares se eliminan por centrifugacin a baja velocidad (500 g durante 5 minutos a 4C) y el sobrenadante se utiliza como fuente de antgenos del virus de la viruela aviar para la ELISA o para la inmunotransferencia. Para aislar antgeno vrico de las lesiones de MCA, se necesita una dispersin inicial de las lesiones mediante tratamiento con detergentes como se describi anteriormente. Tambin se ha empleado como antgeno el virus propagado en fibroblastos o en clulas drmicas de embrin de pollo. La preparacin del antgeno es como la descrita para las clulas QT. Los pocillos de la placa de microtitulacin se antigenizan con 1 g de antgeno soluble vrico de la viruela aviar en 100 l de tampn de recubrimiento (Na2CO3 15 mM, NaHCO3 35 mM, pH 9,6) y se incuban durante toda la noche a 4C (2, 19). Cada pocillo se lava despus una vez con solucin de lavado (NaCl 0,29 M, Tween 20 al 0,05%) y se bloquea con una solucin salina tamponada con fosfato (PBS, pH 7,4), que contenga 3% de seroalbmina bovina (BSA), durante 1 hora a 37C. Despus de un lavado, se aaden a los pocillos diluciones seriadas de los sueros problema en PBS con 1% de BSA. Tras agitar durante 2 horas a 37C, los pocillos se lavan tres veces antes de aadir 100 l/pocillo de anticuerpos IgG (H+L) anti-pollo obtenidos en cabra conjugados con peroxidasa de rbano3, a una dilucin recomendada en PBS. Despus de 2 horas de incubacin a 37C y tres lavados posteriores, se aaden a cada pocillo 100 l del substrato de la peroxidasa TBM3. Las reacciones se terminan por adicin de cido fosfrico 1 M y se registra la absorbancia a 450 nm utilizando un lector de placas ELISA4.

g)

Inmunotransferencia
Las variaciones antignicas que ocurren entre las cepas del virus de la viruela aviar pueden determinarse por medio de inmunotransferencia. En este mtodo, los antgenos se separan por SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato sdico) y reaccionan con anticuerpos policlonales o monoclonales contra el virus de la viruela aviar (6, 12, 14). Este mtodo no es conveniente para el diagnstico rutinario.

C. REQUISITOS PARA LAS VACUNAS Y EL MATERIAL DE DIAGNSTICO

Los estudios iniciales indicaron la posibilidad de proteger a los pollos de la viruela aviar mediante la utilizacin de virus de la viruela de paloma o de gallina (21, 23). La vacunacin se recomienda en reas donde la viruela aviar es endmica o en instalaciones donde se ha diagnosticado previamente la enfermedad. Se han comercializado

3 4

Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersberg, Maryland, EE.UU. Dynatech, Chatilly, Virginia, EE.UU.

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vacunas vivas de poxvirus de gallina y de paloma y tambin vacunas en vectores que protegen contra la enfermedad. Estas vacunas proceden de embriones de pollo o de cultivos de clulas aviares. Las directrices para la produccin de vacunas veterinarias se presentan en el captulo 1.1.8. Principios de produccin de vacunas veterinarias. Las normas dadas aqu y en el captulo 1.1.8. son de carcter genrico y pueden suplementarse con requisitos nacionales o regionales. Debe tenerse en cuenta la inmunidad adquirida pasivamente durante la vacunacin de la descendencia de bandadas que han sufrido una infeccin natural reciente o que se han vacunado recientemente. Como la inmunidad pasiva (durante 23 semanas) puede interferir la multiplicacin del virus vacunal, la descendencia solo debera vacunarse tras la disminucin de los anticuerpos de adquisicin pasiva. La vacuna contra la viruela aviar se aplica por el mtodo de la puncin en la membrana del ala.

1.
a)

Control del inculo

Caractersticas del inculo
Se debe establecer un inculo primario o maestro de virus (MSV) y usarlo segn un sistema de lotes de siembra. Se debe mantener un registro de su origen, un historial de pases y de sus caractersticas. Los virus pueden ser de viruela aviar o de viruela de paloma. El MSV se debe propagar en servicios adecuados, con materiales que cumplan los estndares aprobados y debe comprobarse la ausencia de contaminantes, la identidad y la pureza.

b)

Mtodo de cultivo
El MSV debe propagarse en embriones de pollo libres de patgeno especfico (SPF), utilizando las MCA, o en cultivos celulares aviares, como fibroblastos primarios de embriones de pollo, rin o dermis de embrin de pollo.

c)

Validacin como vacuna

i) Pureza Antes de probarlo para pureza, el MSV se puede neutralizar con un suero hiperinmune especfico. Debido a la dificultad de neutralizar el poxvirus aviar, se acepta tratar el MSV mediante centrifugacin a 1.000 g durante 20 minutos y despus filtrarlo a travs de un filtro de 0,2 m. El MSV neutralizado o filtrado se usa luego en las pruebas para demostrar la ausencia de agentes extraos. Estas pruebas deben realizarse en huevos embrionados o en cultivos celulares aviares para demostrar la inexistencia de replicacin vrica y en pollos SPF para demostrar la ausencia de anticuerpos frente a agentes extraos. ii) Inocuidad Las vacunas solo deben prepararse de una cepa de virus estable y atenuada o de aislamientos naturales de baja virulencia. La vacuna debe ser inocua utilizando la va de administracin recomendada, que es por puncin en la membrana del ala, en aves susceptibles de todas las edades. Una prueba adecuada consiste en tomar 10 pollos SPF e inocular a cada uno pinchando la membrana del ala con una aguja impregnada en la vacuna. Las aves se observan durante 710 das para comprobar la evidencia de tomas y la ausencia de efectos adversos atribuibles a la vacuna. Una toma es una inflamacin de la piel o una costra en el sitio de aplicacin de la vacuna e indica una vacunacin adecuada. La prueba de inocuidad debe repetirse despus de al menos seis pases seriados del virus en pollos SPF, para mostrar que no ha habido reversin a la virulencia. iii) Eficacia Deben obtenerse datos utilizando el nivel de pases ms alto (el quinto pase del inculo original) y el ttulo ms bajo de virus que se va a utilizar en el producto final: se proporciona una dosis de vacuna por el mtodo recomendado a 20 pollos SPF de la edad mnima indicada para la vacunacin. Estos pollos, junto con otros 20 no vacunados de la misma edad y origen, son inoculados con un desafo 3 semanas despus mediante escarificacin con una cepa virulenta del virus de la viruela aviar. Las aves se observan durante 3 semanas. El noventa por ciento de las aves control deben presentar lesiones debidas al virus de desafo y al menos el 90% de las aves vacunadas deben estar libres de tales lesiones.

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2.

Mtodo de fabricacin

La vacuna se fabrica por un sistema de lotes de inculo con el MSV validado. Esto debe realizarse en instalaciones aprobadas y diseadas para evitar el riesgo de contaminacin. Todos los medios y los cultivos celulares deben probarse para asegurar la ausencia de contaminacin.

3.

Control del proceso

Durante el proceso de validacin como vacuna, se deben comparar los datos de eficacia con el contenido del virus de la vacuna. Se puede establecer as una potencia adecuada. La vacuna debe dispensarse en los recipientes finales para asegurar que cada recipiente contiene virus suficiente para alcanzar la potencia especificada.

4.
a)

Control de lotes
Esterilidad
Las pruebas de esterilidad y de ausencia de contaminacin de los materiales biolgicos se pueden encontrar en el captulo 1.1.9.

b) Inocuidad
En cada lote de vacuna se debe utilizar la prueba de inocuidad que se describe en la seccin C.1.c.ii. anterior, exceptuando el requisito de seis pases en pollos SPF.

c)

Potencia
Deben realizarse pruebas sobre el contenido vrico en al menos tres recipientes. Las diluciones deben de abarcar un rango de infectividad del 0100%, usando saltos de dilucin de 1/5 y siete rplicas por dilucin. Si es posible, la prueba debe llevarse a cabo en paralelo con una vacuna estndar. Cada lote de vacuna se titula en el diluyente suministrado para dicho uso. Normalmente, el ttulo de virus no debe ser mayor que 1/10 de la dosis a la que se ha demostrado que la vacuna es segura ni inferior al ttulo determinado en la prueba de eficacia. Una potencia adecuada para una vacuna viva contra la viruela aviar suele estar en la zona de 105 EID50 (dosis infectiva del 50% para embriones) por ml.

d)

Duracin de la inmunidad
La prueba de eficacia presentada en la seccin C.1.c.iii. puede usarse para determinar la duracin de la inmunidad (aproximadamente 612 meses) mediante pruebas realizadas a intervalos despus de la vacunacin, usando grupos distintos de aves en cada prueba.

e)

Estabilidad
Para justificar la caducidad, deben aportarse evidencias sobre la estabilidad. Dicha evidencia debe basarse en las titulaciones vricas realizadas peridicamente hasta 3 meses ms all de la caducidad propuesta y verificadas en, por lo menos, seis lotes de vacuna mantenidos en las condiciones de almacenamiento recomendadas.

f)

Conservantes
No se utilizan conservantes en las vacunas vivas.

g)

Precauciones (riesgos)
Normalmente se recomienda no vacunar a las aves en perido de puesta. Se debe evitar el contacto del hombre con la vacuna viva. La vacuna estndar contra la viruela aviar no se usa en palomas, que pueden vacunarse con la vacuna contra el poxvirus de las palomas. En muchos pases, la vacuna de las palomas se ha visto reemplazada por la vacuna viva atenuada contra la peste aviar diseada para usarse en pollitos de un da. Estos productos se han utilizado con seguridad en palomas a falta de vacuna disponible contra el poxvirus de las palomas.

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5.
a)

Pruebas sobre el producto final

Inocuidad
En cada lote se emplea la prueba de seguridad que se describe en la seccin C.1.c.ii.

b)

Potencia
En cada lote se emplea la prueba de potencia descrita en la seccin C.4.c.

REFERENCIAS
1. AFONSO C.L., TULMAN E.R., LU Z., ZSAK L., KUTISH G.F. & ROCK D.L. (2000). The genome of fowlpox virus. J. Virol., 74, 38153831. BUSCAGLIA C., BANKOWSKI R.A. & MIERS L. (1985). Cell-culture virus neutralization test and enzyme-linked immunosorbent assay for evaluation of immunity in chickens against fowlpox. Avian Dis., 29, 672680. DOANE F.W. & ANDERSON N. (1987). Electron Microscopy in Diagnostic Virology: A Practical Guide and Atlas. Cambridge University Press, Cambridge, UK. FALLAVENA L.C., CANAL C.W., SALLE C.T., MORAES H.L., ROCHA S.L. & PEREIRA DA SILVA A.B. (2002). Presence of avipoxvirus DNA in avian dermal squamous cell carcinoma. Avian Pathol., 31, 241246. FATUNMBI O.O., REED W.M., SCHWARTZ D.I. & TRIPATHY D.N. (1995). Dual infection of chickens with pox and infectious laryngotracheitis (ILT) confirmed with specific pox and ILT DNA dot-blot hybridization assays. Avian Dis., 39, 925930. GHILDYAL N., SCHNITZLEIN W.M. & TRIPATHY D.N. (1989). Genetic and antigenic differences between fowlpox and quailpox viruses. Arch. Virol., 106, 8592. KIM T.J. & TRIPATHY D.N. (2001). Reticuloendotheliosis virus integration in the fowlpoxvirus genome: not a recent event. Avian Dis., 45, 663669. LEE L.H. & LEE K.H. (1997). Application of the polymerase chain reaction for the diagnosis of fowlpoxvirus infection. J. Virol. Methods, 63, 113119. MORITA C. (1973). Studies on fowlpox viruses. II. Plaque neutralization test. Avian Dis., 17, 9398.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10. SCHNITZLEIN W.M., GHILDYAL N. & TRIPATHY D.N. (1988). Genomic and antigenic characterisation of avipoxviruses. Virus Res., 10, 6576. 11 SINGH P., KIM T.-J. & TRIPATHY D.N. (2000). Re-emerging fowlpox: evaluation of isolates from vaccinated flocks. Avian Pathol., 29, 449455 SINGH P., KIM T.-J. & TRIPATHY D.N. (2003). Identification and characterisation of fowlpox virus strains using monoclonal antibodies. J. Vet. Diagn. Invest., 15, 5054.

12

13. SINGH P., SCHNITZLEIN W.M. & TRIPATHY D.N. (2003). Reticuloendotheliosis virus sequences within the genomes of field strains of fowlpox virus display variability. J. Virol., 77, 58555862. 14 SINGH P. & TRIPATHY D.N. (2000). Characterization of monoclonal antibodies against fowlpoxvirus. Avian Dis., 44, 365371. SRINIVASAN V., SCHNITZLEIN W.M. & TRIPATHY D.N. (2001). Fowlpox virus encodes a novel DNA repair enzyme, CPD-photolyase, that restores infectivity of UV light-damaged virus. J. Virol., 75,16811688. SRINIVASAN V. & TRIPATHY D.N. (2005). The DNA repair enzyme, CPD-photolyase restores the infectivity of UV-damaged fowlpox virus isolated from infected scabs of chickens. Vet. Microbiol., 108, 215223. TRIPATHY D.N. (1993). Avipoxviruses. In: Virus Infections of Vertebrates Virus Infections of Birds, Vol. 4, McFerran J.B. & McNulty M.S., eds. Elsevier Science Publishers, Amsterdam, the Netherlands, 515.

15

16

17

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18

TRIPATHY D.N. & HANSON, L.E. (1976). A smear technique for staining elementary bodies of fowlpox. Avian Dis., 20, 609610 TRIPATHY D.N., HANSON L.E. & KILLINGER A.H. (1973). Immunoperoxidase technique for detection of fowlpox antigen. Avian Dis., 17, 274278. TRIPATHY D.N., HANSON L.E. & MYERS W.L. (1970). Passive hemagglutination test with fowlpox virus. Avian Dis., 14, 2938. TRIPATHY D.N. & REED W.M. (2003) Pox. In: Diseases of Poultry, 11th Edition, Saif, Y.M., Barnes, H.J. Glisson, J.R. Fadly, A.M., McDougald L.R. & Swayne, D.E., eds. Iowa State University Press, Ames, Iowa, USA, 253-269.

19

20

21

22. TRIPATHY D.N. & REED W.M. (1998). Pox. In: A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens, Fourth Edition, Swayne D.E., Glisson J.R., Jackwood M W., Pearson J.E., & Reed W.M., eds. American Association of Avian Pathologists, University of Pennsylvania, New Bolton Center, Kennett Square, PA 19348-1692, USA, 137140. 23. WINTERFIELD R.W. & HITCHNER S.B. (1965). The response of chickens to vaccination with different concentrations of pigeon pox and fowlpox viruses. Avian Dis., 9, 237241.

RECONOCIMIENTO
Este estudio fue financiado por el Illinois Agricultural Experiment Station Regional Project.

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