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AO DEL CENTENARIO DE MACCHU PICCHU PARA EL MUNDO

INFORME DE LABORATORIO N 9

ACCIN DE AGENTES QUMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Curso:
Microbiologa General.

Docente:
Mlgo. Jorge Cordero Azabache.

Integrantes:
Karen estefani carhuancho castillo

HUANCAYO, Junio - 2011

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ndice
Portada ndice Introduccin Objetivos o o o o o o o o o o o o General Especficos pH Colorantes Metales Pesados Materiales Equipos Reactivos y medios de cultivo Concentracin de iones de hidrgeno Accin de los colorantes Accin oligodinmica de los metales pesados Tincin de Gram 1 2 3 4 4 4 5 5 6 8 10 10 12 13 14 14 15 16 17 18 21 22 23 24

Marco Terico

Materiales

Procedimiento y Resultados

Discusiones Conclusiones Recomendaciones Bibliografa Anexos

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Introduccin
En el desarrollo de nuestra prctica de accin de agentes qumicos hemos desarrollado varios mtodos que nos ayuden a identificar la accin que tienen los agentes qumicos sobre los microorganismos, lo cual hemos elegido el efecto de concentracin de iones de hidrogeno (pH) en los microorganismos, accin de los colorantes y accin oligodinmica de los metales pesados. En el desarrollo de la concentracin de iones de hidrogeno podemos mantener el crecimiento de los0020microorganismos pero siempre que el pH sea tolerable, el desarrollamos de esta prctica se basa en ver la diferencia de crecimiento que existe cuando tenemos distintos pH. En la accin de colorantes por ejemplo el cristal violeta ingresa en todas las clulas bacterianas tanto Gram positivas y negativas a travs de la pared bacteriana se sabe que el efecto que causa es inhibir el crecimiento de bacterias Gram positivas, en la accin oligodinmica desarrollamos la prctica con la utilizacin de metales en el cual hemos podido observar que haba un espacio de crecimiento bacteriano pero tambin una espacio de zona desinfectada lo cual nos explica como el metal puede llegar a realizar una actividad inhibitoria en el crecimiento de las bacteriaspodemos deducir que los metales penetran en el ncleo delos microorganismos, impidiendo as el funcionamiento normal de estos y como resultado se observa que no hay crecimiento, multiplicacin ni desarrollo demicroorganismos provocando as su muerte. Podemos decir que el desarrollo de esta prctica nos explica detalladamente que efectos tienen los microorganismos al ser expuestos a sustancias qumicas y cmo reaccionan ante los agentes qumicos.

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Objetivos
Objetivo General:
o Comprender la inhibicin de los microorganismos (crecimiento microbiano) por accin de agentes qumicos.

Objetivos especficos:
o o o Observar como la concentracin de iones de oxgeno, es decir, el pH de un medio determinado, condiciona el crecimiento microbiano. Observar el efecto de los colorantes, respecto al crecimiento microbiano. Observar como los metales pesados afectan a los microorganismos, respecto a su crecimiento.

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Marco Terico
AGENTES QUMICOS
pH.

pH del medio:
El grado de ionizacin de los desinfectantes depender del pH del medio. Los cambios del pH no slo pueden afectar la actividad de un desinfectante, sino que tambin pueden incidir en la velocidad de crecimiento de las clulas bacterianas y en el estado fisicoqumico de sus superficies. Mientras que un pH de 6-8 es ptimo para el desarrollo de algunas bacterias, la velocidad de crecimiento de otras disminuye cuando se acidifica o se alcaliniza el medio. Los agentes catinicos, como los compuestos de amonio cuaternarios, por lo general son ms activos en solucin alcalina que en solucin cida. Los fenoles y el hipoclorito son ms eficaces en un medio cido. La actividad esporicida del glutaraldehdo en solucin acuosa es favorecida por un pH alcalino, posiblemente como resultado de un incremento en la interaccin con grupos amino. La actividad de los hipocloritos desaparece a valores de pH superiores a 8 debido a la reduccin en la cantidad de cido hipocloroso no disociado.1

Efecto del pH del medio de cultivo sobre el crecimiento:

El pH es el logaritmo decimal negativo de la concentracin del ion hidronio (H+). Aunque algunas bacterias crecen a pH 1,0 y otras a pH 11,0, la mayora crece mejor cerca de la neutralidad (pH 7,0), en un mbito relativamente estrecho. Aquella concentracin de hidrogeniones que permite el mejor crecimiento de la bacteria de denomina pH ptimo; en los microorganismos patgenos usualmente ese pH es cercano al pH fisiolgico de sus huspedes y en los microorganismos de vida libre es cercano al pH de su microhbitat. Se conoce como valores mximos y mnimos de pH a los lmites superiores e inferiores de su mbito, fuera del cual ese microorganismo no se multiplica. Con frecuencia el metabolismo del propio microorganismo influencia el pH de su hbitat. Por ejemplo, las bacterias fermentadoras de la leche, que producen cido lctico, aumentan la concentracin de hidrogeniones en su medio

Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11: Agentes Qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. pH del medio. Pg. 112.

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ambiente y tienden a crecer mejor a pH moderadamente bajos; la misma condicin se presenta en la vagina humana, donde los lactobacilos (principalmente Lactobacillusacidophilius) desdoblan el glucgeno y bajan el pH a menos de 4,5. Por otra parte, las bacterias de la putrefaccin, que descomponen las protenas y generan aminas y amonaco, eleven el pH de su entorno pues crecen mejor en condiciones alcalinas. Otro ejemplo lo representa

Helicobacter pylori, una bacteria colonizadora del antro gstrico de humanos y

debido a una ureasa preformada desdobla la urea que se secreta a nivel gstrico y libero amonio que neutraliza el pH de su micronicho.
2

Desnaturalizacin por cidos y bases:

El apareamiento de las bases disminuye o se debilita por valores de pH alejados de la neutralidad, con la consiguiente desnaturalizacin del ADN. Sin embargo, un medio cido puede conducir tambin a la ruptura de la estructura primaria de los cidos nucleicos (el medio cido fuerte rompe los enlaces fosfodister y N-glicosdicos, mientras que en condiciones ms suaves, como el pH alrededor de 3, se separan las purinas). Por ello, para la desnaturalizacin del ADN es ms habitual emplear condiciones alcalinas (a las cuales el ADN, a diferencia del ARN, es estable). La neutralizacin del medio puede permitir la recuperacin de la estructura de partida, es decir, la renaturalizacin del ADN (con consideraciones similares a las de la desnaturalizacin por calor). 3

Colorantes.
Colorantes:
Los colorantes se utilizan ampliamente en bacteriologa y en microbiologa para la tincin y como indicadores. La incorporacin de un colorante a un medio de cultivo con frecuencia lo torna selectivo. La accin bacteriosttica de los colorantes se debe a la modificacin del potencial de xido-reduccin del medio, lo que inhibe el desarrollo de los microorganismos. En general, son ms activos contra las bacterias grampositivas y algunos hongos. Tambin se los utiliza como reveladores de biofilm de placa dental. Los principales colorantes son los derivados de la acridina (Proflavina) y los derivados del trifenilmetano (verde brillante y violeta cristal).
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Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio. Evelyn Rodrguez Cavallini. Seccin V. Factores que influencian el crecimiento microbiano. Pg. 153. 3 Texto ilustrado de biologa molecular e ingeniera gentica. Jos Luque Cabrera. Tema 13. Hibridacin de cidos nucleicos, fundamentos y mtodos de ensayo. Pg. 164.

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La solucin hiperosmtica salina con verde brillante se usa para el tratamiento de heridas y quemaduras, y la solucin acuosa de cristal violeta al 5% es til en afecciones de la piel y las mucosas. No obstante, actualmente se desaconseja su empleo debido a su poder cancergeno sobre las clulas del hospedero y a que se cuenta con medicamentos ms especficos para el tratamiento de estas afecciones.4

Tinciones Directas:
Para visualizar las bacterias de manera adecuada y demostrar los detalles finos de sus estructuras internas, en general, se requieren tinciones biolgicas. La introduccin de las tinciones a mediados del siglo XIX fue, en gran parte, responsable de los principales avances que tuvieron lugar en la microbiologa y en otros campos de la microscopia de diagnstico durante los ltimos 100 aos. Las tinciones consisten en preparaciones acuosas u orgnicas de colorantes o grupos de colorantes que proporcionan una variedad de colores a los microorganismos y a los tejidos vegetales y animales, u otras sustancias de importancia biolgica. Los colorantes puedes utilizarse como tinciones directos de materiales biolgicos, como indicadores de oxidacin-reduccin para demostrar la presencia o la ausencia de condiciones anaerobias o para demostrar las funciones fisiolgicas de los microorganismos tcnicas denominadas supravitales. Casi todos los colorantes con utilidad biolgica son derivados del alquitrn de hulla. La estructura bsica de la mayora de los colorantes es el anillo de benceno. Los colorantes estn compuestos, en general, por dos o ms anillos de benceno conectados por enlaces qumicos bien definidos (cromforos) que se asocian con la produccin de color. A pesar de que el mecanismo subyacente del desarrollo del color no se comprende por completo, en teora, ciertos radicales qumicos tienen la propiedad de absorber la luz a diferentes longitudes de onda y actan as como prismas qumicos. Algunos de los grupos cromforos ms comunes que se encuentran en los colorantes son: C==C, C==O, C==S, C==N, N==N, N==O y NO2-. La intensidad del color de un colorante es proporcional al nmero de radicales cromforos presentes en el compuesto. Los colorantes difieren unos de otros en el nmero y el ordenamiento de estos anillos y en la sustitucin de los tomos de hidrgeno con otras molculas. La mayora de los colorantes utilizados en microbiologa son derivados de la anilina y por eso se denominan colorantes anilina. 5 utilizando las

Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11: Agentes qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. Colorantes. Pg. 114. 5 Diagnstico microbiolgico: Texto y atlas en color. Elmer W. Koneman. 6 Edicin. 2006. Editorial Mdica Panamericana. Captulo I: Introduccin a la Microbiologa. Pg. 19.

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Metales Pesados.

Metales pesados:
Ciertos metales pesados o sus combinaciones qumicas ejercen efecto antimicrobiano; los ms activos son el mercurio, la plata y el cobre. Mecanismo de accin: La accin antimicrobiana se debe a la combinacin del ion metlico con los grupos sulfhdricos de ciertas protenas que se desnaturalizan de la clula microbiana: stas se inactivan, precipitan y, finalmente, producen la muerte. Accin oligodinmica: Es la propiedad que tienen ciertos metales, especialmente la plata, de ejercer efectos letales sobre las bacterias en cantidades pequesimas. El trmino deriva de dos palabras griegas: oligos, que significa poco, y dynamis, que quiere decir fuerza o poder. El fenmeno puede demostrarse en el laboratorio si se coloca un trozo pequeo de metal (plata, cobre) limpio sobre una placa con inculo bacteriano. Despus de la incubacin se presenta una zona de inhibicin (no crecimiento) alrededor de la pieza metlica. La cantidad de metal que produce este efecto inhibitorio es extraordinariamente pequeo y puede expresarse en parte por milln. Se supone que la actividad de estas pequesimas cantidades de metal se debe a la elevada afinidad de ciertas protenas celulares por el in metlico. Nitrato de plata: La solucin de nitrato de plata al 1% fue utilizada para la prevencin de oftalma gonoccica en el recin nacido. Actualmente, los antibiticos la han reemplazado. Tambin existen lpices de nitrato de plata para uso cutneo, especialmente para verrugas. 6

Metales Pesados y sus Compuestos:

Varios metales pesados, como la plata, el mercurio y el cobre, pueden ser germicidas o antispticos. La capacidad de cantidades muy pequeas de metales pesados, en especial de plata y de cobre, de ejercer actividad antimicrobiana se conoce como accin oligodinmica (oligo significa poco). Este efecto puede observarse cuando se coloca una moneda u otra pieza limpia de metal que contenga plata o cobre sobre una placa de Petri inoculada. Cantidades nfimas de metal se difunden desde la moneda e inhiben el crecimiento de las bacterias a cierta distancia alrededor de ella. Este efecto es producido por la accin de

Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11. Agentes qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. Metales Pesados. Pg. 114-115.

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los iones se combinan con los grupos sulfhdrico existentes en las protenas celulares se produce la desnaturalizacin. La plata se utiliza como antisptico en una solucin de nitrato de plata al 1%. En un tiempo muchos estados exigan el tratamiento de los ojos de los recin nacidos con unas gotas de nitrato de plata para protegerlos contra la infeccin ocular conocida como aftalma gonoccica genital, que los lactantes podan haber contrado en su paso por el canal de parto. En los ltimos aos, los antibiticos han reemplazado al nitrato de plata para este propsito. La plata tambin puede incorporarse en caracteres permanentes, que constituyen una fuente comn de infecciones intrahospitalarias, y en los vendajes de las heridas. La surfacina, un antimicrobiano relativamente nuevo para aplicar sobre superficies, sean animadas o inanimadas, contiene yoduro de plata no hidrosoluble en un polmero transportador y es muy persistente, con una duracin de al menos 13 das. Cuando una bacteria entra en contacto con la superficie se reconoce la membrana exterior de la clula y se libera una cantidad letal de iones de plata. Es probable que los compuestos inorgnicos de mercurio, como el cloruro mercrico, sean los desinfectantes ms antiguos. Tienen un espectro de actividad muy amplio y su efecto es sobre todo bacteriosttico. Sin embargo, en la actualidad su uso es limitado por su toxicidad, su accin corrosiva y su falta de eficacia en presencia de materia orgnica. Hoy los mercuriales se utilizan fundamentalmente para la formacin de moho en las pinturas. El cobre, en la forma de sulfato de cobre u otros aditivos que contienen cobre, se utiliza sobre todo para destruir las algas verdes que crecen en reservorios, depsitos, estanques de reservas, piscinas y peceras. Si el agua no contiene materia orgnica en exceso el sulfato de cobre es eficaz en concentraciones de una parte por milln de agua. Para evitar la formacin de moho los compuestos de cobre se incluyen a veces en las pinturas como 8-hidroxiquinolina de cobre. Otro metal utilizado como antimicrobiano en el zinc. El efecto de cantidades mnimas de zinc puede observarse en los techos erosionados de construcciones con pendientes provenientes de las instalaciones galvanizadas (recubiertas con zinc). En los sitios donde el crecimiento biolgico es impedido se observa un color ms claro. Se dispone de placas de tejado tratadas con cobre y con zinc. El cloruro de zinc es un componente comn de los colutorios bucales y es probable que el xido de zinc sea el agente antimictico ms utilizado en pinturas, debido a que con frecuencia es parte de la frmulas de los pigmentos.7

Introduccin a la microbiologa. Tortora-Funke-Case. 9 Edicin-2007. Editorial Mdica Panamericana. Caractersticas microbianas y control microbiano. Pg. 202-203.

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Materiales
Materiales:
a. Material Moneda Cobre. de Descripcin Se utiliz para la prueba con metales pesados. Imagen

b. Asa de siembra.

Sirve para sembrar en la placa Petri.

c.

Detergente.

Nos sirvi para limpiar la moneda de cobre.

d. Cepillo usado.

Nos sirvi para limpiar la moneda de cobre.

e.

Tubos Ensayo.

de

Fue donde se tuvo la muestra de distinto pH.

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f. Algodn. Se hicieron torundas para los tubos de ensayo.

g.

Placas Petri.

Es el medio donde se cultivan los microorganismo s.

h. Vaso de precipitado.

Se utiliz para verter lquidos y luego utilizarlos.

i.

Pizeta.

Se utiliz para limpiar la moneda de cobre.

j.

Mechero Bunsen.

de

Se utiliz para esterilizar el asa de siembra.

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k. Portaobjetos. Se utiliz como una lmina para observar la E. Coli con ayuda del microscopio.

l.

Pinza madera.

de

Se utiliz para acercar el portaobjetos al fuego.

m. Plumn indeleble.

Se utiliz para marcar lo que utilizaramos (placas Petri, portaobjetos, etc.).

Equipos:
Equipo a. Horno. Descripcin Lugar donde se incuban las placas con los microorganismos, as mismo, los tubos de ensayo. Imagen

b. Autoclave.

Se utiliza para esterilizar las placas antes de poder utilizarlas.

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c. Microscopio. Se utiliza para ver con un gran aumento a los microorganismos.

Reactivos:
Reactivo a. Coloracin de Gram: (Cristal violeta, lugol, alcohol acetona, safranina, aceite de inmersin). Descripcin Son colorantes para poder distinguir entre bacterias grampositiva o gramnegativas, tien las bacterias para que sean visibles. Imagen

b. Caldo agar (nutritivo).

Es el medio donde crecern los microorganismos.

c.

Cristal violeta.

Es un colorante, para la prueba qumica del mismo en relacin a su accin inhibidora.

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PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
Concentracin de iones de hidrgeno.
Se procedi con lo siguiente: o o o Se nos entreg cinco tubos de ensayo con medio de cultivo, pero con distinto pH. Se inocul a cada tubo una cierta cantidad de muestra de E. Coli. Se observ el crecimiento tras el paso de los das.

Resultado:

Se observ que a una mayor concentracin de pH va a existir un mayor crecimiento de E. Coli.

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Accin de los colorantes.

Cada placa contiene agar y cristal violeta con
-4

Dividir cada placa en tres partes iguales.

las
-5

siguientes

concentraciones 10 , 10 y 10-6,

Despus rotular los datos y llevar a incubar a 37 C por 24-48 hrs. Observar los resultados.

Sembrar en cada tercio de las placas, una cepa distinta:

E.

coli,

B.

subtilisy

St.

aureusrespectivamente

Resultados:
Hubo un crecimiento no tan grande. En este medio de cultivo se utiliz ms colorante que en los otros, por lo tanto a mayor concentracin de colorantes, se da un menor crecimiento bacteriano.

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Accin oligodinmica de los metales pesados.

Preparar dos cajas Petri con Agar nutriente.

Derretir el contenido en dos probetas despus enfriarlas 45C..

Inocular una probeta con E. coli y otra con

Staphyiococcusaureu s.

Lavar las monedas con agua y jabn utilizando pinzas, despus lavarlo con alcohol. Mantener las probetas a 45C. Homogenizar cada probeta.

Colocar la moneda en el centro de la placa Petri en el Agar

Luego echar sobre la moneda el Agar derretido, logrando as que se forme una placa sobre la primera.

Despus mismo

repetir

el

procedimiento

Tapar la placa Petri y rotularla e incubarla en forma invertida 37C por 24-48 horas.

con el otro organismo en a segunda placa.

Resultado:
En el borde de la moneda no creci ninguna bacteria, pues la accin inhibidora de los metales, al liberar iones hacen que las bacterias no puedan crecer normalmente.

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Tincin de Gram.
o Se realiz la tincin de Gram para ver las E. Coli

Se observaron las E. Coli a un aumento de 100x.

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DISCUSIONES
Discusin n 1:

EFECTO ANTIBACTERIANO DE 5 ANTISPTICOS DE USO EN CAVIDAD BUCAL

Recibido para arbitraje: 06/10/2008. Aceptado para la publicacin: 16/04/2010.

M. en C. Jos Jess Muoz Escobedo, Investigador Docente, Instituto de Investigaciones Odontolgicas, Unidad Acadmica de Odontologa. Universidad Autnoma de Zacatecas Mxico. MCD. Patricia Gmez Marroqun, Ex alumna Unidad Acadmica de Odontologa UAZ. Dra. en C. Alejandra Moreno Garca, Investigador Docente, Unidad Acadmica de Biologa Experimental UAZ. CORRESPONDENCIA: E-mail: ymunoz@terra.com.mx

En el presente estudio, la susceptibilidad de S. aureusy E. colia cinco antispticos de uso en cavidad bucal fueron determinados por el mtodo del papel filtro inmerso en antispticos. La reproducibilidad del experimento fue buena., en la bsqueda bibliogrfica se encontr variada informacin sobre las medidas requeridas para una adecuada antisepsia (1,2). Dentro de los antispticos que mostraron un alto poder antibacteriano "In vitro" tanto para bacterias Gram negativas como positivas, son el Hipoclorito de sodio (Cloralex) y perxido de hidrgeno (Agua oxigenada), incluyendo su bajo costo y amplio mercado en los pases (26,5). Es importante mencionar que el Hipoclorito de sodio se experiment al 0.5 % y al 1.25% siendo esta ltima concentracin ms eficaz contra las bacterias probadas. Bibliogrficamente la concentracin al 1.25% no se menciona, sin embargo cabe mencionar que en la Unidad Acadmica de Odontologa de la Universidad Autnoma de Zacatecas Mxico, a esta concentracin es utilizada de manera rutinaria para el tratamiento de conductos radiculares y de acuerdo al autor principal, se obtienen buenos resultados (27,28). Sigue siendo controversial el grado de dilucin o si el hipoclorito de sodio debe utilizarse en combinacin con otras soluciones como es el perxido de hidrgeno (29). En el caso del perxido de hidrgeno equivalente a 3.18%, result estar dentro de los mejores antispticos probados. Se describe que el perxido de hidrgeno debe

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alternarse con otro antisptico para tener efectos satisfactorios, pero tambin se menciona que la accin solvente del agua oxigenada en tejidos orgnicos es mucho menor que el Hipoclorito de Sodio (30). Los resultados experimentales nos hacen reflexionar sobre la eficacia de los antispticos ms comnmente usados en cavidad bucal, un ejemplo es el Gluconato de Clorhexidina al 0.12% (Gingivitis de oral B) el efecto antibacteriano "In vitro" result inferior comparado con 2 de los antispticos como es el perxido de hidrgeno al 3.18 % e hipoclorito de sodio al 1.25%, cabe mencionar que en la bibliografa consultada se menciona que el gluconato de clorhexidina, tiene un efecto antisptico superior a estos dos (31,32). Se menciona que aunque la Clorhexidina posee resultados antibacterianos semejantes a los del Hipoclorito de Sodio al 5.25% e incluso tiene mejor efecto residual que el Hipoclorito a las 24 horas pero que no tiene la capacidad de disolver tejido pulpar. No obstante a ello la Clorhexidina se usa para pacientes alrgicos al Hipoclorito (33,34). Para el caso de 2 de ellos (Isodine bucofarngeo e hidrxido de calcio) presentaron un efecto antibacteriano "In vitro" significativamente inferior a lo referido por Cabrera y cols., Rodrguez PAU y cols., y Rodrguez PAU (2,3,4). En cambio los resultados de ste estudio demuestran que el peroxido de hidrogeno y el hipoclorito de sodio para ambas cepas bacterianas (S. aureusy E. coli) tienen amplio efecto bactericida concordando lo obtenido, con lo descrito por los investigadores Lerones C. y cols., Waltimo TMT. y cols. (35,36) . Es importante mencionar que el efecto antibacteriano de todos los antispticos fue mejor contra el S. aureusque es una bacteria Gram positiva en cambio contra E. coli (bacteria Gram negativa) dicho efecto fue menor. -

Discusin n 2: Accin de agentes qumicos sobre los microorganismos:

Segn: (Artculo Cientfico):
o o Pelczar MJ, Reid RD. Microbiologa. Madrid: Ediciones del Castillo SA, 1966. Prescoh LM, Harley JP, Klein DP, Microbiology. 2nd ed. USA: Wmc. Brown Publishers, 1993. Stanier RY, Adelberg EA, Ingraham JL. Microbiologa. 4ta ed. Barcelona. Editorial Revert SA. 1984.

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Accin del pH:

La acidez o alcalinidad de un medio es expresada en trminos de pH. Los microorganismos tienen un pH ptimo en el cual se obtiene el mejor crecimiento. Comnmente, el pH ptimo es neutro (pH=7), y la mayora de los microorganismos no se desarrollan a una unidad de pH por encima o por debajo de su pH ptimo. Las bacterias son clasificadas como acidfilas, neutrfilas y alcalinfilas de acuerdo con las condiciones de acidez o alcalinidad que ellas puedan tolerar. Las bacterias acidfilas se desarrollan en un rango que va desde pH 0,0 HASTA 5,4. Las bacterias neutrfilas crecen en un rango de pH de 5,4 hasta 8,5; incluyndose en este grupo a la mayora de las bacterias que causan enfermedades en el hombre. Las bacterias alcalinfilas se desarrollan entre un pH de 7,0 hasta 11,5. (Vibrio cholerae, agente causal del clera, se desarrolla mejor a un pH cercano a 9).

Accin de los colorantes:

Un efecto bacteriosttico es aquel que aunque no produce la muerte de una bacteria, impide su reproduccin; la bacteria envejece y muere sin dejar descendencia. Un efecto bacteriosttico est producido por sustancias bacteriostticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias.

Accin oligodinmica de los metales pesados:

Los iones de los metales pesados, como: mercurio, plata, arsnico, zinc y cobre se han empleado como germicidas, aunque muchos metales pesados son ms bacteriostticos que bactericidas, se han sustituido por otros menos txicos y con un mayor poder germicida, aunque algunos de los tradicionales siguen utilizndose, como la plata. Una solucin del 1% de nitrato de plata se aplica a menudo en los ojos de los nios para prevenir gonorrea oftlmica (en muchos hospitales se utiliza en su lugar eritromicina porque es eficaz frente a los gneros CHLAMYDIA y NEISSERIA). Las cantidades nfimas de metal se difunden desde la moneda e inhiben el crecimiento de las bacterias a ciertas distancias alrededor de ella. Este efecto es producido por la accin de los iones de los metales pesados sobre los microorganismos. Cuando estos iones se combinan con los grupos sulfhdrilo existentes en las protenas celulares se produce su desnaturalizacin.

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CONCLUSIONES
Las conclusiones son las siguientes:
o o A mayores concentracin de pH va a existir mayor crecimiento de E. Coli, es decir, que en un medio alcalino el crecimiento es mayor. En relacin a la accin de colorantes, cuando existe una mayor concentracin de colorantes, no se va a observar crecimiento y multiplicacin de bacterias. En las concentraciones de 10 -4, 10-5 no se observa nada de crecimiento, en cambio en 10 -6 se vio crecimiento debido a que la concentracin es menor, o Sobre los metales pesados, la moneda de cobre va a inhibir el crecimiento bacteriano, ya que los iones de cobre liberados tienen una gran actividad sobre el crecimiento microbiano.

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RECOMENDACIONES
Estudiar previamente las prcticas a efectuar, con el propsito de comprender sus objetivos y los principios en que se funda, en algunos casos ser necesario consultar libros de texto para aclarar algunos conocimientos. La utilizacin de guardapolvo es muy conveniente, ya que evita que posibles proyecciones de sustancias qumicas lleguen a la piel. Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustancias corrosivas o txicas. En ocasiones, pueden ser recomendables los guantes de un slo uso. Es muy aconsejable, si se tiene el pelo largo, llevarlo recogido o metido en la ropa, as como no llevar colgantes. Cada grupo se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Es imprescindible la limpieza del laboratorio, de su instrumental y utensilios, as como que est ordenado. En caso de daos al material la reposicin ser a cargo de los alumnos que lo tengan bajo su responsabilidad. Despus de haber terminado la prctica, los alumnos debern entregar el material y equipo limpio en buen estado al auxiliar del laboratorio.

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BIBLIOGRAFA
Bibliografa del Fundamento Terico:
o Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11: Agentes Qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. pH del medio. Pg. 112. Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio. Evelyn Rodrguez Cavallini. Seccin V. Factores que influencian el crecimiento microbiano. Pg. 153. Texto ilustrado de biologa molecular e ingeniera gentica. Jos Luque Cabrera. Tema 13. Hibridacin de cidos nucleicos, fundamentos y mtodos de ensayo. Pg. 164. Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11: Agentes qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. Colorantes. Pg. 114. Diagnstico microbiolgico: Texto y atlas en color. Elmer W. Koneman. 6 Edicin. 2006. Editorial Mdica Panamericana. Captulo I: Introduccin a la Microbiologa. Pg. 19. Microbiologa Estomatolgica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Cap. 11. Agentes qumicos antispticos y desinfectantes. Alcira C. Rosa y Mara Ins Gonzlez. Metales Pesados. Pg. 114-115. Introduccin a la microbiologa. Tortora-Funke-Case. 9 Edicin-2007. Editorial Mdica Panamericana. Caractersticas microbianas y control microbiano. Pg. 202-203.

o o o

o o

Bibliografa de las discusiones:

o M. en C. Jos Jess Muoz Escobedo, Investigador Docente, Instituto de Investigaciones Odontolgicas, Unidad Acadmica de Odontologa. Universidad Autnoma de Zacatecas Mxico. MCD. Patricia Gmez Marroqun, Ex alumna Unidad Acadmica de Odontologa UAZ. Dra. en C. Alejandra Moreno Garca, Investigador Docente, Unidad Acadmica de Biologa Experimental UAZ. CORRESPONDENCIA: Email: ymunoz@terra.com.mx

Segn: (Artculo Cientfico):

Pelczar MJ, Reid RD. Microbiologa. Madrid: Ediciones del Castillo SA, 1966. Prescoh LM, Harley JP, Klein DP, Microbiology. 2nd ed. USA: Wmc. Brown Publishers, 1993. Stanier RY, Adelberg EA, Ingraham JL. Microbiologa. 4ta ed. Barcelona. Editorial Revert SA. 1984.

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ANEXOS

Accin oligodinmica de los metales pesados. Alrededor de la moneda de diez centavos y del sombrero se observan zonas claras donde se ha inhibido el crecimiento bacteriano. El sombrero y la moneda de diez centavos son de plata; el penique es de cobre.

Imgenes de la prctica de laboratorio:

Distintos cultivos de bacterias (E. Coli, Bacillus, etc.)

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Lavado de la moneda de cobre antes de llevar a la placa Petri.

Se verti el cultivo de E. Coli en la placa con la moneda de cobre.

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Se llevaron las muestras al horno para que incuben.