CONCENTRACIN DE FIBRINGENO PLASMTICO EN VACAS LECHERAS CON MASTITIS

Lechuga AAA, Gutirrez CAJ, Olgun y BA, Bouda J, Quintero CJ y Barraza RJE.

Resumen El objetivo del presente trabajo fue determinar la concentracin de fibringeno, protenas plasmticas y protenas en orina en vacas lecheras con mastitis clnica, con diferente intensidad de la enfermedad a fin de sustentar bases para restablecerse como una prueba diagnstica. El estudio se realiz en la cuenca lechera de La Laguna, Torren, Mxico. Se utilizaron 74 vacas en produccin de la raza Holstein y se formaron: Grupo 1 (n=39), vacas con mastitis clnica y Grupo 2 (n=35), vacas clnicamente sanas. Mediante el examen fsico de los animales y de la leche se clasificaron los cuadros de mastitis. En el grupo 1, se observ mastitis crnica (MCr) en el 12.8%, mastitis moderadamente aguda (MMA) en el 51.2% y mastitis severamente aguda (MSA) en el 35.8%. La concentracin promedio de protenas plasmticas (PP), fibringeno (Fb) y protenas en orina fueron 95.4 10.7 g/L, 8.38 5.09 g/L y 28% (11/39), respectivamente. De acuerdo al grado de mastitis se obtuvo para PP en MCr 104.0 8.5 g/L, MMA 92.7 11.5 g/L y MSA 96.2 8.8 g/L; Fb, 8.20 5.76 g/L, 7.45 4.68 g/L y 9.79 5.48 g/L para MCr, MMA y MSA, respectivamente; proteinuria se observ en 18% (2/11), 54% (6/11) y 27% (3/11) para MCr, MMA y MSA, respectivamente. Para el grupo 2, el promedio general de PP fue 91.0 6.0 g/L, Fb de 6.86 4.5 g/L as como ninguna reaccin positiva para protenas en orina. Cabe sealar que aunque no se encontr una diferencia significativa en los resultados de ambos grupos, la tendencia indica que la medicin de los valores del fibringeno puede ser utilizada como una prueba complementaria para el diagnstico. Introduccin Uno de los mltiples factores que limitan la eficiencia en los establos lecheros, es la presencia de enfermedades que provocan una reduccin en la produccin de leche. Esta disminucin puede o no ir acompaada por signos relacionados a una enfermedad que debern ser determinados por un Sistema General de Diagnstico (SGD), el cual incluye: anamnesis, anlisis de registros, anlisis de la racin alimenticia, exploracin fsica de los animales, toma de muestras, anlisis de muestras a nivel de campo y laboratorio e interpretacin de los resultados. Las pruebas que requeran varias horas en llevarse a cabo, hoy se cuenta con el resultado casi en forma inmediata por micromtodos en equipos automatizados. De igual forma la confiabilidad en los resultados obtenidos se ha incrementado. La medicin de las concentraciones de protenas plasmticas aporta importante informacin sobre los procesos inflamatorios. El fibringeno es una protena plasmtica de fase aguda producida y liberada al torrente sanguneo por el hgado en respuesta a un proceso inflamatorio. Adems, forma parte de la cascada de MVZ. Alma Arianna Lechuga Arana. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Av. Universidad # 3000. Ciudad Universitaria, D.F. C.P. 04510, Mxico, D.F. Tel. (01-55) 56-22-59-72/5616-71-61. Correo Electrnico: alma_arianna@yahoo.com.mx.

coagulacin (factor I) y es precursor de la fibrina para la reparacin de tejido daado y favorecer el proceso de migracin de clulas inflamatorias, fibroblastos y clulas endoteliales. La medicin de la concentracin del fibringeno puede ser utilizada como una herramienta alternativa para el monitoreo del estado de salud de los animales. La informacin obtenida es relevante debido a que se puede confirmar o descartar diagnsticos presuntivos. Material y mtodos La investigacin se llev a cabo en unidades de produccin lechera ubicadas en la Comarca Lagunera, Mxico. Se emplearon vacas de la raza Holstein en estabulacin. En cada uno de los animales en produccin, se aplic un SGD, incluyendo la evaluacin clnica de la ubre, mediante un examen fsico utilizando la metodologa descrita por vila S., 1996. Posteriormente, de cada glndula mamaria se tom una muestra de leche para la realizacin de la prueba de tazn de fondo oscuro, segn la metodologa descrita por Schalm et al., 1976. Del total de animales examinados, se formaron dos grupos: Grupo 1 (n=39), vacas con mastitis clnica, las cuales se clasificaron de acuerdo al grado de inflamacin como vacas con mastitis crnica (MCr), mastitis moderadamente aguda (MMA) y mastitis severamente aguda (MSA) y Grupo 2 (n=35), formado por animales clnicamente sanos y sin cambios en la leche. Finalmente, a todos los animales de cada grupo se les tom una muestra de 3 mL de sangre por puncin de la vena caudal y se deposit en un tubo al vaco (Vacutainer) con cido etiln-diamino-tetractico (EDTA) como anticoagulante. Se transport en refrigeracin al Laboratorio de Anlisis Clnicos y Patologa Veterinaria de la Laguna, S.C. 1, en donde se procedi a la determinacin de la concentracin de protenas plasmticas y fibringeno por refractometra, siguiendo la metodologa descrita por Jardn, 2003. Para la valoracin de proteinuria, se obtuvieron muestras de orina por miccin espontnea y cateterizacin de vejiga urinaria. Una vez obtenida la muestra, se aplic la prueba de cido sulfosaliclico siguiendo la metodologa descrita por Davidson et al., 2000. Para el anlisis estadstico, la informacin obtenida tanto en el examen fsico de los animales como en las muestras de laboratorio fue capturada y procesada utilizando el paquete estadstico S.A.S. (Statistic Analyze System). La codificacin de la informacin se realiz utilizando como categora descriptiva la identificacin del animal y como variables a estudiar la informacin de los resultados del examen fsico, el nivel de enfermedad, as como los resultados de las pruebas de laboratorio. Los datos fueron procesados utilizando el procedimiento MEANS, GLM, Prueba de Tukey y CORR. Resultados A la aplicacin del SGD, se diagnosticaron 39 vacas con diversos grados mastitis clnica (Grupo 1) y 35 vacas clnicamente sanas (Grupo 2). Todos animales se encontraban bajo condiciones de produccin intensiva estabulacin total en corrales combinados con cubculos de acceso libre.
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de los en La

Laboratorio de Anlisis Clnicos y Patologa Veterinaria de la Laguna, S.C. Responsable: Dr. Jess Quintero C. Av. Trujado # 1024 Sur, Gmez Palacio, Dgo. Mxico. Correo electrnico: lacpvlaguna@hotmail.com.

alimentacin era en base al ofrecimiento de una racin integral. La condicin corporal promedio de los animales pertenecientes al estudio fue de 2.98 0.48 puntos. Con relacin al Grupo 1 (n=39) vacas con mastitis clnica, se encontr que el 12.8% correspondieron a vacas con MCr, el 51.2% a vacas con cuadros de MMA y el 35.8% restante a vacas con MSA (Cuadro 1). En lo que corresponde al examen fsico general (EFG), las vacas con MCr no presentaron alteraciones en sus constantes fisiolgicas (temperatura rectal, frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria y movimientos ruminales), mientras que en la vacas con MMA y MSA, el 15 y el 14.2%, respectivamente, presentaron un aumento de la temperatura corporal (Cuadro 2). Cabe sealar que todas las vacas de este grupo, mostraron alteraciones en la secrecin lctea de una o ms glndulas mamarias, por lo que fueron separadas del grupo de produccin y enviadas al corral de enfermera. Del grupo 2 (n=35), formado por animales clnicamente sanos y sin cambios aparentes en la secrecin lctea, no se registraron alteraciones fisiolgicas al momento de aplicar el examen fsico (Cuadro 2). Los resultados del anlisis de las muestras sanguneas y de orina para la obtencin de los valores de la concentracin de protenas plasmticas (PP), fibringeno (Fb) y protenas en orina fueron los siguientes: Grupo 1, (vacas con mastitis clnica) el promedio general de la concentracin de PP fue 95.4 10.7 g/L y para Fb de 8.38 5.09 g/L; en lo que respecta a la prueba de cido sulfosaliclico, se identificaron reacciones positivas en el 28% (11/39) de las vacas de este grupo. Mientras que para el grupo 2 (animales clnicamente sanos), el promedio general de la concentracin de PP fue 91.0 6.0 g/L y para Fb de 6.86 4.5 g/L; resaltando que no se registraron pruebas positivas al cido sulfosaliclico en los animales de este grupo (Cuadro 3). La concentracin de PP tuvo una variacin de acuerdo al grado de mastitis, por lo que se registr para cuadros de MCr 104.0 8.5 g/L; para MMA 92.6 11.5 g/L y para MSA de 96.2 8.8 g/L. En cuanto a la concentracin de Fb, se obtuvieron los siguientes valores: 8.20 5.76 g/L para vacas con MCr, 7.45 4.68 g/L para MMA y 9.79 5.48 g/L para vacas con MSA. Los resultados de la prueba de cido sulfosaliclico de los animales del grupo 1 se distribuyeron en la siguiente forma: 18% (2/11) en cuadros de MCr, 54% (6/11) en MMA y 27% (3/11) en cuadros de MSA; mientras que los resultados del grupo 2 fueron todos negativas. Las reacciones positivas observadas por la aplicacin de dicha prueba (grupo 1) tuvieron una variacin en la intensidad de (1+) hasta (4+) (Cuadro 4). A partir del anlisis estadstico de los datos, se encontr que la interaccin entre las diferentes variables utilizadas en este estudio de acuerdo al grado de afeccin (MCr, MMA y MSA) y a la condicin de estatus (sanas o enfermas), resultaron ser altamente significativos los valores de movimientos ruminales, protenas plasmticas y protenas en orina (P<0.05) (Cuadros 3 y 4). Discusin y conclusin En este estudio se observ que el 50% de los animales con mastitis clnica se encontraban en sus primeros das de lactacin. Esto concuerda con lo mencionado por vila J. 1998, quien seala que las vacas recin paridas y durante los primeros das de lactacin, presentan mayor susceptibilidad a padecer una alta frecuencia de trastornos clnicos como: problemas metablicos, reproductivos,

digestivos, respiratorios y de mastitis, entre otros, cuando las condiciones e intensidad de produccin son elevadas y/o mal manejadas. Con relacin a los valores sanguneos de la concentracin de PP, se pudo observar que existe una diferencia significativa entre el grupo 1 y 2 (P<0.05). Ramrez et al., 2000 en un estudio realizado en el estado de Hidalgo evaluaron los cambios hematolgicos que presentaban vacas en diferentes etapas de produccin, en donde sealan haber encontrado concentraciones plasmticas ligeramente elevadas en ganado clnicamente sano. Sin embargo, en lo que se refiere a los valores de la concentracin de fibringeno, aun existiendo una diferencia entre los grupos de animales sanos y enfermos, sta no fue significativa (P>0.05). Los resultados de la prueba de cido sulfosaliclico para la deteccin de protenas en orina realizada a los animales del grupo de vacas enfermas (grupo 1), destac slo en aquellos casos donde la intensidad del proceso de mastitis, fue de moderado a severo. En otras investigaciones, se ha observado que la medicin de los valores de protenas en orina son fundamentales para el diagnstico de la reticulitis traumtica y de problemas podales, por lo que tambin puede ser importante en el diagnstico de mastitis. Los valores de las concentraciones de protenas plasmticas entre los animales sanos y enfermos fueron significativos (P<0.05), resultando que los animales con mastitis presentaron un incremento en dicha concentracin plasmtica. La determinacin y sobre todo la identificacin especfica de las diferentes protenas plasmticas es sin lugar a dudas un mtodo complementario de diagnstico muy exacto. Sin embargo una de las protenas que se pueden determinar en forma rpida y econmica es el fibringeno, debido a que otras protenas con mayor especificidad diagnstica en ganado bovino, requieren mtodos ms tardados y complejos cuyo costo simplemente es mayor. Con relacin a los resultados de la prueba con cido sulfosaliclico, estos fueron significativos entre los grupos de animales sanos y enfermos. Esto puede ser explicado con lo siguiente: por un lado, los resultados de las pruebas realizadas a los animales del grupo 2 fueron todas negativas, situacin que concuerda con los resultados del EFG el cual determin que los integrantes de dicho grupo estaban clnicamente sanos, y por otro, que la pruebas positivas se registraron en animales del grupo 1 cuyo EFG identific alteraciones sistmicas como fiebre, hipomotilidad ruminal, entre otros signos. Es importante tomar en cuenta que la prueba puede tener variaciones que debern ser consideradas en la interpretacin de la misma, puesto que con base en el mtodo de muestreo, se puede obtener una muestra contaminada con fluidos o exudados de tejidos u rganos adyacentes, y de esta forma interferir en los resultados. La determinacin de la concentracin e identificacin de las protenas plasmticas aporta elementos para una mejor interpretacin clnica, debido a que en el caso de mastitis, existen infecciones que inducen cambios como el incremento en la cantidad de clulas somticas y algunas protenas de la respuesta inflamatoria, mucho antes de la presentacin de signos especficos. Sin embargo, es necesario resaltar que dichas pruebas juegan un papel complementario, mismas que pueden ser aplicadas para diferenciar una enfermedad de curso agudo o crnico y que esto debe ser utilizado como datos para la aplicacin de un SGD que finalmente

aporte en conjunto la informacin suficiente y necesaria para emitir un diagnstico presuntivo , debido a que la respuesta del organismo al sintetizar una ligera o abundante cantidad de protenas plasmticas, va con relacin como se ha mencionado antes, al grado y extensin de la lesin; sin embargo, esta reaccin es inespecfica, misma que se puede observar incrementada por factores ambientales y de manejo, entre otros. Como conclusin con base en los resultados obtenidos en el presente estudio resulta que los valores de la concentracin de fibringeno as como de protenas plasmticas, pueden ser utilizados como informacin diagnstica en casos de mastitis clnica bovina. Cabe sealar que aunque no se encontr una diferencia significativa en los resultados al tratar de separar los grados de severidad de la enfermedad, la tendencia de stos, refleja un comportamiento a travs de la aplicacin correcta de un SGD, que permite determinar un diagnstico y tratamiento eficiente de los animales enfermos.
Literatura citada vila GJ. El periodo preparto y su influencia en la eficiencia reproductiva. Memorias del XXII Congreso Nacional de Buiatra; 1998 Julio 20-25; Acapulco (Guerrero) Mxico. Mxico (DF): Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios Especialistas en Bovinos, AC. 1998: 182-190 vila TS, Gasque GR, Cano CP, Baos CA, Fuentes HV. Frecuencia anual de mastitis clnica y sus costos en una explotacin del Valle de Mxico. Memorias de XVIII. Congreso Nacional de Buiatra; 1993 Noviembre 11-13, Mxico DF Mxico. Mxico (DF): Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios Especialistas en Bovinos, AC, 1993: 239-244. vila TS, Valdivieso NG, Cruz PARA. Fisiopatologa de la glndula y ordeo [Computer Program]. Mxico, (DF). Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, 2001. vila TS. Curso Internacional Tcnico prctico de Actualizacin en el Diagnstico de las Enfermedades ms frecuentes en Bovinos. Divisin de Educacin Continua, Departamento Diagnstico Clnico y Departamento Produccin Animal: Rumiantes. 18 al 20 de Abril de 1996. pp. 119-124. Bouda J, Paasch ML, Yabuta OA: (1997) Desarrollo y empleo de diagnstico preventivo de los trastornos ruminales y metablicos en bovinos. Vet Mx 1997; 28: 189-195. Bouda J, Quiroz RGF. Actualizacin en el diagnstico de enfermedades metablicas y ruminales en bovinos. Memorias del Curso durante el Congreso Mundial de Buiatra; 2000 Diciembre 9-10; Punta del Este Uruguay: 2000:9-15. Daniel WW. Bioestadstica. Base para el anlisis de las ciencias de la salud, 3 Ed. Limusa-Noriega Editoriales, Mxico, DF. 1993. Davidson MG, Else RW, Lumsden JH. Manual de patologa clnica en pequeos animales. Espaa: Harcourt, 2000. Eckersall PD, Young FJ, McComb C, Hogarth CJ, Safi S, Weber A, McDonald T, Noland AM, Fitzpatrick JL. Acute phase proteins in serum and milk from dairy cows with clinical mastitis. Vet Rec 2001, 148: 35, 41. Eckersall PD. Recent advances and future prospects for the use of acute phase proteins as markers of disease in animals. Rev Med Vet 2000; 151; 7:577-584. Feldman BF., Zinkl J, Jain NC. Schalms veterinary hematology. 5th ed. Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia 2000.

Gabay C, Kushner I. Acute-phase proteins and other systemic responses to inflammation. The New England J Med 1999; 340; 6: 448-454. Jardn HS et al. Manual de prcticas de patologa clnica [edicin electrnica]. Mxico DF: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM, 2003. Luna GA, Morales FL, Ortiz SB. Mastitis subclnica en el rea de SLP. Memorias del XXI Congreso Nacional de Buiatra; 1997 Julio 9-12; Colima (Colima) Mxico. Mxico (DF): Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios Especialistas en Bovinos, AC. 1997:108-111. Matheus CN, Ramrez GF, Salazar SC. Efecto de la variacin diaria de peso, condicin corporal y hematocrito sobre la concentracin de protenas plasmticas. Memorias del XXVI Congreso Nacional de Buiatra; 2002 Julio 11-13; Acapulco (Guerrero) Mxico. Mxico (DF): Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios Especialistas en Bovinos, AC. 2002: 278. Nuez OL, Bouda J., (Editores) Patologa Clnica Veterinaria (Hematologa, Bioqumica Clnica, Endocrinologa, Casos clnicos). Libro para estudiantes de Licenciatura. FMVZ-UNAM, Mayo, 2005. 346. En prensa. Petersen HH, Nielsen JP and Heegaard PMH. Application of acute phase protein measurements in veterinary clinical chemistry. Vet Res 2004, 35. 163, 187. Pyrl S. Indicators of inflammation in the diagnosis of mastitis. Vet Res 2003, 34, 565, 578 Radostits OM, Gay CC, Blood DC, Hinchcliff KW. Veterinary medicine. 9th ed. Saunders, Philadelphia, EUA. 2000. Ramrez DG, Padilla AS, Candanosa AE, Lima MA. Hallazgos hematolgicos en vacas lecheras altas productoras. Memorias del XXIV Congreso Nacional de Buiatra; 2000 Junio 15-17; Guadalajara (Jalisco) Mxico. Mxico (DF): Asociacin Mexicana de Mdicos Veterinarios Especialistas en Bovinos, AC. 2000: 215-218. SAS. Institute Inc., SAS Procedures Guide, Version 8, Cary, NC: SAS Institute Inc., 2002. Schalm WO, Carroll JE and Jain NC. Bovine mastitis. Lea & Febiger, Philadelphia, USA. 1976.

Cuadro 1. Porcentaje de mastitis de acuerdo a la severidad inflamatoria en vacas lecheras Cuadro de Grupo mastitis 2 Sanas (n=35) 0% (0/35) 1 Enfermas (n=39) 12.8% (5/39) MCr 51.2% (20/39) MMA 35.8% (14/39) MSA MCr: Mastitis crnica, MMA: Mastitis moderadamente aguda, MSA: Mastitis severamente aguda

Cuadro 2. Examen fsico de los animales Frecuencia Frecuencia Temperatur Movimientos Grupo respiratoria cardiaca a rectal ruminales 2 (n=35) Sanas 1 (n=39) Enfermas MCr 3/20 (15%) MMA 2/14 (14%) MSA Valor dentro del rango normal; Temperatura aumentada MCr: Mastitis crnica, MMA: Mastitis moderadamente aguda, MSA: Mastitis severamente aguda Cuadro 3. Concentracin de protenas plasmticas, fibringeno y frecuencia de proteinuria en vacas lecheras Protenas Fibringeno Proteinuria Grupo plasmticas (g/L) (+) (g/L) Sanas 91.0 6.86 Nega Enfermas 95.4b 8.38 11/39b Valores en columna con diferente literal son significativos (p<0.05) Cuadro 4. Concentracin de protenas plasmticas, fibringeno y frecuencia de proteinuria en vacas lecheras en base en la severidad del cuadro clnico de mastitis Protenas Cuadro de Fibringeno Proteinuria plasmticas mastitis (g/L) (+) (g/L) 104 8.20 2/11 MCr 92.6b 7.45 6/11 MMA a,b 96.2 9.78 3/11 MSA Valores en columna con diferente literal son significativos (p<0.05) MCr: Mastitis crnica, MMA: Mastitis moderadamente aguda, MSA: Mastitis severamente aguda