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Curso Introductorio a CBL BD SurePath™

Programa de Entrenamiento
• BD Diagnostics – WH&C

Jorge Garcia Aleman, M.D.


Application Specialist
Women Health & Cancer
BD Diagnostic Systems
& Life Sciences
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Septiembre 2017
1
Agenda
Elementos de entrenamiento

Objetivo • Clases:
– Metodos y técnicas de
colección de especímenes
• Cualificar al – Procesamiento de muestras
participante en en BD PrepStain™
evaluación de – Morfología (didáctico)
laminillas de CBL
Citología de Base
Líquida • Revisión de laminillas
BD SurePath™ • Test de Evaluación

– Certificación

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Recolección de Muestras
• “El proceso BD SurePath™ inicia con personal cualificado usando . . .
• Dispositivos de tipo cepillo e.g., Rovers Cervex-Brush® , Rovers Cervex-Brush®
Combi ó
• Cepillo endocervical / Espátula de Ayre
e.g. Cytobrush Plus GT & Pap Perfect™ espatula”

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Transferencia de la Muestra
• Desprender el cabezal y colocarlo
dentro del Vial BD SurePath™

• Asegura el 100% de la muestra!

• Cuando el Vial BD SurePath


contiene cámara interna, el
cabezal se mantiene dentro en
todo el proceso SIN interferer en
otros equipos y procesos de
biología molecular.

BD PrepStain™ System Product Insert — Doc 779-10002-02 Rev C


BD SurePath™ Collection Product Insert — Doc. No. 779-10001-02 Rev C
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Procesamiento de la muestra de CBL BD SurePath™

Multi vortex BD PrepMate™ Centrifuga BD PrepStain™

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“El Proceso de Enriquecimiento Celular” 1er prog centrifuga 2o prog centrifuga
2 min @ 200 rcf 10 min @ 800 rcf

ANTES y DESPUES del Enriquecimiento Celular


Vortex Mezcla y Coloca una capa de
Aspira muestra SOBRE el Photos compliments of Dr. Dugald Taylor
≈ 8 µL Reactivo de Densidad

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Operator’s Manual – PrepStain slide Processor – 780-06181-00 Rev B
Preparación y Tinción de laminillas
BD PrepStain™
Transferencia Automatica de muestras a las

Cámaras de sedimentación

Tinciones administradas

Botón Celular Homogeneizado

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Operator’s Manual – PrepStain slide Processor – 780-06181-00 Rev B
Enriquecimiento Celular
CARACTERÍSTICA BENEFICIO

“Elimina: artefactos por


REDUCE SIGNIFICATIVAMENTE
desecación, oscurecimiento,
los casos insatisfactorios
sobreposición celular y detritus”

Facilita la visualización de células Aumenta en 64.4%


diagnósticas relevantes y (p<0.00001) la detección de
organismos infecciosos. lesiones HSIL+ en laminillas BD
SurePath™

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Morfología de BD SurePath™

• Características Generales

• Calidad de la Muestra

• NILM a Cancer

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Características Generales de
Morfología de BD SurePath™
CARACTERÍSTICA OBSERVACIÓN
Suspensión Celular (Base liquida) Células al azar
CLAVES ! ! ! Células de aspecto natural, mas
redondas y levemente mas
pequeñas
Areas de deposición celular Mínimos espacios vacíos
Uniformes & altamente pobladas

Fondo limpio menor component C. Endometriales, cambios


inflamatorio (50%) y elementos reactivos, etc - aun se visualizan
sanguíneos (90%) a pesar del fondo limpios
Retención de características Criterios Estandard se aplican
Arquitecturales para caracterizar grupos celulares
Fijación y cromasia de la misma
manera que con fijación en etanol
Organismos y diátesis tumoral Datos clave Relevantes retenidos
presentes
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Cribado / Tamizaje Bi-direccional
• Se recomienda el doble análisis, para no imprimir
diagnósticos en el desarrollo mental

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Evaluación de Adecuación de la Muestra
• Guías recomendadas Bethesda edición 20141

• Celularidad
– Adecuada (+5,000 cels)
– Inadecuada ( <5,000 cells) Factores oscurecedores: > 75% =
Inadecuada
– Conteo recomendado del diámetro transversal : 8 - 9 cels* por HPF 
5000 cells

• Componente Endocervical (ausente o presente)


– minimo 10 cels, solitarias o en grupos
– Incluye C. endocervicales o Metaplasia Escamosa

• La muestra o especimen es adecuado por definicion si se detecta una


lesión

1. Solomon D, Nayar R. The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology. 4th edition. 2016. Springer-Verlag New York, Inc.
Nota: cambios aplican en muestras vaginales y POST – Radioterapia (+2,000 CELULAS)
* FN22 eyepiece/40x objective

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FN22 eyepiece/40x objective


Imágenes de Referencia de Celularidad BD SurePath™

FN22 eyepiece/40x objective


NILM & Cambios Reactivos
(Negative for Intraepithelial Lesion or
Malignancy)

• Atrofia
• Reparación
• Radiación

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NILM = Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy

ECC’s

ECC’s

ECC’s ECC’s
ECC’s

ECC’s
Endocervicales & Metaplasticas

NOTA: Metaplasticas
recuerdan cels parabasales

NOTA: Metaplasticas
Dx Diferencial: ASC-H
HSIL
NILM: Atrofia con Patrón de Céls Solitarias
NILM: “Atrofia profunda” con Grupos, Cels Sueltas & Núcleos
desnudos
NILM: Vaginitis Atrófica

Cels basales degeneradas (“GOTAS


AZULES”)
NILM, Cambios Reactivos y Reparación
• Nucleos crecidos
• No sobreposicionan
• Ocasional : bi / multi Nuc
• N. Vesiculares e HipoCrom
• Cromatina uniforme y
finamente granular
• Bordes citoplasmicos
definidos, con vacuolas y
halos sin grosor periferico
Normal

Reparación

Cambios Reactivos
Cels Endocervicales Reactivas
• Nucleos de bordes regulares,
lisos
• CBL: los grupos son mas
redondos y 3D
Reparación Típica versus Reparación Atípica

Típica Atípica
Reparación & Reparación Atípica

Reparación Reparación Atípica


Cambios Inflamatorios No Específicos

Halo Peri-Nuclear
SIN REFORZAMIENTO
NILM: Cambios por Radiación

• Policromasia
• Vacuolización
• Citomegalia
NILM Radiación: Multinucleación & Citomegalia
NILM: Micro Organismos
• Trichomonas vaginalis

• Microorganismos fúngicos compatibles Candida spp

• Cambios en flora sugestivos de vaginosis bacteriana

• Cambios morfológicos consistentes con virus herpes simplex

• Bacterias morfológicamente consistentes con Actinomyces spp.

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Organismos fúngicos consistentes con Candida spp
• Pseudo-Hifas
• Lanzas
• “Rouleaux”
• Brochetas
“Shish Kebab”

• NOTA: Cándida Glabrata o Torulopsis. NO FORMA PSEUDOHIFAS, y sus levaduras presentan halos En Pacientes
INMUNOCOMPROMETIDO
Trichomona vaginalis

• +PEQUEÑO
• Cometas
• Flagelos
• Gránulos
• Poli-Bolas
Cambios en flora, sugestivos de Vaginosis Bacteriana

“Clue Cells”

“COCO BACILOS”
Cubriendo cels escamosas
En fondos limpios
Herpes simplex virus
• Nucleo en vidrio esmerilado
• Reforzamiento de la periferia
Nuclear
• Inclusiones intranucleares con halo
(Cowdry A)
• 3 M’s (Multinucleación,
Moldeamiento y Marginación)
Herpes: Cambios tempranos
Bacteria consistent with Actinomyces spp.
• Organismos filamentosos de
angulos agudos
• Mas delgados y finos
• Menor inflamacion acompañante
Células Escamosas Atípicas

• ASC-US
• ASC-H

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ASC-US
• Las células pueden aparecer
más pequeñas
• Hay mayor proporción N/C
en dos dimensiones debido a
la fijación.
• Hay redondamiento pues no
hay aplanamiento contra la
laminilla.
• Tienen un halo poco definido
ASC-US
• Lámina engrosada de células
cohesivas.
• Focalmente núcleos crecidos,
citoplasma anaranjado.
• Vacuolas citoplasmáticas mal
formadas
• Binucleación.
• Seguimiento: LIBG
ASC-US
• Mujer perimenopáusica.
• Algunas con leve hipercromasia.
• Leve aumento N/C.
• Binucleación ocasional, halos.
• No se observan
microorganismos.
• Seguimiento: HPV y citología (-).
ASC-US
• Mujer posmenopáusica.
• Células parabasales.
• Atipia focal.
• Casi siempre son VPH (-)
ASC-US
• Nucleo 2.5 a 3 veces de una c. Intermedia
• Contornos levemente irregulares
• Falta de aplanamientos
ASC-US
• Bi / Multinucleación
• Halos mal definidos (Koilocitosis incompleta)
ASC-US

• Relación N:C
• Bi-nucleacion
• Leve hipercromasia

• Celulas mas pequeñas, por


lo tanto la Relacion N:C es
mayor
ASC-H
• Células pequeñas que pueden
tener dos o tres veces el tamaño de
un PMN.
• Puede haber dos núcleos
sobrepuestos.
• EJ: ---
• Célula de metaplasia con
citoplasma denso y núcleo crecido
con hipercromasia.
• Seguimiento: metaplasia inmadura.
ASC-H
• Célula suelta, grande con núcleo
atípico y membrana nuclear
irregular.
• Seguimiento: Bx metaplasia
tubaria.
ASC-H
• Tres células pequeñas de
metaplasia atípica.
• Núcleo hipercromático.
• Membranas nucleares
irregulares.
• Seguimiento: LIAG.
ASC-H
• Grupo de células metaplásicas
inmaduras.
• Núcleo crecido.
• Relación N/C alterada.
• Insuficiente para Dx de LIAG.
• Seguimiento:LIAG
ASC-H
• Mujer perimenopáusica.
• Grupo de células de metaplasia
con núcleo crecido.
• Núcleo claro.
• Bx: células endocervicales
degeneradas.
ASC-H
• Mujer perimenopáusica con una
sola célula con escaso
citoplasma, núcleo
hipercromático con membrana
nuclear irregular, cromatina
uniforme.
• Bx: célula endocervical.
ASC-H
• Grupo endocervical que puede
parecer ASC-H.
• Aumento de la relación N/C
• Mantiene patrón en “panal de
abeja”.
ASC-H
• Cels del tamaño de
una Celula
METAPLÁSICA con
relacion N:C muy
alto (Nucleo ocupa
90% de la cel)

• Cels solitarias o grupos pequeños ( -10 cel)


• No ocurren hileras (Pap Convencional)
• Nucleo 1.5 a 2.5 veces
ASC-H vs HSIL ?
• LBC!!! CELULAS MUY PEQUEÑAS (2 A 3x el tamaño de un 400x magnification
neutrófilo)
• Puede PRESENTARSE como Metaplasia inmadura ATIPICA

ASC- H
• Celulas pequeñas con Grandes Nucleos
• Iregularidades Nucleares
• Pueden agruparse
Lesión Intraepitelial de Bajo Grado

• LSIL

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LIEBG = LSIL

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LSIL

• Nucleos normo – hiper


cromáticos
• Anisonucleosis
• Cromaina granular
• Contorno Nuclear variable
• Generalmente SIN
nucleolos
LSIL: Grupos / Hojas celulares

• Coilocitos.
• Condensación del citoplasma
alrededor de la periferia.
• La hipercromasia es menos
evidente en citología en base
líquida.
• Unica diferencia con la
citología convencional.
LIEBG
• Crecimiento nuclear.
• Hipercromasia.
LSIL: Hojas de Cels
LSIL: Note el incremento del tamaño Nuclear

• EN CBL: la hipercromasia es menos evidente


Lesión Escamosa Intra Epitelial de Alto
Grado

• LEIAG
• LEIAG con extensión glandular endocervical

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LIEAG = LAG = HSIL
• Se ve con mayor frecuencia células anormales dispersas y no en sicicios o
láminas.
• Las células aisladas pueden estar presentes en los espacios vacíos entre los
grupos celulares.
• Están presentes relativamente pocas células anormales.
• Las células suelen ser bastante pequeñas y pueden ser confundidas con
histiocitos o células endometariales.
• Los núcleos pueden ser normocromáticos o aún hipocromáticos, pero todas las
otras características de alto grado están presentes.

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LEIAG: Cels Sueltas

• Cels: Sueltas, en grupos u hojas / capas


• Celulas MAS PEQUEÑAS que en LSIL
• Mayor nucleo
• Cromatina fina o granular uniformemente
distribuida
LIEAG
• Cromatina irregular.
• Membrana nuclear irregular.
• La hipercromasia no es muy
evidente como en LBG.
Poner mucha antención a las células aisladas.
No diagnosticarlas como ASC-H.
LEIAG: Hojas / Sincicios celulares
LEIAG: Grupos / Sincitios

Grupo sincicial.
Sobreposición.
Hipercromatismo. • LBC!!!Grupos saturados e hipercromáticos
Buscar células sueltas. • Bordes externos aplanados
Bx: LAG con penetración glandular. • “Whirling” Remolino al centro
LAG con penetración glandular

Aplanamiento de los bordes


LAG
• Sincicio de células sobrepuestas
con hipocromasia.
• Bx: LAG
LAG
• Mujer de 44 años.
• Grupo sincicial
• Datos de penetración
glandular.
• Grupos hipercromáticos
saturados.
• Bx: LAG con penetración
glandular.
LAG

• Grupo de células
fusiformes que se sueltan,
recuerdan el estroma
endometrial.
• Las células muestran
extemos cónicos.
• Cromatina atípica y
contornos nucleares
irregulares más acorde con
LAG.
• Compara con endometrio.
LAG

• Grupo tridimensional.
• Semeja endometrio.
• El núcleo es pequeño.
• Cromatina atípica y
contornos nucleares
irregulares.
LAG

• Mayor cantidad de
citoplasma.
• Debe de diagnosticarse
cuidadosamente
• Buscar más células de
alto grado.
Cels Endocervicales: simil a LEIAG

Al mover el Foco a traves del


grupo revela citoplasma
vacuolado
Origen Endocervical Confirmado

Patrón en
Panal de
abeja
Cels Endocervicales o Alto grado ?

Mismo grupo, se mueve


el foco PERO NO HAY
Vacuolas

RESPUESTA
Arreglo en Panal ?
LEIAG
LEIAG

ASC-H
LEIAG con extensión Glandular

•Nucleolos presentes
•Hendiduras
•Formas columnares
•Grupos Llenos Hipercromaticos
LEIAG con extensión Glandular

• LBC!!!Aplanamiento en los bordes (a Havor de HSIL sobre una


lesion glandular)
• Perdida de polaridad central
• Nucleolos prominentes (No tanto como AIS)
LAG en atrofia

• En sincicios.
• Mover el foco para ver
diferentes planos.
ASC-US en atrofia

• Seguimiento: negativo
Carcinoma Escamoso / Epidermoide

NO QUERATINIZANTE QUERATINIZANTE
• Menor cantidad de material. • Perlas corneas
• Grupos con formas
redondeadas.
• Diátesis tumoral presente pero
sutil.
• Se ve “colgando” de los grupos
tridimensionales.
Carcinoma epidermoide

• 59 años
• Posmenopáusica, con
sangrado.
• Nucléolo prominente.
• Distribución de la
cromatina anormal.
• Células malignas sueltas.
• Diátesis en el fondo.
Carcinoma Escamoso - Pleomorfismo
Diferentes fondos

Inflamatorio Lubricante
Carcinoma epidermoide

• Los grupos de células


malignas se muestran
más redondeados.
• Dificil diferenciar de un
adenocarcinoma.
• Buscar las células
aisladas.
Carcinoma Escamoso - Pleomorfismo
Carcinoma Escamoso – Perlas de Keratina
Cancer Escamoso – Cromatina Irregular
Citología Glandular
• Endocervix
• Endometrio
• Metastásicos

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Celulas Endocervicales: Orientacion

En punta

Cercos

Panal de abeja
Células endocervicales normales con
“efecto del cepillo”
• Por una toma vigorosa.
• Células uniformes.
• Cromatina finamente
granular.
• Bordes citoplasmáticos
bien definidos.
Metaplasia Tubaria

• empalizada
• Hipercromasia
• Cilios
Metaplasia Tubaria

• Pseudoestratificacion
• Nucleos Redondos a ovales
• Hipercromasia
• Cromatina finamente granular: y distribucion
uniforme.
• Fondo limpio
Metaplasia Tubaria: Cilios

•Criterio mas util: CILIOS


•Fondo limpio
Cels Normales Endometrial

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NILM: Celulas Endometriales Benignas

Note el FONDO LIMPIO


Celulas Endometriales NORMALES
Celulas Endometriales NORMALES
Celulas Endometriales – Estromales
Celulas Endometriales – Estromales
Exodos: Masas de Doble Contorno
Endometrio normal

• Glándulas
endometriales
tubulares o con
formas geométricas.
• El estroma se
encuentra adyacente
generalmente.
Células Atípicas Endocervicales
Adenocarcinoma in-situ
Adenocarcinoma Endocervical

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Células glandulares atípicas en
base líquida
• Las células son más redondeadas.
• Los grupos son más tridimensionales con células
apiladas, siendo difícil observar las células en el
centro de los grupos.
Células endocervicales atípicas

• Células glandulares
reactivas asociadas a DIU.
• Crecimiento nuclear,
nucléolo, citoplasma
vacuolado.
• En ausencia de historia se
puede diagnosticar como
células endocervicales
atípicas.
Células Atípicas Endocervicales

• grupos llenos
• Hipercromasia

AIS
Referencia: Cels Normales en Perspectiva

Células Atípicas Endocervicales Normales Endocervicales


Células Atípicas Endocervicales

Biopsia final: AIS

• Hileras
• empalizada
• Hipercromasia
• N:C incrementado
Células Atípicas Endocervicales

• Grupos llenos 2-D


• Cels Columnares
• Hipercromasia
Células Atípicas Endocervicales

Apoptosis

Mitosis

Biopsy: AIS
Células endometriales atípicas

• La hipercromasia nuclear
es más evidente.
• El nucléolo también es más
evidente.
• Mujer de 64 años con
sangrado.
• Seguimiento:
adenocarcinoma
endometrial grado 1
Adenocarcinoma in situ en base líquida

• Es más fácil encontrar células sueltas intactas.


• Los grupos de células hipercromáticos y sobrepuestos son más
pequeños, densos y más tridimensionales, los bordes son más suaves
y nítidos.
• La protusión nuclear, rosetas y tiras son más sutiles.
• Cromatina grumosa o finamente granular.
• El nucléolo puede ser más prominente.
Adenocarcinoma in situ

• Rosetas
• Pseudostratificacion
• N:C incrementado
• Nucleo OVALADO
• Cromatina en “sal & pimienta”
• “Feathering” = Plumaje
Adenocarcinoma in situ

Filas & Pseudostratificación


Apoptosis
Adenocarcinoma in situ
Grupos Llenos Hipercromáticos
Adenocarcinoma in situ

• Mujer de 25 años.
• Pseudoestratificación.
• Protusión.(a)

Colas de pájaro más cortas.


LEIAG & Similes de AIS

HSIL AIS
Adenocarcinoma
Adenocarcinoma endocervical
invasor en base líquida
• Los grupos tienen a ser densos, esféricos y tridimensionales. En las porciones
centrales el núcleo es casi totalmente obscurecido.
• Es más frecuente ver células aisladas.
• La cromatina es más vesicular con distribución irregular de la cromatina y cromatina
clara.
• El nucléolo es más prominente.
• La diátesis es menos aparente y consiste en agregados de material proteináceo e
inflamatorio, se ve pegado a la superficie de las células o de los grupos “diátesis
pegajosa”.
• También se observa como un fino “algodón de azucar”
Adenocarcinoma invasor

• Grupos densos
sobrepuestos.
• Difícil ver el detalle
nuclear.
Adenocarcinoma EC Invasor

Biopsy – Adenocarcinoma Endocervical


Adenocarcinoma Endocervical

Diatesis

• Nucleo alargado – crecido y lleno.


• Estratificación Nuclear stratification,
y empalizada
• Anisonucleosis moderada a marcada
Adenocarcinoma Endocervical

• Hojas 2-D
• Cels sueltas – solas - individual
• Citoplasma Granular / vacuolado
• Irregularidades en Memb Nuclear
• Prominente nucleolo
Adenocarcinoma Endocervical

Diatesis

• Cromatina: Fina a grumosa, con distribución Irregular


• Prominente Nucleolo
• Diatesis
Adenocarcinoma invasor

• Arquitectura glandular.
• Núcleo crecido.
• Cromatina irregular.
• Nucléolo muy aparente.
• Contornos citoplasmáticos
bien definidos
• Dx diferencial con
reparación.
Adenocarcinoma endometrial en
base líquida
• Grupos tridimensionales y
papilas.
• Núcleo grande con
cromatina finamente
granular.
• La diátesis tumoral es
menos frecuente y se ve
finamente granular,
“pegajosa” a los grupos o
en forma aislada.
Adenocarcinoma endometrial

• Mujer de 67 años con


sangrado.
• Formación de papilas
tridimensionales.
• adenocarcinoma
endometrial grado I-II.
Adenocarcinoma endometrial

• Citoplasmas
vacuolados llenos de
polimorfonucleares.
Céls Atípicas Glandulares

Céls Atípicas
Endometriales

Adenocarcinoma Endometrial

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Cambios por Dispositivo Intra Uterino

Vacuolas grandes distendidas


Cambios por DIU: Cels solitarias simulando HSIL
Adenocarcinoma Endometrial

• Tamaño Nuclear incrementado


• Nucleolos
• Grupos 3 – D
• Bordes prominentes

NILM de Comparacion
Adenocarcinoma Endometrial

Neutrofilos Engullidos

Biopsy: Grade II
Adenocarcinoma Endometrial

Papillary Serous
Adenocarcinoma Endometrial

Note el fondo Atrofico


Carcinoma
Extrauterino

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Adenocarcinoma de colon
metastásico a cérvix
• Estructura columnar
puede confundir con
adenocarcinoma
endometrial.
• Presencia de materia
fecal.
Carcinoma de mama lobulillar
metastásico a cérvix
• En una citología
atrófica
• Pequeños grupos de
células.
• Citoplasmas
vacuolados.
• Receptores a
estrógenos (+)
Cancer Metastásico

Ovario

Mama
Cancer Metastásico

T. de Falopio

Ca de Páncreas en fondo
atrófico
Educational & Technical References
• Demay MR. The Pap Test. 2005. ASCP press, Chicago. Pgs 109-152

• Fadare O, Ghofrani M, Chacho MS, Parkash V. The significance of benign endometrial cells
in cervicovaginal smears. Adv anat pathol. 2005 sept;12(5):274-87

• Solomon,d, Nayar R. The Bethesda System for reporting cervical cytology 4th
edition. 2016. Springer-verlag. Ny, NY.

• Wilbur dc, Mulford dk, Sickel jz,Atkison KM. An Approach to Endocervical Atypia: Normal
Pathology and Mimickers of Pathology. Cytopathology 1997 (vol 2); ASCP reviews in
pathology. ASCP press, Chicago. Pgs 115-143.

• BD PrepStain™ system product insert — Doc 779-10002-02 Rev C

• Operator’s manual – BD PrepStain™ slide processor – 780-06181-00 Rev B


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Dr George Papanicolaou (1883-1962)

© 2016 BD. BD and the BD Logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company.
GRACIAS!

Dr. Jorge Garcia Aleman

jorge.garcia.aleman@bd.com

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