CUANTIFICACIÓ N DE PROTEINAS POR BCA

Cuantificación de proteínas utilizando la curva BCA.

1. Preparación de estándares de Albúmina de Suero Bovino (BSA)

Vial Volumen de PBS (L) Volumen de BSA Stock Concentración final BSA
(L) (g/mL)
A 0 150 2000
B 62,5 187,5 1500
C 162,5 162,5 1000
D 87,5 87,5 750
E 162,5 162,5 500
F 162,5 162,5 250
G 162,5 162,5 125
H 200 80 25
I 200 0 0

2. Preparar 9 viales de acuerdo a la tabla

3. Preparar solución WR

4. En una placa de ELISA, mezclar 25 L de muestra o estándar + 200 L de WR

5. Cubrir la placa e incubar a 37 °C por 30 minutos

4. Dejar a T° ambiente y medir absorbancia a 560 nm

SOLUCIONES

1. Solución WR

(¿ std+¿ m−control) x 2 = volumen

Ejemplo:
8 muestras y 9 estándares
(9+ 8) x 2 = 34 (36) volumen para 36 muestras
50 : 1 A : B
36 x 200 L = 7200 L (7,2 mL)
7200
=141 ,18 L
51

141, 18 L x 50 = 7.059 L Solución A

141,18 L Solución B