- RASTROS -

María Alejandra Rasile- Perito Bioquímico

Evidencias
biológicas

Rastros de Origen Biológico:
 Manchas Hemáticas.
 Semen.
 Pelos.
 ADN.

Rastros de Origen No Biológico:

 Fragmentos de Vidrio.
 Proyectiles.
 Documentos.
 Computadoras.
 Drogas y Medicamentos.
 Documentación Fotográfica del Lugar – Planimetría.
Como recolectar la evidencia.

Proteger el lugar del Hecho.

Ropas.

Fragmentos Pilosos.

ADN.

Sangre Líquida y Seca. Impresión de
Taylor.

Recipientes.

CADENA DE CUSTODIA.
Evidencia Biológica.

Rastros de Origen Biológicos.
 Sangre.
○ Análisis de Trayectoria.
○ ¿Es o no es sangre?
Análisis de Trayectoria (Blood Splattering).

Utilidad: reconstrucción de los eventos.

Interpretación de los mecanismos de producción de heridas: dirección,
altura, diestro-zurdo.

¿Sobre qué superficies buscar? Las paredes no se mueven, los muebles
si.

¿Qué preguntas responde?
 La distancia entre el lugar donde la sangre se deposita y su origen.
 El punto de origen.
 Movimiento y dirección de una persona y objetos.
 El número de golpes o disparos que producen las manchas.
 Tipo y dirección del impacto que produce las manchas.
 La posición relativa de la víctima y el agresor.
 El movimiento de la víctima después de la agresión.
Trayectoria de la gota
Efecto del ángulo.

Arriba: impacto a
velocidad media con
un ángulo de 90º.

Impacto a velocidad
media en ángulo.
Angulo de impacto 45 °

30 °

10°
Forma: se observan dos formas:
Redondeada: una gota de sangre cayendo a 90 grados sobre una
superficie plana produce una gota redondeada
Eliptica: un ángulo de impacto entre 90 a 0 grado produce gotas.
Efecto de altura
Efecto de la superficie.
Sobre un jean.
Ooops! Era materia fecal de moscas.
Golpes a alta velocidad.

Diseminación de
manchas hemáticas
sobre una pared a
partir de la cabeza de
una persona.
La Gota de Sangre y la mancha.

Una gota de sangre tiene un volumen medio de 0,05 ml.

El tamaño depende de la velocidad de goteo.

La forma depende del tipo de superficie (siempre dejar constancia).
Superficie dura y no porosa hace que la gota se fragmente menos(vidrio)
Cuanto más blanda y porosa más se fragmenta (cemento).

La dirección: el extremo agudo de la gota apunta a su origen. Según la
velocidad y ángulo, aparecen las gotas satélites.

Sangre expirada: producida por la víctima desde su boca.

Transferencia: desde objetos conteniendo sangre hacia las ropas,
manos, zapatos, etc.
Influencia de la superficie.

A: Tarjeta de papel
lisa.

B: Cartón corrugado.

C: Vidrio.

D: Superficie pintada
rugosa.
Salpicaduras en la ropa.
Transferencia
Análisis Químico.

¿ Es una mancha de
sangre?

Reacciones de Orientación. Reacciones
del grupo hemo.

Reactivos de Orientación:

 Reactivo de Medinger: leucobase del verde de

Malaquita.
 Reactivo de Kastle-Meyer: leucobase de la
fenolftaleína.
 Prueba del Luminol.

Fundamento: el grupo hemo libera oxígeno

del peróxido del H2O2 y este reacciona con
el reactivo de color.

Ventajas y Desventajas. Falsos Positivos.
Test Presuntivos fenoftaleína

Alta sensibilidad 1/ 100.000

Baja especificidad
Reacciones de Certeza.

Fundamento:
 Formación de cristales de morfología
característica.

Reacción de
Takayama.
 Solución de hidróxido de sodio
 Piridina
 Solución saturada de azúcar
 Agua destilada

Reacción de
Teichman.
 Cloruro de magnesio
 Glicerina
 Acido Acético
 Agua destilada.
Luminol
Sensibilidad ~10-8
Interferencias que dan falsos
positivos:
Blanqueadores tipo lavandina,
metales, oxidantes químicos,
peroxidasas vegetales
No diferencia entre sangre humana
y animal
Muy inestable ~4 luego de mezclado
los componentes
Luminol: lo bueno y lo malo.

Superficie lisa poco absorbente

Origen.

¿ Es sangre
humana?

Métodos Inmunológicos:

anticuerpos monoclonales anti
globina humana.

Método de la Precipitina:
inmunodifusión (técnica de
Outcherlony).

Inmunocromatografía
Tipificación ABO

http://learn.genetics.utah.edu/units/basics/blood/types.cfm
 Alelos A B O
de los
ABO -Rh Padres

A AA AB AO

Patrón de herencia. (A) (AB) (A)

Distribución en la población.

Utilidad forense. B AB BB BO

Resistencia a la degradación. (AB) (B) (B)

Metodología: O AO AB OO
 Aglutinación con precipitinas. (A) (AB) (O)
 Monoclonales.
O A B AB

43-45% 40-42% 10-12% 3-5%

O+ 39% A+ 35% B+ 8% AB+ 4%

O- 6% A- 5% B- 2% AB- 1%
 Tipo Antigenos Anticuerpos
de presentes en el presentes en el
sangre globulo rojo suero

A A Anti-B
B B Anti-A
AB AB No pose anti-A
ni anti-B
O No posee antigenos A Posee ambos
ó B solo sustancia H
anti-A y anti-B
No
aglutina

aglutina

Sangre entera
GRUPO SANGUINEO EN FIBRAS
Saliva.

Determinación de
Saliva: amilasa.

Muestras colillas

Determinación del
grupo sanguíneo en
secretores

Identificación de Semen
Una simple eyaculación puede liberar
entre 2,5 y 6 ml de fluido seminal

Cada ml puede contener 100 millones

ó más de espermatozoides

Composición química del líquido

seminal: zinc, colina, fructosa,
antígeno prostático específico (PSA),
fosfatasa ácida prostática, antígenos
ABO.

Recolección y Obtención de la muestra. Precauciones.

Determinaciones:

Confirmatoria: presencia de espermatozoides
por Microscopia.

Hisopos-manchas coloración eritrosina

Extendidos : coloración hematoxilina-verde brillante
 Test Químicos Presuntivos:

Fluorescencia al UV.
 Test de screening.
 Localización de manchas de semen por
fluorescencia.
 Daño al ADN.

Test de la Fosfatasa Acida Prostática.

 Test Presuntivo.
 Proporciona una idea de la cantidad de
semen presente.
 Su actividad es de 500 a 1000 mayor
que en otros fluidos.
 La fosfatasa de origen vaginal no se
distingue de la prostática.
 Otros falsos positivos: materia fecal,
vegetales, ciertos espermicidas, algunos
productos de higiene femenina.

PSA: antígeno prostatico especifico

 Sensibilidad: 4 ng/mL
 Positivo con PAP negativa.
 Postivo en vasectomizados.
Pelo
arrancado

Arrancado con
fuerza

Caido naturalmente
quemado
cortado afeitado partido

Determinaciones:
Si es pelo (diferenciar de fibras)
Si es humano (diferenciar del pelo animal)
Si posee bulbo (ADN)
Longitud (ADN mit)
Análisis de ADN- Perfiles
genéticos
Homicidios
Delitos sexuales
Secuestros
Hurtos
Extorsiones
 MATERIAL BIOLÓGICO PARA ANALISIS DE ADN.

• Sangre
• Semen
• Saliva
• Pelo
• Dientes /huesos
• Tejidos
• Orina/Heces
Contenido de AND en muestras biologicas:
Tipo de muestras Cantidad de ADN
Sangre 30,000 ng/mL
Mancha 1 cm2 de area 200 ng
2
Mancha 1 mm de area 2 ng

Semen 250,000 ng/mL

Hisopado vaginal postcoital 0 - 3,000 ng

Pelo
ARRANCADO 1 - 750 ng/pelo
TELOGENO(CAIDA NATURAL) 1 - 12 ng/pelo

Saliva 5,000 ng/mL

Orina 1 - 20 ng/mL
Muestras de la escena del crimen
y muestras de referencia

• Extraccion y purificación del

ADN

Extraccion diferencial en casos

de abuso sexual donde existe
mezcla de celulas
espermaticas y epiteliales de la
victima.
Delitos sexuales
Procesos civiles * DEMANDAS DE FILIACIÓN
•Arts. 254 a 258 del C. Civil RECLAMACIÓN
(emplazamiento)
•Arts.259 a 263 del C. Civil IMPUGNACIÓN
(desplazamiento)

Procesos Penales * VESTIGIOS DEL AGRESOR S/ VMA, EN

EL LUGAR, EN LOS INSTRUMENTOS
DEL DELITO .
* VESTIGIOS DE LA VMA S/ EL AGRESOR O
SUS PERTENENCIAS

Identificación de * DESAPARECIDOS , CATASTROFES

cadáveres
 Tres generaciones de análisis de
ADN

RFLP DQ-alpha (HLA 2) Automated STR

AUTORAD TEST STRIP ELECTROPHEROGRAM
Alelo = BANDA Alelo = GOTA AZUL Alelo = PICO
 Ejemplo de sitio variable (STR)
Sitio de adhesión (constante Sitio de adhesión (constante
en todos los humanos) en todos los humanos)

Alelo 1

Alelo 2

Unidad de Repetición (ej.: ACTG)

 METODOLOGIA DE TRABAJO EN EL
LABORATORIO FORENSE

TOMA DE MUESTRA
DE INDIVIDUOS
VIVOS

TOMA DE MUESTRA
DISTRIBUIR INSTRUCTIVOS A
EVIDENCIAS Y MEDICOS FORENSES Y PERSONAL
RESTOS POLICIAL/ JUDICIAL ENCARGADO
CADAVERICOS DE LEVANTAMIENTO DE RASTROS
 EXTRACCIÓN DE ADN

TIPOS DE MUESTRA: Sangre sobre soporte sólido (FTA), manchas

de sangre/ semen sobres diferentes soportes, hisopados, material
subungueal, cabellos, colillas etc.
Material cadavérico: Tejidos blandos, restos óseos frescos, restos óseos
reducidos, piezas dentarias.

METODOLOGIA DE EXTRACCION: Chelex 5%, kits comerciales

Qiagen,, DNA IQTM System
(QIAmp DNA Qiagen System,, Wizard DNA Promega
Corp,, DNAzol Gibco
Corp Gibco),
), CTAB, Fenol-
Fenol-cloroformo, salting
salting--out
out..

CUALI--CUANTIFICACION:
CUALI
AMPLIFICACION (PCR):
 PCR:
Reacción en Cadena de
la Polimerasa
T
Molécula + T
T
de ADN

Desnaturalización (95o C)

Annealing (55o - 65o C) 1o Ciclo 4o Ciclo

T
Polimerización (72o C)
T 3o Ciclo

2o Ciclo

2 Moléculas de ADN 4 Moléculas de ADN

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

95 ° C

5555-65 °C

772 °C
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Analizador Genético ABI
PRISM 3100
Analizador Genetico ABI 310
 ABI 310 Electroforesis capilar

• se inyecta a la columna
STR DNA amplificado
•Se aplica una corriente
electrica
•El AND migra al
electrodo positivo
•El ADN se separa por
tamaño
– STRs largos viajan Ventana del detector
mas lentos
– STRs pequeños viajan
mas rápido

•Se detecta y graba el color del STR a

medida que pasan por el detector
Perfil obtenido
Statistical estimates: the product rule

0.222 x 0.222 x 2
= 0.1
Estimación estadistica: la regla del producto

1 en 10 x 1 en 111 x 1 en 20
= 0.1

1 en 22.200

1 en 100 x 1 en 14 x 1 en 81

1 en 113.400

1 in 116 x 1 in 17 x 1 in 16

1 in 31,552

1 en 79.531.528.960.000.000
1 en 80 cuadrillones
Filiación
 CROMOSOMA Y

Debido a falta de elemento homólogo , la mayor parte

del cromosoma Y no se recombina durante la meiosis,
lo que determina su herencia en un bloque de
ligamento
 Herencia obligada de padre a hijo

Paternidad sencilla con hijo varón

Paternidad en ausencia de padre
Análisis de muestras forenses provenientes de delitos sexuales

Limitación: No podrá desvincularse a individuos relacionados por

Limitación:
vía paterna, sin la utilización de STR’s autosómicos

HOY 11 STR’s Y-PLEX TM 12 Reliagene

Y-PLEXTM 12 Promega
Y-STRs en Reacción Multiplex Fluorescente.
 La Evidencia Fundamental.

La cuidadosa obtención
del material subungueal
permitió detectar el
perfil genético de un
hombre.

El perfil del sospechoso
y el hallado es idéntico.
 Analizando el Caso.

Material Indubitado
de la Víctima.

Material Subungueal
Tomado de la Víctima

Tejido Dactilar de
la Víctima. Match Match Match

Sangre del
Sospechoso1.

Sangre del
Sospechoso 2
Atentado a la mutual
israelita AMIA
Atentado a la AMIA
Vista general
Atentado a la AMIA.
Muestras
Atentado a la AMIA.
Resultados
Accidente aéreo
Accidente Aéreo
de LAPA
Accidente de LAPA: grupos familiares
Accidente de LAPA: individuos reclamados
Marcadores de Cromosoma Y
 Análisis de los restos
STRs autosómicos, formato automatizado.
Paternidad del Gral.
Perón
Bóveda (parte superior)
-foto del año 1987-
Cobertura del ataúd (blindex)
-foto del año 1987-
Cadáver del Gral. Perón
-foto del año 1987-
HUELLAS DACTILARES
AYER… …HOY

M. CARRETERO 102
AYER… …HOY
PUNTOS CARACTERÍSTICOS
AYER… …HOY

1
Parricidio resuelto por Vucetich,
identificación de Francisca Rojas
AYER… …HOY
MATRICULA CIANOCRILATO
AYER… …HOY
AYER… …HOY
AYER… …HOY
AYER… …HOY NAVAJA CIANOCRILATO
AYER… …HOY CINTA EMB. PAQUETE BOMBA
AYER… …HOY
CINTAS RECOGIDAS ZULO
AYER… …HOY
AYER… …HOY
Cinta emb. Cara externa
AYER… …HOY
Cinta emb. Cara externa
AYER… …HOY CINTA AISLANTE JAÉN
AYER… …HOY
CINTA JAÉN: Procesos químicos
AYER… …HOY
AYER… …HOY
MADERA NO TRATADA
AYER… …HOY
VAINAS
AYER… …HOY 200 FRANCOS - LUZ NATURAL
AYER… …HOY 400 nm. detalle
AYER… …HOY 400 nm. detalle