Tinción diferencial

de Gram.

Usando pinzas de disección,

Colocar la muestra microbiana Cubrir la extensión microbiana escurrir el exceso de
hacia arriba, sobre el puente con el colorante primario cristal colorante, lavando la
de tinción. violeta, durante 1 minuto. preparación con un chorro de
agua.

Escurrir el exceso de lugol Cubrir el frotis con lugol

Decolorar goteando alcohol
y lavar con agua de la (mordente), durante 1
acetona sobre la preparación
llave. minuto.
de 15 a 20 segundos.

Colocar el frotis sobre el puente de

tinción y cubrirlo con safranina
Lavar inmediatamente con
(colorante secundario) de 30 a 60
agua de la llave.
segundos.
Escurrir el exceso de
colorante y lavar con
agua de la llave.

Dejar secar al aire, sin

Observar la muestra con el
exponer al calor.
objetivo de inmersión.
 TÉCNICA DIFERENCIAL
DE ZIEHL-NEELSEN
(Técnica original).

Una vez fijado el frotis al calor,
se coloca en el puente de
tinción con la muestra hacia
arriba.
Cubrir el frotis con fucsina
fenicada y calentar durante 3 a
5 minutos a emisión de
vapores evitando que el
colorante hierva o se seque.
Decolorar con alcohol ácido
haciéndolo gotear a manera de
cascada durante 20 a 30
segundos sobre el frotis.

Dejar secar a temperatura Cubrir con azul de metileno

ambiente sin aplicar calor. durante un minuto y lavar con Lavar con agua de la llave.
agua de la llave.

Observar la muestra con el

objetivo de inmersión.

(Modificada por Kinyoun).
Después de haber fijado el frotis
al calor, introducirlo durante 20
minutos en un vaso de Koplin,
mismo que contiene fucsina
fenicada.
Lavar con agua de la llave.
Dejar secar a temperatura
ambiente.
TÉCNICA DIFERENCIAL
DE ZIEHL-NEELSEN
Decolorar con alcohol ácido
haciéndolo gotear a manera
Lavar con agua de la llave. de cascada durante 20 a 30
segundos sobre el frotis.
Colocar el frotis sobre el
Lavar inmediatamente con
puente de tinción y cubrir con
agua de la llave.
azul de metileno durante un
minuto.
Observar la muestra con el
objetivo de inmersión.
 Preparación de frotis
para su tinción.
Añadir una gota pequeña
de agua destilada al cubre Esterilizar el asa exponiéndola
objetos. al mechero, y dejar que enfríe.
Fijar la muestra con calor
haciendo movimientos circulares
por encima de la llama del
mechero, levantando para que
no se queme la muestra.
Abrimos la caja de Petri y
comprobamos que el asa se
haya enfriado tocando el
agar.
Con el asa recolectamos unas
colonias de bacterias y las
extendemos sobre la gota de
agua destilada.