Espectrofotometria Del Visible

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Espectrofotometría DEL Visible
Bioquímica (Universidad Católica de Santa María)
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ESPECTROFOTOMETRÍA DEL VISIBLE

SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE
ONDA ANALÍTICA
I OBJETIVOS
 Operar adecuadamente el espectrofotómetro computarizado
Shimadzu 160 - A .
 Obtener espectros o Curva de absorción
 Seleccionar la longitud de onda de trabajo, máxima o analítica
II GENERALIDADES
En cada tipo de sustancias los átomos, iones o moléculas absorben con
cierta preferencia longitudes de onda de una determinada gama de
frecuencias; esto hace que los átomos, iones o moléculas puedan
identificarse mediante la longitud de onda a que se da lugar la absorción.
En el análisis espectrofotométrico, las mediciones de absorbancia se
realizan ordinariamente a una longitud de onda que corresponda a un
máximo del espectro de absorción.
Para ello en una determinación deberá obtenerse siempre una curva de
absorción o espectro de absorción para ubicar en ella el pico más alto y
seleccionar la longitud de onda a la cual se produce ese máximo de
absorción. A esta longitud de onda se denomina longitud de onda
analítica, de trabajo o máxima y es la longitud de onda a la cual se
realiza la medición cuantitativa. A esta longitud de onda la variación de
absorbancia por unidad de concentración es máxima, con lo cual se
obtiene la sensibilidad máxima.
III FUNDAMENTO
Para encontrar la curva de absorción se irradia a la solución coloreada con
energía radiante de una gama de longitudes de onda de tal manera que a cada
longitud de onda se mide su valor de absorbancia o de % de transmitancia; esta
energía absorbida se traduce en un espectro de absorción que es obtenido en
función de los valores de absorbancia o de % de transmitancia frente a las
longitudes de onda. En la curva se hace un barrido espectral y se ubica el
máximo pico o valle más profundo que corresponde a un máximo de
absorbancia a una determinada longitud de onda; a esta longitud se denomina
longitud de onda analítica, óptima o de trabajo.
IV ARREGLO EXPERIMENTAL

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V APARATOS
 Espectrofotómetro Shimadzu 160 - A.
 Cubeta: 1cm de trayecto óptico.
 Región de trabajo: espectro visible (450 - 600 NM).

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 Blanco: agua destilada.
VI MATERI ALES
 Fiolas de 100 y 250 ml.
 Buretas de 25ml.

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 Vasos de precipitación de 250ml.
VII REACTIVOS
 Solución Stock de permanganato de potasio 0,1000 N.
 Solución de permanganato de potasio con concentración de 100 mg/L (ppm) de

manganeso

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 Soluciones estandares o patrones.
VII TÉCNICA
1.- PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
A) Preparación de una solución díluida de 100 ppm en manganeso
Disponer de una solución stock de KMnO4 0.1000 N, previamente valorada. Calcular
su concentración en partes por millón referida a manganeso. Preparar a partir de la
solución stock de 250 ml de una solución de 100 p.p.m. de manganeso
B) Preparación de soluciones patrones o estándares

Preparar por dilución 100 mililitros de los siguientes patrones: 2, 4, 6, 8,10, 12, y 16
ppm.
2.- SELECCIÓN DE MODO BÁSICO DE TRABAJO

Cuando el interruptor de potencia es llevado a “on “, el instrumento es inicializado en 3
minutos, y entonces indica en pantalla el menú de modo básico,
MENU DE MODO BASICO

Modo No “ “
1.- Fotómetro
2.- Espectro
3.- Barrido de tiempo

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4.- Cinética
5.- Cuantitativo
6.- Multicomponente
7.- Memoria
8.- Señalamiento de condición
9.- Enlace
Presione el Nro “2 “y luego la tecla ENTER para seleccionar el modo

“espectro “. El blanco a emplear es agua destilada.
3.- AJUSTE DE PARÁMETROS ANALÍTICOS
Luego que el modo básico es seleccionado, es necesario primero

establecer los parámetros analíticos de medición siguientes:
MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO

Espectro Cambio de parámetros s/n
1.- λ s = 600,0 nm λ E = 450,0
2.- Medición (ABS / T %) = ABS.
3.- Superior = + 1,00 A Inferior = + 0,00 A
4.- Velocidad de barrido = rápida
5.- Ciclo T = 60 seg. N =1
6.- Cubrir Si
7.- Copiar No
8.- Barrido OBS No
9.- Fila
Si desea cambiar un parámetro presione la tecla “Yes “e ingrese el
número del parámetro correspondiente, y luego ingrese el nuevo valor
para el parámetro indicado por el cursor. Ahora si el ingreso es erróneo
presione la tecla “CE “y reingrese el nuevo valor. Cuando el parámetro
indicado por el cursor no será cambiado, presione directamente la tecla
“ENTER “.
Cuando el proceso de cambio de parámetro está completo, presione la

tecla “NO “para terminar el procedimiento.
4.- MEDICIÓN DE STÁNDARES

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Una vez ajustados los parámetros de medición y al presionar la tecla “No

“para el cambio de parámetro aparece el mensaje de insertar una
muestra y presionar la tecla “Star / Stop “.El espectro medido es
indicado en la pantalla.
5.- PROCESAMIENTO DE DATOS

Cuando la medición termina, se indica el mensaje “PROCESAMIENTO DE
DATOS S/N”.
a) Si no es necesario el procedimiento de datos, presionar “NO” y es

posible indicar la longitud de onda y valor medido a cualquier posición
deseada en el espectro medido, la cual es recogida por el cursor
usando la techa ----- o ------ .Al espectro medido puede ser grabado
en copia con la techa “COPY “.
b) Si es necesario un procesamiento de datos, presionar “SI” y es
posible hacer los siguientes procesamientos de datos:
0* Para almacenar el espectro medido en la memoria ... presionar 1

ENTER (número de canal) ENTER.
1* Para expandir o comprimir el espectro...presionar 2 ENTER, y
entonces ajustar los parámetros de escala en la abcisa y ordenada
de acuerdo con la indicación del cursor presionando (valores)
ENTER, sino hay cambio necesario, sólo presionar ENTER.
Después de que el espectro es indicado con nuevos parámetros de escala, el

sistema pregunta “VOLVER A LA CURVA ORIGINAL S/ N” .Si presiona “SI”
se obtiene de nuevo el espectro original; si presiona la tecla “NO “ el espectro
expandido es almacenado en la memoria.
 Para hacer una detección de pico...presionar 3 ENTER, y
entonces cada pico y valle son marcados y también sus
longitudes de onda y valores son impresos.
 Para obtener un espectro derivado o espectro suavizado...
presionar 4 ENTER y luego ingresar la orden derivada
presionando (N) ENTER de acuerdo con la indicación de la
pantalla. Cuando el procedimiento es terminado, con la escala
automáticamente ajustada al valor derivado. El suavizado
corresponde a la orden derivada.
 Para imprimir datos a intervalos de longitud de onda regulares...
Presionar 5 ENTER (intervalo de longitud de onda) y presionar
ENTER
 Para plotear los datos en el ploteador X-Y,... presionar 6 ENTER.
Cuando termine sus procedimientos de datos aparece en pantalla la curva

debidamente suavizada con los parámetros de absorbancia frente a las
longitudes de onda en NM. Con el cursor ubicar el pico más alto de la curva,

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apareciendo en pantalla los valores de absorbancia y longitudes de onda que

corresponde a ese pico.
VIII INTERPRETACION DE DATOS

El espectro medido puede ser grabado en copia con la tecla de “COPY “.
Imprimir las curvas espectrales en un sistema de coordenadas teniendo en
cuenta los siguientes parámetros:
 Absorbancia frente a longitudes de onda
 Porcentaje de transmitancia frente a longitudes de onda.

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INFORME DE LABORATORIO N° 1
ESPECTROSCOPÍA DEL ESPECTRO VISIBLE
DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO
FECHA: 20/08/2018 GRUPO: 06

ANÁLISIS:
 Preparación de soluciones patrón.
 Obtención de la curva de absorción.
 Determinación de la longitud de onda de trabajo.
MÉTODO:
 Espectrofotométrico del espectro visible.
MUESTRA:
 Solución de KMnO4 01000 N.
 CÁLCULOS:
1. Valoración de la Solución de KMnO4 con Oxalato de Sodio R.A. (Método de porción

pesada).
 Normalidad Exacta.
0.1106 g . Na2 C 2 O 4 1 meq . KMn O4 meq .

× =0.0994
16.6 mL . KMn O4 0.067 g . Na2 C2 O4 mL .
2. Expresión de la concentración del KMnO4 0.1 N en ppm referida a Manganeso (Solución

Stock).
meq 0.031606 g . KMn O4 54.94 g . Mn 1000 mg . 1000 mL.

0.0994 KMn O4 × × × × =
mL . 1 meq. KMnO 4 158.03 g . KMn O4 1g. 1 L.
3. Preparación de la solución de 100 ppm Mn a partir de la solución stock (Solución diluida).
1091.9999 ppm Mn × V 1=100 ppm Mn ×250 mL .

V 1=22.89 mL .
4. Cuadro de soluciones patrón.

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Concentración Volumen a medir de la solución

N° Patrón Volumen final
ppm Mn diluida
1 2.0 2.0
2 4.0 4.0
3 6.0 6.0
4 8.0 8.0 100.0
5 10.0 10.0
6 12.0 12.0
7 16.0 16.0
MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO EN EL MODO ESPECTRO
a) ABSORBANCIA
b) TRANSMITANCIA

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A. TABLA DE RESULTADOS
i. Medición de la Absorbancia a diferentes longitudes de onda ( λ )
λ nm. Absorbancia λ nm. Absorbancia

450 0.078 530 0.497
460 0.190 540 0.476
470 0.146 550 0.470
480 0.190 560 0.393
490 0.264 570 0.286
500 0.346 580 0.153
510 0.408 590 0.077
520 0.484 600 0.053
ii. Espectro de absorción

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B. TABLA DE RESULTADOS
i. Medición del % de Transmitancia a diferentes longitudes de onda ( λ )
λ nm. % Transmitancia λ nm. % Transmitancia

450 81.4 530 31.0
460 77.3 540 32.3
470 69.5 550 33.2
480 63.2 560 49.0
490 53.4 570 51.0
500 44.4 580 69.7
510 38.3 590 83.2
520 32.2 600 85.8
ii. Espectro de absorción

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En la espectroscopia de absorción, los fotones absorbidos no son emitidos de nuevo (como en
la fluorescencia) sino que la energía que se transfiere al compuesto químico en la absorbancia
de un fotón se pierde por medios no radiantes, como la transferencia de energía por calor a otras
moléculas.
El espectrofotómetro es un instrumento usado en la física óptica que sirve para medir, en
función de la longitud de onda, Utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación
de sustancias y microorganismos. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha
muestra. Da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra, e indicar
indirectamente qué cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra.
Se determinó de esta manera la longitud de onda de trabajo la cual fue de 525 nm. La longitud
de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual la absorbancia
del analito (sustancia a analizar) es máxima, Para seleccionar el λ máx., se hace un espectro de
absorción o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la absorbancia de una solución de
la sustancia absorbente de concentración adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en
ella se determina el λ máx.
APELLIDOS Y NOMBRES DEL ALUMNO
FIRMA DEL ALUMNO

CUESTIONARIO

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1. Defínase brevemente:
La radiación monocromática y policromática.
La luz monocromática es aquella que está formada por componentes de un solo color. Es decir,
que tiene una sola longitud de onda, correspondiente a ese color. La luz blanca es una radiación
policromática; es decir, está compuesta por radiaciones de distintas longitudes de onda, visibles
y no visibles.
Espectro de absorción.
Cada elemento químico posee líneas de absorción en algunas longitudes de onda, hecho que está
asociado a las diferencias de energía de sus distintos orbitales atómicos.El espectro de
absorción de una materia muestra la fracción de la radiación electromagnética incidente que un
material absorbe dentro de un rango de frecuencias. Es, en cierto sentido, el opuesto de
un espectro de emisión.
¿Por qué es importante monocromatizar la radiación policromática?
Porque al monocromatizar la luz policromática no sólo seleccionamos un color de luz sino
también una longitud de onda de trabajo que permite mejorar la eficiencia de los análisis y
además devuelve datos más precisos ya que en la longitud de onda de trabajo es donde el
material absorbe más radiación.
2. Describir la diferencia entre un espectro en función de las absorbancias y transmitancia.

Un espectrofotómetro lee en longitudes de onda que van desde el ultravioleta hasta en infrarrojo,
se utiliza generalmente para dosar concentraciones en soluciones o caracterizar sustancias por su
curva de absorción.
3. En la longitud de onda de trabajo obtenida en la parte experimental a 525 nm. calcular la

cantidad de energía que le corresponde a esa radiación. Compararla con una longitud de
onda de 200 nm. que corresponde a la región UV.
Longitud de onda a 525 nm.

Frecuencia de la radiación:
8
c 2.998 ×10 m/ s
ν= = =5.7105 ×1014 Hz
λ 5250 ×10−10 m
Energía de cada fotón:
Eγ =h ∙ ν =6.6261× 10−34 J ∙ s ×5.7105 ×1014 Hz=37.8383 ×10−20 J
Longitud de onda a 200 nm.

Frecuencia de la radiación:
c 2.998 ×10 8 m/ s
ν= = =1.499 ×1015 Hz
λ 2000 ×10−10 m
Energía de cada fotón:
−34 15 −20
Eγ =h ∙ ν =6.6261× 10 J ∙ s ×1.499 ×10 Hz=99.3252 ×10 J

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4. ¿Qué tipo de información proporciona el espectro de absorción?

Muestra la fracción de la radiación electromagnética incidente que un material absorbe dentro de
un rango de frecuencias. Se emplea para identificar los elementos componentes de algunas
muestras, como líquidos y gases; más allá, se puede emplear para determinar la estructura
de compuestos orgánicos.
5. Señale algunas razones del porqué determinar la longitud de onda analítica o de trabajo.
La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual la
absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, Para seleccionar el λ máx., se hace un
espectro de absorción o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la absorbancia de una
solución de la sustancia absorbente de concentración adecuada, medida a distintas longitudes de
onda y en ella se determina el λ máx.
Las mediciones de absorbancia se hacen en la zona de longitudes de onda donde se espera que
absorba la sustancia problema. Si se trata de sustancias coloreadas, las mediciones se realizan en
la zona visible del espectro electromagnético (380 a 800nm). En el caso de sustancias no
coloreadas, las mediciones se realizan en la región ultravioleta del espectro electromagnético
(200 a 380nm).
6. Indicar, ¿Qué formas conoces para representar una curva de absorción?

El gráfico que resulta de la concentración respecto a la absorbancia se hace a mano o usando un
software de ajuste de curvas apropiado, que usa una fórmula matemática para determinar la
concentración en la muestra. La repetición de este proceso para cada compuesto en una muestra
da un modelo de varios espectros de absorción que en conjunto reproducen la absorción
observada.
7. ¿Qué es un espectro de absorción atómica y qué es un espectro de absorción molecular?

. Esta técnica se utiliza para determinar la concentración de un elemento particular (el analito) en
una muestra y puede determinar más de 70 elementos diferentes en solución o directamente en
muestras sólidas utilizadas en farmacología, biofísica o investigación toxicológica.
La espectrofotometría de absorción molecular ultravioleta visible, comúnmente llamada
espectrofotometría UV-VIS, tiene una larga y continua historia en el campo de la química
analítica. Esta técnica está basada en la medición de absorción de radiación U.V. o visible por
determinadas moléculas.

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ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

DEMOSTRACION DE LAS LEYES
FOTOMETRICAS Y ERROR RELATIVO DE LA
CONCENTRACION
I OBJETIVOS
 Construir curvas de calibración
 Verificar la conformidad de la ley Beer
 Determinar las concentraciones límites de los patrones
II GENERALIDADES
Después de determinar la longitud de onda a la cuál deben de realizarse las medidas, se
calibra el método midiendo una serie de patrones del constituyente en estudio.
Generalmente se prepara una solución diluida de la sustancia que se desea determinar,
se pipetean cuidadosamente porciones de esta solución, de distinto volumen, se añade el
reactivo que forma color, y se ajustan las condiciones para que se desarrolle el color en
forma óptima, se diluye cada solución a un volumen predeterminado en una fiola, y luego
se mide la absorbancia de cada solución a la longitud de onda analítica o de trabajo.
Las medidas de la absorbancia se realizan comúnmente utilizando un blanco, que debe

ser idéntico a la muestra en todo, excepto en que no debe contener el constituyente que
se ha de determinar. El blanco deberá contener los reactivos, aditivos, disolvente, etc., en
la misma naturaleza y concentración que las utilizadas en cada muestra desconocida en
la que se desarrolle color. De esta manera, las lecturas de las muestras están corregidas
automáticamente para cualquier absorción pequeña por acción de los reactivos y del
disolvente. Con los datos absorbancia para las diferentes concentraciones de las series
patrón se construye una curva de calibrado. La cantidad de luz absorbida por cada patrón
se encuentra bien definida y se debe ajustar a ciertas leyes físicas denominadas leyes
fotométricas:
a) Ley Lambert - Bouguer
Presenta dos partes:
1.- “La relación entre la energía radiante transmitida, P, y la incidente, Po, es una
constante expresada como T, y se denomina TRANSMITANCIA”.
T = P / Po

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2.- “La energía de radiación transmitida decrece en progresión geométrica cuando la

longitud del camino óptico aumenta en progresión aritmética”. Se expresa
matemáticamente de la siguiente manera:
 log T = ab = A = - log T = - ( P/ Po ) = log ( Po/ P )
b) Ley Beer
Expresa la relación entre transmitancia y concentración de material absorbente, es decir,
que la transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando la concentración
aumenta en progresión aritmética. Por tanto:
-log T = ac = A = - log (P / Po) = lo (1/ T)
c) Ley Combinada Lambert - Beer

Resulta de la combinación de la ley de Lambert con la de Beer y suele llamarse
simplemente ley de Beer. Esta ley establece que: “la cantidad de luz o energía
ultravioleta o infrarroja absorbida o transmitida por una solución es una función
exponencial de la concentración de sustancia absorbente presente y de la longitud de la
trayectoria hacia la muestra”. Se obtiene las siguientes relaciones:
A = abc = = - log T = -log (P/ Po) = log (Po / P ) = log ( 1 / T ).
Donde:
T = transmitancia
a = absortividad del medio
b = Trayecto óptico
P = poder de radiación transmitida
Po= poder de radiación incidente.
Esta forma matemática de la ley combinada muestra que la absorbancia A en función

de la concentración “c” es una línea recta de pendiente “a”, y la representación de log T
frente a la concentración es una línea recta de pendiente negativa. La representación
gráfica de esta ley se denomina representaciones de la ley Beer.
III FUNDAMENTO
La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan
experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la
absorbancia de cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con
los datos de absorbancia frente a las concentraciones de los patrones se gráfica en un
sistema cartesiano y la representación debe ser una línea recta de pendiente positiva si
cumple con la ley Beer.

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V APARATOS
 Espectrofotométro : Shimadzu 160 –A
 Cubeta : 1 cm. De trayecto óptico
 Región de trabajo : Espectro visible

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 Longitud de Onda de trabajo : 525 nm
VI MATERIALES
 Fiolas de 100 y 250 ml.
 Buretas por 25 ml.

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VII REACTIVOS
 Solución Stock O,100N de permanganato de potasio
 Solución diluída de permanganato de potasio de 100 ppm .de manganeso
 soluciones patrones.

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VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones patrones
Preparar a partir de la solución Stock de KMnO 4 0, 1000N una solución estandard

diluida de 100 ppm en manganeso para un volumen de 250 ml y luego por dilución
preparar las soluciones patrones siguientes:
CUADRO DE SOLUCIONES
No Concentración ppmVolumen a Volumen a preparar

Patrón
Medir del estándar ml
1 0,5 50.0
2 1,0 50.0
3 2,0 50.0
4 4,0 50.0
5 6,0 50.0
6 8,0 50.0
7 10,0 50.0
8 12,0 50.0
9 16,0 50.0
10 20,0 50.0

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11 30,0 50.0
12 40.0 50.0
2.- Selección de Modo

Cuando se enciende el instrumento el interruptor es llevado hacia arriba en la posición
“ON “y es iniciado su funcionamiento. Cuando aparece el menú de modo básico
seleccionar el modo “5” que corresponde al modo cuantitativo.
3.- Ajuste de Parámetros

En el mostrario de la función CUANTITATIVO o de determinación de la concentración,
ajuste los parámetros de medición.
MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO EN EL MODO CUANTITATIVO
CUANT. CAMBIO DE PARAMETRO S / N ?
1.- METODO : 1
1λ = 525 NM
2 .- STANDAR No = 12
3.- MUESTRA No = 1
4.- REPETIR = 1
5.- IMPRESION DE DATOS NO
6.- CURVA DE TRABAJO NO LINEAL NO
7.- FILA
Para ajustar el primer parámetro “METODO” se sigue los siguientes pasos:

 Para una medida a una longitud de onda única.presionar “SI” ENTER, 1 ENTER.
Luego introducir la longitud de onda de medición.
 Para una medida con 2, 3 longitudes de onda, o para un análisis con valores
derivados...presionar “SI” ENTER, y presionar la opción 2, 3 o 4 y ENTER.
El segundo parámetro “STANDARD” significa introducir el número de soluciones

patrones cuyos valores de absorbancia se van a medir.

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El tercer parámetro “MUESTRA No”, significa la solución muestra, este será creado
automáticamente.
El sexto parámetro “CURVA DE TRABAJO NO LINEAL”, cuando este parámetro es

colocado en “SI”, la curva trabajada es no lineal. Cuando este es colocado para “NO” , el
trabajo de la curva es lineal .
Cuando los parámetros han sido ajustados a las condiciones adecuados presionar en
“CAMBIO DE PARAMETROS “NO. De acuerdo con la indicación de la pantalla, ingresar
tantos valores de concentración como muestras standard o patrones exista. El sistema
pregunta “CAMBIO DE CONCENTRACION S/ N”. Si se cometió un error en la
introducción de datos, presionar “SI “ presionar el No del patrón para la corrección,
ENTER, entrar el dato correcto, y ENTER.
Cuando no hay error en las entradas de concentración, presionar la tecla “NO “luego el
sistema pregunta “ INGRESO MANUAL DE DATOS DE ABSORBANCIA S/ N? “:
 Al presionar la tecla “SI “puede ingresar los valores de absorbancias desde el patrón
número 1 hasta el último.
 Para medir las muestras standares o patrones...presionar “NO “y luego medir los
patrones desde el número 1.
Cuando la entrada manual de las absorbancias de los patrones se ha terminado, el

sistema pregunta “CAMBIO DE DATOS S/N “igual que antes. Luego corregir las entradas
equivocadas como se señaló anteriormente, y presionar por último la tecla “NO “.
El sistema pregunta al operador “MOSTRARIO DE CURVA DE TRABAJO S/ N “, cuando

se presiona “NO “se puede iniciar una medición inmediatamente. Si se presiona “SI “, la
curva de trabajo se indica en la pantalla. Cuando el sistema pregunta “CAMBIO DE
CONCENTRACION EN CURVA DE TRABAJO S/ N ‘“, para cambiar la escala del eje de
concentración de la curva de trabajo, presionar “SI “(valor de concentración) ENTER. En
este caso si se presiona “NO “, se indican la curva de trabajo y su ecuación.
4.- Medición de la Muestra

Insertar una muestra y entonces presionar la tecla “STAR/STOP “, para iniciar su
medición.
IX INTERPRETACIÓN DE DATOS
Para copiar la curva de trabajo obtenida en pantalla en función de los valores de
absorbancia en el eje de la ordenada frente a las concentraciones en partes por millón
de manganeso en el eje de la abcisa, presionar la tecla “COPY “.

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Para seleccionar las soluciones patrones para la construcción de la curva de calibración

es necesario calcular el error relativo de la concentración o de la absorbancia que surge
de un error fotométrico de 1 %, y se efectua a partir de la ecuación siguiente:
dA = dC = 0.434 dT
A C t log t
Donde:
dA = dC = error relativo de la concentración o de la absorbancia
A C
dT = error fotométrico de 1 %
t = transmitancia.

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INFORME DE LABORATORIO N°2

DEMOSTRACIÓN DE LAS LEYES FOTOMÉTRICAS Y ERROR RELATIVO
DE LA CONCENTRACIÓN
FECHA: 27/08/2018 GRUPO: 06

ANÁLISIS:
 Obtención de la curva de calibración.
 Error relativo de la concentración.
 Selección de soluciones patrón
MÉTODO:
MUESTRA:
 Solución de 100 ppm. Mn
Datos:
 Longitud de Onda de trabajo: 525 nm.
 Blanco: Agua destilada.
 Soluciones patrón: KMnO4
 Solución Stock: 100 ppm. Mn
1. CUADRO DE SOLUCIONES PATRON

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Concentración Volumen a
N° Patrón Volumen a medir del estandar
ppm Mn preparar
1 0.5 2.0
2 1.0 4.0
3 2.0 6.0
4 4.0 8.0 50.0
5 6.0 10.0
6 8.0 12.0
7 10.0 16.0
8 12.0 50.0
9 16.0 50.0
10 20.0 50.0
11 30.0 50.0
12 40.0 50.0
2. SELECCIÓN DEL MODO DE TRABAJO (MODO CUANTITATIVO)
A. TABLA DE RESULTADOS DE LAS SOLUCIONES PATRONES
Concentración
N° Patrón Absorbancia % Transmitancia
ppm. Mn

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1 0.5 0.035 92.25

2 1.0 0.055 88.10
3 2.0 0.099 73.61
4 4.0 0.191 64.42
5 6.0 0.280 52.48
6 8.0 0.365 43.15
7 10.0 0.444 35.97
8 12.0 0.512 30.76
9 16.0 0.716 19.28
10 20.0 0.875 13.34
11 30.0 1.338 4.59
12 40.0 1.798 1.59
B. CURVA DE CALIBRACION
3. CALCULO DEL ERROR DE LA ABSORBANCIA O LA CONCENTRACION
Relación matemática:
∆ C 0.434 ∆T
=
C t log t
Donde:

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∆ C /C= Errorelativo de laoncentración o de la absorbancia .

∆ T =Error fotométrico1 %
t=Transmitancia
CÁLCULOS
1. Cálculo del ∆ C / C para 1% de Transmitancia.
∆ C 0.434 ( 0.01 )
= ×100 %=−21.7
C 0.01 log 0.01
∆ C 0.434 ( 0.01 )
= × 100 %=−6.6716
C 0.05 log 0.05
∆ C 0.434 ( 0.01 )
= × 100 %=−4.34
C 0.10 log 0.10
4. Tabulación de datos del Error Relativo
% Transmitancia ∆ C /C
95 20.51
90 10.54
80 5.60 Soluciones muy diluidas.
70 4.00
60 3.26
50 2.88
40 2.73
30 2.77 Soluciones diluidas.
20 3.10
10 4.34
5 6.67
1 21.70
Soluciones
concentradas.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
El trabajo práctico descrito previamente hizo referencia a la segunda etapa de diseño, teniendo
como objetivos construir curvas de calibración, verificar la conformidad del método con la Ley
Beer, y seleccionar las concentraciones límites de los patrones para ser empleados en un método
de análisis espectroscópico.
La obtención de la curva de calibración nos permitió demostrar que los datos de absorbancia
frente a las concentraciones de los patrones sí cumplen con la Ley de Beer.
La ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una
sustancia y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y la longitud
del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos (longitud atravesada por la luz en el medio) y

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α (coeficiente de absorción), la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de

la cantidad de luz transmitida.
Las unidades de c (concentración del absorbente en el medio) y α dependen del modo en
que se exprese la concentración de la sustancia absorbente. Si la sustancia es líquida, se suele
expresar como una fracción molar. Las unidades de α son la inversa de la longitud Si la
concentración de c está expresada en moles por volumen, α es la absorbencia molar
normalmente dada en mol cm-2.
Al desarrollar este tipo de temas nos familiarizamos más con conceptos como la Teoría
Corpuscular, la Fotónica, y las Leyes Fotométricas.
FIRMA DEL ALUMNO

CUESTIONARIO
1. ¿Qué son y cuáles son las leyes fotométricas?
 Ley de Lambert-Bouguer:
Presenta dos partes; “La relación entre la energía radiante transmitida, P, y la
incidente, P0, es una constante expresada como T, y se denomina
TRANSMITANCIA”, “La energía de radiación transmitida decrece en
progresión geométrica cuando la longitud del camino óptico aumenta en
progresión aritmética”.
 Ley de Beer:
Expresa la relación entre transmitancia y concentración de material absorbente,
es decir, que la transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando la
concentración aumenta en progresión aritmética.
 Ley Combinada Lambert-Beer:

Resulta de la combinación de la Ley de Lambert con la de Beer y suele
llamarse simplemente ley de Beer. Esta ley establece que: “La cantidad de luz o
energía ultravioleta o infrarroja absorbida o transmitida por una solución es un
función exponencial de la concentración de sustancia absorbente presente y de
la longitud de la trayectoria hacia la muestra”.
2. ¿Cómo obtiene y para qué se utiliza una curva de calibración o de trabajo?

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La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan

experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la
absorbancia de cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo.
Con los datos de absorbancia frente a las concentraciones de los patrones se grafica en
un sistema cartesiano y la representación debe ser una línea recta de pendiente positiva
si cumple con la Ley Beer.
3. ¿Cómo comprueba experimentalmente la Ley Beer?

Con los datos de absorbancia frente a las concentraciones de los patrones se grafica en
un sistema cartesiano y la representación debe ser una línea recta de pendiente positiva
si cumple con la Ley Beer.
4. Señalar las razones por las cuales se dan las limitaciones de la Ley de Beer.
La ley de Lambert-Beer tiene unas limitaciones que son:
i. Limitaciones propias:
Los niveles de energía en los que se mueven los electrones son distintos. Lo
mismo ocurre en disoluciones de baja concentración de especies absorbente, pero
con concentraciones elevadas de otras especies (sales interferentes). Los iones de
las sales interaccionan con las especies absorbentes y se modifica la capacidad de
absorción. De esta manera el diagrama de energía y la capacidad de absorción de
radiación variaran. Por lo tanto el efecto salino también afecta.
ii. Limitaciones debidas a desviaciones químicas:
Y esta asociación, disociación, reacción depende de la dilución. La ley de Beer
no se cumple debido a los cambios en los equilibrios que se producen. Cuanto
más parecidos sean los coeficientes de absorción molar de las especies, la
relación lineal tiende a ser más recta.
iii. Desviaciones instrumentales con radiaciones policromáticas:
Otra de las razones por las que no obtenemos una linealidad se puede deber a
desviaciones instrumentales, del instrumento en si. Si seleccionamos una longitud
de onda única, lo ideal sería que el monocromador dejase escapar esa longitud de
onda que seleccionamos (Radiación monocromática).
5. ¿A qué se denominan y cuáles son los errores personales?

Son difíciles de determinar y se dan debido a las limitaciones de carácter personal. Como, por
ejemplo, los errores de paralaje, o los problemas de tipo visual. Son una de las causas probables
de los errores sistemáticos, aquellos que son constantes a lo largo de todo el proceso de medida
y, por tanto, afecta a todas las medidas de un modo definido y es el mismo para todas ellas.
6. ¿Qué criterios se manejan para seleccionar las soluciones patrones para ser utilizadas en
un método espectrofotométrico?
 La especie debe estar coloreada.
 Las soluciones deben de contener solamente a la especie en solución y no otras que

tengan coloración propia y pueden absorber radiación.
 La longitud de onda óptima debe de ser marcada y apta para su estudio.

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7. Dar razones de porqué en espectroscopía se utilizan soluciones diluidas.

Para que la concentraciones no sean muy altas y la curva no salga elevado
8. ¿Cuándo una curva de calibración no parte del origen?, señalar las razones que
determinan este tipo de curva.

ANALISIS DE MANGANESO
I OBJETIVOS
 Construir la curva de calibración o de trabajo
 Determinar el contenido de manganeso en muestras de alimentos y de fármacos.
II GENERALIDADES
Pueden determinarse por espectrofotometría y colorimetría en forma de
permanganato pequeñas cantidades de manganeso en minerales, aguas, alimentos,
aceros y fármacos.
Entre los diversos reactivos capaces de oxidar los estados inferiores de oxidación del
manganeso a permanganato, tenemos el peryodato de potasio cuya reacción se
desarrolla de la siguiente manera:

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2 Mn+2 + 5 IO4- + 3 H2O ---- 2 MnO4- + 5 IO3- + 6 H+
analito peryodato ión permanganato
Existen productos farmacéuticos que son agentes activos para el restablecimiento de

la capacidad corporal e intelectual y para la lucha contra las manifestaciones de
desgaste. Las cápsulas de Pharmaton son productos que contienen extracto de
ginseng, vitaminas A, B1, B2, B6, B12, C, D, E, hierro, calcio, fósforo, flúor, cobre,
potasio, magnesio, zinc, y manganeso en cantidad de 1.0 mg por cápsula y otros
componentes.
Muchas enzimas contienen manganeso o son activados por este elemento. El manganeso está
presente en los alimentos de origen vegetal, como té, harina integral, germenes de cereales y
nueces. La deficiencia de manganeso ocasiona trastornos del crecimiento, modificaciones de
esqueleto y alteración del metabolismo de hidratos de carbono y grasas. A grandes dosis, el
manganeso es tóxico y produce trastornos en el tracto grastrointestinal y neumonía. No se
conocen intoxicaciones debidas a una ingesta normal procedente de alimentos.
1.- Interferencias
Son pocas las interferencias para el método. La presencia de iones coloreados se

puede compensar empleando como blanco un parte alícuota de la muestra problema ,
no oxidada por el peryodato.El cerio (III) y el cromo (III) son excepciones ; estos dan
productos de oxidación por el peryodato que absorben en el mismo grado a la
longitud de onda que se usa para la medición del permanganato.
Los componentes que acompañan al manganeso comunican cierta coloración a la
solución, el ión férrico de color amarillo se elimina con ácido fosfórico por formación
del complejo hierro-fosfórico incoloro, el color debido a pequeñas cantidades de
cromo, vanadio, níquel, y cobalto se compensan con el blanco tal como se ha
señalado.
Los cloruros reducen el permanganato formado y por lo tanto, si hubo necesidad de
utilizar HCl, deben ser eliminados previamente en forma de vapores de HCl llevando a
fumación con H2SO4
III FUNDAMENTO
La muestra es sometida a calcinación seca entre 500 - 550 oC , hasta obtener un
resíduo de cenizas, la que es disuelta por ácido y tratada con peryodato de potasio en
caliente ; el manganeso es oxidado por este reactivo hasta permanganato de color
violeta. En esta condición de color desarrollado por reacción y diluido a un volumen
conocido se realiza la medición espectrofotométrica a una longitud de onda de 525
nm.

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V APARATOS
 Espectrofotómetro : Shimadzu 160 – A
 Cubeta : 1 cm. De trayecto óptico

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 Longitud de onda : 525 nm
 Blanco : agua

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VI MATERIALES
 Fiolas de 100 ml.
 Pipeta graduada de 10 ml.
 Equipo de filtración
 Vaso de precipitación

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 Pisetas
VII REACTIVOS
 Solución de ácido nítrico 1 : 1

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 Peryodato de potasio
 Acido fosfórico
 Solución de Permanganato de potasio de 100 ppm en manganeso

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 Soluciones patrones o Standares.
VIII TECNICA
1.- Obtención de curva de calibrado
Preparar las soluciones patrones o estandares de: 4, 6, 8, 12 y 16 ppm en manganeso
para un volumen de 100 ml.
No standard Volumen del Stock Volumen aforado Concentración

ppm
1 4.0 100.0 4
2 8.0 100.0 8
3 12.0 100.0 12
4 16.0 100.0 16
2.- TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

A. Medida y disolución de la muestra
Pesar 6.0000 g de muestra, colocarla en un crisol de porcelana y someterla a
calcinación a más o menos 550 oC, mantener esa temperatura por espacio de 3 - 4
horas hasta obtener un residuo de cenizas.
Trasladar las cenizas a un vaso de precipitado de 250 ml y agregar 20 ml de HNO 3
1:3, cubrir el vaso con un vidrio de reloj y hervir lentamente hasta semisequedad. (En

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el curso de la disolución se produce NO2 y NO), estos pueden interferir posteriormente

reduciendo el ácido periódico por ello deben ser removidos). Diluir con más o menos
30 ml de agua destilada, calentar suavemente y si queda un residuo sólido filtrar.
Lavar el precipitado con agua destilada. El residuo sólido de descarta
B. Oxidación del Manganeso

Colocar la solución filtrada en un vaso de 250 ml, añadir de 3 a 5 ml. de ácido
fosfórico al 85% y unos 0.3 gramos de peryodato de potasio sólido. Hervir la solución
suavemente durante unos 3 minutos. Retire del fuego y permita que se enfrie; después
añada otros 0.2 gramos del peryodato de potasio (el exceso de peryodato estabiliza el
permanganato). Haga hervir uno o dos minutos más para desarrollar el color purpúreo,
enfriar y llevar a un volumen de 25 ó 50.0 ml en un matraz aforado (según intensidad
del color obtenido)
Medir en el instrumento la solución problema coloreada obtenida a la longitud de onda
seleccionada, utilizando como blanco agua.
3.- Medición Cuantitativa

A. Selección de Modo
Encender el instrumento y seleccionar en el menú de modo básico, presionando la
tecla “5 “que corresponde al modo cuantitativo y ajustar los parámetros de medición a
lo siguiente:
CUANTIT. CAMBIO DE PARAMETRO S/ N
1.- Método: 1
λ = 525 NM
2.- Standard No = 4
3.- Muestra No = 1
4.- Repetir No = 1
5.- Impresión de datos = NO
6.- Curva de trabajo no lineal = NO
7.- Fila
El sistema pregunta “CAMBIO DE PARAMETRO S /N “al presionar “NO “aparece en

pantalla “CALIBRATION “e ingresar los valores de concentración como soluciones
Standares, aparece luego en pantalla el mensaje de “CAMBIO DE CONCENTRACION
S / N” .

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Si presiona “NO “el sistema pregunta “INGRESO MANUAL DE DATOS DE ABS. S / N

“. Para ingresar las absorbancia de las soluciones Standares....presionar YES. Y
luego ingresar los valores de absorbancia desde el standard No 1 hasta el 4.
Cuando aparece “MOSTRARIO DE CURVA DE TRABAJO S/N “, presionar YES y la

curva se indica en pantalla. Presionar “RETURN “, aparece el modo cuantitativo y
presionar la tecla “NO “.
B.- Medición
Cuando aparece en pantalla “COLOCAR MUESTRA Y PRESIONAR LA TECLA
START. Luego aparecen los valores de absorbancia y concentración para cada
muestra.
IX CALCULOS
1.- Método Gráfico
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en ella se plotea el
valor de absorbancia de la muestra en la curva para determinar su concentración.
Luego calcular la concentración final de la muestra teniendo en cuenta las alícuotas
correspondientes.
2.- Método Analítico

Los pasos a seguir en el cálculo son:
A.- Cálculo de las absortividades de los estandares en base a:

A p = a. b. Cp
B.- Cálculo de la concentración de la muestra en base a:

Am = a. b. C m
Donde:
Ap = absorbancia del patrón
Am = absorbancia de la muestra
Cp = concentración del patrón
Cm = concentración de la muestra

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C.- Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las

diluciones efectuadas.
Considerar en estos cálculos las diluciones que se han realizado con la solución
problema. Se tiene un peso inicial, un volumen inicial de la solución, una medición de
una porción alícuota, y finalmente un volumen final de la muestra.
d.- Expresión del resultado

El resultado del análisis expresarlo bajo las dos formas siguientes: El fármaco declara
en su envase que contiene un peso determinado en miligramos por cápsula. En el
caso de alimentos se expresa el resultado como miligramos por ciento.

ANALISIS DEL MANGANESO
FECHA: 3/08/2018 GRUPO: 06

ANÁLISIS:
 Obtención de la curva de calibración.
 Error relativo de la concentración.
 Selección de soluciones patrón
MÉTODO:
MUESTRA:
 Solución de 100 ppm. Mn
Datos:
 Longitud de Onda de trabajo: 525 nm.
 Blanco: Agua destilada.
 Soluciones patrón: KMnO4
 Solución Stock: 100 ppm. Mn
1. TABLA DE MEDICION DE LOS PATRONES
Concentración
N° Patrón Absorbancia
ppm. Mn

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1 4.000 0.191
2 6.000 0.280
3 8.000 0.369
4 10.000 0.444
5 12.000 0.512
6 16.000 0.712
2. PREPARACION DE LAS MUESTRAS PROBLEMA
Peso de muestra H3PO4ml KIO4g Volumen

N° Patrón HNO31:3 ml
g. Final ml
1 4.0747 15 3 0.3 50.0
2 4.0116 15 3 0.3 50.0
3 4.0381 15 3 0.3 50.0
4 4.0695 15 3 0.3 50.0
5 4.0529 15 3 0.3 50.0
6 4.0217 15 3 0.3 50.0
7 4.0252 15 3 0.3 50.0
8 4.0171 15 3 0.3 50.0
3. TABLA DE MEDICION DE LA MUESTRAS
Concentración
N° Patrón Absorbancia
Instrumental
1 0.080 1.4385
2 0.036 04176
3 0.025 0.1588
4 0.029 0.242
5 0.570 12.878
6 0.092 1.7341
7 0.039 0.4802
8 0.035 0.8618
4. CALCULOS DEL ANALITO
a) METODO GRAFICO (curva de calibración)

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5. METODO ANALITICO
b) CALCULO DE LA ABSORTIVIDAD MEDIA AP=a.b.Cp
A1 0.191l
a 1= = =0.0478
bxC 1 mg
cm.4
L
A2 0.280l
a 2= = =0.0467
bxC 2 mg
cm .6
L
A3 l
a 3= = =0.461
bxC 3 mg
cm.8
L

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A4 l
a 4= = =0.0444
bxC 4 mg
cm .10
L
A5 0.512l
a 5= = =0.0427
bxC 5 mg
cm.12
L
A6 0.916 l
a 6= = =0.0448
bxC 6 mg
cm.16
L
c) CALCULO DE LA CONCENTRACION PARA LAS DILUCIONES
0.080
Cmuestra= =1.362 mg/ml
mg
1 cm.0 .0454
L
d) CALCULO DE LA CONCENTRACION PARA LAS DILUCIONES
mg
1.7671 x 50 ml=0.0829 ml Mn
L
e) CALCULO DEL PESO DE MANGANESO EN MILIGRAMOS
mg 0.08429 mg Mn 1000 g 21.62 mg
= x = Mn
L 4.474 1 Kg L
6. TABLA DE RESULTADOS DEL ANALISIS
N° MUESTRA Mg Mn/%
1 21.62
2 9.88
3 6.81
4 7.85
5 25.19
6 25.19
7 24.87
8 15.09
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En el experimento se usó la técnica de espectrofotometría. La técnica se basa en la

absorción de luz por parte de un cromóforo (especie química capaz de absorber luz).
La determinación cuantitativa del manganeso se basa en la ley de Beer-Lambert la cual
establece que la absorbencia es proporcional a la concentración del cromóforo. Se
construyouna curva de calibración con soluciones de concentración conocida del ión de
permanganato y se determinará los parámetros de la pendiente e intercepto por el
método de cuadrados mínimos para determinar la concentración del desconocido.

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Las concentraciones que deseamos detectar son demasiado bajas, por lo que debemos recurrir a
técnicas especiales que requieren complementar el equipo con ciertos accesorios, los cuales
mejoran notablemente la sensibilidad del equipo.
FIRMA DEL ALUMNO

CUESTIONARIO:
1. Que métodos de trabajo conoce para determinar concentración de analitos en
espectrofotómetro
Rayos x : Ionizaciones de la moléculas
UV-visible: Transiciones electrónicas entre los orbitales atomicos y moleculares
Infrarrojo: Deformación de los enlaces químicos
Microondas: Rotaciones de los enlaces químicos
Radiodiofrecuencias: Transiciones de espín electrónico o nuclear en los átomos de la
molécula

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2. Porque en espectrofotometria visible la solucion debe presentar color natural o

formado con colorante cromoforo y cuáles son los factores a tomar en
consideración
LaporcióndelaradiaciónUVvisiblequeesabsorbidaimplicaque unaporciónderadiación
electromagnéticanoesabsorbidaporla muestrayqueportantoestransmitidaatravésdeellay
puedesercaptadaporelojohumano. Eselcolordelasustancia.
3. Qué papel desempeña el reactivo peryodato de potasio y el ácido fosforico .
formule las reacciones químicas
El ácido es resistente oxidación, a la reducción y a la evaporación facilita la adhesión
de los materiales ; como catalizador, en metales inoxidablesy para fosfatos que se
utilizan como ablandadores de agua, fertilizantes y detergentes. Muy utilizado en
laboratorios químicos en la preparación de disoluciones tampón o reguladoras
del pH.
4. Como emplea la curva de calibración para determinar la concentración de un

analito
Un procedimiento analítico muy utilizado en análisis cuantitativo es el llamado de
calibración que implica la construcción de una “curva de calibración”. Una curva de
calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función de la
concentración de un analito.
La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los parámetros que

permitan determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un
método analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la
concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de
trabajo. En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de
estándares de concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con
propiedades muy similares a éste).
5. Un peso de 15mg de muestra de un compuesto con peso molecular de 384.63 se

disuelve en un matraz volumétrico de 5 ml. un alicuota de 1 ml se coloca en un
matraz de 10ml y se diluye hasta la marca de enrase
6. Halle la concentración de la muestra en el matraz de 5ml
7. Determine la concentración en el matraz de 10 ml

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ANALISIS DE HIERRO
I OBJETIVOS
 Construir una curva de absorción y de calibrado
 Seleccionar la longitud de onda de trabajo
 Analizar el contenido de hierro en un alimento.
II GENERALIDADES
Gran cantidad de iones inorgánicos que presentan color en solución acuosa absorben
suficiente energía radiante en la región visible, lo que permite su determinación
espectrofotométrica directa, incluso en muy bajas concentraciones. Pero no todos los
iones metálicos presentan color propio, y otros tienen poco color.
Los colores de muchos cationes se pueden intensificar por formación de compuestos
complejos al hacerlo reaccionar con determinados reactivos denominados cromoforos.
Muchos reactivos que producen color han sido empleados para la determinación de
hierro, en algunos se efectúa la determinación directa de hierro (III), mientras en otros
se aprovecha la formación de complejos muy coloreados entre hierro (II ) y diversos
ligandos orgánicos.
Entre los diversos reactivos más importantes para la determinación
espectrofotométrica del hierro figuran el reactivo 1, 10 fenantrolina y sus análogos
como el 4, 7 difenil 1, 10 fenantrolina (batofenantrolina). El ligando orgánico, tiene la
estructura siguiente C12H8N2, donde tres de estos ligandos están coordinados con un
catión de hierro (II), por los pares de electrones sobre los átomos de nitrógeno, para
formar el complejo indicado, que en forma abreviada se escribe así:
Fe+2 + 3 Fenan ========= Fe (fen)3 +2
Analito ligando complejo rojo anaranjado
Cada átomo de nitrógeno de la fenantrolina forma un enlace coordinado con el hierro

(II) y que hay un total de 6 enlaces de este tipo. El complejo se llama tris 1, 10
fenantrolina, hierro II.

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El hierro está contenido en el pigmento de la sangre (hemoglobina) y sirve

principalmente para el transporte del oxígeno y la hematopoyesis. El hierro se
encuentra en hígado, riñones, corazón, carne, productos elaborados con cereales
integrales, verdura verde, espinacas, etc. En los productos farmacéuticos se tiene la
presencia de hierro como sulfato ferroso y estos productos son empleados en caso de
anemía ferropénica (profiláxis y tratamiento) y como suplemento dietético.
1.- Interferencias
Las principales interferencias son plata (I), cobalto (II), cobre (II) y níquel (II) se ha
demostrado que una mezcla de ácido cítrico y ácido etilen diamino tetraacético
( EDTA ) puede emplearse para enmascarar plata (I) , cobre (II), y níquel (II) y una
gran cantidad de iones metálicos comunes. También resultan interferentes los
oxidantes enérgicos como cianuros, nitritos, y fosfatos. La adición en exceso de
hidroxilamina elimina los errores debido a estas sustancias.
III FUNDAMENTO
El método de la fenantrolina consiste en reducir el hierro al estado ferroso con el reactivo orgánico
cloruro de hidroxilamina en un medio ácido ajustado a más ó menos 3.5, con solución buffer, en estas
condiciones se agrega el reactivo complejante 1, 10 fenantrolina; formándose un compuesto complejo
de fierro fenantrolina de color rojo naranja, y que es medido luego espectrofotométricamente a una
longitud de onda de 510 nm. La formación cuantitativa del complejo se observa en el margen de pH
comprendido entre 3 y 9 pero se recomienda un pH próximo a 4 para evitar la precipitación de diversas
sales de hierro.
El circuito básico del equipo instrumental es el siguiente:

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V APARATOS
 Espectrofotómetro : Shimadzu 160 - A
 Cubeta : 1 Cm. De trayecto óptico
 Longitud de onda : 510 nm
 Blanco : Solución de reactivos y disolvente menos hierro.
VI REACTIVOS
 Solución de Hidroxilamina .- Disolver 10.0 gramos de reactivo en 100 ml de agua
destilada
 Solución buffer.- Disolver 250 gramos de acetato de amonio en 150 ml de agua
destilada, añadir 700 ml de ácido acético glacial.
 Solución de fenantrolina.- Disolver 0.250 gramos de 1, 10 fenantrolina
monohidratada en 100 ml de agua destilada, agitando y calentando a 80 oC. Se
evita el calentamiento si se añade 2 gotas de ácido clorhídrico en el agua destilada.
 Solución Stock de hierro.- La solución se prepara a partir del sulfato ferroso
amoniacal [FeSO4 (NH4)2SO4.6H2O]. Para ello se disuelve 0.7020 gramos del
reactivo, calidad analítica, en 50 ml de agua destilada y 1 ml de ácido sulfúrico
concentrado, pasar a una fiola en un litro, diluir exactamente hasta el enrase y
homogenice. La concentración de la solución es de 0.1 mg de hierro por mililitro de
solución (0.1 mg Fe / ml de solución).
VIII TECNICA
1.- Preparación de soluciones estandares o patrones
Estas soluciones se deben preparar instantes antes del análisis porque son inestables.
Disponer de 5 matraces aforados de 50 ml y rotular del uno al cinco; agregar a la fiola
número 1, 0.5 ml, agregar a la segunda fiola, 1.0 ml, a la tercera 1.5 ml, y a la cuarta
fiola 2.0 ml de la solución Stock. A la quinta fiola no se le añade dicho reactivo
(solución blanco).
Se agrega a cada fiola, 3 ml de solución de hidroxilamina, 3 ml de solución de

fenantrolina y ajuste el pH de la solución a 3.5 con la solución buffer; diluya cada
solución con agua destilada hasta el aforo, se tapa la fiola, se agita y se deja en
reposo durante media hora. El color de la solución es rojo anaranjado.

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No volumen del Buffer Fenantrolina Concentraci Volume

estanda Stock ml Hidroxilamina ml ón mg/ml n final
Ml
rd ml
ml
1 0.5 3 3 0.001 50.0
2 1.0 3 3 0.002 50.0
3 1.5 3 3 0.003 50.0
4 2.0 3 3 0.004 50.0
5 0.0 3 3 0.000 50.0
2.- Determinación de la longitud de onda analítica
Una vez iniciada el encendido del instrumento y aparece en pantalla el menú básico de
funciones, seleccionar la función “ESPECTRO “y ajustar en esta función los
parámetros analíticos de:
λS = 600 NM λ E = 400 NM
SUPERIOR = + 0.700 A INFERIOR = + 0.00 A
Determinar la longitud de onda de trabajo en la curva espectral mediante el barrido con

el cursor.
3.- Preparación de la muestra
Pesar exactamente, 6.0000 g de la muestra y calcinar en una mufla a 550 o C hasta la

obtención de cenizas blancas. Disolver con 10 ml de HCl 6 M, calentando suavemente
evitando llegar a sequedad. Diluir con más o menos 20 ml de aguas destilada y
calentar. Filtrar si es necesario y recibir los filtrados en una fiola de 100 ml enrasar y
homogenizar la solución con agua destilada.

lOMoARcPSD|17999274
Medir una alícuota de 25.0 ml, colocarla en una fiola de 50.0 ml y darle el mismo
tratamiento que las soluciones estandar hasta obtener el color. Esta solución de la
muestra en estudio está lista para ser sometida a medición en el aparato.
4.- Medición de la Muestra

Seleccionar en el menú principal el modo “CUANTITATIVO “y ajustar los parámetros
analíticos de medición a la longitud de onda de trabajo y del número de standard por
medir empleando como blanco la solución No 5 (Blanco).
IX CALCULOS
1.- Método Gráfico
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en el se plotea el valor

de absorbancia de la muestra en la curva para determinar su concentración. Calcular
la concentración final de la muestra teniendo en cuenta las diluciones efectuadas.
2.- Método Analítico
Seguir los procedimientos de acuerdo a los pasos señalados:
a) Cálculo de las absortividades de las soluciones estandar
Emplear la ecuación base de las leyes fotómetricas:
A = a.b.c
Calcular las absortividades de las soluciones standard.
a1 = A1 / C1
a2 = A2 / C2
a3 = A3 / C3
a4 = A4 / C4

lOMoARcPSD|17999274
Luego calcular la absortividad media:
a m = a1 +a2+ a3+ a4
4
b) Cálculo de la concentración de la muestra
En la ecuación: A = am.b.c.
Se despeja C que corresponde a la concentración de la muestra:
C muestra = A muestra
am x b
c) Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las

diluciones efectuadas
Calcular la concentración de la muestra tomando en cuenta las diluciones realizadas a

la solución problema.
d) Expresión del resultado

1.- En miligramos de hierro por mililitro

ANALISIS DEL HIERRO
FECHA: 17/09/2018 GRUPO: 06

ANÁLISIS:
 Preparación de soluciones patrones.
 Obtención del espectro de absorcion.
 Determinacion de la longitud de Onda de Trabajo.
 Determinacion de Hierro.
MÉTODO:

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 Espectrofotométrico dela fenaltrolina .
MUESTRA:
 Lentejas 5.000g
CONTERNIDO TEORICO
8.6 mg

100 g
Datos:
 Peso de muetra =5.000g
 Volumen inicial =100.0ml
 Volumen alícuota=25.0ml
 Volumen final=50.0ml
 Solución stock= 1ml=0.1mg Fe
Tabla de preparación de soluciones patrones

N° Volumen Buffer Hidroxilamina Fenantrolina Concentración Volumen
Patrón Stock ml ml ml ml mg final
g
1 0.5 2.0 3.0 3.0 0.001 50.00
2 1.0 2.0 3.0 3.0 0.002 50.00
3 1.5 2.0 3.0 3.0 0.003 50.00
4 2.0 2.0 3.0 3.0 0.0004 50.00
5 00 2.0 3.0 3.0 ------------ 50.00
Tabla de resultados de las soluciones patrones para la determinación del espectro

de absorción
λ nm. Absorbancia λ nm. Absorbancia
450 0.129 530 0.134
460 0.141 540 0.088
470 0.151 550 0.048
480 0.153 560 0.025
490 0.167 570 0.011
500 0.174 580 0.006
510 0.180 590 0.001
520 0.170 600 0.002
Medición de patrones

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N° mg Absorbancia
Patrón Concentración
g
Fe
1 0.001 0.187
2 0.002 0.349
3 0.003 0.565
4 0.004 0.735
Curva de calibración
Tabla de Preparación de muestras
N° Peso de Volumen Volumen Buffer Cloruro Fenantrolina Volumen Final

Patrón muestra inicial alícuota
1 5.0010 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
2 5.0009 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
3 5.0110 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
4 5.0010 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
5 5.0013 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
6 5.0006 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
7 5.0131 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
8 5.0139 100.0 25.00 3.0 3.0 3.0 50.00
Tabla de medición de muestras

lOMoARcPSD|17999274
N° Absorbancia Concentración
Patrón mg
Fe
g
1 0.067 0.1983
2 0.456 1.2429
3 0.201 0.5582
4 0.425 1.1601
5 0.460 1.2527
6 1.339 3.6087
7 0.611 1.6580
8 0.323 0.8853
CALCULOS
1. Método grafico
2. Método analítico
Ap=c1.b.cp
a) Absortividad
A1 0.187
a 1= = =187.00
bxC 1 mg
1 cm.4
L
A2 0.349
a 2= = =174.50
bxC 2 mg
1 cm.6
L

lOMoARcPSD|17999274
A3 0.565
a 3= = =188.33
bxC 3 mg
1 cm .8
L
A4 0.735
a 4= = =183.75
bxC 4 mg
1 cm.10
L
Am ml
am= =183.395
bxCm Cmxmg
b) Concentración analito
Am=am.b.cm
1.339 ml
Cm= =7.30 x 10−3
1 cmx 183.395 Cmxmg
c) Dilución
mg
1.76x10-3 x50ml=25mlxC2
L
mg
3.52x10-3 x100ml=0.352mgFe
L
d) Concentración mg/%
0.352mg
x 100 %=7.02
5.0139 g
Tabla de Resultados
N° mg
Grupo Fe
%
1 1.46
2 9.41
3 4.37
4 9.27
5 10.03
6 29.20

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7 13.31
8 7.02
3. Discusión y resultados
En la espectrofotometría de emisión de llama, la muestra en solución es nebulizada e

introducida dentro de la llama, en donde es desolvatada, vaporizada y atomizada, todo esto en
rápida sucesión. Subsecuentemente, los átomos y las moléculas se elevan a estados excitados
por colisiones térmicas con los constituyentes de los componentes de la llama parcialmente
quemados.
Durante su regreso a un estado electrónico basal o más bajo, los átomos y moléculas emiten la
radicación característica de los componentes de esa muestra. La luz emitida pasa por un
monocromador que aísla la longitud de onda específica para el análisis deseado. Un
fotodetector mide la potencia radiante de la radiación seleccionada, que entonces es
amplificada y enviada a un dispositivo de lectura: medidor, registrador o sistema con
microcomputadora.
FIRMA DEL ALUMNO

CUESTIONARIO
1. Efectue la reacción entre el hierro (II) y el reactivo fenantrolina

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2. Para qué sirve el blanco y como está constituido en la determinación de

hierro por el método de la fenantrolina
La base para lo que los químicos llaman análisis colorimétrico es la variación en la
intensidad del color de una solución con cambios en la concentración. El color puede
deberse a una propiedad inherente del constituyente mismo –por ejemplo, MnO4 - es
púrpura- o puede deberse a la formación de un compuesto colorido como consecuencia de
la adición de un reactivo adecuado.
Comparando la intensidad del color de una solución de concentración desconocida con
las intensidades de soluciones de concentraciones conocidas, se puede determinar la
concentración de una solución desconocida. Se analizará para hierro en este experimento
permitiendo al hierro(II) reaccionar con un compuesto orgánico (o-fenantrolina) para
formar un complejo de hierro rojo-naranja..
3. Si una muestra contiene hierro (II) y hierro(III) , diseñe una técnica

mediante un diagrama de bloques para analizar estos componentes por
separado
4. Que tipos de interferencia puede presentarse en un análisis

espectrofotométrico
Interferencias espectrales.

lOMoARcPSD|17999274
Aparecen cuando un átomo distinto de aquel que se va a medir absorbe parte de la

radiación incidente sobre la muestra. Pueden presentarse al utilizar una lámpara
multielemento que posee dos líneas de emisión muy próximas que correspondan a dos
elementos diferentes. La interferencia puede ser eliminada utilizando una lámpara de un
único elemento.
Interferencias de absorción inespecífica o absorción de fondo. Ocurren cuando ciertas

partículas formadas en la llama desvían la trayectoria de la radiación incidente
produciendo una señal aparente de absorción. Se producen también como resultado de
la formación de algunas especies moleculares que puedan absorber radiación
Interferencias de ionización. Tienen lugar al medir un elemento fácilmente ionizable a la

temperatura de la llama utilizada. El grado de la ionización depende de la concentración
y de la presencia en la muestra de otros átomos fácilmente ionizables que ejerzan un
efecto de tampón sobre el medio. La interferencia puede ser controlada añadiendo a
muestras y patrones la sal de un metal alcalino.
Interferencias químicas. Ocurren cuando el elemento a medir se combina con otras

especies presentes en la llama, disminuyendo el número de átomos en estado
elemental. Este tipo de interferencias puede ser controlado utilizando una llama que
produzca una mayor temperatura o bien añadiendo a muestras y patrones algún otro
compuesto que inhiba la reacción entre el metal y sus interferentes. Una concentración
de 1000 µg de lantano por ml de muestra es generalmente suficiente para minimizar
esta interferencia
Interferencias físicas. Aparecen cuando existen diferencias en las propiedades físicas

(viscosidad, tensión superficial, etc.) de las disoluciones de muestras y patrones de
calibración. Se reducen las interferencias si se consiguen igualar las características de las
matrices de dichas disoluciones, bien por dilución o añadiendo los
5. Calcular la absortividad molar del complejo rojo anaranjado fenantrolina ,

si se trato un volumen alícuota de 5 ml de una solución estándar con un
total de 20 microgramos de hierro y luego se diluyo a una volumen final de
10 ml . la absorbancia de la solución medida a 510 nm es de 0.4 y se empleo
una celda de 1 cm
6. Que otros métodos espectroscópicos del visible conoce para la
determinación de hierro , señale sus fundamentos brevemente
Espectroscopia de emisión por plasma de acoplamiento inductivo
Espectrometría de masas por plasma de acoplamiento inductivo
Espectroscopia de Absorción Atómica

Espectrofotometria Del Visible

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Espectrofotometría DEL Visible

Bioquímica (Universidad Católica de Santa María)

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ESPECTROFOTOMETRÍA DEL VISIBLE

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 Cubeta: 1cm de trayecto óptico.

 Región de trabajo: espectro visible (450 - 600 NM).

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 Blanco: agua destilada.

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 Vasos de precipitación de 250ml.

 Solución de permanganato de potasio con concentración de 100 mg/L (ppm) de

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 Soluciones estandares o patrones.

B) Preparación de soluciones patrones o estándares

2.- SELECCIÓN DE MODO BÁSICO DE TRABAJO

MENU DE MODO BASICO

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Presione el Nro “2 “y luego la tecla ENTER para seleccionar el modo

3.- AJUSTE DE PARÁMETROS ANALÍTICOS

Luego que el modo básico es seleccionado, es necesario primero

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO

1.- λ s = 600,0 nm λ E = 450,0

2.- Medición (ABS / T %) = ABS.

3.- Superior = + 1,00 A Inferior = + 0,00 A

4.- Velocidad de barrido = rápida

5.- Ciclo T = 60 seg. N =1

8.- Barrido OBS No

Cuando el proceso de cambio de parámetro está completo, presione la

4.- MEDICIÓN DE STÁNDARES

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Una vez ajustados los parámetros de medición y al presionar la tecla “No

5.- PROCESAMIENTO DE DATOS

a) Si no es necesario el procedimiento de datos, presionar “NO” y es

0* Para almacenar el espectro medido en la memoria ... presionar 1

Después de que el espectro es indicado con nuevos parámetros de escala, el

Cuando termine sus procedimientos de datos aparece en pantalla la curva

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apareciendo en pantalla los valores de absorbancia y longitudes de onda que

VIII INTERPRETACION DE DATOS

 Absorbancia frente a longitudes de onda

 Porcentaje de transmitancia frente a longitudes de onda.

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FECHA: 20/08/2018 GRUPO: 06

1. Valoración de la Solución de KMnO4 con Oxalato de Sodio R.A. (Método de porción

0.1106 g . Na2 C 2 O 4 1 meq . KMn O4 meq .

2. Expresión de la concentración del KMnO4 0.1 N en ppm referida a Manganeso (Solución

meq 0.031606 g . KMn O4 54.94 g . Mn 1000 mg . 1000 mL.

3. Preparación de la solución de 100 ppm Mn a partir de la solución stock (Solución diluida).

1091.9999 ppm Mn × V 1=100 ppm Mn ×250 mL .

4. Cuadro de soluciones patrón.

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Concentración Volumen a medir de la solución

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO EN EL MODO ESPECTRO

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i. Medición de la Absorbancia a diferentes longitudes de onda ( λ )

λ nm. Absorbancia λ nm. Absorbancia

ii. Espectro de absorción

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λ nm. % Transmitancia λ nm. % Transmitancia

ii. Espectro de absorción

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