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Cinetica de Reacciones Catalizadas Por Enzimas
Cinetica de Reacciones Catalizadas Por Enzimas
! Si se desnaturaliza o
disocia en subunidades
pierde su actividad
En 1890s, Emil Fischer propuso un modelo de llave
cerradura para explicar la especificidad de las enzimas.
a[ S ]
v0 =
b + [S ]
Mecanismo de las reacciones catalizadas por enzimas.
Cinética de Michaelis-Menten
E = enzima
S = sustrato,
ES = complejo enzima
k1 k2 sustrato
E + S ⇄ ES → P + E
k-1
d [ P] k 2 [ E ]0 [ S ]
v0 = =
dt 0 K s + [S ]
Cinética de Michaelis- Menten
d [ P] k 2 [ E ]0 [ S ] a[ S ]
v0 = = Tiene la forma de la v0 =
dt 0 K s + [S ] ecuación de la hipérbola b + [S ]
a = k2[E] 0 y b = Ks
d [ P] k2
v0 = = [ E ]0 [ S ] La velocidad depende de la [S]
dt 0 K s
v0 = k 2 [ E ]0 = Vmax
Representa la transición de
baja a alta concentración
Mecanismo de las reacciones catalizadas por enzimas.
Cinética del estado estacionario.
k1 k2
E + S ⇄ ES → P + E
k-1
En 1925 Briggs y Haldane postularon que tan pronto como la enzima y el sustrato
se mezclaban, la concentración del complejo ES alcanzaba un valor constante, de
tal manera que la aproximación del estado estacionario podía aplicarse.
concentración
tiempo
Cinética del estado estacionario
k1 k2
E + S ⇄ ES → P + E
k-1
d [ ES ]
= k1[ E ][ S ] − k −1[ ES ] − k 2 [ ES ] = 0
dt
[E]0 = [E] + [ES] [E] = [E]0 - [ES]
k1[ E ]0 [ S ]
[ ES ] =
k1[ S ] + k −1 + k 2
d [ P] k1k 2 [ E ]0 [ S ]
v0 = = k 2 [ ES ] =
dt 0 k1[ S ] + k −1 + k 2
k 2 [ E ]0 [ S ]
v0 =
(k−1 + k 2 ) / k1 + [ S ]
Cinética de Reacciones Catalizadas por Enzimas
k1 k2
E + S ⇄ ES → P
k-1
Estado estacionario: Equilibrio:
k 2 [ E ]0 [ S ]
k 2 [ E ]0 [ S ] v0 =
v0 = K s + [S ]
(k−1 + k 2 ) / k1 + [ S ] KM ≠ Ks
k −1
k 2 [ E ]0 [ S ] k −1 + k 2 Ks =
v0 = KM = k1
K M + [S ] k1
Vmax [ S ]
v0 =
K M + [S ]
Cinética de Reacciones Catalizadas por Enzimas
! Cuando la velocidad
inicial es la mitad del
máximo de la velocidad v0
Vmax Vmax [ S ]
v0 = =
2 K M + [S ]
[ S ] + K M = 2[ S ]
KM = [S]
[S]
Vmax [ S ] 1
v0 =
K M + [S ] v0
KM
m=
1 KM 1 1 Vmax
= + −
v0 Vmax [ S ] Vmax KM 1
Vmax
1
[S ]
Gráfica Eadie-Hofstee
Eadie-Hofstee propusieron otro método para graficar los datos
cinéticos, éste método consiste en multiplicar ambos lados de la
ecuación del recíproco por v0Vmax
1 KM 1 v0 Vmax
= +
v0 Vmax [ S ] Vmax
vK m = −KM
Vmax = 0 M + v0
[S ] Vmax
Rearreglando: KM
v0 K M
v0 = Vmax − v0
[S ]
[S ]
Significado de KM
Vmax = k2[E]0
Vmax = (1×106 s-1)(1×10-6 M) = 1 M s-1
! Competitiva.
! Acompetitiva
! No competitiva
k1 k2
Mecanismo: E + S ⇄ ES → P
k-1
+
I
⇄
ES
EI
Inhibición Competitiva.
k1 k2
E + S ⇄ ES → P
+ k-1
I [ E ][ I ]
⇄ KI KI =
EI
[ EI ]
Aplicando la aproximación del estado estacionario y considerando que la
concentración total de enzima está dada por: [E]0 = [E] + [EI] + [ES]
Vmax [ S ]
v0 =
[I ]
K M 1 + + [ S ]
KI
[I ]
Excepto que el término KM está modificado por: 1 +
K I
Vmax [ S ]
ésta ecuación tiene la misma forma que la ec. de Michaelis-Menten v0 =
K M + [S ]
Inhibición Competitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
Vmax [ S ]
v0 =
[I ]
K M 1 + + [ S ]
KI
[I]
1 KM [I ] 1 1
= 1 + + 1
v0 Vmax K I [ S ] Vmax v0
[I] = 0
m
1 KI
intercepto = −
KM K I + [I ] 1
Vmax
1
[S ]
Inhibición Competitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
K [I ]
m= M 1 +
Vmax KI m
KM KM [I ] KM
m= + m'=
Vmax Vmax K I Vmax K I
-KI KM
Vmax
[I]
E + S ⇄ ES → P
+
I
Inhibición Competitiva.
⇄
EI
ES ESI
EI ESI
k1 k2
Mecanismo: E + S ⇄ ES → P
k-1
+ +
I I EI y ESI no forman productos
⇄
KI KI
EI + S ⇄ ESI
Inhibición No Competitiva.
k1 k2
E + S ⇄ ES → P
k-1
+ +
I I
⇄
KI KI
EI + S ⇄ ESI
Aplicando la aproximación del estado estacionario y considerando que la
concentración total de enzima está dada por: [E]0 = [E] + [EI] + [ES] + [ESI]
Vmax
[S ]
[I ]
1 +
v0 = KI
K M + [S ]
Inhibición No Competitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
Vmax
[S ] 1 KM [I ] 1 1 [I ]
[I ] = 1 + + 1 +
1 + v0 Vmax K I [ S ] Vmax KI
v0 = KI
K M + [S ]
1 [I]
v0
1 [I ] [I] = 0
intercepto = 1 +
Vmax K I
1 1
−
KM [S ]
Inhibición No Competitiva.
La adición de más
sustrato no revierte el
E ES ESI efecto inhibitorio
k1 k2
Mecanismo: E + S ⇄ ES → P
k-1
+
I
ESI no forman producto
⇄
KI
ESI
Inhibición Acompetitiva.
k1 k2
E + S ⇄ ES → P
k-1
+
I
⇄
KI
ESI
Aplicando la aproximación del estado estacionario y considerando que la
concentración total de enzima está dada por: [E]0 = [E] + [ES] + [ESI]
Vmax
[S ]
[I ]
1 +
KI
v0 =
KM
+ [S ]
[I ]
1 +
KI
Inhibición Acompetitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
Vmax
[S ]
[I ]
1 +
KI 1 KM 1 1 [I ]
v0 = = + 1 +
KM
+ [S ] v0 Vmax [ S ] Vmax KI
[I ]
1 +
KI
1
[I]
v0
1 [I ]
intercepto = 1 + [I] = 0
Vmax K I
KM
m=
Vmax
1 1
−
KM [S ]
1 KM 1
Sin inhibición = +
v0 Vmax [ S ] Vmax