2.

MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 Muestreo de suelo
Se tomará partir de una perforación con una pala recta en el suelo a una
profundidad de 30 cm.
• Preparación de material
Deberá ser almacenada en bolsas de polietileno.

• Toma de muestra e identificación de la muestra

Una vez obtenida la muestra de suelo debe ser llevada al laboratorio, en donde
deberá ser preparada, para posteriormente someterla a los procesos de análisis
correspondientes.
• Traslado de la muestra al laboratorio

1. Una vez obtenida la muestra en el campo esta debe ser cuidadosamente

mezclada y reducidas de tamaño las partículas más grandes,

2. Cada muestra debe ir acompañada de una identificación, donde se indique

claramente su procedencia, nombre del interesado, profundidad de colecta,
relieve, cultivo, historial de fertilización, aplicación de mejoradores, etc., así como
las determinaciones requeridas, según el propósito del estudio.
2.2 Análisis de laboratorio
• Preparación del material
Las cajas Petri deben ser envueltas en papel estraza y pipetas graduadas se
taparán por la parte superior trasera con un poquito de algodón e igual se
envolverán con papel estraza, después se meterán en la autoclave para
esterilizarse, los matraces ya deben estabar previamente limpios. La mesa de
trabajo también debe ser esterilizada con alcohol.
• Preparación de medios de cultivo

Se pesarán 7 g de Agar nutritivo MacConkey en una balanza analítica para

posteriormente ser hidratado en 140 ml de agua destilada en un matraz
Erlenmeyer con capacidad de 250 ml. Para su preparación, el matraz se debe
colocar sobre una estufa eléctrica hasta el punto de ebullición agitando
cuidadosamente durante 1 minuto.

• Esterilización
 En una autoclave a 121 ± 1,0 ºC con 15 lb de presión, durante 15 minutos,
incluyendo medios de cultivo.
2.2.1. Aislamiento por estría simple

En 5 cajas Petri se colocará dextrosa y en otras 5 lactosa, a un lado del mechero

para evitar contaminación, después de solidificar se toma un asa bacteriológica
previamente esterilizada al rojo vivo con la llama del mechero y enfriada en el
mismo medio de cultivo, después se debe tomar un poco de la muestra en la que
se sembró usando la técnica por estría simple. Como medio de cultivo para
hongos y bacterias se utilizará soya y dextrosa. Después la caja Petri se tiene
invirtir y se incubará a 37°C durante 48 horas.

2.2.2. Morfología colonial

Después del cultivo de estría simple se identificarán las colonias aisladas y

tomarán en cuenta los siguientes criterios:

-Tamaño
-Color
-Forma
-Borde
-Elevación
-Superficie
-Aspecto
-Luz reflejada
-Luz transmitida
-Consistencia
-Producción de pigmento

2.2.3 Conteo en placa (bacterias viables)

En este procedimiento se primero se tiene que vertir las diluciones (agar y soya
tripticasa) y después se verterá el en medio y se dejando enfriar e invertir para ser
incubadas durante 48 horas a 36°C. Una vez que se incubaron son seleccionadas
las colonias y se eligieran a aquellas que tendrán entre 30 y 3000 unidades
formadoras de colonias, para llevarlas al cuenta colonias.
También se usarán dos testigos, donde el testigo uno (dextrosa) será utilizada
para observar si había contaminación en el medio, y el testigo 2 (agua peptonada)
será utilizada en ambos medios para observar si el agua estaba contaminada.
Dextrosa Soya tripticasa
10-2 Incontable Incontable
10-3 28 (menor a 30) Incontable
10-4 154 unidades formadoras 134 unidades formadoras
de colonias de colonias
Testigo 1 (Medio) Incontable Incontable
Contaminada
Testigo 2 (Agua No contaminada y No No presenta colonias
peptonada) presenta colonias

2.2.4. Conteo de NMP

Este procedimiento fue realizado en 9 tubos de cultivo por 48 h en incubación, los

microorganismos fueron en un medio líquido y el crecimiento se determinó por
dos criterios que son medio turbio y la formación gas en los tubos de campana
Durham.
De los 9 tubos que se analizaron solo 4 si presentaron gas y turbiedad y fueron
clasificados de la siguiente manera: dos tubos de 10 -2 si presentaron turbiedad y
gas, también un tubo de 10-3 y 10-4
si presentaron turbiedad y gas.