Técnicas para el Estudio de Entonces: Se estimula a una célula y a la otra no.

La que
es estimulada será evaluado el patrón de cambio de
ARNm, así se ven los genes que están involucrados en
las Células el proceso.

1) Microarreglos

Sirve para ver la expresión diferencial entre células.

Por ejemplo: Se tiene una célula normal y otra

cancerosa, estas se cultivan, después se les extrae el
ARNm a cada una y se le hace un RPCR obteniendo el
cDNA.

Luego se ocupan pequeños fragmentos

complementarios de DNA (sondas) de distintos colores
(con fluorescencia). En la imagen a continuación se ve otro experimento en
cDNA donde se utilizan muchos más genes. En Rojo se ven a
las células que se están probando donde se aprecia la
regulación de este gen. En la última imagen de la
Sonda +
derecha se puede observar que se va a expresar. En
Fluorescencia
Verde no se encuentra presente.

Esto imitará una señal que permitirá saber si la sonda

se une o no a los otros fragmentos. De unirse es porque
el cDNA está presente.

La siguiente célula será la cancerosa marcada con

una fluorescencia de otro color y se seguirá el
mismo procedimiento. Después se comparan estos
patrones de expresión.

Esto será lo que realmente se observará. No se utiliza un

par de genes, sino que se utiliza una batería gigante de
sondas.

Por ejemplo:
Verde: Presente sólo en Células Normales
Rojo: Presente solo en Células Cancerosas
De no unirse a la sonda no se expresará ningún color.
Amarillo: Significa que el patrón no cambió dado a que Proceso
está presente en ambas células. En una placa, que es utilizada como portaobjetos de
microscopía, un robot va sembrando las muestras y
luego las sondas.

En Verde se tiñe lo que se expresa en una célula.

En Rojo se tiñe lo expresado en otro espacio.

Es así como esta técnica se utiliza para ver la expresión

Esto se puede utilizar para ver la expresión de células que
hayan estado en contacto y hayan obtenido DNAviral
que haya modificado su expresión. También se puede
utilizar en investigación para saber que proteínas están
involucradas en ciertos procesos.
diferencial de los genes si estos son sometidos a algo,
logrando averiguar qué genes se logran activar en cierto
proceso o actividad.
Esta técnica es frecuentemente utilizada en procesos de
Cáncer, dado a que le suministran a los pacientes la
célula cancerosa para compararla con las células
normales en donde los genes están inactivos, y en base a
ello se realiza el tratamiento necesario.
 Meiosis 1) Leptoteno: Los cromosomas homólogos se aparean.

2) Zigoteno: Empieza a ocurrir la sinapsis y se

comienzan a formar las tétradas.

3) Paquiteno: Ocurre el Crossing Over

(entrecruzamiento cromosómico).

4) Diploteno: Los cromosomas se separan y quedan

unidos solamente por los quiasmas.

5) Diacinesis: Los cromosomas se siguen condensando y

se comienza a separar la carioteca. Luego de esto entra a
Metafase.

Interfase: Se encuentra presente la membrana nuclear,

hay cromatina.

Meiosis I
Preguntas
Profase I: Cromosomas Homólogos apareados e
intercambian fragmentos hereditarios.
1. ¿Por qué es Diploteno la última?
Porque están comenzando a separarse los cromosomas
Metafase I: Las tétradas se ordenan en la Línea del
pero son unidos por los quiasmas.
Ecuador.
2. ¿Cómo reconozco a Paquiteno en la imagen?
Anafase I: Los cromosomas se separan.
Se muestran los cromosomas homólogos apareados..
Telofase I: Se dividen las células (2n).
En Zigoteno podemos ver que se comienzan a unir los
cromosomas.
Meiosis II
En Leptoteno ya se ve que los cromosomas homólogos
Profase I: Se desarma la carioteca y se separan los comienzan a aparearse, pero NO están unidos aún.
centriolos comenzando el procesos para obtener células
aploides.

Metafase II: Cromosomas alineados en la Línea del

Ecuador.

Anafase II: Se separan las cromátidas.

Telofase II: Cromosomas con una cromátida. Se

obtienen células haploides.

Profase I: Etapa principal de la Meiosis

En la imagen podemos observar la etapa de replicación

de los cromosomas. Aquí están las tétradas
equivalentes. ¿En qué etapa se produce esto? Sucede
en Paquiteno, sin embargo, luego se comenzarán a
separar.

Aquí podemos observar la recombinación la cual genera

una variabilidad genética dado a que en ella los
cromosomas van a intercambiar trozos de material
genético.

En Meiosis I, después de la unión entre cromosomas,
viene una pérdida de la tensión y se presenta una fuerza
en la que están involucrados los centrómeros. Aquí es
donde los cromosomas apareados se separan formando
dos cromosomas con dos cromátidas.
En Meiosis II se pierde la fuerza de cohesión
separándose las cromátidas hermanas del cromosoma.
¿Quién ayuda a que esta fuerza de cohesión exista?
La proteína que ayuda a que esta fuerza de cohesión
exista en la Cohesina o la Condensina. En la figura las
líneas que están marcadas con amarillo con las
Cohesinas/Condensinas, las que ayudan a que se unan
los cromosomas homólogos. Esta es la misma proteína
que ayudaba al empaquetamiento inicialmente
Reparación
En el proceso de Meiosis la Recombinación Genética
no solo sirve para intercambiar el material genético, sino
que también sirve para reparar algún daño en el
ADN. Al ser diploide, en la parte del Leptoteno se
comienza a reparar el ADN.
¿Cómo se repara el ADN?
Copiando al cromosoma homólogo.
¿Qué ocurre en este proceso?
En la Profase los cromosomas homólogos en
apareamiento presentan el complejo LINC, el cual se
une a la membrana nuclear dando como resultado los
cromosomas apareados.
Entonces: LINC participa de este proceso ya que, si no
está presente la membrana nuclear, no se podrá obtener
el apareamiento de los cromosomas homólogos dado a
que este complejo fija a los cromosomas homólogos.
LINC se une también al centrosoma. Tenemos a los
microtúbulos, y al centrosoma que está unido a la
membrana nuclear mediante el complejo LINC el cual es
una proteína que atraviesa la carioteca.
¿Qué pasa con las Histonas?
Las Histonas sufren modificaciones durante todo el
proceso de Meiosis. Por ejemplo en el ovocito en la
ovogénesis.
En esta imagen, por ejemplo, la histona H2BK120UB
comienza a ubiquitinarse, por lo tanto estas histonas
están siendo enviadas a degradación. Ahora con las
histonas H3K9ac y H4K12ac, estas comienzan a
acetilarse y se metilan, aquello significa que perdieron
carga positiva lo que significa una expresión de genes.
El Proceso de Transcripción Génica se debe regular
para ver que proteínas se necesitarán para cada proceso
que ocurre en la Meiosis. La forma de regularlo es
modificando las Histonas.
¿Qué factores están involucrados en que cada
cromosoma homólogo se encuentre uno con otro
durante la Meiosis?
Para aquello se tienen factores que promueven el
apareamiento (proteínas especiales) y también se tienen
factores anti-apareamiento que separan estos
cromosomas.
¿Cómo puedo identificar estos factores?
Las primeras aproximaciones se obtienen al estudiar en
hongos y levaduras. El procedimiento consta de contar el
número de sinápsis.
La idea de la imagen es que se vea el Leptoteno: Si se
presentan problemas en la sinapsis este no llegará a
Zigoteno, lo que significa que hay un problema en el
apareamiento cromosómico.
Si se cuentan los quiasmas, posiblemente habría un
problema en el entrecruzamiento, específicamente en el
Paquiteno, pero se busca ver cómo se aparean. Para ello
se cuenta algo que se pueda cuantificar con las distintas
Crossing Over que tengan problemas con la sinapsis.
Luego se hace un experimento muy simple. En la
siguiente imagen se ven las ondas de color, por ejemplo
el factor MND1 dentro de todos los factores
involucrados, pero se quiere decir como se estudian estos
factores.
Esto se realizó en hongos y se logra ver que las
cromátidas hermanas se aparean. Se utiliza una sonda
que marque el cromosoma 5, de esta manera se ven los
cromosomas apareados. Luego se ve al mutante del 3 y
cómo es su apareamiento mientras que en otros se ve
junto a la mutante MND1.
Se concluye que MND1 es un factor fundamental en este
proceso de aparear cromosomas.
De llegar a esta etapa hay otros factores, por ejemplo,
está HOP2 y MND1 que son quienes aparean a los
cromosomas y estabilizan los filamentos antes de hacer
la sinapsis, luego viene la recombinación, entonces estas
proteínas ayudan a estabilizar las fibras de DNA antes de
que comience la recombinación, ayudando que los
cromosomas homólogos se apareen entre ellos y que este
no sea discordante.
 Figura 21–13 Los dos mecanismos principales de
redistribución del material genético que intervienen
en la producción de los gametos durante la meiosis.
(A) La distribución independiente de los homólogos
materno y paterno durante la meiosis produce 2O
gametos haploides diferentes para un organismo con O
cromosomas. En este caso O = 3, por lo que existen 8
posibles gametos diferentes. (B) El entrecruzamiento
durante la profase I permite el intercambio de segmentos
de DNA entre cromosomas homólogos y de ese modo la
redistribución de los genes en cada uno de ellos. Debido
a la gran cantidad de pequeñas diferencias que presentan
las secuencias de DNA de cualquier par de homólogos,
ambos mecanismos aumentan la variabilidad genética de
los organismos que se reproducen sexualmente.

Símil de Mitosis y Meiosis

Se tiene al cromosoma homologo, cuyas cromátidas

hermanas se duplicaron en la mitosis, se unen en el
ecuador, se separan y se tienen cromosomas con una sola
cromátida.

En cambio en la imagen de abajo se tiene la replicación,

ocurre la recombinación del crossing-over y se separan.
En la primera división se obtienen cromosomas con dos
cromátidas, luego en la segunda división ocurre igual
que la mitosis normal obteniéndose los gametos. La
única diferencia es que en el resultado final se disminuyó
la cantidad de material genético a haploide.

La figura anterior nos muestra como cromosomas

diferentes, mediante la técnica microarray con sondas
diferentes, se va a identificar un cromosoma entero.

En el entrecruzamiento a continuación se ve el par de

cromosomas homologos. Si se tiene el entrecruzamiento
se obtendrán 4 gametos posibles diferentes. De tener 6
gametos posibles diferentes las posibilidades de
recombinación son mayores. Entonces la idea de esta
recombinación es otorgarle variabilidad al sistema y a
nuestra descendencia.

Entonces, entre más cromosomas se tiene mayor es la ¿Dónde ocurre esto?

variabilidad que habrá y mayor es la probabilidad de que
los gametos sean diferentes.
Se tienen a la células foliculares, los Citoprimarios
donde se está en Profase 1, luego la Célula Teka, Zona
Pelúcida, luego se forma el antro y viene el ovocito
secundario cuando se forma el cuerpo lúteo. Cuando se
obtiene el Folículo Corto se obtiene el Primer
Corpúsculo Polar, que es cuando se terminan las meiosis
y se tiene al ovocito secundario listo para fecundarse.
En la Espermatogénesis se tienen a las células
germinales, las Espermatogonias que sufren mitosis
constantemente para poder tener un nivel celular
necesario para producir al espermatozoide. Acá la
Espermatogonia sigue siendo diploide y sufre mitosis.
Una vez entran en meiosis se obtiene al Espermatocito
Primario, luego el Espermatocito Secundario y una
vez se entra en la segunda división meiótica y esta acaba
comienza la diferenciación.
espermatozoide maduro y alrededor de 27 del zigoto al
ovocito maduro.
¿Dónde ocurre esto?
En todos los Túbulos Seminíferos se ven las Células de
Leydig que dan el soporte a la espermatogonia y para
mantener el sistema.

Se ve un corte histológico en la siguiente imagen, en

donde se observa el Espermatocito, las Células de Sertoli
(que secretan Testosterona), las Células de Leydig que
son el soporte y también la Espermatogonia hasta llegar
a Espermatozoide.

Figura 21-30 Etapas de la Espermatogénesis

Fecundación
Las espematogonias se forman a partir de las células
germinales primordiales (PGC) que migran a la gónada Acá se une el espermatozoide a la Zona Pelúcida, llega
en desarrollo en las primeras etapas de la embriogénesis. la reacción acrosómica en donde se libera el contenido
Cuando el animal alcanza la madurez sexual, las del Acrosoma de la cabeza del espermatoxoide, después
espermatogonias comienzan a proliferar rápidamente por se atraviesa a la Zona Pelúcida, se fusionan las
mitosis. Algunas mantienen la capacidad de dividirse de membranas plasmáticas y comienza la fusión de los
forma indefinida (como células madre de las núcleos.
espermatogonias). Otras (espermatogonias en
maduración) experimentan un número limitado de ciclos
mitóticos antes de comenzar la meiosis transformándose
en espermatocitos que se convierten en espermátidas
haploides y después en espermatozoides. La
espermatogénesis se diferencia de la ovogénesis en
varios aspectos. (I) A partir de la pubertad se producen
continuamente nuevas células que inician la meiosis. (2)
Cada célula que empieza la meiosis da lugar a cuatro
gametos maduros y no a uno solo. (3) Los
espermatozoides maduros se forman mediante un
elaborado proceso de diferenciación celular que empieza
cuando acaba la meiosis. (4) Se dan aproximadamente
doble número de divisiones en la producción de un
espermatozoide que en la producción de un ovocito. En
el ratón, por ejemplo, se ha calculado que por término
medio de unas 56 divisiones del zigoto al
Acá se tiene al núcleo haploide del ovocito y al núcleo
haploide del espermatozoide. Se tienen los centriolos, se
fusionan los núcleos y viene la primera división donde se
producen dos células diploides.
¿Donde se vio esto?
En la clonación de la Oveja Dolly, en donde una oveja
de cara negra fue la donante de los ovocitos para una
oveja de cara blanca a la cual se le extrajo una célula
somática diferenciada. El ovocito y la célula se
fusionaron, se les eliminó un núcleo y ocurrió la
activación del ovocito mediante una corriente eléctrica
para cambiar el potencial de membrana. Este “huevo”
fusionado y activado fue implantado en una oveja negra.
Si la clonación sale perfecta, los hijos serán se una oveja
blanca dado a que se utiliza su material genético,
obteniendo así una clonación.

Acá hay duplicación , fecundación y se tiene a los dos

Blastómeros, donde se obtienen células diploides. Se
tienen 4 Blastómeros, luego 32 llegando a Mórula, luego
viene la Blástula, luego la Gastrulación, después la
Gástrula Dibásica y por último la Gastrula Triblásica en
donde se ve el celoma y comienza la diferenciación de
Ectodermo, Mesodermo, etc.

El conocimiento de la división y de la fecundación nos

permite crear ratones o animales de experimentación que
sirven para encontrar terapias para ciertas enfermedades.

Por ejemplo acá hay dos ratones adultos. Al ratón rojo se

le extraen células somáticas, se les quita el núcleo, se
activa el ovocito, se le saca el núcleo el cual es haploides
y estas células somáticas se activan, ahora este ovocito Ratones Knock-Out
tiene 2n, luego se obtiene el embrión y aquí ocurre la
clonación. Hay que pensar que tiene el núcleo de una Donde un gen se reemplaza, se muta o se elimina.
célula somática del ratón rojo y al ratón azul se le
intercambió el núcleo haploide por un núcleo de una Hacer un Ratón Knock-Out consiste en:
célula somática. Esto se activa y se coloca en un ratón
nodriza y se obtiene un ratón clonado, siendo este el 1. Tomar células embrionarias.
principio de clonación.
2. A estas células se le elimina un gen o se le inserta una
A estas mismas células embrionarias se les puede mutación de un gen.
realizar una clonación terapéutica y se tienen células
embrionarias personalizadas de la persona que lo 3. Se insertan estas células embrionarias modificadas en
necesite. un embrión de un ratón en etapa de Blastocisto.

4. El Blastocisto que ya está con las células modificadas

se insertan en un ratón.

5. El ratón con el Blastocisto implantado tendrá

descendencia quimera, es decir, con células no mutadas
y células mutadas.

Ratones Transgénicos
1. El ratón quimera se cruza con un ratón normal.
2. En la descendencia se tendrán células/ratones
heterocigotos, dado a que contienen células modificadas
y puras.
3. Al cruzar los heterocigotos, en su descendencia nacerá
un ratón que expresa el gen sin mutaciones, es decir, es
puro.
1. Ratón GEN RSY: Se le coloca un gen que no
corresponden. XY, XX y el transgénico es el ue tiene un
trozo de Y. El gen RSY es el que otorga los caracteres
masculinos.
El macho XX tiene el gen RSY en el cromosoma.
2. Ratones AD: Son los ratones transgénicos de la
enfermedad de Alzheimer. Normalmente los ratones no
desarrollan esta enfermedad, por lo tanto se les agregan
proteínas que producen la enfermedad. Las neuronas
toman un color azulado y se vuelven difuminadas
cuando han comenzado a morir. En el primer recuadro se
observa el hipocampo (lugar donde se ubican las
neuronas), en el segundo recuadro son las neuronas a los
3 meses y en el tercer recuadro son las neuronas luego de
un año. Comienza la aparición de placas miloides que
son las que producen la enfermedad. Con este ratón se
puede investigar la enfermedad en un año, luego de esto
se puede generar algún medicamente para su tratamiento.
Ratones modificados con esta Técnica
1. Ratón de la Obesidad: Se le eliminó el gen de la
leptina, conocido como Gen Op. Este ratón actualmente
sirve para el estudio de la obesidad.
2. Ratón Knock-Out para encontrar ppar-alfa
(Factor de transcripción de triglicéridos): La
glicemia, tejido adiposo (se caracteriza por el tratamiento
histológico, donde se ve el núcleo y lo demás solo es
tejido adiposo). En la imagen se puede ver el hígado del
ratón, el ppar-alfa solo se encuentra en el hematocito
mientras que el tejido adiposo está en todo el cuerpo.
Este es un ratón de estudio para las enfermedades
cardiovasculares.
3. Sintaccina 4: Proteína de la familia tydsnar asociada
a la fusión de las vesículas que contienen el
transportador gluc4. Se le es eliminada esta proteína a un
ratón lo que produjo resistencia a la insulina ya que al no
tener el transportador gluc4 no ocurre fusión causando
esta resistencia.
Limitaciones de los ratones Knock- Out
Debido a que estos genes de estudio están involucrados
en el desarrollo se vuelven letales en el desarrollo
embrionario.

Como tendrá un efecto distinto en etapa embrionaria, en

etapa adulta se genera un ratón condicional al cual se le
inyectan drogas para activar el gen knock-out y en ese
momento aplicar las mutaciones.

Sección de Preguntas

¿Qué raza de ratones se utiliza?

Hay ratones y ratas. Se utilizan ratones dado a que son

más pequeños, utilizándolos en su estado normal como
control luego se aplicar cambios.

Water Mesit

Piscina con agua y una plataforma de escape. Se dan 20

segundos para que el ratón salga hacia la plataforma de
escape.

Ratón Normal: El ratón nadará ya los 20 segundos el

examinador lo ubicará en la plataforma. Este
procedimiento se realiza 2 veces. A la tercera vez el
ratón llega a la plataforma por sí solo, es decir, aprendió
y recordó.

Ratón con Alzheimer: Comienza a nadar en círculos

por la piscina. El examinador lo sube a la plataforma,
pero aún después de 3 días el ratón no recuerda la vía de
escape.

Ratón con Alzheimer tratado con Hierba San Juan:

Al segundo día ya recuerda la vía de escape y nada hacia
ella.