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Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53

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Avances en biotecnología

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Documento de revisión de investigación

Productos de alto valor a partir de maíz transgénico

Shaista Naqvia, Koreen Ramessara, Gemma Farréa, Maite Sabalzaa, Bruna Miralpeixa, Richard M.Twymanb,
Teresa Capella, Changfu Zhua, Paul Christoua,C,⁎
aDepartamento de Producción Vegetal y Ciencia Forestal, Universitat de Lleida, Av. Alcalde Rovira Roure, 191, Lleida, 25198, España
bDepartamento de Ciencias Biológicas, Universidad de Warwick, Coventry, CV4 7AL, Reino Unido
CInstituto Catalana de Recerca I Estudis Avancats, Passeig Lluís Companys, 23, 08010 Barcelona, España

información del artículo resumen

Historial del artículo: El maíz (también conocido como maíz) es un grano de cereal domesticado que se ha cultivado como alimento y alimento para
Recibido el 3 de mayo de 2010 animales durante decenas de miles de años. Actualmente es el cultivo más cultivado en el mundo y se utiliza no solo para
Recibido en forma revisada el 17 de agosto de 2010
alimentos/piensos, sino también para producir etanol, almidones industriales y aceites. El maíz se encuentra ahora al
Aceptado el 17 de agosto de 2010
comienzo de una nueva revolución agrícola, donde los granos se utilizan como fábricas para sintetizar moléculas de alto valor.
Disponible en línea el 15 de septiembre de 2010
En este artículo analizamos la diversidad de productos de alto valor del maíz, los avances tecnológicos recientes en el campo y
el marco regulatorio emergente que rige cómo se cultivan, utilizan y comercializan las plantas de maíz transgénico y sus
Palabras clave:

Maíz productos.
Maíz © 2010 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
transgénico
Farmacia molecular
ingeniería metabólica
Proteína recombinante
Procesando
Regulación
bioseguridad

Contenido

1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2. Alimentos versus productos industriales: el maíz en primera línea. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3. Transferencia de genes en el maíz: de un solo gen a múltiples características y vías. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3.1. Transformación de maíz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3.2. Transferencia múltiple de genes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
3.3. Estrategias utilizadas para sintetizar productos de valor agregado en maíz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4. Productos de valor añadido. Objetivos específicos: metabolismo primario. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
4.1. carbohidratos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
4.2. Aminoácidos esenciales y proteínas nutricionales. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
4.3. Ácidos grasos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
5. Productos de valor añadido. Objetivos específicos: vitaminas y minerales. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
5.1. Niveles de micronutrientes en el maíz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
5.2. Estrategias convencionales y transgénicas para aumentar los niveles de carotenoides. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
5.3. Vitaminas B9, C y E. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
6. Productos de valor añadido. Dianas específicas: proteínas recombinantes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
6.1. Proteínas farmacéuticas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
6.2. Proteínas industriales. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
7. Aspectos regulatorios, económicos y políticos de los productos de alto valor a partir del maíz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
7.1. economía . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
7.2. Desafíos regulatorios. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49

⁎Autor correspondiente. Departament de Producció Vegetal i Ciència Forestal, Universitat de Lleida, Avenue Alcalde Rovira Roure 191, 25198 Lleida, España. Tel.: +34 973702693; fax:
+34 973238264.
Dirección de correo electrónico:christou@pvcf.udl.es (P. Christou).

0734-9750/$ – ver portada © 2010 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
hacer:10.1016/j.biotechadv.2010.08.009
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53 41

8. Perspectiva. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
Agradecimientos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
Referencias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51

1. Introducción
Maíz o choclo1(Zea Mays)es el cultivo de cereales más cultivado en el mundo
con 792 millones de toneladas producidas en 2007/2008, de las cuales 774
millones de toneladas se consumieron como alimento o pienso (Tablas 1 y 2).
Además de su uso como alimento/pienso, el maíz tiene una serie de aplicaciones
industriales, incluida la producción de bioetanol y almidón (Figura 1). Más
recientemente, el maíz ha atraído el interés como vehículo de producción de
productos de alto valor, como proteínas farmacéuticas recombinantes y productos
químicos especiales.
Los diversos usos del maíz reflejan su larga historia como cultivo domesticado
y su amplio acervo genético (Gewin, 2003). El interés en el maíz como plataforma
para productos de alto valor refleja una serie de ventajas únicas sobre otras
plantas (Ramessar et al., 2008a). Estos incluyen su estado GRAS (generalmente
considerado como seguro), la infraestructura agrícola establecida, sus
propiedades genéticas bien caracterizadas, su capacidad parain vitromanipulación
y transferencia de genes, y su producción eficiente de biomasa resultante de la
ruta fotosintética C4. Más específicas para la producción de proteínas
recombinantes de alto valor, las semillas de maíz son excelentes vehículos de
producción debido a su gran tamaño en comparación con otros cereales, con un
82% de la semilla compuesta por endospermo (watson, 1987) (Figura 2). Además,
la semilla de maíz madura está desecada, carece de proteasas activas y contiene
una rica mezcla de chaperonas moleculares y disulfuro isomerasas, lo que ayuda a
garantizar el correcto plegamiento y ensamblaje de proteínas y una mayor
estabilidad. El tejido del endospermo de maíz puede realizar modificaciones
postraduccionales (p. ej., glicosilación) que se producen en las células animales, lo
que garantiza que las proteínas heterólogas expresadas en las semillas conserven
su actividad biológica. La estabilidad de las proteínas recombinantes producidas
en semillas de maíz se ve favorecida porque el endospermo de maíz es un órgano
natural de almacenamiento de proteínas, por lo que las proteínas en semillas
secas de maíz se mantienen estables por más de 6 años a temperatura ambiente,
y durante meses en semillas de maíz partidas y en copos almacenadas a
temperatura ambiente. hasta 10 °C.
El maíz tiene pocos inconvenientes potenciales como plataforma de
producción y los que se han propuesto se relacionan principalmente con
cuestiones de bioseguridad y normativas que afectan a los cultivos de maíz en el
campo. Por ejemplo, el maíz es un cultivo cruzado polinizado por el viento, lo que
plantea problemas relacionados con el flujo de genes hacia el maíz no transgénico
y los parientes silvestres. Esto se discute más adelante en la sección que trata
sobre los desafíos regulatorios. Las ventajas y desventajas potenciales del maíz
como plataforma de producción de productos de alto valor se resumen en Tabla 3.
Los granos fueron responsables de parte del aumento en los precios de los
granos, aunque muchos factores adicionales estuvieron involucrados como se
describe enFig. 3 (Mitchell, 2008). La OCDE llegó a una conclusión similar: “…El
impacto de las políticas actuales de biocombustibles en los precios mundiales de
los cultivos, en gran parte a través de una mayor demanda de cereales y aceites
vegetales, es significativo pero no debe sobreestimarse. Se estima que las
medidas actuales de apoyo a los biocombustibles por sí solas aumentarán los
precios promedio del trigo en un 5 %, el maíz en un 7 % y el aceite vegetal en un
19 % durante los próximos 10 años” (OCDE, 2008). También es importante tener
en cuenta que el etanol está hecho de maíz de campo, un grano que los humanos
no pueden digerir en su forma cruda y que requiere procesamiento antes de que
pueda ser consumido. En realidad, se utiliza muy poco maíz de campo para el
procesamiento de ingredientes alimentarios para humanos. La gran mayoría del
maíz estadounidense (incluidas las exportaciones) se utiliza para alimentar al
ganado en lugar de a los humanos. Además, el proceso de etanol crea piensos e
ingredientes alimentarios: la porción de almidón del grano se convierte en etanol,
mientras que la proteína, la grasa y otros nutrientes, vitaminas y minerales pasan
a los coproductos de piensos o ingredientes alimentarios humanos. De hecho, hoy
en día hay más alimentos per cápita a escala mundial que nunca antes y la falta de
infraestructura, el acceso al capital, la pobreza general y otros problemas son las
causas más probables del hambre, no la escasez de alimentos (revisado porAGNC,
2008). Recientemente se ha publicado una evaluación equilibrada del impacto de
los cultivos para biocombustibles en la seguridad alimentaria (Martindale y
Trewavas, 2008).
3. Transferencia de genes en el maíz: de un solo gen a múltiples rasgos
y vías
3.1. Transformación de maíz
En la década de 1980,Agrobacterium-La transferencia de genes mediada
surgió como la forma más sencilla de generar plantas dicotiledóneas transgénicas,
pero pocas monocotiledóneas eran aptas para este proceso. Por lo tanto, los
esfuerzos para transformar el maíz comenzaron con sistemas de entrega física
dirigidos a protoplastos (Fromm et al., 1985; Klein et al., 1988). Las primeras
plantas transgénicas de maíz producidas por transformación de protoplastos eran
estériles (Rodas et al., 1988) pero las plantas transgénicas fértiles fueron
tabla 1
Producción mundial de maíz en miles de toneladas métricas (adaptado deUSDA-FAS, 2008).

Producción 2004/05 2005/06 2006/07 2007/08 2008/09a

2. Alimentos frente a productos industriales: el maíz en primera línea Argentina 20.500 15,800 22,500 20,850 18,000
Brasil 35,000 41,700 51,000 58,600 55,000
Canadá 8837 9361 8990 11,650 9900
El costo de los alimentos en términos reales cayó un 75% entre 1974 y 2005, Porcelana 130,290 139,365 151,600 152,300 156,000
pero aumentó considerablemente desde mediados de 2005 en adelante. Como el Egipto 5840 5932 6149 6174 6175
cultivo alimentario más cultivado en el mundo, la triplicación del precio del maíz UE-27 66,471 60,668 53,829 47,519 59,486
entre 2005 y 2008 fue impactante y sin precedentes. También coincidió con un India 14,180 14,710 15,100 19,310 18,000
Indonesia 7200 6500 6700 7500 7750
fuerte aumento en el uso de maíz para producir bioetanol, lo que dio lugar a un
México 22,050 19,500 22,350 22,650 24,000
apasionado debate centrado en el papel de los biocombustibles en el precio de los Nigeria 6500 7000 7800 6500 7800
alimentos y la seguridad alimentaria (Bailey, 2008). Un informe del Banco Mundial Filipinas 5050 5884 6231 7250 6500
publicado en 2008 concluyó que los biocombustibles producidos a partir de Federación Rusa 3500 3200 3600 3950 6500
Serbia no. no. 6415 4054 6000
Sudáfrica 11,716 6935 7300 12,500 11,500
Ucrania 8800 7150 6400 7400 9500
Estados Unidos 299,914 282,311 267,598 332,092 305,319
Otros 69,922 73,149 68,880 71,660 73,929
1La comunidad científica utiliza estos términos indistintamente. En el uso común, maíz es el
total mundial 715,770 699,165 712,442 791,959 781,359
término preferido en Europa, mientras que maíz se prefiere en América del Norte y Australia.
aValores proyectados.
42 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53

Tabla 2
Consumo mundial de maíz en miles de toneladas métricas (adaptado deUSDA-FAS, 2008).

Consumo 2004/05 2005/06 2006/07 2007/08 2008/09a

Argentina 5200 6200 6700 7000 7500

Brasil 38,500 39,500 41,000 42,500 47,500
Canadá 10,311 10,837 11,436 13,844 11,500
Porcelana 131,000 137,000 145.000 149,000 158,000
Egipto 11,300 10,100 10,700 10,400 10,600
UE-27 63,200 61,500 62,300 63,000 60.500
India 13,900 14,200 13,900 16,900 16,100
Indonesia 7900 7900 7900 7700 8200
Japón 16,500 16,700 16,500 16,500 16,500
Corea 8666 8579 8833 8644 7300
México 27,900 27,900 30,700 32,000 32,500
Nigeria 6300 6800 7600 6550 7800
Filipinas 5150 5800 6550 7150 7000
Sudáfrica 9700 8200 8600 9700 9600
Estados Unidos 224,648 232,063 230,769 262,586 270,141
Vietnam 3900 4250 4900 5300 5800
Otros 103,903 107,397 112,269 116,674 119,263
total mundial 688,945 706,439 728,533 774,179 797,705

aValores proyectados.

eventualmente generado al bombardear cultivos de células en suspensión de la

línea endogámica A188 con partículas metálicas recubiertas de ADN (Gordon-
Kamm et al., 1990). En 1996, plantas transgénicas fértiles de la misma línea
endogámica fueron producidas porAgrobacterium-transformación mediada
utilizando una tensión que lleva un sistema vectorial "superbinario" (Ishida et al.,
1996). Métodos adicionales que se han utilizado para generar maíz transgénico
Figura 2.Composición del maíz amarillo dentado (adaptado deAGNC, 2010).

las plantas incluyen la transformación de protoplastos mediada por PEG (

Golovkin et al., 1993), electroporación de embriones inmaduros o cultivos de
callos embrionarios (D'Halluin et al., 1992) y la transformación de

Tabla 3
Resumen de las ventajas y desventajas del maíz como cultivo de producción de proteínas
farmacéuticas (adaptado deRamessar et al., 2008a).

Propiedad Ventajas Desventajas

Fisiología de la semilla El tamaño pequeño facilita

concentración de proteína
Mayor tamaño de grano y mayor
contenido de endospermo que
otros cereales
La cáscara previene la infección
microbiana
Semilla Desecado, previene la degradación La estabilidad de las proteínas en

bioquímica de proteínas, permite la semilla puede conducir a

barato a largo plazo ambiental

almacenamiento persistencia
Contiene chaperonas y disulfuro
isomerasas para mejorar el
plegamiento de proteínas El
proteoma simple facilita el
procesamiento
Crecimiento y Ciclo fotosintético C4 Floración obligatoria
reproducción Escalabilidad ciclo
crecido ampliamente

Variedades élite de alto rendimiento

disponibles

Seguridad (humana/ GRAS Potencial de consumo

uso de animales) No alergénico accidental de
no tóxico semillas farmacéuticas
Seguridad (flujo de genes, polen de vida corta Polinización abierta
exposición) Rango corto de dispersión del polen polen dispersado por el viento
Parientes silvestres solo en América Varios animales se
Central alimentan de semillas.
La cáscara reduce el desmoronamiento de las

semillas Contacto limitado con

herbívoros adventicios
Producción y Se almacena fácilmente como grano, copos, harina. Necesita ser molido para
Figura 1.Consumo de maíz por segmento en los Estados Unidos para 2009. JMAF es jarabe de
Procesando liberar el producto
maíz alto en fructosa (adaptado deAGNC, 2010).
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53 43

Fig. 3.Los factores a corto y largo plazo que contribuyen al aumento de los precios de los alimentos en el siglo XXI (adaptado deTrotlé, 2008).

suspensiones de células embriogénicas (Marco et al., 1994) o cultivos de callos ( (Napier et al., 2006), vitaminas (Giuliano et al., 2008; Zhu et al., 2008; Chen et
Petolino et al., 2000) utilizando filamentos de carburo de silicio.Agrobacterium- La al., 2006; Ishikawa et al., 2006) y minerales (Drakakaki et al., 2005). La
transformación mediada y el bombardeo de partículas siguen siendo los métodos complejidad de tales vías significa que las estrategias de transferencia de un
más utilizados para la transformación. Una lista de genes marcadores utilizados solo gen se están volviendo menos apropiadas para modificar los rasgos
para la selección y regeneración de plantas de maíz transgénico se proporciona en objetivo. Las vías metabólicas pueden tener múltiples ramificaciones,
Tabla 4. enzimas multifuncionales, enzimas compartimentadas y específicas del tipo
de célula, y mecanismos de retroalimentación complejos.Verpoorte et al.,
3.2. Transferencia de múltiples genes 2000). En estas circunstancias, la transferencia de un solo gen a menudo no
es útil porque las vías se regulan en múltiples pasos. Más recientemente, los
Los nuevos rasgos introducidos en los cultivares comerciales de maíz se investigadores han desarrollado nuevos métodos de transformación que
limitaron inicialmente a la tolerancia a herbicidas y la resistencia a plagas o reconocen el deseo de introducir múltiples transgenes en las plantas y
enfermedades, principalmente para su uso en los sistemas agrícolas del expresarlos de manera coordinada (Naqvi et al., 2009a). La transferencia de
mundo industrializado. Sin embargo, los horizontes se han ampliado más genes múltiples puede aumentar, reconstruir o extender vías biosintéticas
recientemente tras la investigación de las vías metabólicas que producen complejas en plantas, incluido el maíz.Zhu et al., 2008) y puede permitir la
metabolitos primarios y secundarios, en particular para compuestos síntesis de proteínas multiméricas complejas (Capell y Christou, 2004;
importantes para la salud y la nutrición humana, incluidos los aminoácidos ( Twyman et al., 2005).
Galili y Höfgen, 2002), ácidos grasos poliinsaturados de cadena muy larga La transferencia simultánea de múltiples genes ha hecho posible
desarrollar un sistema de transformación combinacional que no solo
permite generar bibliotecas de variantes metabólicas transgénicas, sino
también seleccionar nuevos rasgos metabólicos (Zhu et al., 2008) pero
Tabla 4
Propiedades de los genes marcadores seleccionables y rastreables utilizados en el maíz.
también tiene potencial para generar plantas transgénicas con múltiples
rasgos (Naqvi et al., 2009b). Las plantas transgénicas multiplex se generaron
Genes marcadores seleccionables/explorables Características
mediante bombardeo de partículas, revistiendo las partículas con diferentes
bar Resistencia a fosfinotricina y bialafos vectores y seleccionando plantas que expresan diferentes combinaciones de
aph IV Resistencia a higromicina transgenes. En el futuro, las estrategias más complejas para la transferencia
epspssintasa Resistencia al glifosato
de genes a las plantas solo se podrán lograr utilizando múltiples técnicas de
nptII Resistencia a la kanamicina
ELA Resistencia a las sulfonilureas transferencia de genes (Altpeter et al., 2005).
mdhfr Inhibición de la enzima mDHFR
gato Resistencia al cloranfenicol
3.3. Estrategias utilizadas para sintetizar productos de valor agregado en maíz
pmi Convierte manosa-6-fosfato en fructosa-6-
fosfato
ipt Fenotipo ESP y pérdida de dominancia apical Cuando hablamos de productos de valor agregado, podemos hacer una
lucia Emite luz amarillo-verde (560 nm) con sustrato distinción entre dos amplias clases de compuestos: proteínas y metabolitos de
de luciferina bajo peso molecular. Esta distinción es importante porque la mayoría de los
gfp Proteína fluorescente verde
transgenes codifican proteínas y, en algunos casos, la proteína codificada por el
dsROJO Proteína fluorescente roja Codifica
GusA β-glucuronidasa Gen biosintético
transgén es en sí misma la molécula deseada, mientras que en otros casos la
LC de antocianina Gen biosintético de proteína es solo el primer paso en el camino hacia el compuesto deseado, por
C1 antocianina Gen biosintético de ejemplo, puede codificar un enzima que ayuda a la planta a producir un
B-Perú antocianina Gen biosintético de
compuesto químico particular. De la misma manera, los transgenes también se
BI antocianina
pueden usar para expresar moléculas de ARN funcionales para
44 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53
afectar el resultado de una vía metabólica para estimular la síntesis de
un compuesto específico deseado. El primer enfoque (donde la
proteína misma es la molécula deseada) puede denominarse molecular
Farmado, o molecularpharmar si la proteína de interés tiene un uso
médico; el segundo (donde el transgén altera el fenotipo metabólico de
la planta y conduce a la producción de un compuesto de bajo peso
molecular) puede denominarse ingeniería metabólica.
La farmacología molecular en plantas se ha desarrollado durante 20 años y
ahora es posible expresar prácticamente cualquier proteína de interés en grandes
cantidades y extraerla directamente del tejido vegetal. El maíz fue el primer cereal
que se convirtió en una plataforma de expresión gracias en gran parte a los
esfuerzos de los científicos de Prodigene Inc., College Station, TX, y se ha utilizado
para producir vacunas, anticuerpos, enzimas industriales y polipéptidos
farmacéuticos de alto valor (revisado porRamessar et al., 2008a). Las semillas de
maíz también se pueden usar como vacunas comestibles, como lo demuestra la
expresión de una proteína de fusión del virus de la enfermedad de Newcastle en
semillas de maíz transgénico que, cuando se alimentan a los pollos, inducen la
producción de anticuerpos que confieren protección contra un desafío viral (
Guerrero-Andrade et al., 2006). Debido a su condición de cultivo farmacéutico
molecular, gran parte de la investigación se ha centrado en estrategias para
mejorar los niveles de expresión de proteínas recombinantes en semillas de maíz
y proteínas diana para garantizar el plegamiento, ensamblaje y modificación
postraduccional correctos. Se ha llevado a cabo un análisis proteómico para
dilucidar el almacenamiento de proteínas y la cinética de acumulación en el
endospermo de maíz para maximizar la estabilidad de la proteína recombinante.
Se han desarrollado procesos de purificación aguas abajo a medida para el maíz, a
fin de lograr una recuperación eficiente y altos niveles de pureza, como se
muestra para los anticuerpos monoclonales anti-VIH 2F5 y 2G12, dondenorteEl
90% del anticuerpo se recuperó ennorte95% de pureza utilizando un proceso de
cromatografía de afinidad modificada (Platis y Labrou, 2008; Ramessar et al.,
2008b).
Mientras que los esfuerzos en farmacología molecular apuntan a aumentar el
rendimiento, la estabilidad y la recuperación de proteínas, la ingeniería metabólica
es un campo diverso en el que se pueden emplear múltiples estrategias para
lograr el objetivo de aumentar la recuperación de un compuesto objetivo
específico. Dichas estrategias incluyen la sobreexpresión de enzimas limitantes de
la velocidad para mejorar la síntesis de un compuesto objetivo (Zhu et al., 2008),
silenciando genes que codifican enzimas que degradan o convierten un
compuesto objetivo o sintetizan un compuesto competitivo usando un precursor
común (Houmard et al., 2007; Frizzi et al., 2008), expresando enzimas alteradas
para evitar el control por retroalimentación (Huang et al., 2005; Frizzi et al., 2008),
y expresar múltiples enzimas para extender una ruta metabólica truncada o
importar completamente una ruta heteróloga (Zhu et al., 2008). Puede ser
necesario asegurarse de que el metabolito deseado se acumule en un
determinado tejido (p. ej., tubérculos y semillas) o en compartimentos
subcelulares específicos (p. ej., la vacuola) para evitar la toxicidad o los efectos
fuera del objetivo, por lo que la regulación de la expresión del transgén y la
orientación de la proteína es igual de importante. importante en ingeniería
metabólica como lo es en farmacología molecular.
4. Productos de valor añadido. Objetivos específicos: metabolismo primario
4.1. carbohidratos
Las plantas producen tanto carbohidratos poliméricos (p. ej., glucanos y
fructanos) como azúcares individuales (p. ej., glucosa y fructosa). Los
carbohidratos no solo son omnipresentes en la dieta humana y animal, sino que
también se utilizan en el procesamiento de alimentos y en la fabricación de
adhesivos, cosméticos, detergentes, papel y textiles.Ellis et al., 1998). Más de la
mitad de la masa de una semilla de maíz es carbohidrato, predominantemente
almidón (Figura 2).
El almidón, que se almacena en forma de gránulos insolubles en agua, se
compone principalmente de dos tipos de α-glucano: amilosa y amilopectina. La
amilosa es un polímero predominantemente lineal de residuos de glucosa con
enlaces α-1,4 con enlaces α-1,6 raros, mientras que la amilopectina consiste en
cadenas de glucano con enlaces α-1,4 y está muy ramificada con
5–6% enlaces α-1,6 (Buleón et al., 1998). Los niveles típicos de amilosa en los
almidones son del 15 al 25% (Modales, 1979) pero el almidón de lawx (ceroso)
mutante del maíz está virtualmente libre de amilosa (Shure et al., 1983) mientras
que el extensor de amilosa (ae)mutantes (Boyer y Preiss, 1978) comprenden
50-85% de amilosa (Modales, 1979).
La proporción de amilosa a amilopectina en el almidón determina sus
propiedades físicas y químicas y, por lo tanto, su uso final, por lo que la
ingeniería de síntesis de almidón en el maíz se puede utilizar para adaptar el
cultivo a diferentes aplicaciones.Fergason, 1994). La supresión de la enzima
endógena de ramificación del almidón 2 (SEB 2) por ARNi aumentó el
contenido de amilosa hasta en un 50%, aunque el contenido total de
almidón se mantuvo igual.Chai et al., 2005). Otro enfoque que puede valer la
pena considerar es la sobreexpresión del transportador de adenilato
plastidial, ya queBt-1 mutantes que carecen de esta proteína tienen niveles
bajos de almidón (Shannon et al., 1998; Crianza, 1965).
Aunque solo se ha logrado un éxito limitado mediante la modificación
directa de la biosíntesis del almidón, se pueden producir glucanos
alternativos a partir de sacarosa a través de la expresión de
glucosiltransferasas (GTF). Estas son enzimas bacterianas que catalizan la
polimerización de la sacarosa, que es abundante en la semilla de maíz en
desarrollo, lo que conduce a la producción de glucanos de alto peso
molecular con enlaces α-1,3/α-1,6 que normalmente no existen en las
plantas superiores. .Zhang et al. (2007)fusionó una forma mutante delgtfD
gen deSreptococcus mutans al péptido de tránsito Brittle-1 de plástido de
maíz para la orientación de amiloplasto. Sobreexpresión degtfDresultó en la
acumulación de un nuevo glucano soluble α-(1–6) enlazado a altos niveles en
los granos maduros (hasta 14% de su peso seco) (Zhang et al., 2007).
El fitoglucógeno es un glucano soluble en agua altamente ramificado que se
produce además del almidón en elazucarado-1mutantes de maíz (Crianza, 1965) y
arroz (Nakamura et al., 1997). En ambas especies, el contenido de fitoglucógeno
de los granos mutantes es de aproximadamente 25 a 30% del total de
carbohidratos. El aumento del contenido de fitoglucógeno por encima del 30 %
podría producir polisacáridos con propiedades funcionales únicas, incluida la
reducción de la viscosidad, la formación de gel y la tasa de retrogradación, pero
una mayor retención de agua, lo que facilita la digestión del ganado (Johnson et
al., 2001a,b). Los investigadores han intentado aumentar los niveles de
fitoglucógeno apilando diferentes alelos mutantes en el maíz, pero hasta ahora no
han tenido éxito (Wang et al., 1993).
Finalmente, los fructanos son polímeros de fructosa localizados, a diferencia
del almidón, en vacuolas en lugar de amiloplastos. Los fructanos son
componentes importantes de los alimentos funcionales porque tienen
propiedades probióticas y ofrecen protección contra ciertos tipos de cáncer (
Menne et al., 2000; Roberfroid, 2000). Expresión específica de tejido y orientación
deBacilo amyloliquefaciensSacB (levan sacarasa) a las vacuolas del endospermo de
maíz resultó en la acumulación de fructano de alto peso molecular, que
representa del 4 al 8% del peso seco de las semillas maduras (Caimí et al., 1996).
4.2. Aminoácidos esenciales y proteínas nutricionales
En humanos, ocho de los veinte aminoácidos estándar se describen
como esenciales porque no se pueden sintetizar.de novoy debe obtenerse
de la dieta. Sin embargo, la mayoría de los cultivos alimentarios básicos son
deficientes en ciertos aminoácidos esenciales, siendo los niveles de lisina y
triptófano particularmente bajos en el maíz (Galili y Höfgen, 2002; Huang et
al., 2006). Por lo tanto, la deficiencia de triptófano y lisina prevalece en los
países en desarrollo donde el maíz es la única o predominante fuente de
alimento.
El que ocurre naturalmenteopaco-2El mutante tiene niveles más altos de lisina
y triptófano que el maíz de tipo salvaje, pero tiene un grano suave y calcáreo que
no es satisfactorio para cocinar (Mertz et al., 1964). El mayor contenido de
aminoácidos esenciales en el mutante resulta de un nivel reducido de ciertas
proteínas de almacenamiento (por ejemplo, zeínas α y β) que permiten que otras
proteínas las reemplacen y aumenten el nivel de lisina y triptófano. Los programas
de mejoramiento han dado como resultado el desarrollo de Maíz Proteico de
Calidad (QPM) que se beneficia del alto contenido de lisina
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53
y los niveles de triptófano delopaco-2mutante pero combina esto con un núcleo
duro con cualidades culinarias superiores (Prasanna et al., 2001). Investigaciones
posteriores han demostrado que aunque el QPM tiene niveles más bajos de zeínas
α y β en comparación con el maíz de tipo salvaje, tiene niveles más altos de zeína
γ.Zarkadas et al. (2000)mostró que QPM con alto contenido de lisina puede
proporcionar hasta el 73% de los requerimientos de proteína humana, en
comparación con el 28-50% para el maíz común. El laborioso programa de
reproducción que dio lugar a QPM se puede replicar mucho más rápidamente con
RNAi.Segal et al. (2003)maíz transformado con una construcción de ARNi que da
como resultado una fenocopia delopaco-2fenotipo. Las semillas transgénicas
contenían menos α-zeína de lo normal (y niveles más bajos de leucina, alanina y
glutamina) pero niveles más altos de lisina. Recientemente,Huang et al. (2006)
obtuvieron resultados similares transformando maíz con construcciones que
expresan ARN quimérico de doble cadena.
En la literatura se han reportado dos estrategias transgénicas para
aumentar el contenido de aminoácidos esenciales en el maíz. La primera
consiste en aumentar las reservas de aminoácidos libres mediante la
manipulación de las rutas biosintéticas correspondientes, aunque como
único enfoque, esto puede provocar la lixiviación de los aminoácidos
durante el procesamiento y la cocción de los alimentos. El segundo es
mejorar el nivel de proteínas que contienen aminoácidos esenciales ya sea
modificando la secuencia de genes de proteínas de almacenamiento de
semillas para incorporar más codones de lisina y triptófano, o importando
proteínas heterólogas o completamente sintéticas que contienen triptófano
y lisina y expresando dichas proteínas en las semillas. . Aunque la lixiviación
no es un problema con esta estrategia, las proteínas con alto contenido de
lisina/triptófano no se acumularán si se agotan las reservas de aminoácidos.
yexpresan proteínas con un alto contenido de aminoácidos esenciales. Otro
enfoque novedoso es la sobreexpresión deArabidopsis thalianalysyl tRNA
synthetasa (AtKRS), que da como resultado una mayor inserción de residuos
de lisina en lugar de otros aminoácidos. La expresión elevada y estable de
AtKRS en maíz transgénico resultó en una recodificación significativa de
lisina en proteínas zeína que normalmente carecen de lisina, aumentando el
contenido de lisina del grano transgénico hasta en un 26% (Wu et al., 2007).
La expresión elevada y estable de AtKRS en maíz transgénico provoca una
recodificación significativa de lisina en zeínas que normalmente tienen poca
o ninguna lisina, lo que enriquece el grano (Wu et al., 2007). El grano de maíz
transgénico contenía hasta un 26% de contenido elevado de lisina (Wu et al.,
2007). El cruce de una variedad de maíz con niveles reducidos de α-zeína y
una línea transgénica que expresa una enzima biosintética de lisina liberada
por inhibición por retroalimentación (CordapA), resultó en una duplicación
del contenido de lisina en la progenie F1 (Huang et al., 2005).Houmard et al.
(2007)informaron que las semillas de maíz acumularon más lisina cuando se
reprimió el catabolismo de la lisina usando ARNi para inhibir la enzima clave
lisina-cetoglutarato reductasa/sacaropina deshidrogenasa (LKR/SDH).Frizzi
et al. (2008)combinó ambos enfoques, expresando la versión desregulada de
CordapA y un ARNi específico de LKR-SDH (de la misma construcción), lo que
resultó en un aumento de 40 veces sin precedentes en los niveles de lisina.
La expresión de proteínas ricas en lisina como la hordotionina (HT12) que contiene
un 28 % de lisina y la proteína 8 con alto contenido de lisina de cebada (BHL8) que
contiene un 24 % de lisina ha logrado aumentos significativos en los niveles de lisina total
en semillas de maíz, pero la coexpresión con la enzima bacteriana DHPS aumentó el
contenido total de lisina a más del 0,7% en comparación con el 0,2% en semillas de tipo
salvaje (Jung y Carl, 2000). Maíz transgénico que expresa lasb401gen que codifica una
proteína con un contenido muy alto de lisina, aumentó los niveles de lisina hasta un 54,8
% y el contenido total de proteínas hasta un 39 %. Estos niveles se mantuvieron durante
seis generaciones (Yu et al., 2004). Los niveles de lisina también podrían incrementarse
mediante la expresión de proteínas nutricionales animales, como las proteínas de la
leche. La expresión de lactoalbúmina alfa porcina en el maíz se probó con dos estrategias
dirigidas, una construcción que contenía una secuencia señal de zeína y otra que
contenía una señal de retención del retículo endoplásmico (RE), pero no se informaron
los niveles de aminoácidos individuales (Yang et al., 2002). Recientemente,Bicar et al.
(2008)llevaron a cabo un experimento similar y demostraron que la expresión de α-
lactoalbúmina en el maíz sí aumentaba el contenido de lisina.
45
4.3. Ácidos grasos
Aunque las plantas superiores sintetizan más de 300 tipos diferentes de
ácidos grasos (Aitzetmüller et al., 2003), solo unos pocos son comunes a
todas las plantas, por ejemplo, los ácidos grasos saturados ácido palmítico
(16:0) y ácido esteárico (18:0), y los ácidos grasos insaturados ácido oleico
(18:1∆9), ácido linoleico (LA) (18:2∆9, 12) y ácido α-linolénico (ALA) (18:3∆
9,12,15) (Broun et al., 1999). Las proporciones relativas de los diferentes
tipos de ácidos grasos impactan en las propiedades de cocción, y los ácidos
grasos monoinsaturados se consideran más saludables que los ácidos
grasos saturados y poliinsaturados (PUFA) (Kinney et al., 2002).
La mayoría de los ácidos grasos se pueden sintetizarde novopor humanos,
pero ciertos PUFA no pueden y deben obtenerse de la dieta. Estos incluyen los
ácidos grasos ω-3 de cadena más larga que normalmente se encuentran en los
peces y los microorganismos marinos, el ácido eicosapentaenoico (EPA; C20:5n-3)
y el ácido docosahexaenoico (DHA; C22:6n-3), que juegan un papel importante en
la regulación de las respuestas inflamatorias, la presión arterial y el desarrollo del
cerebro. El ácido estearidónico (SDA; C18:4n−3), EPA y DHA también ayudan a
prevenir ciertos tipos de cáncer (Christensen et al., 1999; Smuts et al., 2003; Reiffel
y McDonald, 2006).
Durante muchos años, los científicos han estado buscando reemplazos
saludables para los aceites de palma e hidrogenados que tengan propiedades
similares, como solidez y resistencia a la oxidación. Los aceites ricos en ácido
oleico satisfacen algunas de estas necesidades y se han desarrollado en el maíz
mutantes con alto contenido de ácido oleico, con un contenido de ácido oleico que
oscila entre el 60 % y el 90 %. Estos sonFAD2mutantes (Bello et al., 2008), laFAD2
gen que codifica una omega-6 desaturasa que convierte el ácido oleico en ácido
linoleico. Más recientemente,Zheng et al. (2008)mostró que un QTL con alto
contenido de aceite (qHO6) que afecta el contenido de aceite de semilla de maíz y
ácido oleico codifica una acil-CoA: diacilglicerol aciltransferasa (DGAT1–2), que
cataliza el paso final de la síntesis de aceite y se ha implicado como un paso
limitante de la velocidad (Jako et al., 2001; Pulmón y Weselake, 2006). Una
inserción de fenilalanina en DAGT1–2 en la posición 469 es responsable del
aumento del contenido de aceite y ácido oleico (Zheng et al., 2008). La expresión
ectópica del alelo DAGT1-2 con alto contenido de aceite aumenta los contenidos
de aceite y ácido oleico hasta en un 41% y 107%, respectivamente (Zheng et al.,
2008). Este es el primer informe de ingeniería metabólica directa para el contenido
de ácidos grasos en el maíz, una estrategia que se ha empleado ampliamente en
plantas modelo y cultivos oleaginosos (Truksa et al., 2009).
5. Productos de valor añadido. Objetivos específicos: vitaminas y minerales
5.1. Niveles de micronutrientes en el maíz
Los cereales, incluido el maíz, son generalmente deficientes en la mayoría de
las vitaminas y minerales, lo que significa que las personas que dependen del maíz
como alimento básico corren el riesgo de sufrir desnutrición incluso si obtienen
suficientes calorías de su dieta. Los valores nutricionales típicos de las semillas de
maíz se enumeran enTabla 5, que se obtiene de la base de datos de nutrientes del
USDA. Una porción típica de 100 g de semillas contiene aproximadamente del 10
al 15 % de la ingesta diaria recomendada de las principales vitaminas B y vitamina
C (ascorbato), pero solo el 1 % de la RDI de vitamina A. De manera similar, las
semillas de maíz son fuentes pobres de hierro , selenio, magnesio y potasio. En el
mundo industrializado, la deficiencia de micronutrientes se evita mediante dietas
variadas, suplementos y la fortificación de cereales procesados y
Tabla 5
Propiedades nutricionales seleccionadas del maíz (datos de la base de datos de nutrientes UDSA,www.ars.
usda.gov).
micronutriente Cantidad en 100 g de semilla de maíz Porcentaje de IDR
vitamina a 10 μg equivalente 1%
Niacina (B3) 1,7 miligramos 11%
Folato (B9) 46 microgramos 12%
Vitamina C 7 miligramos 12%
Hierro 0,5 miligramos 4%
46 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53
pan de molde (Zhu et al., 2007; Gómez-Galera et al., 2010). En los países en
desarrollo, donde estos métodos tienen un impacto limitado, la fortificación
directa de los cultivos de cereales en la fuente puede ser la única forma de reducir
la incidencia de la deficiencia de micronutrientes a largo plazo.
5.2. Estrategias convencionales y transgénicas para aumentar los niveles de carotenoides
Debido a que el maíz tiene un acervo genético tan diverso, existe una
variación significativa en diferentes cultivares y variedades con respecto a
los niveles de vitaminas y minerales. Por esta razón, se han utilizado
enfoques de mejoramiento convencionales para seleccionar variedades más
nutritivas, aunque esto ha tenido un éxito limitado. Por ejemplo, muchos
investigadores han estudiado la variación en los niveles de β-caroteno en el
maíz, ya que esto afecta el color del grano y es un fenotipo fácil de calificar (
Kurilich y Juvik, 1999; islam, 2004). Los seres humanos pueden sintetizar la
vitamina A a partir del β-caroteno, por lo que una ingesta suficiente de β-
caroteno puede prevenir las enfermedades causadas por la deficiencia de
vitamina A, que incluyen ceguera, disfunción inmunitaria y trastornos de la
piel.Harjes et al. (2008)describió cuatro polimorfismos en elliceolocus en el
maíz, que codifica la enzima licopeno-ε ciclasa, que determina el flujo en las
ramas de α-caroteno y β-caroteno de la ruta de síntesis de carotenoides. Sin
embargo, solo se logró un éxito marginal con la selección de líneas que
contenían hasta 13,6 μg/g de peso seco de β-caroteno (una mejora del 30-40
%). Se necesitarían años de mejoramiento convencional para introducir este
rasgo en variedades de maíz adaptadas localmente cultivadas por
agricultores de subsistencia en el mundo en desarrollo.
Los enfoques transgénicos ofrecen un progreso más rápido hacia la
mejora nutricional ya que los programas de mejoramiento prolongados son
innecesarios. Los genes que codifican las enzimas biosintéticas relevantes se
pueden transferir directamente al cultivo de elección, lo que permite
modificar ese rasgo único sin afectar el fondo genético y, por lo tanto, las
propiedades agronómicas del cultivo. Con respecto a las vías de los
carotenoides,Aluru et al. (2008)introdujo los genes bacterianoscrtB (que
codifica la fitoeno sintasa) yCrTI (que cataliza los cuatro pasos de
desaturación en la ruta de los carotenoides, un proceso que requiere dos
enzimas en las plantas) en el maíz bajo el control de un 'superpromotor de γ-
zeína' para la expresión específica del endospermo. Esto aumentó el
contenido total de carotenoides a 33,6 μg/g de peso seco y elevó los niveles
de β-caroteno.
Utilizando un nuevo enfoque de transformación genética combinatoria,
la vía biosintética de los carotenoides se ha modificado y ampliado para
producir no solo β-caroteno sino también otros carotenoides importantes
como la luteína, la zeaxantina, el licopeno y la astaxantina, que se sabe que
tienen beneficios nutricionales y médicos (Zhu et al., 2008). Este estudio,
mencionado brevemente anteriormente, involucró la transformación
genética combinatoria para generar una biblioteca de variantes metabólicas
que expresan diferentes combinaciones de cinco genes carotenogénicos (
Zmpsy1, PacrtI, Gllycb, GlbchyParacrtW).Plantas de esta biblioteca que
expresan Zmpsy1yPacrtIbajo el control de un promotor específico del
endospermo contenía niveles extraordinariamente altos de β-caroteno,
alcanzando en los mejores casos los 56 μg/g de peso seco.
5.3. Vitaminas B9, C y E
La ingeniería metabólica es una alternativa prometedora a la
fortificación artificial con folato, que es particularmente importante durante
el desarrollo neuronal en el feto humano y tiene un efecto profundo en la
incidencia de defectos del tubo neural como la espina bífida (Scott et al.,
2000; Bouis, 2003; DellaPenna, 1999). Ha habido intentos exitosos de
aumentar los niveles de folato en frutos de tomate (Díaz de la Garza et al.,
2004, 2007) y granos de arroz (Storozhenko et al., 2007) usando estrategias
transgénicas, y usando una estrategia similar en maíz,Naqvi et al. (2009b)
aumentó el contenido total de folato hasta 2 veces. En el caso de la vitamina
C, la expresión constitutiva de la enzima dehidroascorbato reductasa (DHAR)
en maíz duplicó el nivel de vitamina C (Chen et al., 2003). Esta enzima recicla
el ascorbato oxidado y se obtuvieron resultados similares.
cuando la expresión específica del endospermo de DHAR resultó en un aumento de 6
veces en el contenido de vitamina C en las plantas de maíz transgénicas en comparación
con el tipo salvaje (Naqvi et al., 2009b).
La vitamina E es una colección de ocho vitámeros relacionados que
comprenden cuatro tocoferoles y cuatro tocotrienoles, conocidos colectivamente
como tococromanoles (DellaPenna y Pogson, 2006). El más potente de ellos es el
α-tocoferol, que tiene una actividad 100 veces superior a la de otros vitámeros (
Traber y Sies, 1996). Las plantas varían en su contenido de tococromanol y en las
proporciones aportadas por los diferentes compuestos, siendo más abundantes
los α-tocoferoles en las hojas y predominando los γ-tocoferoles en las semillas (
bronceado, 1989; Demurin et al., 1996). El análisis de tococromanoles en
diferentes líneas puras de maíz ha revelado que las semillas muestran una
variación natural sustancial en los niveles de tocoferoles α, γ y δ (Grams et al.,
1970; Egesel et al., 2003). La vía de síntesis de tocoferoles de maíz aún no se ha
dilucidado por completo, pero un gen relevante (TEV1,que codifica la tocoferol
ciclasa) ha sido clonado y caracterizado (Provencher et al., 2001; Sattler et al., 2003
). En un estudio más reciente, se identificaron en el maíz regiones cromosómicas
asociadas con la variación cuantitativa del contenido de tocoferoles.Chander et al.
(2008)utilizó el mapeo de QTL combinado con el enfoque del gen candidato en
líneas consanguíneas recombinantes (RIL) con diferentes antecedentes genéticos
para estudiar las acumulaciones de tocoferoles en el maíz. Este estudio identificó
seis genes candidatos en la ruta de biosíntesis de tocoferoles. (HPPD, VTE1, VTE3,
VTE4, P3VTE5,yP4VTE5),y 31 QTL asociados con la variación cuantitativa del
contenido y la composición de tocoferoles se identificaron mediante mapeo de
intervalos compuestos (CIM).
La ingeniería metabólica podría usarse para aumentar los niveles totales
de tococromanol o cambiar el equilibrio de los vitámeros a favor del γ-
tocoferol (DellaPenna, 1999; Savidge et al., 2002). La expresión de genes de
síntesis de tococromanol en plantas y cultivos modelo como la canola y la
soja (Karunanandaa et al., 2005) ha aumentado los niveles de vitamina E en
plantas transgénicas principalmente al aumentar la cantidad de α-tocoferol.
Se han realizado avances limitados en el maíz, que tiene el segundo mayor
contenido de tocoferoles después de la soja y una mayor proporción de α-
tocoferol (Grusak y DellaPenna, 1999).Cahoon et al. (2003)creó plantas de
maíz transgénicas que expresan homogentisato de cebada geranilgeranil
transferasa, la primera enzima comprometida en la ruta del tococromanol,
bajo el control del promotor del gen de la oleosina de 16 kDa de maíz
embrioespecífico. Esto aumentó los niveles totales de tococromanol 6 veces,
principalmente debido a un aumento en los niveles de tocotrienol (los
niveles de tocoferol permanecieron prácticamente sin cambios). La
expresión simultánea de ρ-hidroxifenilpiruvato dioxigenasa y MPBQ
metiltransferasa en maíz resultó en un aumento de 3 veces en el contenido
total de tocoferol (Naqvi et al., 2010). Este aumento en el contenido de
tocoferoles en las semillas transgénicas se debió a un aumento en el γ-
tocoferol mientras que otros isómeros de tocoferoles permanecieron
indetectables.Naqvi et al., 2010).
6. Productos de valor añadido. Dianas específicas: proteínas recombinantes
6.1. Proteínas farmacéuticas
La industria biofarmacéutica es responsable de una nueva ola de medicamentos
basados en proteínas de mamíferos, incluida una floreciente industria basada en
anticuerpos monoclonales. Además, la expresión de proteínas de subunidades de
patógenos como vacunas proporciona una forma segura y eficaz de proteger a humanos
y animales contra enfermedades emergentes y reemergentes. Actualmente, la industria
se basa en sistemas de producción microbianos (principalmenteE. coliy levadura) y
células de mamíferos cultivadas, pero ambos se basan en fermentadores y, por lo tanto,
son caros y tienen una capacidad limitada (Torres et al., 1999). Las plantas tienen todas
las ventajas de las células de mamíferos (es decir, pueden expresar proteínas complejas,
como anticuerpos, y pueden plegarlas y ensamblarlas correctamente), pero son tan
económicas como los sistemas microbianos pero tienen una capacidad ilimitada y tienen
ventajas adicionales, como la ausencia de patógenos humanos. y una diversidad de
plataformas que ofrecen conceptos de nicho (por ejemplo, almacenamiento a largo plazo
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53 47

en semillas, administración de vacunas orales en frutos, sistemas únicos de Tabla 7

purificación en oleaginosas) (Twyman et al., 2003, 2005; Stoger et al., 2005a, Proteínas farmacéuticas producidas en maíz, destinadas a aplicaciones veterinarias
(adaptado deRamessar et al., 2008a).
b; Ma et al., 2005; Basaran y Rodríguez-Cerezo, 2008).
Las semillas de cereales, particularmente el maíz, son útiles para las proteínas Producto Indicación Estado
farmacéuticas porque pueden almacenarse durante años, incluso a temperatura Vacunas
ambiente, sin que la proteína recombinante pierda actividad.Stoger et al., 2002a). E. colitoxina termolábil Diarrea Dos ensayos de fase I

Esto significa que los medicamentos expresados en semillas pueden distribuirse (ETC LtB) independientes
PTGEV, porcino transmisible Gastroenteritis de lechones Fase I completada
y almacenarse en países que carecen de una cadena de frío y pueden extraerse en
virus de la gastroenteritis
instalaciones locales en lugar de depender de instalaciones centrales y redes de (vacuna oral)
distribución nacionales. Las semillas son órganos naturales de almacenamiento de virus de la enfermedad de newcastle Protección contra Probado en pollos.
proteínas con un entorno bioquímico apropiado para promover la acumulación (NCDV) (vacuna oral) cambios virales Determinación de la
estable de proteínas sin pérdida detectable de actividad. Además, las semillas de dosis apropiada

cereales carecen de compuestos como los fenoles y los alcaloides presentes en las
anticuerpos
hojas de tabaco, lo que complica el procesamiento y la purificación posteriores. Anticuerpo monoclonal E559 Rabia Estudios experimentales
Por lo tanto, las semillas de cereales son un vehículo ideal para la acumulación
estable de proteínas recombinantes (Ramessar et al., 2008c).

Los anticuerpos monoclonales recombinantes funcionales se han producido

con éxito en plantas desde 1989 y ahora son una de las categorías plantas donde la demanda mundial podría satisfacerse con solo unas
biofarmacéuticas más avanzadas producidas en plantas (revisado porTwyman et pocas hectáreas de maíz que producen los anticuerpos en las semillas.
al., 2005; Nicholson et al., 2005; Stoger et al., 2002b). Se han producido con éxito Se ha documentado la expresión exitosa de 2G12 en maíz y la
varios anticuerpos en semillas de maíz (Tablas 6 y 7), algunos de los cuales han extracción de un anticuerpo puro y funcional (Ramessar et al., 2008b;
sido difíciles de producir económicamente en células de mamíferos ( Rademacher et al., 2008).
Chintalacharuvu y Morrison, 1997). Uno de los principales beneficios del uso de Los anticuerpos para la inmunización 'pasiva' son un objetivo importante para
plantas para la producción de anticuerpos es la economía de escala. Este es un la farmacopea molecular, pero la inmunización 'activa' con antígenos producidos
factor importante para los anticuerpos destinados a un uso de gran volumen, en plantas es otro campo emergente. El uso de plantas para sintetizar antígenos
como los destinados a ser incluidos en microbicidas tópicos donde las dosis son patógenos como posibles vacunas conlleva todas las ventajas de seguridad y
mucho mayores que los anticuerpos destinados a inyección. Los anticuerpos escalabilidad enumeradas anteriormente para los anticuerpos, pero los estudios
monoclonales anti-VIH 2F5 y 2G12 son buenos ejemplos, ya que la neutralización han demostrado que los antígenos producidos por las plantas pueden inducir
efectiva requiere la aplicación de cantidades de miligramos de anticuerpo. Para respuestas inmunitarias tanto a nivel mucoso como sérico, y pueden
satisfacer la demanda mundial, ambos anticuerpos tendrían que producirse a administrarse por inyección, así como por vía oral, este último proporciona
escala de toneladas, lo que en una plataforma basada en fermentadores sería importantes beneficios de costos al eliminar la necesidad de un extenso
económicamente inviable. Sin embargo, ambos anticuerpos se han producido en procesamiento posterior. Se han llevado a cabo varios estudios clínicos con
antígenos expresados en una variedad de tejidos vegetales, mostrando
resultados abrumadoramente positivos en términos tanto de producción de
anticuerpos como de respuesta al desafío de patógenos (Yusibov y Rabindran,
2008).
Tabla 6
Se han desarrollado varias plataformas diferentes para la expresión de
Proteínas farmacéuticas producidas en maíz, destinadas a la administración a humanos
(adaptado deRamessar et al., 2008a). antígenos, incluidos el tomate, el tabaco, la patata y otras especies que se
incluyeron en los primeros ensayos clínicos. Sin embargo, el maíz se ha convertido
Producto Indicación Estado
en un candidato prometedor debido a las ventajas de producción citadas
Vacunas anteriormente, la estabilidad del antígenoen el lugary el hecho de que muchos
E. colitoxina termolábil Diarrea dos independientes
animales comerán maíz, lo que permitirá que se use para administrar vacunas
(ETEC LtB) ensayos de fase I
veterinarias (Tabla 7). El maíz se ha utilizado como un sistema de producción de
anticuerpos antígenos de vacunas basado en semillas (Streatfield y Howard, 2003) y los
Avicidina Cáncer colonrectal Retirado de investigadores han descubierto que el entorno de la semilla proporciona
fase II en 1998
"bioencapsulación" para las proteínas recombinantes, lo que retrasa la digestión y
IgG humanizada Uso terapéutico (inhalación): virus Testado en animales
prolonga la ventana de tiempo durante la cual puede ocurrir la estimulación
respiratorio sincitial Uso modelos
IgG humanizada terapéutico (oral):Clostridium Probado en animales inmunológica en el intestino (Zhang et al., 2006). De particular interés es el éxito
difficile modelos de las vacunas a base de maíz para combatir la enfermedad de Newcastle en las
IgG humanizada Esperma (tópico): anticonceptivo Probado en animales aves de corral. El virus de la enfermedad de Newcastle infecta a una amplia gama
modelos
de aves tanto domésticas como silvestres en la mayoría de los países y tiene un
2G12 VIH Neutralización de
el virus efecto devastador en la producción avícola comercial (Alejandro, 1997; Sello et al.,
monoméricohIgA1 Virus del herpes simple (HSV) Estudios experimentales 2000). La alimentación de pollos con semillas de maíz que contenían la proteína F
(anti-herpes) del virus indujo la producción de anticuerpos que confirieron protección contra un
monoméricohIgA1 antígeno SAGA-1 Estudios experimentales
desafío viral equivalente a una vacuna comercial que debe inyectarse en pollos
individuales.
Otros productos
Lipasa gástrica Fibrosis quística, pancreatitis Ensayos de fase II Otras proteínas farmacéuticas interesantes producidas en las semillas de
lactoferrina Infecciones gastrointestinales Ensayos de fase I maíz incluyen la tripsina, una serina proteasa pancreática que generalmente
avidina Uso diagnóstico Disponible en Sigma se produce a partir de canales bovinas. Debido a los temores que rodean la
Catálogo
posibilidad de encefalopatía espongiforme transmisible, ahora se prefieren
tripsina Cuidado de heridas/insulina Disponible en Sigma
fabricar Catálogo
las fuentes de tripsina no animales y el alto volumen de producción posible
aprotinina Inhibidor de la proteasa en Comercializado por en el maíz es ideal (Woodard et al., 2003). Del mismo modo, la aprotinina,
cultivos de tejidos y cirugía prodigio que se obtiene principalmente del pulmón bovino, también se ha expresado
Humano recombinante cardiaca Diabetes Estudios experimentales
en el maíz para reducir el riesgo de contaminación con priones (Zhong et al.,
proinsulina (rhProinsulina)
1999).
48 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53
Tabla 8
Enzimas industriales y reactivos proteicos no médicos producidos en maíz.
Enzima Gene Usar
Lacasa (peroxidasa, enzima lignolítica) Trametes versicolor Para mejorar el procesamiento de la lignina, utilizada como
lacasa yo agente blanqueador y antimicrobiano; clarificación de bebidas y
desintoxicación de flujo de residuos
Celulasa/glucanasa acidothermus Conversión enzimática de celulosa a azúcares fermentables
(endo-1,4-β-D-glucanasa) celulolítico
fitasa Aspergillus niger Mejorar la disponibilidad de fósforo en la alimentación animal
phyA2
β-glucuronidasa E. coli gusA Reactivo técnico
6.2. Proteínas industriales
Además de las proteínas farmacéuticas, que por lo general deben ser
altamente purificadas antes de su uso (siendo las vacunas orales la principal
excepción), las plantas también pueden usarse para la producción de enzimas
industriales a granel utilizadas en las industrias de alimentos y piensos, así como
papel, textiles y fabricación. En cuanto a las proteínas farmacéuticas, la principal
ventaja de usar plantas es económica, ya que se puede lograr una producción a
gran escala sembrando campos adicionales en lugar de poner en marcha nuevas
instalaciones de fermentación o contratar organizaciones de fabricación por
contrato. Por ejemplo, las lacasas fúngicas se han expresado en una variedad de
microbios heterólogos que incluyenSaccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris,
Trichoderma reeseiyAspergillus oryzae,aunque en concentraciones relativamente
bajas. Las plantas de maíz transgénico que expresan altos niveles de lacasa como
una enzima inmovilizada podrían cultivarse a gran escala y la enzima podría
extraerse utilizando un procedimiento simple sin más enriquecimiento o
purificación, lo que reduce los costos de producción (Bailey et al., 2004).
Como se discutió anteriormente, las proteínas de origen animal están cayendo
en desgracia en la industria biofarmacéutica debido al riesgo de infecciones por
priones, y las fuentes alternativas incluyen plantas transgénicas. Además de la
tripsina y la aprotitina, que tienen usos médicos e industriales, se puede producir
una variedad de reactivos de laboratorio en las plantas para garantizar que los
productos utilizados en el cultivo de células y tejidos estén libres de
enfermedades. Dichos reactivos incluirían tripsina, como se discutió
anteriormente, pero también avidina y β-glucuronidasa, los cuales se han
producido comercialmente en semillas de maíz y funcionan tan bien como sus
contrapartes extraídas de fuentes tradicionales.
El alto coste de las enzimas hace que algunos procesos industriales sean
caros o inviables a gran escala, como es el caso de la conversión de biomasa
celulósica en etanol mediante celulasas. Las celulasas comerciales se
producen en sistemas microbianos, pero los costos son prohibitivos. Las
plantas transgénicas que producen celulasas aportan la misma economía de
escala que se observa para otros productos, pero la ventaja adicional en el
maíz es que las celulasas recombinantes pueden activarseen el lugarpara
comenzar el proceso de conversión sin ningún requisito de extracción o
purificación. Los ejemplos de celulasas expresadas en el maíz se enumeran
en Tabla 8.
7. Aspectos regulatorios, económicos y políticos de los productos de alto
valor a partir del maíz
Los principales impulsores del uso sostenible de productos de alto valor
derivados del maíz son la demanda, la economía, la eficiencia y la seguridad.
La demanda de estos productos ya existe debido a la falta de instalaciones
de fabricación de bioprocesos adecuadas y rentables para moléculas tan
importantes. El menor costo de los bienes es la principal fuente de
beneficios potenciales y, por lo tanto, la viabilidad económica y la
comercialización de tales plataformas de producción son de gran
importancia (Figura 4).
Aunque el costo del procesamiento posterior representanorte85%
del gasto (Twyman et al., 2003) en la producción de valor añadido
Niveles de expresión
0,20% del peso seco de la semilla
2,1% de proteína soluble total con actividad enzimática
de 0,845 nmol/mg/min en hoja y 0,835 nmol/mg/min en
raíz
2200 unidades de fitasa (FTU) por kg de semilla
0,7% de proteína soluble total
moléculas y nutracéuticos2en el maíz, la 'fase de producción anterior' es
igualmente importante porque influye en el rendimiento de proteína disponible
para el procesamiento posterior. Este rendimiento está influenciado por la
elección del genotipo/explante para la producción y los niveles de expresión
(revisado enRamessar et al., 2008c). Ciertos genotipos expresan proteínas en
niveles más altos que otros, y la elección del genotipo a menudo refleja la
morfología del grano y la propensión a almacenar proteínas dentro del
endospermo. El maíz es particularmente ventajoso sobre los otros cereales
porque tiene el mayor rendimiento anual de granos (aproximadamente 8300 kg/
ha) pero los costos generales de producción son más bajos (Giddings et al., 2000) y
también un contenido de proteína de semilla relativamente alto (10%). La elección
de la variedad también está influenciada por la facilidad de transformación y la
facilidad de purificación (por ejemplo, las variedades con mayor contenido de
aceite tienen más probabilidades de obstruir los filtros y las resinas de
cromatografía, mientras que aquellas con un alto contenido de carbohidratos
favorecen el crecimiento de microorganismos (Fariñas et al., 2005)).
Los altos niveles de expresión de proteína son beneficiosos porque esto
permite extraer una mayor cantidad de proteína recombinante de una cantidad
determinada de biomasa vegetal (lo que hace que el procesamiento y la
purificación posteriores sean más eficientes), y significa que se requieren menos
hectáreas de tierra para lograr un objetivo de rendimiento particular. . Por lo
tanto, maximizar la acumulación de proteína recombinante es un objetivo
importante (Ma et al., 2003; Streatfield, 2007). Los factores clave que afectan los
niveles de expresión de proteínas recombinantes incluyen el diseño de
construcciones de expresión, donde se pueden lograr altos niveles de proteína
recombinante eligiendo componentes que maximicen las tasas de transcripción y
síntesis de proteínas, y promuevan la estabilidad de la transcripción y la proteína (
Delaney, 2002; Stoger et al., 2002a; Hood et al., 2003; Tada et al., 2003). Sin
embargo, el direccionamiento de proteínas es importante para optimizar la
estabilidad, y esto se logra mediante el direccionamiento subcelular que influye en
el plegamiento, ensamblaje y modificación postraduccional de las proteínas, lo
que afecta su estabilidad y rendimiento final.Schillberg et al., 2002). Otros factores
que pueden estar involucrados incluyen la cigosidad, que se ha demostrado que
aumenta la expresión del transgén, y la inclusión de etiquetas de purificación para
facilitar la extracción y la purificación.
7.1. Ciencias económicas
La pureza de la proteína recombinante para su aplicación suele influir en
la economía de las plataformas de producción. Se requieren diferentes niveles de
pureza para diferentes aplicaciones (Tabla 9), es decir, una mayor pureza implica
un procesamiento posterior más complicado y costoso. El uso de semillas de maíz
para la producción es ventajoso ya que el estado GRAS significa que los productos
que no requieren una purificación extensa pueden administrarse como semillas
enteras, hojuelas, harina o pasta, con una purificación mínima.
Debido a que el procesamiento posterior representa una proporción tan
alta de los costos de producción en las plantas, es importante garantizar que
se utilicen métodos óptimos de purificación y procesamiento para
2Un nutracéutico es una sustancia que se encuentra naturalmente en los alimentos y que ha demostrado
tener un beneficio fisiológico o médico, por ejemplo, resveratrol y flavonoides.
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53 49

Figura 4.Costos comparativos de diferentes sistemas de producción de anticuerpos (PIFB, 2003).

maximizar la producción de altas cantidades de proteínas puras y funcionales. Sin
embargo, independientemente de la pureza requerida, todas las semillas primero
tienen que pasar por un paso de trituración (en forma de polvo o harina) para la
posterior extracción de la proteína total. Durante este proceso, pueden ocurrir
aumentos en los niveles de temperatura y esto a menudo conduce a la
degradación de las proteínas. El maíz es ventajoso sobre todas las demás semillas
de cereales en este aspecto, ya que se ha demostrado que sus semillas retienen la
actividad de la proteína recombinante después de la molienda a altas
temperaturas (Campana et al., 1997). La producción en semillas de maíz también
es ventajosa ya que se pueden acumular altos niveles de proteína en un volumen
pequeño, lo que minimiza los costos asociados con el procesamiento (Perrin et al.,
2000; Stoger et al., 2000). Otros parámetros que son críticos para mantener la
viabilidad económica incluyen la necesidad de equipos especializados y dedicados,
prácticas agronómicas especiales y la capacitación especializada del personal. La
infraestructura existente para el maíz, especialmente el maíz transgénico de
primera generación, brinda una enorme ventaja en este contexto.
7.2. Desafíos regulatorios
Los dos principales problemas normativos relacionados con la producción de
moléculas de alto valor en el maíz son su impacto en el medio ambiente (flujo de
genes a cultivos de maíz no transgénico o especies silvestres relacionadas) y sus
efectos en la salud humana y animal a través de la exposición física y/o la mezcla
inadvertida de semillas. (dentro o fuera de la finca). El flujo de genes depende de
factores intrínsecos, como el tamaño y la densidad del grano de polen, y factores
extrínsecos, como la distancia entre las plantas donantes y receptoras, la
velocidad y dirección del viento, la temperatura, la precipitación, la cantidad de
polen producido y el momento de liberación del polen, todos ellos. que
contribuyen a la longevidad del polen (Di-Giovanni y Kevan, 1991; Di-Giovanni et
al., 1995; Jones y Brooks, 1950). El polen de maíz se libera en cantidades muy
grandes, entre 4,5 y 25 millones de granos de polen por planta durante un
período típico de 5 a 8 días (Paterniani y Stort, 1974), pero es más grande (90–125
μm) y más pesado que el polen de la mayoría de las demás plantas polinizadas por
el viento y, por lo tanto, la dispersión se limita a aproximadamente el 10 % del
área de distribución cubierta por otras especies, a menudo asentándose a unos
pocos cientos de metros de su fuente (Raynor et al., 1972). Un estudio de
investigación realizado por el Instituto Español de Agricultura y Alimentación

En 2009, se cultivaron más de 134 millones de hectáreas (331,1 millones

de acres) de cultivos transgénicos en 25 países, 9 en el mundo
industrializado y 16 en el mundo en desarrollo (Santiago, 2009). Más de la
mitad de los cultivos transgénicos del mundo se cultivaron en los Estados
Unidos (Figura 5). Los marcos normativos que rigen los cultivos transgénicos
y sus productos asociados varían mucho de un país a otro y, a menudo, se
basan en instrumentos internacionales, lo que garantiza un cierto nivel de
armonización internacional (Jaffe, 2004; König et al., 2004). Sin embargo,
siguen existiendo diferencias importantes en la forma en que los diferentes
países eligen interpretar dichos instrumentos y, por lo tanto, en cómo
regulan la aprobación de cultivos transgénicos (Ramessar et al., 2008d, 2009
). El ejemplo más discutido es la diferencia de enfoque entre la UE y EE. UU.:
EE. UU. utiliza el sentido comúnenfoque comparativopara determinar si un
producto transgénico tiene el mismo riesgo que su contemporáneo no
transgénico, mientras que la UEenfoque de precaución asume ilógicamente
que un producto transgénico es inherentemente peligroso y requiere que se
realicen pruebas para demostrar su seguridad. Un marco regulatorio es más
exitoso cuando las medidas de riesgo se basan en datos científicos y no en
enfoques preventivos que exigen la ausencia total de riesgo.

Tabla 9
Concentraciones mínimas de proteína extraña en material vegetal transgénico requeridas para
una producción rentable (Hood y Woodward, 2005).

Producto Requisito de aplicación Concentración mínima

Entrega de vacunas orales ~1 mg requerido para la dosis 0,1% peso seco

Productos farmacéuticos
purificados Enzimas industriales
Celulosa para etanol
Menos sensible a la expresión 0,01% peso seco
b$200/kg costo de producción ≥0,1% peso seco ≥
Figura 5.Esquema porcentual de las áreas de maíz transgénico versus no transgénico sembradas
120 g/galón de etanol 3% peso seco
en los Estados Unidos en 2009 (AGNC, 2010).
50 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53

Tabla 10
Estándares mínimos de tierra, aislamiento, campo y semilla para la certificación de material de maíz y colza (adaptado deCódigo Electrónico de Regulaciones Federales, 2008).

Cultivo Base Certificado

Tierraa Aislamientob CampoC Semillad Tierraa Aislamientob CampoC Semillad

Maíz
Cruz trasera de la fundación 0 201,17 metrose,f 1000g, h 0.1i
Innato 0 201,17 metrose,f 1000g, h 0.1i
Cimentación simple cruce 0 201,17 metrose,f 1000g, h 0.1i
Híbrido 0 201,17 metrosfj 1000 0.5
Polinización abierta 0 201,17 metrosfj 200 0.5
Dulce 0 201,17 metrosf k 0.5

aEl número de años que deben transcurrir entre la siembra de diferentes clases de semillas. Una agencia de certificación puede otorgar una variación en el historial de cultivo de la tierra en circunstancias específicas
donde las prácticas culturales han demostrado ser adecuadas para mantener la pureza varietal.
bDistancia en metros de cualquier fuente contaminante.
CNúmero mínimo de plantas o cabezas en las que se permite una planta o cabeza de otra variedad o fuera de tipo.
dPorcentaje máximo permitido de semillas de otras variedades o fuera de tipo.
mi
No se requiere aislamiento para la producción de semilla polinizada a mano.
F
Cuando el contaminante es del mismo color y textura, la distancia de aislamiento puede ser modificada por (1) barreras naturales adecuadas o (2) fechas de madurez diferenciales, siempre que existan
no hay estigmas receptivos en el progenitor de la semilla en el momento en que el contaminante está liberando polen. Además, las palomitas de maíz estériles para abolladuras no requieren aislamiento de las palomitas de maíz para abolladuras.
gramo
Se refiere a las plantas fuera de tipo en el progenitor de polen que han arrojado polen o a las plantas fuera de tipo en el progenitor de semilla en el momento de la última inspección. Se permite el
h
desespigado, corte o extracción del progenitor de la semilla con esterilidad masculina citoplásmica.
i
Se refiere a orejas fuera de tipo. Las mazorcas con granos descoloridos o de diferente textura se limitan al 0,5 %, o un total de 25 granos descoloridos o de diferente textura por cada 1000 mazorcas. Cuando la fuente
j
contaminante sea maíz del mismo color y textura que el del campo inspeccionado o maíz de endospermo blanco clasificado ópticamente, la distancia de aislamiento es de 124,97 m.
y puede ser modificado por la plantación de filas de borde de padres de polen de acuerdo conTabla 11.
kLa distancia de aislamiento mínima requerida para el maíz dulce es de 201,17 m desde la fuente contaminante, más cuatro hileras de borde cuando el campo a inspeccionar tiene un tamaño de 10 acres (4,0 ha) o
menos. Esta distancia se puede reducir en 4,57 m por cada incremento de 4 acres (1,6 ha) en el tamaño del campo hasta un máximo de 40 acres (16 ha) y se puede reducir aún más 12,19 m por cada hilera de borde
adicional hasta un máximo de 16 hileras . Estas filas de borde son solo para propósitos de desprendimiento de polen.

Research and Technology (IRTA) demostró que en ensayos de campo, la Estudios recientes concluyeron más específicamente que se observó poca o
presencia promedio del gen Bt en muestras de maíz convencional fue del 0,9 ninguna reducción en el flujo de polen si había 3 días o menos entre el
% a distancias de 2 a 10 m del maíz Bt (Melé et al., 2004). En otro estudio, la tiempo de floración de la fuente y el receptor del polen, una reducción del 24
distancia máxima en la que se produjo cualquier polinización cruzada entre % si la separación era de 4 a 5 días, una reducción del 50 % a los 6 días y casi
maíz transgénico y no transgénico fue de 200 m (un evento de un solo un 100% de reducción si transcurre más de una semana entre los tiempos
grano), y también se observaron otros eventos a 150 m y 100 m, es decir, un de floración (Della Porta et al., 2008). Por lo tanto, es evidente que distancias
total de tres granos de polen de un 4000 m2 de separación mucho más cortas serían suficientes junto con el aislamiento
parcela de maíz transgénico (Luna et al., 2001). Por lo tanto, mediante el uso de temporal. Se han estudiado muchas estrategias artificiales adicionales para
estándares predeterminados (basados en datos científicos) para distancias reducir el flujo de genes en cereales, incluidas medidas biológicas de
mínimas de aislamiento entre campos, se puede controlar y prevenir el flujo de mitigación (contención de genes) y métodos de barrera (confinamiento
genes por dispersión de polen. físico) (Commandeur et al., 2003; Gorrión et al., 2007).
A pesar de los datos mencionados anteriormente, la normativa actual exige zonas de Los posibles riesgos de exposición incluyen alergenicidad, reacciones adversas
separación obligatoria mayores de lo que parecería necesario, por ejemplo, un mínimo a la planta transgénica o su producto (en comparación con la planta de tipo
de 1,6 km entre cultivos transgénicos y no transgénicos (Ramessar et al., 2010). Los silvestre equivalente y el producto convencional) y evaluaciones cuantitativas de la
métodos de separación más relajados se practican con éxito para los cultivos de maíz exposición dietética (revisadas porWolt et al., 2006). Los cereales, en particular el
convencionales. La semilla de maíz híbrido, por ejemplo, requiere una distancia de maíz, son ventajosos en este contexto porque son cultivos alimentarios con
aislamiento de 201 m para mantener una pureza del grano del 99,5 % (Tabla 10) y, por lo estatus FDA GRAS, habiendo sido consumidos durante milenios por miles de
tanto, ser adecuado para el etiquetado como un único híbrido de acuerdo con la Ley millones de personas sin efectos nocivos. Existe un mar de información sobre el
Federal de Semillas del USDA. No parece haber ninguna razón lógica por la que no se potencial alergénico de los cereales y los estudios de exposición dietética, que
puedan utilizar los mismos parámetros de aislamiento para el maíz transgénico. La proporcionan datos de equivalencia de fácil acceso para las comparaciones de
distancia de separación obligatoria para el maíz transgénico se puede reducir a 802 m si evaluación de riesgos. La producción de productos de alto valor en semillas de
el maíz transgénico regulado se cultiva fuera de temporada y, por lo tanto, se aísla maíz tiene la ventaja adicional de que las proteínas restringidas a la semilla
temporalmente (USDA-APHIS, 2003; Messeguer et al., 2006; Palaudelmas et al., 2008). normalmente no interfieren con el crecimiento vegetativo de la planta, y esta
estrategia también limita el contacto accidental con organismos no objetivo (
Fischer et al., 2004). Además, el maíz transgénico ya se ha comercializado y, por lo
tanto, ya existen datos de seguridad de alimentos y piensos para el maíz no
Tabla 11
transgénico, lo que proporciona un gran ahorro de tiempo al realizar
anexo aTabla 10, nota al pie k.
comparaciones de equivalencia del cultivo de maíz transgénico.
Distancia minima Se requiere un número mínimo de filas de borde
de contaminante
Tamaño del campo, hasta 20 acres Tamaño del campo, 20 acres (8 En 2002, la empresa de biotecnología ProdiGene Inc. fue multada con 250.000
(8 ha) ha) o más dólares por el USDA y obligada a llevar a cabo una operación de limpieza de 3
124,97 metros 0 0 millones de dólares después de que se encontraran plantas de maíz voluntarias
112,78 metros 2 (0,8 ha) 1 (0,4 ha) que contenían el gen de una vacuna veterinaria entre un cultivo de soja sembrado
100,59 metros 4 (1,6 ha) 2 (0,8 ha) en el mismo campo en los siguientes temporada. La sólida respuesta de las
88,39 metros 6 (2,4 hectáreas) 3 (1,2 ha)
agencias reguladoras (la sanción impuesta a ProdiGene fue la máxima posible en
74,68 metros 8 (3,2 hectáreas) 4 (1,6 ha)
62,48 metros 10 (4,0 hectáreas) 5 (2,0 hectáreas)
virtud de la Ley de Protección de Plantas de 2000) reflejó el riesgo percibido
50,29 metros 12 (4,8 ha) 6 (2,4 hectáreas) asociado con el consumo accidental de un producto farmacéutico y resultó en un
38,10 metros 14 (5,6 hectáreas) 7 (2,8 hectáreas) enfoque de "tolerancia cero" para la aplicación. Sin embargo, nunca se demostró
25,91 metros 16 (6,4 hectáreas) 8 (3,2 hectáreas)
que las plantas de maíz voluntarias fueran transgénicas o que produjeran semillas
0 No permitido 10 (4,0 hectáreas)
viables.
 S. Naqvi et al. / Avances en biotecnología 29 (2011) 40–53
que contiene la vacuna. De hecho, este fue un caso en el que la empresa fue
sancionada por no cumplir con las regulaciones, no porque hubiera
evidencia de riesgo real. Es notable que el USDA haya abandonado desde
entonces su política de tolerancia cero, lo que demuestra claramente que las
regulaciones aún están evolucionando (Ramessar et al., 2008a).
8. Perspectiva
El maíz es el cultivo alimentario más cultivado en el mundo, por lo que quizás
no sea sorprendente que ahora esté a la vanguardia de una nueva revolución
verde en la que las plantas se utilizan no solo como alimento, pienso o productos
básicos, sino como fábricas bioquímicas avanzadas para producir el valioso
moléculas que necesitamos como productos farmacéuticos, enzimas industriales,
nutrientes, precursores químicos y combustibles. Se ha argumentado
económicamente el uso del maíz, y varios estudios de casos ahora muestran de
manera concluyente que es una plataforma de producción viable para moléculas
de alto valor, incluso cuando se toman en cuenta regulaciones onerosas. El marco
regulatorio para los productos farmacéuticos e industriales de origen vegetal está
evolucionando (Spök et al., 2008), pero es imperativo basar las reglamentaciones
emergentes en principios científicos y no en riesgos que no se comprenden bien y
en gran medida no se cuantifican. Debemos evitar temer al 'hombre del saco
debajo de la cama' y, en cambio, debemos estudiar el impacto de las fábricas de
plantas con rigor y cuidado. Se ha sugerido que un enfoque más práctico y
productivo podría ser basar las evaluaciones de riesgo en principios
ecotoxicológicos, en los que los problemas de investigación se refieren a criterios
de valoración relevantes de la evaluación y las hipótesis de riesgo no predicen
efectos adversos de las plantas transgénicas en los criterios de valoración de la
evaluación (Raybould, 2007). El maíz presenta una serie de ventajas importantes
como plataforma de producción de moléculas de alto valor, incluidos los
beneficios de su fisiología única, la capacidad de expresar proteínas
recombinantes en semillas, el estado GRAS, su infraestructura extendida y bien
desarrollada, su diversidad genética, genética bien entendida y falta de
alergenicidad y toxicidad. También se puede cultivar en todos los continentes y,
con la excepción de América Central, no tiene parientes maleza co-localizados y,
por lo tanto, es ideal para su adopción en entornos de producción local en
entornos rurales. El marco regulatorio debe construirse en torno a estos hechos
científicos sólidos en lugar de la especulación impulsada por los medios, y
debemos centrarnos en los beneficios que el maíz transgénico puede brindar
tanto al mundo industrializado como a los pobres de los países en desarrollo.
Agradecimientos
La investigación en nuestro laboratorio cuenta con el apoyo de la
subvención BFU2007-61413 del Ministerio de Ciencia e Innovación (MEI,
España); el programa Ramón y Cajal (MICINN, España); el proyecto Pharma-
Planta FP6 EU LSH-2002-1.2.5-2; Centro Consolider, MICINN, España;
Acciones Complementarias (MICINN, España) Beca BIO2005-24826; ERC
Advanced Grant BIOFORCE para PC; SN y GF son beneficiarios de becas de
doctorado MICINN.
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