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Patogenicidad de las larvas de Anisakis physeteris inoculadas

experimentalmente en Canis familiaris

Article · January 1997

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3 authors, including:

Rufino Cabrera Alfonso Chavera C.

Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC) National University of San Marcos
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Parasitol al Día 21: 14 - 19, 1997
FLAP

TRABAJOS DE INVESTIGACION

PATOGENICIDAD DE LAS LARVAS DE Anisakis physeteris

INOCULADAS EXPERIMENTALMENTE EN Canis familiaris

RUFINO CABRERA", MANUEL TANTALEAN** y ALFONSO CHAVERA***

PATHOGENICITY OF Anisakis physeteris LARVAE EXPERIMENTALLY

INOCULATED TO Canis familiaris

The purpose of this report, ¡is to experimentally demonstrate the pathogenicity of

Anisakis physeteris larvae on the digestive tract of dog. The larvae were collected from
Scomber japonicus «caballa» caught in the coast of Pisco, Peru. Macroscopically, the
gastric mucosa showed thickening of the folds, edema, erosion and hyperemia at 36, 42
and 60 hours post-infection. Histologically, severe gastric inflammatory reaction mostly
conformed by neutrophils and eosinophils associated with lymphocytes, monocytes and
plasmocytes were seen. The lesion was surrounded by large amount of chronic connective
tissue. This pathologic features are similar to acute gastric anisakiosis of humans.
Key words: Anisakis physeteris; Experimental infection; Canis familiaris; Scomber
japonicus, Ica, Peru.

INTRODUCCION la viabilidad de las larvas presentes. Como conse-

La anisakiosis es una zoonosis producida por
la ingestión accidental del tercer estadio larval (L),
principalmente de Anisakis simplex y al invadir el tracto gastro-intestinal
Pseudoterranova decipiens, especies que pertene-
cen a la familia Anisakidae.' Estas larvas se loca-
lizan en los músculos y en la cavidad visceral de
numerosos peces marinos y en calamares de im-
portancia comercial; las formas adultas parasitan
el estómago de mamíferos marinos.
En el Perú, la infección humana se produce por
la ingestión de alimentos semicrudos conocidos
como «ceviche», plato típico de la población
costera preparado a base de carne de pescado
con jugo de limón y especias que no disminuyen
cuencia de este hábito alimenticio, se han regis-
trado dos casos humanos de infección producidos
por larvas de Phocanema decipiens.? Las larvas,
del hombre,
ocasionan lesiones granulomatosas que son ca-
racterizadas por infiltración eosinofílica masiva.?
En el mundo, son pocos los estudios orienta-
dos a conocer la patogenicidad de las larvas de
Anisakis physeteris o larvas tipo Il en animales de
experimentación;* * sin embargo, estas larvas tam-
bién son patógenas para el hombre.' ** En el
Hemisferio Sur, hasta ahora, no se conocía su
capacidad infectante.
La presencia de larvas L, de A. physeteris en
peces marinos de importancia comercial de nues-

* Facultad de Ciencias. Universidad Nacional «San Luis Gonzaga» de Ica. Casilla 03. Ica, Perú.
** Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Ricardo Palma. Casilla 2670 Lima 100. Lima, Perú.
*** Departamento de Salud Animal y Salud Pública. Facultad de Medicina Veterinaria. Universidad Nacional Mayor de San
Marcos. Lima, Perú.

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 ANISAKIOSIS EXPERIMENTAL EN PERRO - R. Cabrera et al.
tra costa” * constituye un riesgo de infección para
el hombre y para otros mamíferos que se alimen-
ten Cu. estos peces.
El objetivo de este estudio es demostrar experi-
mentalmente, por medio de la observación
anátomo-histopatológica, que las larvas de A.
physeteris son patógenas para el perro doméstico
porque le causan lesiones en el tracto digestivo.
MATERIAL Y METODOS
Colección de las larvas de A. physeteris
(Tipo 11)
Las larvas fueron colectadas de la superficie
visceral, gonadal, membrana peritoneal y del
parénquima hepático de Scomber japonicus, "ca-
balla", capturado en las costas de Pisco, en el
departamento de Ica, en donde se ha comproba-
do que es un importante transportador de larvas
de A. physeteris.”
Los peces fueron cuidadosamente examinados
en el terminal pesquero de San Andrés (Pisco) y/o
en el Laboratorio Regional del Instituto del Mar
del Perú (IMARPE-Pisco). Una vez obtenidas las
larvas, se lavaron con agua de mar y se transpor-
taron rápidamente a la ciudad de Ica en solución
fisiológica (CINa 0,95%) y a temperatura ambien-
te; a continuación se colocaron en placas de Petri
y se prepararon para la inoculación a los perros
entre 3-5 horas después de la colección.
Animales de experimentación e infección
Se usaron 8 (4 machos y 4 hembras) cacho-
rros de perro (Canis familiaris) libres de infección
por helmintos, de 1-4 meses de edad y de 1-4,5
kg de peso; se mantuvieron individualmente en
caniles de 1,1 m x 1,0 x 1,05 m) y se alimentaron
con camote, leche, maíz granulado y en ocasio-
nes grasa abdominal y músculos de aves domés-
ticas.
Para la infección, las larvas se colocaron direc-
tamente en la faringe del perro o contenidas en un
bolo alimenticio de 2 cc de volumen aproximada-
mente, preparado a base de pan humedecido con
leche.
Antes de la inoculación, los animales fueron
divididos en 4 grupos, cada uno compuesto de 2
cachorros. A los del grupo | (control), se les admi-
nistró pequeñas porciones de carne de pollo
(placebo); 3 días después se sacrifiraron con
sobredosis de cloroformo y se necropsiaron inme-
diatamente.
El cachorro N* 1 del grupo ll se inoculó con 15
larvas y se necropsió a las 15,5 h de la inoculación.
Al otro animal se le administró 11 larvas. Debido
a que espontáneamente eliminaron los gusanos
con las heces, se repitió la inoculación con otras
20 larvas. La necropsia se hizo a las 36 h de la
inoculación.
A los cachorros del grupo lll, se les inoculó con
8 y 12 larvas respectivamente y la necropsia se
realizó a las 42 h.
A los miembros del grupo IV se les administró
1 y 16 larvas respectivamente; ambos animales
se necropsiaron a las 60 h de la infección.
A los cachorros que eliminaban las larvas re-
petidamente, se les administró, antes de la
reinfección, una suspensión de hidróxido de alu-
minio-trisilicato de magnesio, en dosis de una
cucharadita antes de la comida, durante 5 días,
para reducir la posible hiperacidez gástrica.
Las larvas eliminadas en las heces se fijaron
en alcohol caliente de 70% para su identificación.
Los tractos digestivos de los animales
necropsiados fueron cuidadosamente examinados,
tratando de localizar los posibles lugares de pene-
tración. Una vez localizada la larva en la mucosa
gástrica, se seccionó la porción de tejidos afecta-
do y se fijó en formol al 10% realizando cortes
histológicos según las técnicas conocidas para la
tinción con hematoxylina-eosina. Algunas larvas
fueron extraídas de la mucosa y se disectaron
bajo microscopio estereoscópico, con la finalidad
de obtener y observar el esófago y el ventrículo,
luego se alcoholizaron y clarificaron en una mez-
cla de alcohol-fenol y estudiaron con ayuda de un
microscopio Carl Zeiss con contraste de fases. La
identificación de las larvas de A. physeteris se
hizo tomando en cuenta las características seña-
ladas en trabajos publicados.*- *
RESULTADOS
Las larvas de A. physeteris obtenidas de «ca-
balla» e inoculadas en los perros produjeron le-
siones al penetrar las paredes del estómago, como
se puede apreciar en la Tabla 1; aquellas que
fueron eliminadas en las heces presentaron
coloración rojiza en el extremo anterior.
En las zonas de penetración, se observaron
manchas hemorrágicas de hasta 2 mm de diáme-
tro, erosión, edema y leve hiperemia. La penetra-
ción se verificó hasta 60 h después de la
inoculación.
En el corte histológico de la lesión de 36 h de
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 ANISAKIOSIS EXPERIMENTAL EN PERRO - R. Cabrera et al.

Tabla 1. Resultados de la infección experimental en perros, inoculados con larvas

L, de Anisakis physeteris (Tipo Il)

N? larvas
administradas Tiempo de Perros
Grupo Número infección infectados
experimental de 1ra. 2da. (horas)
perros dosis dosis

| (Control) 2 Placebo 72,0 -

1 1 15 - 155 -
1 11 20 36,0 .
11 1 8 - 42,0 +
1 12 - 42,0 +
IV 1 1 - 60,0 .
1 16 - 60,0 -

evolución se observó la penetración del extremo

Figura 1. Corte longitudinal del extremo anterior de la larva
L, de Anisakis physeteris. Nótese la invasión de la
submucosa gástrica con la reacción inflamatoria y exudación
de fibrina.
anterior del gusano hasta el nivel del ventrículo en
la submucosa del cuerpo del estómago, ocasio-
nando una severa reacción inflamatoria compues-
ta principalmente de neutrófilos y eosinófilos y
acompañada de macrófagos, eritrocitos
extravasados, linfocitos y una gran proliferación
de tejido conectivo fibroso embebido en el edema
(Figura 1). También se pudo identificar un foco de
fibrina tabicando el área inflamada, a manera de
malla reticulada.
En otro corte, se observó el gusano invadiendo
la mucosa, ocasionando una reacción inflamatoria
moderada compuesta por neutrófilos y eosinófilos
asociados a linfocitos, monocitos y algunas célu-
las plasmáticas embebidas en el edema; también
observamos que las células musculares de la
muscularis mucosae se vacuolizaron y que los va-
sos circundantes estaban dilatados.
A las 42 h de la invasión de la mucosa del
estómago por el parásito, se aprecia una severa
reacción inflamatoria, constituida, predominante-
mente, por eosinófilos y algunos neutrófilos, aso-
ciada a monocitos, linfocitos y tejido conectivo
fibroso denso embebido en el edema leve (Figura
2 y 3); en este caso, el extremo anterior de la
larva alcanza la submucosa y ocasiona una mo-
derada reacción inflamatoria discretamente
edematizada, constituida básicamente por
eosinófilos y neutrófilos, rodeados de tejido
conectivo fibroso (Figura 4).

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 ANISAKIOSIS EXPERIMENTAL EN PERRO - R. Cabrera et al.

cie de distribución mundial. De

acuerdo a Davey"”” existen 3 es-
pecies de Anisakis, pero sólo
los estadios larvarios de A.
simplex y A. physeteris se en-
cuentran en la mayoría de pe-
ces comerciales de la costa pe-
ruana.? *'
En el Perú, el «ceviche» es
un plato popular preparado a
base de carne de pescado ma-
rino macerado con zumo de li-
món y condimentado con es-
pecias que no afectan la viabi-
lidad de las larvas de los gusa-
nos presentes. En el Perú, que
se ha investigado la presencia
de anisakiosis en pobladores de
la costa, anotándose el hallaz-
go de 2 casos producidos por
larvas de Pseudoterranova
decipiens (= Ph. decipiens).?
Las larvas de A. physeteris
son patógenas para el perro,
conejos y ratas,? pero también
lo son para el hombre en el
Japón.** En el Hemisferio Sur
no se conocen casos de infec-
ción humana ni de estudios ex-
perimentales en animales con
larvas de A. physeteris; por esta
razón, el presente trabajo sería
el primer aporte en este senti-
do.
En relación a la invasión del
tracto digestivo de perros por
larvas de A. physeteris, se co-
noce que la penetración se rea-
liza a nivel del estómago y del
intestino; pero nosotros sólo
hemos observado la penetra-
ción a nivel de la mucosa del
cuerpo del estómago, ocasio-
Figura 3. Sección de la lesión anterior en mayor aumento, para mostrar la severa nando severa reacción
reacción inflamatoria con eosinófilos y algunos neutrófilos. Nótese la proliferación inflamatoria, con edema, ero-
de fibroblastos embebidos en el edema. sión, engrosamiento de los plie-
gues gástricos y leve hiperemia
debido a la invasión mecánica
DISCUSION del parásito; la hemorragia fue detectada
macroscópicamente a las 60 h de la infección con
Uno de los parasitismos producidos por la una sola larva.
ingestión de pescado marino insuficientemente co- En las infecciones humanas, se ha comproba-
cido o crudo es la anisakiosis, ocasionada princi- do la presencia de erosiones diseminadas y de
palmente por el estadio larval de A. simplex, espe- pequeñas manchas hemorrágicas en los lugares

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 ANISAKIOSIS EXPERIMENTAL EN PERRO - R. Cabrera et al.
Figura 4. Corte transversal del extremo anterior de la larva.
Nótese el esófago muscular, la musculatura polimiaria del
cuerpo, los cordones laterales y la reacción inflamatoria
alrededorde la larva.
de penetración.* * Nuestras observaciones en pe-
rros son similares a las anotadas para los huma-
nos, pero diferenciándose de ellas por la presen-
cia de edema y de engrosamiento de las plicas
gástricas, lo que evidencia la gran capacidad
los gusanos para penetrar en la mucosa gástrica
de los perros.
También observamos la eliminación de algu-
nas larvas en las materias fecales, como lo anota
otro autor pero en conejos;* este fenómeno se
debería a la hiperacidez del estómago o a otros
factores relacionados con la virulencia del parási-
to.
En relación a la patología microscópica, seña-
laremos que a las 36 h de la infección se observa
invasión múltiple con reacción inflamatoria que va
del grado moderado al severo y constituida princi-
palmente por neutrófilos y eosinófilos; sin embar-
go, es notable la presencia muy temprana de
fibroblastos, probablemente debido a la virulencia
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de la larva. A las 42 h de la inoculación, los cam-
bios fueron similares, pero los monocitos se
incrementaron en el caso de un perro infectado
con 1 larva. Debemos señalar, como un hallazgo
nuevo, la vacuolización de las células musculares
de la muscularis mucosae. Es probable que estas
lesiones hayan sido provocadas por la liberación
de enzimas proteolíticas, como se ha hipotetizado
en el caso de infección por larvas de A. simplex.'?
Nuestras observaciones sobre la patología
macroscópica y microscópica producidas por lar-
vas de A. physeteris en perros son semejantes a
las señaladas por diversos autores utilizando lar-
vas de A. simplex tanto en perros como en otros
animales.'* '* Nuestros hallazgos también se ase-
mejan a los descritos en humanos infectados con
A. simplex.' La exudación de fibrina en los perros
infectados con A. physeteris se debe a la lesión
vascular.
Frente al cuadro patológico observado, que con-
figura una afección subaguda, es destacable se-
ñalar la capacidad de las larvas de A. physeteris
del Hemisferio Sur de infectar a perros domésti-
cos, lo que permitiría considerarlas como poten-
ciales agentes infecciosos para el hombre, princi-
palmente de la costa peruana, porque entre sus
hábitos alimenticios está el de consumir regular-
mente pescado y calamares insuficientemente co-
cidos como fuente principal de proteínas y tam-
bién para otros animales que se alimentan con
vísceras o peces marinos.
RESUMEN
El propósito del presente estudio fue demostrar
de manera experimental la patogenicidad de las
larvas L, de Anisakis physeteris en el tracto diges-
tivo de Canis familiaris.
de Las larvas se colectaron de Scomber japonicus
«Caballa», capturados en las costas de Pisco, Perú.
Macroscópicamente, después de las 36, 42 y 60
horas de la infección se aprecia la mucosa gástrica
con engrosamiento de las plicas, edema e
hiperemia. Histológicamente se observa severa re-
acción inflamatoria gástrica mayormente confor-
mada por neutrófilos y eosinófilos asociados a
linfocitos, así como monocitos y plasmocitos. La
lesión se encuentra rodeada por gran cantidad de
tejido conectivo crónico. Estas características pa-
tológicas son similares a las descritas en la
anisakiosis gástrica humana. Consideramos que
A. physeteris es un potencial agente patógeno para
el hombre y otros animales que se alimentan con
pescado en el Perú.
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