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TESIS DE GRADO
AUTOR:
DIRECTOR DE TESIS:
GUAYAQUIL, ECUADOR
2017
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
CERTIFICACIÓN
_______________________________
Directora
ii
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
TESIS DE INVESTIGACIÓN
Tribunal de sustentación
Presidenta
Dra. Fabiola Mieles Soriano, MS.c MVZ. Chian Lee Gómez Yoza, MS.c
iii
Agradecimiento
iv
Dedicatoria
v
La investigación de tesis
presentada fue tomada de
citas bibliográficas, los
resultados, conclusiones y
recomendaciones son
derecho exclusivo del
autor.
vi
RESUMEN
vii
SUMARY
A total of 362 cattle were used as a total sampling for blood collection,
determining positive and negative animals by modified Romanowsky staining
observad with fine spleen blood smear, and microhematocrit was implemented
to know the hematocrit level of the animals, as a result the owner was
correlated to relate the environmental factors in which they indicated: number of
properties affected, location of buildings, Application of preventive medicine,
animals that presented ectoparasites, presence of vectors in farms, type of
farm affected, risk by vaccination, sudden deaths in farms and months with
higher mortality rate.
The statistical analysis used was chi square and cross tabulation tables
determining the presence of Trypanosoma spp and correlation of environmental
factors in Daule, a percentage of 3.9% bovine animals corresponding to 14
Trypanosoma spp positive animals was identified, as well as the number of
affected cattle ranchers, 8.34% that corresponds to 4 affected farms, the
evaluation of health conditions with hematocrit presented levels of 16% of
Hematocrit An unexpected range, there is correlation in the positive animals
that presented ectoparasite the rest of parameters has no statistical correlation
viii
ÍNDICE DE CONTENIDO
I INTRODUCCION ………………………………...…………………………….1
1.1 IMPORTANCIA O CARACTERIZACIÓN DEL TEMA……………....2
1.2 PLANTEAMIENTO DE LA SITUACIÓN PROBLEMÁTICA……......3
1.3 JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL ESTUDIO………………..3
1.4 DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA…….………….……………….….4
1.5 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA………….………………....….....5
1.6 OBJETIVOS…………………………………………………………......5
1.6.1 Objetivo General……………..………………………………….5
1.6.2 Objetivos Específicos………..…………………….……………5
1.7 Hipótesis…………………………………………………....…….…...…6
1.8 Aporte teórico……………………………………………..……...…......6
1.9 Aplicación Práctica…………………………………...….……………...7
II MARCO TEÓRICO……………………………...…...………………………...8
2.1 ESTADO DEL ARTE………………………………………...……..…8
2.2 BASE CIENTÍFICA Y TEÓRICAS DE LA TEMÁTICA……….....…9
2.2.1 Definición ………………….…………………….………....….9
2.2.2 Antecedentes Históricos…….……………….…………….....9
2.2.3 Tripanosoma en Ecuador……………………………………10
2.2.4 Etiología……………………………….………………………10
2.2.5 Clasificación Taxonómica………………………………...…11
2.2.6 Morfología………………………………………………….….11
2.2.7 Ciclo Biológico………………………………………………..12
2.2.8 Epidemiologia………………………………………………...13
2.2.9 Vías de Transmisión…………………………………………13
2.2.10 Vector………………………………………………………….13
2.2.11 Manifestaciones clínicas…………………………………….14
2.2.12 Diagnostico……………………………………………………15
2.2.12.1 Diagnostico Directo………………………….15
2.2.12.2 Diagnostico Indirecto………………………..16
2.2.13 Tratamiento……………………………………………………18
2.2.14 Control………………………………………………………....19
2.2.15 Prevención………………………………………..……….…..19
ix
3.2.2 Materiales y equipo……………………………………...…...21
3.2.3 Recursos humano………………………...……………….....21
3.2.4 Recursos económicos…………………………………….....22
3.3 Métodos…………………………………………………………………..22
3.3.1 Modalidad y tipo de investigación…………………………..22
3.3.2 Métodos ……………………………………………………....22
3.3.3 Variables…………………………………………...……….…22
3.3.4 Estadística descriptiva o inferencial…………….…………..22
3.3.5 Población y Muestra…………………………………............23
3.3.5.1 Población de Estudio…………..………………….....23
3.3.5.2 Tamaño de la muestra………..……………………...23
3.3.6 Técnicas………………………………………………...……..24
3.3.6.1 Recolección de muestras…………………………....24
3.3.6.2 Toma de muestra………………………………….....25
3.3.6.3 Tipo de prueba diagnóstica……………………….…25
3.3.6.4 Principio de la prueba………………………………..25
3.3.6.5 Procedimiento……………………………………......26
3.3.7 Cronograma de Actividades……………………...………….27
IV. RESULTADOS
4.1 Determinación de la Presencia de Tripanosoma spp en Bovinos del
Cantón Daule……………………………………..………………...………..28
4.2 Determinación de los Hatos Infestados relacionado con los animales
positivos en la Ganadería del Cantón Daule………………….………...28
4.3 Parámetros Sobre los Efectos de la Salud en Bovinos del Cantón
Daule………………………………………………...………………………..30
4.4 Factores Ambientales y Externos Relacionados a la Presencia de
Trypanosoma spp con los Animales Positivos……………………….......32
V. DISCUSIÓN…………………………………………………………………..36
VI. CONCLUSIONES y RECOMENDACIONES………………..………...…38
BIBLIOGRAFIA CITADA…………………………………………………….....40
ANEXOS…………………………………………………………………….......44
APENDICES………………………………………………………………….....46
x
ÍNDICE DE APENDICE
xi
INDICE DE ANEXOS
xii
Foto 16: Muestra de Sangre Recolectada………………………………………..70
Foto 17: Muestra de Sangre Recolectada………………………………………..71
Foto 18: Identificación de las muestras para su observación al microscopio...71
Foto 19: Rotulación de la placa cubre objeto…………………………………….72
Foto 20: Procesamiento del frotis sanguíneo………………………………….…72
Foto 21: Procesamiento del Microhematocrito…………………………………..73
Foto 22: Microcentrifugación de las muestras…………………………………...73
Foto 23: Resultado de la Microcentrifugación e Interpretación………………...74
Foto 24: Placas porta objeto de frotis sanguíneo………………………………..75
Foto 25: Observación de las muestras procesadas……………………………..75
Foto 26: Observación de Trypanosoma spp…………..……………………….76
xiii
I. INTRODUCCIÓN
Su llegada a Sur América y los primeros reportes fue en 1919 por Leger y
Vienne en las Guayana Francesa desde entonces se ha propagado en todo el
continente sur americano empezando su distribución por Brasil (Atias &
Neghme, 1984).
2
enmascaren la enfermedad, podría llevar un efecto de fármaco resistencia en
dichos animales.
3
natural en personas, generando dudas que puede conllevar a un posible
agente zoonotico hacia las personas pudiendo presentarse de forma accidental
(Desquesnes & de la Rocque, 1994).
4
Dentro del estudio se lograra obtener la presencia del mismo pero se
necesitará pruebas más específicas para lograr la identificación genética del
parasito de una misma manera pruebas complementarias para conocer las
alteraciones fisiológicas y el daño que causa la enfermedad a los principales
órganos funcionales y reproductivo.
Que puede pasar con los animales negativos que dentro del predio hayan
detectado positivos cuál será su repercusión y los niveles de protección que se
deberán tomar por parte de los propietarios.
1.6 OBJETIVOS
5
1.7 HIPÓTESIS
6
1.9 APLICACIÓN PRÁCTICA
7
II. MARCO TEÓRICO
Las pérdidas de producción neta se puede ver reflejada en los costó que
genera la recuperación de un animal pero se puede acortar gasto en base a la
prevención.
Los países que fueron identificados con Trypanosoma vivax por primera
vez fueron la Guayana Francesa en 1919, Venezuela 1920, Colombia 1931,
Surinam 1938, Panamá 1941, Guyana 1952, Brasil 1972, El Salvador 1977,
Costa Rica 1977, Ecuador, Perú y Paraguay en 1977 así como en Bolivia 1995,
a medida que pasa el tiempo se van implementando nuevas técnicas y
8
métodos de diagnóstico con mejor eficacia para la identificación de las
serovariedad que existen dentro de la especie Trypanosoma spp (Toure,
1976).
2.2.1 Definición
9
fases infectante en diferentes especies terrestres que a su vez se distribuyó en
América del Norte y Sur América se completó la evolución con los insectos el
cual afecta de manera prejudicial a los animales en la actualidad.
2.2.4 Etiología
10
rápido cuando se observa en fresco (Rodriguez Vivas, Quiñonez Avila, Ramirez
Cruz, & Ruiz Piña, 2003).
- Reino: Protista.
- Subreino: Protozoa.
- Phylum: Sarcomastigophora.
- Subphylum: Mastigophora.
- Orden: kinetoplastidae.
- Género: Trypanosoma.
2.2.6 Morfología
11
longitud y 1,5 a 3 micras de ancho depende de la especie (Sandoval, Espinoza,
& Valle, 1995).
12
2.2.8 Epidemiologia
2.2.10 Vector
13
Este tipo de díptero tiene la particularidad de buscar zonas como el cuello,
patas y abdomen del bovino, su aparato bucal está diseñado para atravesar su
piel en busca de un vaso sanguíneo para alimentarse, dentro de su cavidad
bucal su saliva es especializada en producir sustancias anticoagulante con el
fin de no bloquear la succión de sangre, el T. importus siendo de capacidad
más grande puede succionar hasta 700 mg de sangre dejando lesiones en la
piel después de la picadura (Desquesnes & de la Rocque, 1994).
En fase crónica donde los niveles de parasitemia son alto se presenta con
anemia y temperatura elevada, el desarrollo de la enfermedad se determina por
la frecuencia e intensidad de la parasitemia (Campo & Hincapié, 2003).
14
En la fase Subclínica se suelen presentar con manifestaciones en pérdida
del apetito, disminución de su producción, letargia y aumento de la temperatura
corporal, que suelen ir recuperándose lentamente pero siempre recaen a la
sintomatología inicial (Gugliemone, 1991).
2.2.12 Diagnóstico
15
Extensión Gruesa de Sangre:
Técnica usada por (Woo 1971) donde se utiliza dos vías la periférica y la
central se obtiene mejor resultado en la periférica debido a la muestra obtenida
en la punta de la cola o de la vena de la oreja siendo la circulaciones menores
y de muy poca presión los tripanosomas suelen tener mayor presencia, para su
elaboración se utiliza un tubo de microhematocrito con 70 microlitros de sangre
centrifugando a 5 000 o 9 000 rpm durante 5 minutos observando la separación
de los diferentes estratos celulares y valorando el Buffy Coat separación blanca
(OIE, 2004).
16
Intercambio de Aniones:
Cultivo in-vitro:
Inoculación de Animales:
Utiliza como principal material biológico los roedores que resultan ser no
conveniente por el nivel de logística utilizada económicamente, se utiliza más
para T cogolense debido a que la cepa de T vivax no afecta a roedores (OIE,
2004).
Amplificación de ADN:
Inmunofluorescencia Indirecta:
17
Las técnicas mencionadas se confrontan con valores hematológicos o
enzimáticos para valorar las condiciones de salud de cada individuo y las
posibilidades en recuperación (Ganadero, 2015).
2.2.13 Tratamiento
18
2.2.14 Control
2.2.15 Prevención
19
III. ASPECTOS METODOLÓGICOS
Norte limita con Santa Lucia, Sur con Guayaquil, Este con Salitre y
Samborondón y Oeste con lomas de Sargentillo e Isidro Ayora.
3.2 MATERIALES
20
3.2.2 Materiales y Equipo
Toma de Muestra:
Materiales de Laboratorio:
Otros Materiales
- Cuaderno - Folders
- Hojas A4 - Cámara Fotográfica
- Encuesta - Laptop
- Reloj Alarma
21
3.2.4 Recursos Económicos
3.3 MÉTODOS
3.3.2 Métodos
3.3.3 Variables
22
Para determinar la presencia de tripomastigote en bovinos se efectuó la
siguiente formula:
Determinaremos:
Se tomó como base del estudio 5 asociaciones, se estima que por cada
asociación hay 60 socios, para lo cual se estima que la población de socios del
estudio será de 300, generando un promedio de 21 bovinos por cada socio,
esto nos dará un número de 6 300 bovinos a muestrear.
23
La cantidad de 6300 bovino será tomada como universo.
(N-1) e2 + Z2PQ
Datos
N= Tamaño de Población.
P= 0,5
Q= 0,5
Resolver:
3.3.6 Técnicas
24
Para la recolección de la muestra se utilizó venopunción en vena
coccígea o en la vena yugular, previa asepsia de la zona a venopunción, con
un sistema de tubo colector el cual consiste en tubo de flebotomía y aplicación,
realizando la extracción de la sangre mediante llenado al vacío.
25
presencia de Trypanosoma spp después de realizar la valoración del tubo
micro capilar (Voigt, 2003).
3.3.6.5 Procedimiento
Una vez que se obtienen las muestras de sangre con EDTA se procederá
a transportarla bajo normas de bioseguridad y condiciones ideales para la
transportación de material biológico hacia el laboratorio, llegando al laboratorio
se realizaría el correspondiente frotis sanguíneo de gota gruesa esperando
alrededor de 1 a 2 minutos para que se fije el material biológico en una placa
porta objeto.
26
Para realizar la tinción Romanowsky modificada se deberá tener en
consideración los siguientes pasos y respetar los tiempos, para no generar
artefactos al momento de la visualización de la placa:
1.- Preparar la placa cubre objeto con un frotis sanguíneo y dejar secar
al aire (Borrás Múrcia, 2012).
27
IV. RESULTADOS
Animales Muestreados
Animales Porcentaje Porcentaje
válido
Positivo 14 3,9 3,9
Negativo 348 96,1 96,1
Total 362 100 100
Hatos % de Hatos
Positivos 4 8,34 %
Negativos 44 91, 66%
28
Análisis: Dentro del estudio se consideró 48 predios de 5 asociaciones
que se eligió de forma participativa para el desarrollo de la investigación, se
descubrió 4 predios positivos representando un 8 % y 92% de haciendas
negativas como se lo muestra en anexo grafico 2.
29
4.3 Parámetros sobre los Efectos de Salud en Bovinos del Cantón
Daule.
Animales Muestreados
Positivo Negativo
% de Normal 24-46 4 291
Hematocrito 1,1% 80,4%
Anemia < 23 10 56
2,8% 15,5%
Total 14 348
3,9% 96,1%
30
Tabla 11: Muertes Repentinas Asociados al Tiempo de Atención Medica
Hacia Los Animales Enfermos y Ausencia de Alimentación.
31
4.4 Factores Ambientales y Externos Relacionados a la Presencia de
Trypanosoma spp con los Animales Positivos.
32
Tabla 13: Sistema de Producción Positivo a Trypanosoma spp.
Sistema de Producción
Positivo Negativo
Carne 0 25 7,2 %
Leche 0 21 6%
Doble Propósito
14 302 86,8%
Total 14 348 362
3,9% 96,1 % 100%
Animales Total
Muestreados
Positivos Negativos
Realiza Control Si 4 248 252
Ectoparásito 69,6%
No 10 100 110
30,4%
34
fumigación de potreros debido a donde pastorean los animales es más
pequeño que en las otras haciendas, se le pregunto qué tipo de fármacos
utilizaban encontrando Cipermetrina, Deltrametrina, Amitraz, Etión,
Clorfenvinfos y Fipronil los fármacos más usado para el control de
ectoparásitos.
Tábanos en Total
Predio
Si No
Meses con Enero a Marzo 0 3 3
Problema con 6,3%
Presencia de Abril a Junio 4 9 13
Moscas 27%
Julio a 9 13 22
Septiembre 45,8%
Octubre a 5 5 10
Diciembre 20,9%
Total 18 30 48
37,5% 62,5% 100%
Fuente: Investigación de Campo.
35
V. DISCUSIÓN
36
intercambio de gases a nivel pulmonar en el organismo, hay cierta cantidad de
animales que generan resistencia a la enfermedad pero en la su mayoría
muere un 60 o 70 % de los animales que no reciben tratamiento indicado o
esperan la recuperación voluntaria de los animales esto lo indica (Quispe A,
2013).
Mediante la encuesta relaciona con los factores que pueden incidir con la
presencia del hemoparásito es el uso de drogas indiscriminada en los
animales, (Suàrez, y otros, 2013) presenta un riesgo potencial dentro de ellos
se evidencia la frecuencia con la que se aplica teniendo relación con dicho
estudio se manifiesta los mismo inconvenientes por parte de los propietarios de
las haciendas.
37
VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
CONCLUSIONES
38
RECOMENDACIONES
39
BIBLIOGRAFÍA CITADA
40
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43
ANEXOS
44
Anexo 2: Identificación de Trypanosoma vivax
Fuente: http://www.ilri.org/InfoServ/Webpub/Fulldocs/Ilrad89/Trypano.htm
Anexo 3: Ciclo Biológico.
Fuente: http://www.vet.uga.edu/VPP/clerk/womack/index.php
45
APÉNDICE
46
Tabla 2: Variables Independientes.
47
Tabla 3: Encuesta Realizada.
Formato de encuesta relacionado con la salud y factores ambientales predisponente a Trypanosoma
spp.
48
Tabla 5: Cronograma de Actividades.
Octubre Noviembre
Mes Diciembre 2016
Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 5 1 2
Actividades
Aceptación del Estudio x x
Toma de Muestra La
Resistencia Toma de Muestra
Los Lojas x x x
Toma de Muestra Los
Ángeles
Toma de Muestra La Beldaca x x x x x x
Toma de Muestra Bramadero
Toma de Muestra Las
Maravillas x x x x x x
Toma de Muestra Tintal
Toma de Muestra Juan
Bautista Aguirre x x x x x x x x
Análisis e Interpretación de
Resultados x x x x x x x x x x
49
Tabla 18: Chi cuadrado de Haciendas infestadas.
Pruebas de chi-cuadrado
Chi-cuadrado de 362,000
a 1 ,000
Pearson
Corrección de
335,602 1 ,000
continuidadb
Razón de
118,524 1 ,000
verosimilitud
Prueba exacta de
,000 ,000
Fisher
Hematocrito
N Válido 362
Perdidos 0
Media 28,00
Moda 24
Mínima 16
Máxima 49
Mediana 28,00
50
Suma 10135
Percentiles 25 24,00
75 32,00
Pruebas de chi-cuadrado
Valor gl Sig. Significac Significac
asintótica ión ión
(2 caras) exacta (2 exacta (1
caras) cara)
Chi-cuadrado de 11,59 1 ,001
Pearson 7 a
51
Tabla 21: Chi cuadrado Presencia de Tábanos spp y control de
Ectoparásitos.
Pruebas de chi-cuadrado
Valo gl Sig. Signific Signific
r asintótic ación ación
a (2 exacta exacta
caras) (2 (1 cara)
caras)
Chi-cuadrado 1,65 1 3
de Pearson 4 a
Corrección de ,000 1 0
continuidadb
Razón de 2,64 1 3
verosimilitud 9
Prueba exacta 1,000 ,662
de Fisher
Asociación ,192 1 1
lineal por lineal
N de casos 48
válidos
a. 1 casillas (25,0%) han esperado un recuento menor que 5. El
recuento mínimo esperado es 3,00.
52
Tabla 22: Listado de Propietarios y Localización de Predios
53
Asociación Agrícola Ganadera Daule-Salitre
Correa Pedro Juan Bautista Aguirre
Navarrete Luis Juan Bautista Aguirre
Diógenes Gallardo Juan Bautista Aguirre
Camba Vicente Las Maravillas
Víctor Castro Las Maravillas
Martillo Melvin Juan Bautista Aguirre
Briones Tulio Juan Bautista Aguirre
Figueroa Tulio Los Lojas
Moran Yimmy La Marina
Briones Galo Juan Bautista Aguirre
Martínez Jacinto Juan Bautista Aguirre
Lozano Tito Los Lojas
Martillo Raquel Juan Bautista Aguirre
Vera Carmen Juan Bautista Aguirre
54
Anexo
Bovinos
4%
96%
Positivos Negativos
Haciendas
8%
92%
Positivas Negativas
Hematocrito
18%
82%
Normal Anemia
Muertes Repentinas
15%
85%
Si No
56
Grafico 5: Muertes repentinas asociadas con reacción de animales enfermos y
ausencia de alimentación
17%
23% 60%
Presentacion de Ectoparàsito
30%
70%
Presente Ausente
57
Grafico 7: Sistema de Producción Positivo a Trypanosoma spp.
Sistemas de Produccion
7%
6%
87%
CONTROL DE ECTOPARÀSITO
30%
70%
Si No
58
Grafico 10: Método de Control Aplicado en ectoparásito.
Control de Ectoparasito
19%
81%
Medicina Aplicada
4%
13%
4%
79%
59
Grafico 12: Meses con Presencias de Moscas
6%
21%
27%
46%
60
Foto 2: Selección de Bovinos en Los Ángeles.
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Foto 3: Selección de Bovinos Juan Bautista Aguirre.
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Foto 5: Método de Sujeción
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Foto 7: Recolección de Muestras de Sangre.
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Foto 9: Recolección de Muestras de Sangre.
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Foto 15: Materiales de Laboratorio.
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Foto 17: Muestra de Sangre Recolectada.
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Foto 21: Procesamiento del Microhematocrito.
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Foto 23: Resultado de la Microcentrifugación e Interpretación.
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Foto 24: Placas porta objeto de frotis sanguíneo.
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Fuente: Nicolás Garcia 2017.
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Fuente: Nicolás Garcia 2017.
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Fuente: Nicolás Garcia 2017.
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