UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGÍA DELOS RECURSOS NATURALES

BIOTECNOLOGÍA ANIMAL

ANIMALES TRASGÉNICOS

Desde el principio de los tiempos, el hombre ha intentado modificar las características de los
animales domésticos intentando incrementar aquellas que mejoraban sus condiciones como
animales de compañía, de producción, de trabajo o de abasto, mediante la selección de los más
aptos y el cruzamiento de los ejemplares que presentaban mejores características: mayor
producción de leche o carne o más fuerza y resistencia. Se seleccionaban aquellos ejemplares con
características deseables, apareándolos entre sí y con su descendencia, para perpetuar los rasgos
de interés, recurriendo al mestizaje cuando se advertía la aparición de características fenotípicas
indeseadas debido a la consanguinidad (Basrur & King, 2005).

Hoy en día, gracias a la reproducción asistida y a la biotecnología, se planifican y dirigen los

procesos reproductivos, se transmiten los rasgos deseados y se acelera la mejora genética. El
intervalo intergeneracional puede reducirse sensiblemente gracias a la combinación de la
inseminación artificial, que es la más antigua y utilizada de las técnicas de reproducción asistida,
con las técnicas más recientes como son: el estro sincronizado, la superovulación, la extracción
de óvulos de hembras sexualmente inmaduras aun fuera de la época de cría, o la producción de
embriones “in vitro” y la transferencia de embriones (Park, 2007). Además, es posible seleccionar
el sexo de la progenie con semen sexado para la inseminación; se puede realizar la selección
genética de individuos mediante marcadores moleculares asociados a caracteres de interés.
También se puede modificar el genoma de los organismos: introduciendo genes de interés
(organismos transgénicos); modificando los genes (organismos transgénicos “knockins”); o
eliminando o silenciando genes concretos (organismos transgénicos “knockouts”). Y se puede
llevar a cabo la clonación de animales por transferencia nuclear de células somáticas, germinales
o embrionarias (Smith & Heald, 2014).

HISTORIA

A partir de las experiencias de Gordon, Ruddle y colaboradores iniciadas en 1980 en las que
inyectaron ADN de ratón en uno de los pronúcleos de un cigoto de la misma especie, se inició
una nueva era en la manipulación genética de embriones de mamíferos. Al año siguiente,
demostraban la integración y transmisión estable a través de la línea germinal de genes inyectados
en pronúcleos de cigotos de ratón obtenidos por fecundación in vitro (Gordon & Ruddle, 1981).
Eran los primeros ratones transgénicos. El paso siguiente consistió en probar que también se
podían obtener ratones transgénicos que incorporaran en su genoma un gen (transgén) de otra
especie. Así, obtuvieron ratones transgénicos gigantes al inyectar en el pronúcleo de un cigoto el
gen de la rata que codifica para la hormona del crecimiernto. Incluso, se obtuvieron también
ratones transgénicos gigantes cuando el transgén introducido era el gen humano que codifica para
la hormona de crecimiento (Palmiter & Brinster, 1982).
El ratón transgénico, que lleva incorporado el gen de la hormona de crecimiento de la rata, tiene
un aumento de tamaño del 80% en comparación con un ratón normal. Como era de esperar, a los
ratones transgénicos siguieron los conejos, ovejas y cerdos transgénicos a los que se les había
introducido por microinyección en uno de los pronúcleos del cigoto el ADN del gen humano que
codifica para la hormona de crecimiento, en un intento de aumentar el tamaño de tales animales
(Gordon & Ruddle, 1981)Sin embargo, este avance científico no tuvo aplicación zootécnica
porque la presencia del transgén modifica la fisiología del animal transgénico, produciendo
efectos colaterales perjudiciales para su desarrollo. De cualquier manera, la era de la trangénesis
animal había comenzado como una realidad imparable.

Cerdo transgénico que lleva incorporado el gen humano de la hormona del crecimiento. Su
desarrollo presentaba trastornos fisiológicos importantes (Cummings, 1995).

AÑO EVENTO
1938 Experimento de transferencia nuclear
1949 Embriones de ratón en cultivo in vitro
1961 Ratones quiméricos agregando embriones
1966 Técnica de microinyección de embriones de ratón
Primeros ratones transgénicos por microinyección de ADN en
1980
el pronúcleo de cigotos de ratón
Animales de granja transgénicos (conejos, ovejas, cerdos) con
1985
el transgén de la hormona del crecimiento humano
Ovejas transgénicas con el gen humano del factor IX de
1989 coagulación de la sangre mediante microinyección de ADN en
el pronúcleo del cigoto
1993 Ratones quiméricos por co-cultivo de embriones
Ovejas clónicas por transferencia nuclear de células
1997
diferenciadas fetales y adultas en cultivo
1999 Cabras transgénicas por transferencia nuclear

USOS

APLICACIONES EN BIOMEDICINA

Desarrollo de modelos animales para el estudio de enfermedades humanas

La aplicación de la tecnología transgénica ha sido particularmente útil para el examen de la

importancia de la expresión de determinados genes en la etiopatogenia de gran número de
enfermedades (Melo, Cavanavessi, Franco, & Rumpf, 2007).

Utilización de animales modificados genéticamente como donantes de órganos para

humanos: xenotrasplantes.

La posibilidad de recurrir a especies animales como donantes de órganos se planteó hace ya

muchos años. De hecho, entre los años 1964 y 1995, se realizaron 32 xenotrasplantes de riñón,
corazón, hígado y médula ósea procedentes mayoritariamente de chimpancé y mandril, con un
resultado negativo en todos los casos (Bacci, 2007).

Utilización de animales transgénicos en terapia génica

Los experimentos de terapia génica que utilizan animales tienen tres objetivos generales:
conocer la fiabilidad y seguridad de los vectores, estudiar la eficacia de la transferencia de los
genes problema y ensayar nuevas terapias para curar la enfermedad (Niemann & Kues, 2007).

APLICACIONES EN INDUSTRIA FARMACÉUTICA

Realización de ensayos farmacológicos y toxicológicos utilizando animales modificados
genéticamente

Se han diseñado roedores transgénicos sensibles a toxinas medioambientales que son capaces de
evaluar la seguridad de medicamentos, productos o materiales mucho más rápidamente que los
ancestros de los que provienen. Este tipo de pruebas pueden realizarse con un número mucho
menor de animales porque la presencia del transgén mejora la eficacia (Wheeler, Walters, &
Clark, 2003).

APLICACIONES EN ZOOTECNIA

Cambios en la composición de la leche

Los avances en la tecnología del DNA recombinante han permitido cambiar la composición de la
leche introduciendo proteínas totalmente nuevas. Estos cambios pueden aumentar las
posibilidades de utilización de la leche e incrementar su valor (Bacci, 2007).

Modificación de los índices de crecimiento y de la composición de la canal

En cerdos se han realizado esfuerzos para mejorar su crecimiento y variar la composición de su

carne mediante la adición de transgenes: un estudio de expresión en músculo de un gen factor de
crecimiento “insulina-like” exógeno demostró una significativa reducción de la grasa y un
incremento del músculo magro; en otro estudio, un gen exógeno de la hormona del crecimiento
produjo un incremento de la ganancia de peso, mejoró la eficiencia en la alimentación y redujo el
grosor de la grasa dorsal (Wheeler, Walters, & Clark, 2003).

Animales resistentes a enfermedades

La aplicación de la transgénesis para regular aspectos definidos del sistema inmunológico puede
proporcionar oportunidades para diseñar, por ingeniería genética, ganado con mayor resistencia a
las enfermedades (Melo, Cavanavessi, Franco, & Rumpf, 2007).

TÉCNICAS DE OBTENCIÓN DE ANIMALES TRASGÉNICOS

Para la obtención de animales transgénicos se han llevado a cabo varios métodos, entre los cuales
se pueden citar:

1. MICROINYECCIÓN DE ADN EN PRONÚCLEO O EN CITOPLASMA DE

CIGOTO (ÓVULO FECUNDADO)

En esta técnica, la introducción del transgén se realiza mediante la microinyección de esta

construcción de DNA en el pronúcleo de un ovocito fertilizado. El procedimiento sería el
siguiente (Peñaranda & Asensio, 2014):

1. Se extraen óvulos de hembras en las que se ha inducido una superovulación y han sido
fertilizadas “in vivo”, o bien se fertilizan posteriormente “in vitro”.
2. Utilizando un microscopio, con una micropipeta, se inmoviliza el óvulo fecundado y se
inyecta en uno de sus pronúcleos una solución que contiene muchas copias del transgén.
3. Posteriormente, estos óvulos fecundados y microinyectados se introducen en madres
receptoras, previamente sincronizadas hormonalmente, para gestarlos, aplicando la
técnica de la transferencia de embriones.
4. Finalmente, los recién nacidos son examinados para ver si en ellos se ha producido la
incorporación del transgén.
La microinyección es un método para generar animales transgénicos muy ineficiente, debido a
que conlleva la integración aleatoria del gen foráneo en el genoma receptor con las siguientes
consecuencias (Peñaranda & Asensio, 2014):

• El transgén se introduce en el genoma receptor de forma aleatoria, por lo que sólo en un

pequeño porcentaje se sitúa en el lugar adecuado para conseguir una buena expresión en
el animal transgénico.
• No todos los animales que nacen han incorporado a su genoma el transgén (no son
transgénicos, por tanto).
• El gen exógeno puede insertarse en un lugar erróneo, por ejemplo en medio de un gen del
genoma receptor, interrumpiéndolo y causando su mutación y, con ello, la muerte del
embrión o alteraciones en el animal transgénico nacido.
• Se produce un patrón variable de expresión del gen exógeno en la progenie transgénica,
a menudo en mosaico.

2. MICROINYECCIÓN DEL ADN EN CÉLULAS EMBRIONARIAS

Esta técnica requiere de infraestructura, equipamiento y personal debidamente entrenado para su

realización, lo cual aumenta significativamente los costos. La microinyección de embriones de
especies de mamíferos, anfibios y peces se ha constituido en una forma útil de probar
construcciones genéticas directamente en los embriones y en algunas estirpes celulares derivadas
de ellos (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

El organismo adulto será una quimera ya que no todas las células incorporan el nuevo gen.
Entonces, se utilizarán solo los animales que tengan el gen en sus gametas y por lo tanto lo
transmitan a su descendencia. Esta técnica es más fácil y eficiente que la anterior a pesar de que
se descarten animales (PQBio, 2007).

El gen que se inserta está dentro del plásmido de una bacteria E. coli, se introduce todo el plásmido
(con el gen de interés y con otras secuencias del plásmido) y una vez dentro del núcleo de la célula
el ADN se integra al material genético del animal (PQBio, 2007).

3. ELECTROPORACIÓN DE CIGOTO

La electroporación es una técnica que se basa en la aplicación de un elevado voltaje a las células
durante un periodo de tiempo muy corto. Durante ese tiempo las células (en este caso los cigotos)
despolarizan sus membranas y se forman pequeños orificios por los que penetran las moléculas
de ADN que se encuentran alrededor. La ventaja de esta técnica es que se aplica a varios cigotos
a la vez y habitualmente se obtienen eficiencias de entrada del ADN del 100%. Es una técnica
que requiere su ajuste fino para cada tipo celular, a fin de determinar las condiciones óptimas de
duración y potencia del pulso. Se busca siempre el mejor equilibrio entre las condiciones que
aseguran la entrada en la célula y las que maximizan la viabilidad celular. La eficiencia de la
transfección por electroporación esta mediada por una serie de factores como la magnitud del
campo eléctrico aplicado, la duración del pulso eléctrico, la temperatura, la concentración, el tipo
de ADN y la composición iónica del medio (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

La electroporación se ha usado para transferir ADN foráneo a espermatozoides bovinos para su

uso en transgénesis mediante inseminación artificial. A partir de 1986, la electroporación se ha
empleado como el método de elección para la transfección de células embrionarias totipotentes
(embryonic stem cells ES) tanto en experimentos de gene knock-out, como de reemplazamiento
alélico y recombinación de homólogos (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).
En términos generales la mayor desventaja de la electroporación es su costo, ya que la mayoría
de los equipos comercialmente disponibles (electroporadores) y los accesorios como cubetas y
adaptadores tienen un precio elevado (Universidad Nacional Abierta y a Distancia, 2015).

4. TRANSFECCIÓN DE CÉLULAS TOTIPOTENTES

Las células Totipotentes son aquellas células no germinales pero con capacidad de desarrollarse
en determinadas condiciones, pudiendo dar lugar a la formación de quimeras, integrando órganos
y tejidos del embrión y del individuo adulto. Hasta hace poco el factor limitante de esta estrategia
era la necesidad de contar con una línea celular para cada especie cuyo genoma se quisiera
manipular.

La gran ventaja de las células totipotentes, es que, como en cualquier línea celular, la introducción
de un gen es más sencilla, así como el saber si el gen se expresa y en qué proporción.
El transgen puede ser incorporado a la célula por microinyección, por electroporación o por
transfección, estos dos últimos sistemas son algo menos costosas. En todos los casos es posible
aislar a aquellas células transformadas utilizando marcadores de resistencia a algún agente
exógeno llegando a obtener una línea celular transformada y capaz de expresar la nueva
información genética.

La inclusión de células de esta línea en el blastosisto se hace por microinyección en el blastocele

de las células aisladas del cultivo, dirigiendo la aguja hacia la masa celular interna del embrión.
Es preciso remarcar que el individuo nacido de un blastocisto microinyectado con células
totipotentes no es transgénico, es una quimera, su descendencia sólo será transgénica si alguna de
las células microinyectadas, al colonizar la masa celular interna del embrión fue capaz de formar
la línea germinal (Muñoz, 2009).

5. TRANSFERENCIA DE DNA EXÓGENO MEDIADA POR ESPERMA

DURANTE LA FERTILIZACIÓN (SMGT, “SPERMMEDIATED GENE
TRANSFER”).

Desde hace casi dos décadas, el uso de los espermatozoides como vectores de ADN exógeno
(transgénesis mediada por espermatozoides: SMGT) ha centrado la atención de numerosos
investigadores en un continuo debate sobre la transgénesis animal.
En 1989 se demostró la capacidad que tenían los espermatozoides de ratón, de transportar ADN
exógeno y transferir estas moléculas al interior del ovocito en el proceso de la fecundación, dando
lugar a animales modificados genéticamente. De tal manera, la transgénesis mediada por
espermatozoides, debido a su relativa sencillez y bajo costo, podría ser ampliamente utilizada para
la producción de animales de granja modificados genéticamente, representando una potente
herramienta para la biomedicina. Dicha metodología mejora notablemente la eficiencia que se
alcanza al emplear la microinyección pronuclear (0,5-4% de eficiencia), ya que se han obtenido
resultados muy esperanzadores próximos a un 80% de animales transgénicos obtenidos.

Sin embargo, las dificultades en la repetitividad y la baja eficiencia en la integración de los

transgenes en el genoma del animal obtenida con esta tecnología, resultó en una considerable
controversia sobre dicho trabajo durante numerosos años. No obstante, son varios los estudios
que han sido publicados recientemente en los que se confirma que, los espermatozoides de
múltiples especies pueden ser usados como vectores para introducir transgenes dentro del genoma
del animal.

En la especie porcina (Sus scrofa) doméstica, se ha utilizado con éxito esta técnica para producir
cerdos transgénicos mediante el uso de la inseminación artificial (IA), o mediante el uso de
transferencia de embriones producidos mediante la inyección intracitoplásmica de
espermatozoides (ICSI). La aplicación de IA intrauterina permite el uso de un número reducido
de espermatozoides al depositar los espermatozoides próximos al lugar de fecundación y evitar el
proceso de transporte espermático que se produce a través del tracto reproductor femenino cuando
se realiza una IA convencional. La calidad seminal de la muestra determina la capacidad de
fecundar los ovocitos y producir embriones viables, por tanto es necesario asegurar, como paso
previo, que la incubación de los espermatozoides en presencia de ADN no afecte sustancialmente
la calidad seminal.

Pasos para obtener el transgénico:

• Seleccionar al donador de semen de fertilidad probada

• Mantenerlo en habitáculos con temperatura controlada (25°) y bajo condiciones naturales
de luz y humedad
• Diluir y lavar los espermatozoides con SFM (Swine Fertilization Medium) y posterior
evaluación de la calidad seminal
• Selección y construcción del gen de interés a ser transferido
• Transferencia del gen al los espermatozoides
• Inseminación intrauterina a la hembra

6. VECTORES VIRALES

Un método alternativo es la transgénesis viral: el uso de virus recombinantes para introducir genes
en el embrión. Los vectores retrovirales han sido estudiados extensamente para terapia génica
humana. Estos vectores han demostrado transferir eficientemente genes en embriones murinos,
bovinos y porcinos. Sin embargo, los retrovirus están sometidos a modificación epigenética y la
expresión retroviral se corta durante la embriogénesis o es breve después del nacimiento.

En animales de granja, la eficiencia de la transgénesis con vectores lentivirales es 50 veces

superior a la que se consigue con la microinyección pronuclear de DNA. Su mayor limitación es
que no pueden transportar transgenes con más de 8-9 kb de DNA y, además, los sitios en los que
se produce su integración de forma preferente son regiones codificantes de los genes de las células
que infectan.

El procedimiento podría ser así: embriones pre-implantación son expuestos “in vitro” a soluciones
concentradas de virus recombinantes (virus a los que previamente se les ha introducido el gen de
interés), o son incubados sobre una monocapa de células infectadas con estos virus. A
continuación de la exposición a los virus, los embriones infectados “in vitro” son transferidos a
hembras receptoras para completar la gestación (Narbón, 2008).

Las partículas virales silvestres no se pueden emplear directamente como vectores de expresión,
es necesario convertirlos en virus deficientes en su replicación dentro de la célula diana. De esta
forma, el vector viral sólo se podrá multiplicar en las células de empaquetamiento, que son líneas
celulares modificadas que tienen la propiedad de ensamblar a los virus y producir partículas
virales que poseen los genes que codifican para las proteínas virales y para el gen de interés. Los
virus recombinantes son estructuras capaces de transferir material genético a una célula diana.

El uso de la tecnología del ADN recombinante junto con el conocimiento del genoma viral, ha
permitido generar viriones con capacidad de infectar y transferir su material genético (transfectar),
pero incapaces de replicarse bajo condiciones especificas. Los virus recombinantes son la
herramienta más eficiente en la transgénesis, permiten sobre expresar proteínas en células
humanas y como consecuencia se pueden obtener proteínas recombinantes con un procesamiento
postraduccional adecuado. Entre los virus recombinantes con aplicaciones en transgénesis se
encuentran los adenovirus, los retrovirus, los virus adeno asociados, los lentivirus, además de
otros ADN o ARN virus (Narbón, 2008)
Proceso de transgénesis por vectores virales

• Seleccionar el virus recombinante

• Sustituir los genes que producen la muerte
• Genes importantes en el ciclo viral
• Extraer los embriones de la hembra de unos 2 días post-coito
• Cultivarlos en placas
• Incluir en las placas los virus recombinantes
• Transferir el embrión infectado a la hembra.
• La transmisión del transgén sólo es posible si el retrovirus se integra en algunas de las
células germinales

7. TRANSFERENCIA NUCLEAR

En la transferencia nuclear (NT) se utiliza el núcleo de una célula procedente del animal que
queremos clonar para introducirlo en un ovocito receptor previamente enucleado. Este ovocito se
activa eléctricamente, o por otros métodos, para que reprograme al núcleo y éste comience la
generación de un embrión que tendrá un 98-99% de la información genética procedente del núcleo
del animal a clonar y un 1-2% procedente del DNA contenido en las mitocondrias y otras
organelas presentes en el citoplasma del óvulo receptor. Consecuentemente, el organismo
resultante no será un clon exacto del animal donante del núcleo. (Peñaranda & Asensio, 2014)

Durante el desarrollo, el contenido genético de cada célula se mantiene, con unas pocas
excepciones, idéntico al que tenía el cigoto. Por lo tanto, las células diferenciadas (adultas) poseen
en su núcleo toda la información necesaria para generar un organismo completo. Esto es lo que
se conoce como totipotencia nuclear. En sus inicios, la transferencia nuclear (NT) se desarrolló
como un medio de comprobar, de forma experimental, este concepto de totipotencia, mediante la
clonación de animales a partir de células adultas. Los núcleos de estas células adultas se
reprograman con la información que hay en el citoplasma del ovocito, de manera que se silencian
algunos genes y comienzan a funcionar otros, produciéndose la parada de la fase adulta para
encenderse la embrionaria. Esta reprogramación permite que las células donantes de los núcleos
para la NT puedan ser fetales, embrionarias o somáticas. (Peñaranda & Asensio, 2014)
Como es posible obtener un número ilimitado de células somáticas a partir de un animal, la
clonación constituye una tecnología que puede ser utilizada para la producción de un gran número
de animales genéticamente idénticos entre sí (clonación reproductiva), aunque difieran en algo de
su progenitor donante del núcleo. Muchos animales de granja, tales como vacas, cerdos y ovejas,
han sido clonados de forma satisfactoria utilizando esta técnica. La oveja Dolly, en 1996, fue el
primer animal clonado a partir de una célula somática adulta (célula de la glándula mamaria de
una oveja de 6 años. (Peñaranda & Asensio, 2014)

Las líneas celulares obtenidas a partir de células somáticas permiten la manipulación de los
genomas de los animales de granja “in vitro”, lo cual permite crear células transgénicas de ovejas,
cerdos y vacas cuyos núcleos, posteriormente, pueden ser transferidos a un ovocito enucleado
para generar un animal transgénico mediante transferencia nuclear: clonación a partir de una
célula transgénica. Polly es la primera oveja transgénica producida por transferencia nuclear. Fue
generada a partir de fibroblastos fetales que fueron previamente modificados genéticamente
mediante la adición del gen humano que codifica el factor IX de coagulación, introducido en un
vector que portaba un promotor que dirigía la expresión a la glándula mamaria. Polly excretaba
el factor IX de coagulación humano en su leche.
Por otra parte, si un embrión obtenido por NT de células somáticas se detiene en fase de
blastocisto y de él se obtienen células ES, éstas pueden cultivarse “in vitro” para diferentes usos
potenciales (clonación terapéutica): terapias de reemplazo y regeneración celular; investigación
médica; e, incluso, se puede realizar la modificación genética de estas células ES para corregir un
defecto genético del individuo donante. (Peñaranda & Asensio, 2014)
 8. TRANSFECCION DE GAMETOS

Se comentan algunos aspectos sobre la transfección de gametos y su empleo para la producción

de animales transgénicos (AT). Para la transfección de gametos han sido empleados ADN
desnudo, vectores virales, complejos ADN-Liposomas, electroporación, o microproyectiles de
alta velocidad. En general, se han obtenido altos porcentajes de transfección (hasta del 80% en
espermatozoides) y se ha observado que los transgenes se localizan en el interior del núcleo. Se
ha constatado que los gametos están naturalmente protegidos frente a la entrada de genes extraños:
en espermatozoides esta función la cumplen diversas proteínas presentes en los fluidos seminales
o en su membrana plasmática; mientras que en los gametos femeninos son las envolturas del
huevo (zona pelúcida en mamíferos o membrana perivitelina en moluscos) las que desarrollan
esta labor. En muchos casos, los gametos transfectados se han utilizado en fecundaciones in vitro
o en inseminaciones a fin de crear AT. En algunos casos, los porcentajes de estos AT han sido
altos, como en el salmón (85%). Pero los AT, así creados, han sido en su mayoría quimeras y no
han sido capaces de producir líneas transgénicas. Se sugiere que los AT producidos por gametos
transfectados, son diferentes a los producidos por el método convencional de microinyección. Es
probable que los gametos posean mecanismos, aún no descritos, capaces de modificar la
integración/expresión de los transgenes, o que impedirían la integración de los transgenes en la
línea germinal. (Esponda, 2005)

El procedimiento habitual para transfectar un espermatozoide ha sido el método in vitro. Los

gametos se incuban durante períodos de tiempo cortos en una solución que contiene las
construcciones de genes y luego se comprueban para la transfección, esta técnica ha sido usada
para las inseminaciones o para procedimientos de fertilización in vitro. En varios casos el ADN
desnudo fue empleado con éxito, pero complejos ADN-liposoma o electroporación
procedimientos han sido también usados. El método in vivo emplea una inyección del transgen
en el conducto deferente del ratón y después de 6-12 horas los gametos son recogidos y
analizados. En el caso de las transfecciones in vitro de gametos femeninos se han usado liposomas
o retrovirus los cuales han sido aplicados con éxito. (Esponda, 2005)

La localización del gen foráneo en el espermatozoide se lo realiza mediante hibridación in situ

fluorescente, autorradiografía o inmunocitoquímica. Después de usar el procedimiento de
transfección in vitro o in vivo un alto porcentaje (80%) de espermatozoides aparecieron
transfectados. Generalmente, estos resultados mostraron que el gen extraño apareció en el núcleo
de los espermatozoides y procedimientos moleculares (secuencias de Slot-Blot, PCR, Southern
Blot) han demostrado la presencia del transgen en el ADN de los gametos. (Esponda, 2005)

9. TRANSFERENCIA GÉNICA CON TRANSPOSONES

Los transposones se definen como elementos transponibles que contienen genes adicionales a
parte de los necesarios para la transposición y están dentro de secuencias repetidas. Dentro de esta
categoría se encuentran los trasposones compuestos de procariotas, familia Tn3, elemento P de
Drosophila, secuencias Alu de mamíferos, retrotrasposones. (Narbón, 2008)

Los trasposones son secuencias de material genómico que tienen la capacidad del saltar fuera y
dentro del genoma. Son capaces de autorreplicarse e integrarse aleatoriamente en nuevos sitios
dentro del genoma (trasponerse o “saltar”). Pueden entrar en plásmidos y ser propagados por ellos.
Estas propiedades les confieren la capacidad de ser transferidos exitosamente en células y
genomas extraños. La ingeniería genética puede manipular estos trasposones para llevar a cabo
transferencia horizontal de genes. La transferencia horizontal de genes es la transferencia de
material genético entre células y genomas que pertenecen a especies no relacionadas, por procesos
distintos a la reproducción. Un ejemplo de ello es el uso de los trasposones de salmónidos para la
transferencia génica en vertebrados. Los trasposones de vertebrados de la familia Tc1/mariner
contienen como mínimo un gen único que codifica la enzima trasposasa flanqueada por dos
repeticiones terminales invertidas (tir). Cada una de las tir posee uno o varios sitios de 20-30 p.b.
de interacción con la trasposasa. (Narbón, 2008)

La trasposasa interacciona con estos sitios para cortar el trasposón, luego interacciona con
secuencias presentes en el genoma en otro locus y pega el trasposón en el nuevo locus. En
vertebrados todos los trasposones que se han detectado están inactivados por mutaciones. Sin
embargo recientemente se ha obtenido un trasposón activo de salmónidos mediante múltiple
mutagénesis dirigida. Dicho transposón denominado “Bella durmiente” o “Sleeping beauty” (SB)
se puede usar en todos los vertebrados analizados hasta el momento como vehículo de
incorporación de nuevos genes y para inactivar genes en el genoma por inserción. (Narbón, 2008)

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