PRÁCTICA No.

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ELISA

OBJETIVO
Analizar el fundamento de la técnica de ELISA.

MARCO TEÓRICO

● ELISA: Esta técnica consiste en la detección de un antígeno a través de un

anticuerpo enlazado a una enzima, mediante algún producto detectable, como, por
ejemplo, el cambio de color, que haría posible la medición del antígeno en la muestra
utilizando la espectrofotometría.
● Antígeno: Es cualquier sustancia que provoca que el sistema inmunitario produzca
anticuerpos contra sí mismo. Esto significa que su sistema inmunitario no reconoce la
sustancia, y está tratando de combatirla. Un antígeno puede ser una sustancia
extraña proveniente del ambiente, como químicos, bacterias, virus o polen. También
se puede formar dentro del cuerpo.
● Anticuerpo: Proteína elaborada por las células plasmáticas (tipo de glóbulo blanco)
en respuesta a un antígeno (sustancia que provoca que el cuerpo reaccione mediante
una respuesta inmunitaria específica). Cada anticuerpo se puede unir a un solo
antígeno específico. El propósito de esta unión es ayudar a destruir el antígeno.
Algunos anticuerpos destruyen los antígenos directamente. Otros facilitan la tarea de
los glóbulos blancos para destruir el antígeno. Un anticuerpo es un tipo de
inmunoglobulina.
METODOLOGÍA
1. Ingresar al simulador de ELISA:
https://media.hhmi.org/biointeractive/vlabs/immunology2/content/index.html

2. Describir brevemente los cuatros tipos de ELISA que existen.

3. Describe los pasos para realizar un ELISA indirecto.

 RESULTADOS
Colocar los resultados derivados del simulador acorde a lo solicitado por el docente. Colocar
la información derivada de las actividades 2 y 3.

4. Describir brevemente los cuatros tipos de ELISA que existen.

Directo: Es el más simple y rápido, donde un anticuerpo primario marcado con una enzima
se unirá directamente al antígeno de interés permitiendo la detección del mismo,

Indirecto: Es parecido al directo pero en dos pasos, se utilizan 2 anticuerpos, uno primario y
otro secundario, este último se irá conjugando a una enzima.

Sandwich: Aquí el antígeno queda inmovilizado entre 2 anticuerpos, uno de captura y otro de
detección que se unirán a 2 epítopos distintos de un mismo antígeno.

Competitivo: Se une un antígeno de referencia que competirá con el antígeno de la muestra

para unirse al anticuerpo primario.

5. Describe los pasos para realizar un ELISA indirecto.

● El antígeno se inmoviliza sobre una placa

● Se añade un anticuerpo primario sin marcar que se une al antígeno de interés
● Se añade un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al
anticuerpo primario
● Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible
que permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.

DISCUSIÓN
La prueba de ELISA es una técnica de laboratorio que usa anticuerpos ligados a enzimas a
fin de detectar y medir la cantidad de una sustancia en una solución, como el suero. La
prueba se hace usando una superficie sólida a la que los anticuerpos y otras moléculas se
adhieren.Su utilidad en el campo clínico de la medicina humana es bastante amplia,
mediante esta técnica es posible conocer, entre otras cosas, si un paciente tiene alguna
infección o alguna enfermedad autoinmune. Los laboratorios sanitarios utilizan los tests
ELISA para diagnosticar enfermedades como el cáncer, la hepatitis B, o la presencia en el
organismo humano del VIH o, más recientemente, del COVID-19. Por ejemplo, algunas
pruebas que se realizan mediante esta técnica son las de la proteína TAU; la proteína
P-TAU; la proteína β-amiloide 1, 42; o el análisis de la presencia de anticuerpos IgM e IgG
frente al virus SAR-CoV-2.
CONCLUSIÓN
El objetivo de esta práctica que era “analizar el fundamento de la técnica ELISA” se cumplió
en un 100% ya que logramos realizar la práctica por nuestra cuenta y pudimos comprender
cómo es que funciona la técnica ELISA y sus aplicaciones y utilidades en el campo médico
como lo es para la detección de numerosas enfermedades, además también analizamos
conceptos relacionados a esta técnica como antígeno y anticuerpos, etc.

CUESTIONARIO

1. Menciona qué es un anticuerpo primario y un anticuerpo secundario.

Un anticuerpo que se puede unir a una proteína específica o a una biomolécula de interés se
denomina anticuerpo primario.
Un anticuerpo secundario se une con un anticuerpo primario que se une directamente al
antígeno objetivo o los restos de un invasor destruido.
2. Menciona la diferencia entre un anticuerpo monoclonal y un anticuerpo
policlonal.
Los anticuerpos monoclonales (mAbs) son generados por células B idénticas que son clones
de una sola célula madre. Esto significa que los anticuerpos monoclonales tienen afinidad
monovalente y solo reconocen el mismo epítopo de un antígeno.
Los anticuerpos policlonales (pAbs) son una mezcla heterogénea de anticuerpos que
generalmente son producidos por diferentes clones de células B en el cuerpo. Pueden
reconocer y unirse a muchos epítopos diferentes de un solo antígeno.
3. Menciona el fundamento de la reacción empleada para revelar el resultado de un
ELISA.
El ELISA es una técnica que se basa en el uso de un antígeno o un anticuerpo marcado con
una enzima; al estar uno estos componentes marcado y fijado a un soporte, se interrumpe la
reacción antígeno-anticuerpo, posteriormente se le agrega un sustrato específico sobre la
enzima que producirá un color determinado observable a simple vista o cuantificable por un
espectrofotómetro o analizar la reacción antígeno anticuerpo.
 4. Además de ABTS, ¿qué otro reactivo puede utilizarse para revelar un ELISA?

HRP (peroxidasa de rábano), TMB, DAB, AEC, ASA, AP (Fosfatasa alcalina), NAPFB,
NAPR, BCIP.

REFERENCIAS

● Instituto Nacional del Cáncer. Anticuerpo.

https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionarios/diccionario-cancer/def/anti
cuerpo
● News Medical Life Sciences. Primary and Secondary Antibodies: What's the
Difference?.https://www.news-medical.net/life-sciences/Primary-and-Secondary-Antibo
dies-Whats-the-Difference.aspx
● Labclinics. Anticuerpos Policlonales vs Monoclonales.
https://www.labclinics.com/2018/09/07/anticuerpos-policlonales-vs-monoclonales/
● Química.es.
ELISA.https://www.quimica.es/enciclopedia/ELISA.html#Marcadores_enzim.C3.A1tico
s_m.C3.A1s_com.C3.BAnmente_utilizados
● med.se-todo. Fundamentos y Tipos de elisa.
https://med.se-todo.com/biolog/19131/index.html
● Abyntek. Tipos de ELISA, ¿conoces las diferencias?.
https://www.abyntek.com/tipos-de-elisa/