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Investigación en Ciencias Veterinarias 135 (2021) 335–342

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Investigación en Ciencias Veterinarias

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Características minerales y metabólicas comunes y específicas en vacas lecheras

con metritis clínica, hipocalcemia o cetosis

Elda Dervishia,*, Graham Plastowa, BrentHoffb,1, Marcos Colazoa

aDepartamento de Ciencias Agrícolas, Alimentarias y Nutricionales, Universidad de Alberta, Edmonton, AB, Canadá
bLaboratorio de Salud Animal, Universidad de Guelph, ON, Canadá

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Palabras clave: Los objetivos fueron evaluar las diferencias en la concentración sérica de metabolitos, macrominerales y enzimas
Enfermedades de los lácteos
hepáticas en puntos de tiempo pre y posparto en vacas lecheras diagnosticadas con metritis clínica, hipocalcemia o
Metabolitos
cetosis posparto. En este estudio se inscribieron un total de 144 vacas Holstein de 11 rebaños lecheros comerciales
Macrominerales
en Alberta (oeste de Canadá). Las vacas con metritis clínica tenían concentraciones séricas más bajas de glutamato
Enzimas hepáticas
deshidrogenasa (GLDH) antes y después del parto y Ca total más bajo, albúmina, urea y colesterol después del parto
en comparación con las vacas de control. Las vacas con hipocalcemia tenían mayores concentraciones séricas de Na,
Cl y osmolaridad calculada (CalOsmo) en el preparto y una menor concentración sérica total de Ca, glucosa,
colesterol, gammaglutamil transpeptidasa (GGT), GLDH, proteína total y albúmina en el posparto. Las
concentraciones séricas preparto de ácidos grasos no esterificados (NEFA), beta hidroxibutirato (BHB), Cl, relación
albúmina/globulina (A/G), Na, K y la suma de Na y K fueron mayores en las vacas cetósicas en comparación con las
vacas de control . Las vacas con cetosis también tenían mayores concentraciones séricas posparto de NEFA, BHB,
GGT y aspartato transaminasa (AST) en comparación con las vacas de control. Las concentraciones séricas de Na y Cl
antes del parto y CalOsmo fueron mayores en las vacas diagnosticadas con hipocalcemia o cetosis en comparación
con las vacas de control. Además, las concentraciones séricas posparto de Ca total, colesterol, albúmina y GLDH se
vieron significativamente afectadas por la hipocalcemia o la metritis clínica y las concentraciones de GGT por la
hipocalcemia o la cetosis. Finalmente, las concentraciones séricas posparto de haptoglobina aumentaron en todos
los grupos de enfermedades en comparación con las vacas de control.

1. Introducción
Las llamadas enfermedades de transición, como la metritis, la hipocalcemia y la
cetosis, tienen un impacto negativo en el bienestar animal y la rentabilidad de las granjas
lecheras debido a las altas tasas de sacrificio, los costos del tratamiento, la pérdida de
productividad y la reproducción deteriorada (Duffield et al., 2009;Le Blanc, 2010;Dubuc et
al., 2011). Se ha informado que del 30 al 50% del ganado experimenta una enfermedad
metabólica o inflamatoria poco después del parto (Le Blanc, 2010). Además, las vacas con
una enfermedad tienen un mayor riesgo de desarrollar otras enfermedades (DeGaris y
Lean, 2008). Por cierto,Macmillan et al. (2020a) informaron que el 39,7% de los bovinos
que se enfermaron durante el posparto tenían más de una enfermedad. Abordar la salud
animal, el bienestar animal y la reproducción son prioridades identificadas para la
producción sostenible de leche en Canadá. En un estudio reciente realizado por
Macmillan et al. (2020a)en varias granjas lecheras en Alberta, Canadá, se informó que
21.4, 41.0
y el 30,6% de las vacas fueron diagnosticadas con metritis, hipocalcemia o cetosis
respectivamente. Por lo tanto, predecir estas enfermedades de transición antes de
que ocurran ayudará a los productores lecheros a realizar ajustes nutricionales y/o
tomar mejores decisiones de manejo para reducir su impacto negativo. Sin
embargo, hasta ahora los intentos por descubrir biomarcadores predictivos
específicos de enfermedades de transición se han mantenido en una etapa
experimental.
La metritis clínica es una enfermedad inflamatoria, que ocurre durante los primeros
21 días después del parto, caracterizada por un útero agrandado y secreción líquida
acuosa de color marrón rojizo sin fiebre.Sheldon et al., 2006). Tanto la hipocalcemia como
la cetosis se consideran enfermedades metabólicas que se desarrollan durante el
periparto o el posparto temprano. Durante la lactancia temprana, las vacas experimentan
un estado de balance energético negativo (BNE) debido a una menor ingesta de alimento
y una mayor demanda de energía para la producción de leche (Huzzey et al., 2007). Para
hacer frente a NEB, se lleva a cabo la movilización de grasa corporal, lo que lleva a

* Autor para correspondencia en: 4/10 Centro de agricultura/silvicultura, Universidad de Alberta, Edmonton, Alberta T6G 2P5, Canadá. Dirección de
correo electrónico:dervishi@ualberta.ca (E. Dervishi). Fallecido.
1

https://doi.org/10.1016/j.rvsc.2020.10.012
Recibido el 24 de abril de 2020; Recibido en forma revisada el 16 de septiembre de 2020; Aceptado el 14 de octubre de 2020
Disponible en línea el 17 de octubre de 2020 0034-5288/© 2020 Elsevier
Ltd. Todos los derechos reservados.
E. Dervishi et al.
un aumento de ácidos grasos no esterificados (NEFA) y beta hidroxibutirato
(BHB) en sangre. Actualmente, las concentraciones sanguíneas de Ca y BHB
siguen siendo el estándar de oro para el diagnóstico de hipocalcemia y
cetosis, respectivamente. Además, las enfermedades de hipocalcemia y
cetosis tienen sus estados clínicos y subclínicos. En este sentido, las vacas
con concentración sanguínea de Ca≤2,1 mmol/L se consideran casos
subclínicos de hipocalcemia, mientras que vacas con concentraciones de Ca<
1,5 mmol/L se consideran casos clínicos (Reinhardt et al., 2011). La cetosis
subclínica se caracteriza por concentraciones de BHB entre 1,1 y 2,9 mmol/L
y la cetosis clínica por la concentración de BHB≥3mmol/L (Oetzel, 2007;
Macmillan et al., 2017). Actualmente, los esfuerzos se centran en el
diagnóstico temprano para reducir el impacto negativo de estas
enfermedades en las vacas lecheras lactantes. Ahora hay una gran cantidad
de evidencia que indica que las vacas con metritis, hipocalcemia o cetosis
experimentan alteraciones en algunos de los reactivos y metabolitos de la
inmunidad innata relacionados con el metabolismo de los carbohidratos
semanas antes de que ocurra la enfermedad (Dervishi et al., 2016;Zhang et
al., 2016;Zhang et al., 2018). A este respecto,Zhang et al. (2018)informaron
que las concentraciones séricas de factor de necrosis tumoral α (TNFα),
lactato y NEFA, 8 semanas antes del parto y una combinación de TNFα, alfa
amiloide sérico (SAA) y BHB 4 semanas antes del parto son biomarcadores
predictivos útiles para la hipocalcemia. En otro estudio, se propuso que las
concentraciones séricas de interleucina (IL)-6, lactato y SAA 8 semanas antes
del parto e IL-6, BHB y lactato 4 semanas antes del parto tenían muy buen
poder de discriminación entre vacas cetósicas y control (Zhang et al., 2016).
Es más, Dervishi et al. (2016)sugirió que la SAA preparto se puede usar para
evaluar a las vacas en busca de la posible aparición de infecciones uterinas
posparto. Otra proteína de fase aguda que se ha sugerido como un
indicador temprano de metritis e inflamación es la haptoglobina.Huzzey et
al., 2009, 2011). Una amplia gama de valores de corte de suero de≥0,2 g/L a≥
Se han propuesto 1,4 g/L para la haptoglobina, dependiendo del tipo de
intervención elegida (Huzzey et al., 2009). Sin embargo, se ha demostrado que el
SAA y la haptoglobina también aumentan durante la mastitis o la hipocalcemia (
Groenlund et al., 2005;Zhang et al., 2018). Los datos de la literatura indicarían que
muchas características metabólicas no son específicas de una enfermedad, lo que
sugiere una respuesta metabólica común a las infecciones y enfermedades
metabólicas en las vacas lecheras. En el estudio actual, planteamos la hipótesis de
que la metritis clínica, la hipocalcemia y la cetosis comparten características
metabólicas comunes entre ellas además de su respuesta específica. Por lo tanto,
los objetivos de este estudio fueron evaluar las diferencias en la concentración
sérica de metabolitos, macrominerales y tres enzimas hepáticas en los períodos de
pre y posparto en vacas con metritis clínica, hipocalcemia o cetosis posparto.
2. Materiales y métodos
2.1. Animales, dieta y extracción de sangre.
Este fue un estudio retrospectivo realizado de abril a noviembre de 2015 en 11
granjas lecheras comerciales en Alberta, Canadá. Las condiciones climáticas
actuales e históricas para la provincia de Alberta se pueden encontrar en https://
acis.alberta.ca/acis/. Se recogieron muestras y datos de 1.096 bovinos. Los
criterios de selección del rebaño incluyeron el tamaño del rebaño (≥100 vacas
lactantes), establo gratuito para vacas recién paridas, calidad de los registros
disponibles, suscripción al servicio de registro de leche, CanWest DHI (mejora del
rebaño lechero) o uso de DairyComp 305 (Valley Agricultural Software, Tulare, CA,
EE. UU.), y un estableció una relación con la clínica veterinaria local para garantizar
la consistencia e integridad de los datos utilizados. El manejo y los resultados
reproductivos y la producción de leche equivalente madura (ME) de 305 días por
rebaño se han descrito enMacmillan et al. (2020b). Los rebaños inscritos en este
estudio fueron monitoreados para identificar vacas que padecían retención de
membranas fetales, cetosis, metritis clínica, mastitis, hipocalcemia, hígado graso o
abomaso desplazado (DA). En cada finca, solo se inscribieron vacas sin signos de
trastornos de salud durante el período seco. Diez rebaños usaban una frecuencia
de ordeño de dos veces al día y el rebaño restante ordeñaba vacas tres veces al
día. Todas las granjas alimentaron a
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Ración totalmente mezclada, una vez al día, para cumplir o exceder los
requerimientos dietéticos de una vaca lactante que pesa aproximadamente 680 kg
y produce 45 kg de leche con 3,5% de grasa corregida (CNR, 2001). Todos los
procedimientos se realizaron de acuerdo con las directrices del Consejo
Canadiense de Cuidado Animal (CCAC, 2009).
En el presente estudio, las vacas fueron observadas por metritis clínica,
hipocalcemia o cetosis desde el parto hasta los 60 días en leche. En el estudio
realizado porMacmillan et al. (2020a), que involucra los mismos rebaños lecheros
que aquí, el ganado se clasificó según el tipo de enfermedad (p. ej., inflamatoria,
metabólica o con ambas). Sin embargo, en el presente estudio, seleccionamos
retrospectivamente vacas que solo presentaban una enfermedad de transición (es
decir, metritis clínica, hipocalcemia o cetosis) y se consideraron casos clínicos y
subclínicos de hipocalcemia y cetosis. Se excluyeron los bovinos que sufrieron
múltiples enfermedades. Los diagnósticos de la enfermedad fueron realizados por
cuatro veterinarios de rebaño. La metritis clínica se definió como se describe por
Sheldon et al. (2006). Se consideró que una vaca tenía hipocalcemia clínica si no
podía levantarse dentro de las 72 horas posteriores al parto y respondía al
tratamiento con calcio intravenoso o permanecía postrada con las extremidades
frías y disminución de la temperatura rectal (<38◦C). La hipocalcemia subclínica se
caracterizó como una concentración circulante posparto de Ca≤2,1 mmol/L (
Martínez et al., 2012). La cetosis clínica se definió como apetito deprimido y
letargo con evidencia de cetonas sanguíneas elevadas (concentración circulante
posparto de BHB≥3,0 mmol/L). Finalmente, vacas sin signos de enfermedad con
concentración circulante posparto de BHB≥1.2 y <3,0 mmol/L, se consideró que
tenían cetosis subclínica (Macmillan et al., 2017). Cada caso de enfermedad se
emparejó con un caso de control de la misma manada (basado en la paridad, la
estación del puntaje de condición corporal (BCS, por sus siglas en inglés) y el mes
de parto)). Los criterios para la selección de casos de control incluyeron vacas sin
signos clínicos y/o registros de ninguna de las siete enfermedades. Las vacas se
atribuyeron a cada grupo después de 60 días en leche. Cada grupo de enfermedad
se comparó con su propio grupo de control; sin embargo, en algunos casos, se
utilizó un caso de control para emparejar más de un caso de enfermedad. Los BCS
fueron evaluados por dos técnicos bien capacitados en 6.0±4,2 días antes del
parto usando una escala de 5 puntos con incrementos de 0,25 (1 = delgado y 5 =
gordo) como se describió anteriormente (Edmonson et al., 1989).
Se recogieron muestras de sangre de las 144 vacas a 6,0±4.2 d preparto y a los
9.0±3.6 d posparto (mediana±SD) por miembros del equipo de investigación
durante visitas quincenales a las fincas. Se recogió sangre de los vasos coxígeos
en tubos de vacío que no contenían conservantes (Vacutainer; Becton Dickinson
and Co., Franklin Lakes, NJ, EE. UU.). Los tubos de muestra de suero se dejaron
reposar a temperatura ambiente durante 3 a 4 h y luego se centrifugaron (3000 xɡ
durante 20 minutos; Rotanta 460 R, Hettich Zentrifugan, Tuttlingen, Alemania). Se
recolectó suero y las muestras se congelaron y almacenaron a -20◦C hasta su envío
al Laboratorio de Salud Animal (AHL; Universidad de Guelph, Guelph, ON, Canadá)
para la determinación de las concentraciones de todos los analitos.
2.2. Determinación del perfil de analitos séricos
Las concentraciones séricas de Ca, P, Mg, Na, K, Cl totales, urea, glucosa,
NEFA, colesterol, albúmina, globulina, proteína total, gamma-glutamil
transpeptidasa (GGT), aspartato transaminasa (AST), glutamato
deshidrogenasa (GLDH ), BHB y haptoglobina se determinaron como se
describió previamente porGobikrushanth et al. (2019)yMacmillan et al.
(2020a). NaK se calculó como la suma de Na y K. La osmolaridad (CalOsmo)
se calculó mediante la fórmula: 1,86*(Na + K) + (Urea+Glucosa). Se calcularon
las proporciones de albúmina/globulina (A/G), Ca/P y Na/K, NaK/Cl y se
incluyeron en el análisis estadístico.
2.3. Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizandoRStudio (Versión 1.2.5). Antes
del análisis estadístico se comprobó la normalidad de cada una de las variables.
Las variables que no se distribuyeron normalmente se transformaron
logarítmicamente. Para investigar las diferencias entre vacas enfermas vs.
E. Dervishi et al.
vacas control cada indicador metabólico se analizó con un Modelo
Lineal, antes y después del parto siendo el modelo completo:
y = μ + Granja+ Lactancia + BCS + Estación + SDay + Grupo + Lact*Grupo + e
Donde: y es la variable de respuesta, μ representa la media de la población,
granja, lactancia (1–4 o más), BCS, estación (primavera, verano y otoño), día de
muestreo (0–5 d; 6–10; 11– 15 antes/después del parto), grupo (control vs.
enferma) y grupo y su interacción con el número de lactancia, se incluyeron como
efectos fijos, y e se refiere al término de error común. Los resultados se muestran
como la media de mínimos cuadrados (±SEM) después de aplicar la corrección de
Tukey para comparaciones múltiples.
Antes del análisis de conglomerados, cada indicador metabólico, la enzima hepática
y la concentración de minerales se ajustaron para los efectos fijos, excepto para el estado
de salud, y se analizaron juntos mediante el análisis de varianza unidireccional (ANOVA).
Se consideraron diferencias significativas siPAGS≤0.05 yPAG > 0.05 y≤0,10 se consideró
como una tendencia. El análisis de conglomerados se realizó utilizando el software
MetaboAnalyst (Xia et al., 2015). Para el análisis de conglomerados jerárquicos,
consideramos dos parámetros, a saber, la medida de similitud y el algoritmo de
agrupamiento. Para las mediciones de distancia, utilizamos el algoritmo de Euclidian y
Ward para la agrupación. Los resultados del análisis de conglomerados se muestran
como un mapa de calor (Figura 1a y 1b).
3. Resultados
Los resultados del análisis univariante se presentan por separado para cada
grupo de enfermedad, que se comparó con su grupo de control. Las vacas
diagnosticadas con metritis clínica fueron de primera (64,3%), segunda (28,6%) y
tercera lactancia (7,1%). Entre las vacas con hipocalcemia, 38,0, 27,5 y 34,5%
fueron de segunda, tercera y tercera≥cuatro lactancias y vacas diagnosticadas con
cetosis 20.0, 26.6, 30.0 y 20.0% fueron de primera, segunda, tercera y≥cuatro
lactancias.
3.1. El efecto de las enfermedades en las concentraciones séricas pre y posparto de
indicadores nutricionales y metabólicos
En total, analizamos muestras de 144 vacas de 1.096 vacas disponibles:
29 métricas, 29 hipocalcémicas (clínicasnorte=15 y subclínicanorte=
14), 30 cetósicas (clínica n = 15 y subclínica n = 15) y 56 control. Las vacas que
experimentaron múltiples enfermedades fueron excluidas del presente
estudio. La Tabla complementaria 1 resume el número total de animales por
grupo, el número de lactancia, la temporada y el día del muestreo en el
período preparto y posparto. En el puerperio el número de vacas con
hipocalcemia fue menor debido a descartes o muertes.
tabla 1muestra el cambio significativo de los indicadores metabólicos preparto por
enfermedades posparto. Las vacas con metritis clínica tenían una concentración sérica
más baja de GLDH antes del parto en comparación con el grupo de control (PAGS <0,05).
Las vacas que desarrollaron hipocalcemia tenían mayores concentraciones séricas de Na,
Cl, CalOsmo y NaK preparto en comparación con las vacas control (pag <0,05). Las
concentraciones séricas preparto de nueve indicadores se vieron significativamente
afectadas en vacas cetósicas. Los ácidos grasos no esterificados, BHB, Cl, Na, K, relación
A/G y NaK fueron significativamente mayores (pag <0.05), mientras que la globulina y la
relación Ca/P fueron menores (pag < 0.05) en vacas cetósicas en comparación con vacas
control.
En el posparto, las vacas con metritis clínica continuaron teniendo una
concentración sérica más baja de GLDH, y también tenían Ca total más bajo,
albúmina, urea y colesterol en comparación con el grupo de control (pag <0,05).
Además, la concentración de haptoglobina posparto en vacas con metritis clínica
fue mayor en comparación con las vacas control (pag <0,05;Tabla 2). El número de
analitos afectados por la hipocalcemia aumentó después del parto. Las vacas con
hipocalcemia tenían mayores concentraciones séricas de haptoglobina y menores
concentraciones de Ca total, glucosa, colesterol, GGT, GLDH, albúmina y proteína
total (pag <0,05;Tabla 2) en comparación con el grupo control. En el posparto, las
vacas con cetosis tenían mayores concentraciones séricas de NEFA, BHB,
haptoglobina, GGT y AST (pag <0.05), mientras que el Mg fue menor (pag <0,05) en
comparación con el control
337
Investigación en Ciencias Veterinarias 135 (2021) 335–342
vacas (Tabla 2).
3.2. Efecto de la época, lactación y día de muestreo
La estación, la granja, la lactancia y el día de muestreo fueron factores
asociados con cambios en la concentración de indicadores nutricionales y
metabólicos. Las concentraciones séricas preparto de GDHL se vieron afectadas
por la interacción de la enfermedad y la lactancia. En este sentido, las vacas de
tercera lactancia con metritis clínica tenían concentraciones más bajas de GDLH en
comparación con sus contrapartes de control (0.59±0,16 frente a 1,2±0,16U/L;
PAGS=0,05). Curiosamente, al analizar la hipocalcemia frente al control, la estación
afectó las concentraciones séricas preparto de Na y NaK (tabla 1). Las
concentraciones séricas preparto de Na y NaK fueron mayores en verano en
comparación con el otoño (Tabla 3;pag <0,05). Al analizar la cetosis vs control, la
concentración sérica preparto de BHB fue mayor en primavera en comparación
con el verano (Tabla 3;pag <0.05) y tendió a ser mayor en primavera en
comparación con el otoño (Tabla 3;PAGS=0,06). Además, la concentración sérica de
NEFA se vio afectada por el día del muestreo. La comparación por pares mostró
que las vacas cuya muestra se recolectó entre 0 y 5 días antes del parto, tenían
mayores concentraciones de NEFA en comparación con las vacas cuyas muestras
se recolectaron entre 6 y 10 días y entre 11 y 15 días antes del parto (Tabla 3;pag <
0,05).
En el posparto, los indicadores metabólicos estudiados se vieron afectados
principalmente por el número de lactancia y la interacción entre el número de
lactancia y la enfermedad (Tabla 2). Por ejemplo, al comparar la metritis clínica con
el grupo de control, las vacas de segunda lactancia tuvieron mayores
concentraciones de albúmina sérica en comparación con las vacas de primera
lactancia (Tabla 4;pag <0.05), mientras que la concentración de colesterol sérico
fue significativamente menor en las vacas de tercera lactancia en comparación con
las vacas de primera y segunda lactancia (Tabla 4;pag <0,05). Además, la
concentración de colesterol sérico posparto también se vio significativamente
afectada por el día del muestreo. Las muestras recolectadas de 0 a 5 días después
del parto tenían concentraciones más bajas que las muestras recolectadas de 11 a
15 días después del parto (1.9±0,19 frente a 2,5±0,20 mmol/l;pag <0,05).
Al analizar la hipocalcemia frente al grupo control, la interacción entre el
número de lactancias y la enfermedad afectó significativamente la GLDH sérica y
el contenido total de proteínas. Las vacas en su segunda lactancia diagnosticadas
con hipocalcemia tuvieron una concentración sérica más baja de contenido de
proteína total en comparación con las vacas control de segunda lactancia (58.0±
2,95 frente a 71,8±3,07 g/litro;pag <0,05).
La concentración sérica posparto de BHB se vio significativamente afectada
por la lactancia y la interacción entre la lactancia y la enfermedad en el análisis de
cetosis frente al grupo de control. Las vacas de primera lactancia presentaron
menor concentración de BHB en comparación con las vacas en su≥cuarta lactancia
(Tabla 4;pag <0,05). Vacas cetósicas en su≥cuarta lactancia tuvo mayor BHB en
comparación con las vacas de control contraparte (2.7±0,28 frente a 0,58± 0,34
mmol/l;pag <0,05). Además, las vacas cetósicas en su segunda lactancia tuvieron
una concentración más baja de BHB en comparación con las vacas cetósicas en su
≥cuarta lactancia (1.4±0,24 frente a 2,7±0,28 mmol/l;pag < 0,05). Además, las vacas
de tercera lactancia diagnosticadas con cetosis tenían una concentración sérica
más baja de GGT en comparación con las vacas cetósicas en su ≥cuarta lactancia
(19,5±3,08 frente a 37,8±4,47U/L). Finalmente el día de muestreo afectó la
concentración de haptoglobina. Las muestras recolectadas entre los días 0 y 5
tenían concentraciones mayores en comparación con las muestras recolectadas
entre los días 6 y 10 y entre los días 11 y 15 después del parto (Tabla 4;pag <0,05).
3.3. Resultados del análisis de conglomerados
Después de ajustar por todos los efectos fijos, las tres enfermedades y sus
grupos de control se compararon entre sí. Los resultados mostraron que las
concentraciones séricas preparto de Na (pag <0,0001), NaK (pag <0.0001),
CalOsmo (pag <0,0001) y Cl (pag <0,0001) fueron significativamente mayores en
vacas con cetosis o vacas con hipocalcemia en comparación con vacas control y
métricas. Se observaron mayores concentraciones de NEFA preparto solo en vacas
con cetosis (pag <0,001) en comparación con los grupos de control, metritis clínica
o hipocalcemia. Los resultados del análisis de conglomerados de dos
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Figura 1.Análisis de agrupamiento jerárquico de las

características ajustadas medidas en el suero en a) período
preparto yb) período posparto en vacas clasificadas como
control, metritis clínica, hipocalcemia o cetosis. Cada celda está
coloreada según la concentración de características. El marrón
oscuro representa alta concentración, el azul indica baja
concentración y el gris indica el nivel intermedio. (Para la
interpretación de las referencias con diferentes colores en la
leyenda de esta figura, se remite al lector a la versión web de
este artículo).

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tabla 1
Las diferencias en la media de mínimos cuadrados (±SEM) en concentraciones séricas circulantes de analitos preparto por enfermedades posparto.

Rasgo Grupo factores,PAGS-valor

Metritis clínica (norte=29) Control (norte=27) Grupo Lactancia Temporada SD GxL

GLDH (U/L) 0.87±0.04 1.07±0.04 0.008 0.002 0.79 0.56 0.04

Hipocalcemia (n = 29) Control (norte=24)
Na (mmol/L) 143±1.31 136±1.16 <0.0001 0.12 0.03 0.17 0.48
Cl (mmol/L) 99.7±1.01 95.1±0.90 <0.0001 0.12 0.22 0.23 0.56
CalOsmo 282±2.60 268±2.31 <0.0001 0.15 0.02 0.05 0.53
NaK 148±1.39 140±1.24 <0.0001 0.16 0.02 0.20 0.47
Cetosis (norte=30) Control (norte=25)
Na (mmol/L) 145±1.68 137±2.01 <0.0001 0.51 0.009 0.25 0.91
K (mmol/L) 4.80±0.11 4.52±0.13 0.03 0.06 0.57 0,64 0,64
Cl (mmol/L) 100.9±1.21 96.8±1.44 0.002 0.22 0.02 0.12 0.83
CalOsmo 287.0±3.01 271±3.66 <0.0001 0.49 0.01 0.25 0.98
NaK 150±1.75 141±2.08 0.0001 0.49 0.01 0.25 0.89
NaK/Cl 1.48±0.008 1.46±0.01 0.02 0,61 0.88 0.58 0.97
Gorra 1.14±0.05 1.29±0.06 0.04 0.07 0.70 0.46 0.38
BHB (mmol/L) 0.51±0.04 0.37±0.05 0.01 0.99 0.009 0.35 0,55
NEFA (mmol/L) 0.30±0.08 0.016±0.09 0.005 0.08 0.008 0.001 0.81
Globulina (g/L) 32.3±1.62 37.1±1.93 0.01 0.19 0.98 0.12 0.25
relación AG 1.18±0.06 1.01±0.07 0.01 0.27 0.82 0.78 0.57

DS, día del muestreo; G x L, interacción entre grupo y número de lactancia.

CalOsmo = osmolalidad calculada; GLDH = glutamato deshidrogenasa; BHB = beta hidroxibutirato; NEFA = ácido graso no esterificado.

Tabla 2
Las diferencias en la media de mínimos cuadrados (±SEM) en concentraciones séricas circulantes de analitos posparto por enfermedades posparto.

Rasgo Grupo Factores, valor P

Metritis clínica (n = 29) Control (n = 27) Grupo Lactancia Temporada SD GxL

Ca (mmol/L) 2.26±0.03 2.33±0.03 0.009 0.03 0.10 0.59 0.28

Urea (mmol/L) 3.40±0.26 3.98±0.26 0.02 0.03 0.53 0.49 0.29
Colesterol (mmol/L) 2.05±0.17 2.29±0.17 0.04 0.02 0.27 0.001 0.73
registro GLDH10(U/L) 1.18±0.11 1.48±0.11 0.008 0.04 0.28 0,60 0.80
Albúmina (g/L) 31.8±0.84 33.7±0.87 0.008 0.01 0.04 0,64 0.52
Haptoglobina (g/L) 0.82±0.18 0.22±0.19 0.02 0.51 0.98 0.72 0.18
Hipocalcemia (norte=21) Control (n = 24)
Ca (mmol/L) 2.01±0.08 2,39±0.06 <0.0001 0.08 0,67 0.15 0.79
Glucosa (mmol/L) 2.31±0.20 2.75±0.16 0.02 0.43 0,61 0.15 0,55
Colesterol (mmol/L) 2.02±0.28 2.62±0.21 0.005 0.06 0.24 0.04 0.23
GGT (U/L) 15.2±2.37 19.2±1.83 0.01 0.83 0,55 0.18 0.37
registro GLDH10(U/L) 1.11±0.07 1.30±0.05 0.001 0.36 0.77 0.29 0.05
Albúmina (g/L) 32.4±1.58 36.7±1.22 0.0007 0.16 0.18 0.84 0.19
Haptoglobina (g/L) 0.46±0.13 0.20±0.10 0.02 0.02 0.74 0.91 0.89
Proteínas totales (g/L) 67.2±2.90 73.1±2.24 0.001 0.02 0.05 0.04 0.007
Cetosis (n = 30) Control (norte=26)
Mg (mmol/L) 0,85±0.02 0,92±0.02 0.01 0.48 0.59 0.32 0.53
NEFA (mmol/L) 0.91±0.09 0.36±0.09 <0.0001 0.08 0.06 0.23 0.76
BHB (mmol/L) 1.6±0.17 0.5±0.18 <0.0001 0.0007 0.07 0.14 0.01
GGT (U/L) 22.7±2.33 14.9±2.47 0.02 0.13 0,94 0.06 0.0007
AST (U/L) 97.1±8.88 75.4±9.42 0.03 0.02 0.27 0,60 0.06
Haptoglobina (g/L) 0,45±0.10 0.22±0.10 0.004 0.17 0,63 0.004 0.28

DS, día del muestreo; G x L, interacción entre grupo y número de lactancia; GGT = gamma-glutamil transpeptidasa; AST = aspartato aminotransferasa; GLDH = glutamato
deshidrogenasa; NEFA = ácido graso no esterificado; BHB = beta hidroxibutirato.

Los puntos de tiempo se muestran enFigura 1ay 1b.Figura 1a muestra las
diferencias entre el control y los tres grupos de enfermedades. Un grupo de
indicadores como Cl, CalOsmo, Na y NaK aumentaron en los grupos de cetosis e
hipocalcemia en comparación con el control, lo que demuestra que estos
indicadores no son específicos de una enfermedad.
En el posparto, la concentración sérica de haptoglobina aumentó en las
tres enfermedades (pag <0,0001;Figura 1b) en comparación con el control.
Sin embargo, solo observamos mayor NEFA (pag <0.0001) y BHB (pag <
0.0001) concentraciones en vacas con cetosis, y menores concentraciones de
Ca (pag <0,0001), colesterol (pag <0.0001), proteína total (pag <0,001) y
albúmina (pag <0,0001) en vacas con hipocalcemia en comparación con
todos los demás grupos.
4. Discusión
En el presente estudio, planteamos la hipótesis de que la metritis clínica,
la hipocalcemia y la cetosis comparten características metabólicas comunes
además de las específicas. Para probar nuestra hipótesis, evaluamos las
diferencias en la concentración sérica de metabolitos, minerales y enzimas
hepáticas antes y después del parto en vacas que desarrollaron metritis clínica,
hipocalcemia o cetosis después del parto. Los resultados de este estudio indican
que las concentraciones séricas preparto de Na, Cl, NaK (Na y K) y CalOsmo fueron
significativamente mayores en las vacas diagnosticadas con cetosis o hipocalcemia
en comparación con las vacas de control. El sodio, el K y el Cl son minerales muy
importantes responsables de mantener el equilibrio ácido/base en el cuerpo
además de regular la excitabilidad de las células y el volumen celular. Se ha
planteado la hipótesis de que la alcalosis metabólica es la causa subyacente de la
hipocalcemia en el ganado lechero. En apoyo de eso,+, k+y aniones Cl−y SO4−,juega
un papel importante en la incidencia de hipocalcemia (Ender et al., 1971) y al
alimentar a las vacas secas con sales aniónicas, disminuye la incidencia de
hipocalcemia (Bloque, 1984). Recientemente, se ha encontrado que el exceso de K
en la dieta

339
E. Dervishi et al. Investigación en Ciencias Veterinarias 135 (2021) 335–342

Tabla 3
Media de mínimos cuadrados (±SEM) en concentraciones séricas de analitos preparto afectados por lactancia, estación o día de muestreo en cada comparación entre control y grupo de
enfermedad.

Rasgo Lactancia Temporada SD

Primero Segundo Tercero ≥Cuatro Primavera El verano Otoño 0–5 6–10 11–15

Metritis Clínica vs Control

GLDH (U/L) 10.95± 14.29± 9.17± 11.6±2.25 9.6±2.31 13.2±1.79 11.1±1.77 12.5±1.80 10.8±2.60
1.51a 1.53b 3.60abdominales

Hipocalcemia vs Control
Na (mmol/L) 140±1.08 142±1.51 139±1.34 139± 143±1.23a 140±1.04b 142±1.21 141±1.24 138±1.53
1.61abdominales

CalOsmo 276±2.12 280±2.97 275±2.64 274±3.17a 282±2.42b 276± 281± 279± 272±3.01b
2.04abdominales 2.39a 2.43abdominales

NaK 144±1.14 147±1.60 144±1.42 143±1.7abdominales 147±1.3a 144±1.1b 147±1.28 146±1.31 142±1.62

Cetosis vs Control
K (mmol/L) 4.25±0.20a 4.91±0.12b 4.86± 4.63± 4.76±0.15 4.64±0.11 4.58±0.16 4.60±0.09 4.60±0.22 4.78±0.12
0.16abdominales 0.20abdominales

BHB (mmol/L) 0.46±0.08 0.47±0.05 0.43±0.06 0.39±0.07 0,55±0.06a 0.40± 0.37± 0.48±0.04 0.46±0.05 0.38±0.08
0.04b 0.06abdominales

NEFA (mmol/ 0.35±0.14× 0.11±0.08y 0.17± 0.14±0.10 0.22± 0.23± 0.11±0.10b 0.43± 0.16± 0.12±
L) 0.11xy 0.10abdominales 0.08a 0.06a 0.08b 0.05b

GLDH = glutamato deshidrogenasa; NaK = suma de Na y K; BHB = beta hidroxibutirato; NEFA = ácido graso no esterificado; DS = día del muestreo. a,b,c La media de los
mínimos cuadrados con diferentes superíndices dentro de la misma categoría y fila difieren (PAGS≤0,05).
x,y, la media de mínimos cuadrados con diferentes superíndices dentro de la misma categoría y fila tendía a diferir (PAG >0.05 y≤0,10).

Tabla 4
Media de mínimos cuadrados (±SEM) en concentraciones séricas de analitos posparto afectados por lactancia, estación o día de muestreo en cada comparación entre grupo control y
enfermedad.

Metritis Clínica vs. Control

Rasgo Lactancia Temporada SD

Primero Segundo Tercero ≥Cuatro Primavera El verano Otoño 0–5 6–10 11–15

Ca (mmol/L) 2.30±0.02 2.34±0.02 2.24±0.06 2.33± 2.24± 2.31± 2.26± 2.31±0.03 2.31±
0.05abdominales 0.03a 0.03b 0.03 0.03
Urea (mmol/L) 3.45± 3.94±0.19y 3.68± 3.86±0.40 3.64±0.25 3.57± 3.87± 3.47±0.30 3.74±
0.21× 0.49xy 0.25 0.29 0.24
Colesterol (mmol/ 2.47± 2.56±0.13a 1.48± 2.45±0.26 2.05±0.16 2.01± 1.93± 2.09± 2.49±
L) 0.14a 0.32b 0.16 0.19a 0.15abdominales 0.20b
Albúmina (g/L) 32.1± 33,9±0,64b 32.2± 32.7±1.31 33.1±0.83 32.3± 33.2± 32.4±0.77 32.6±
0,69a 1.61abdominales 0.82 0,96 1.00

Hipocalcemia vs Control
Haptoglobina (g/L) 0,47± 0.46± 0.05± 0.19±0.16 0.34±0.17 0,45±0.08 0.27±0.14 0.43±0.12 0.27±
0.10× 0.14×y 0.17y 0.14

Cetosis vs Control
BHB (mmol/L) 0,61± 1.0±0.02abdominales 1.1±0.02abdominales 1.5±0.03b 1.0±0.02 1.2±0.02 1.0±0.02 1.1±0.03 0.88±0.02 1.3±0.02
0.03a
Haptoglobina (g/L) 0.32± 0.59±0.09a 0.10± 0.30± 0.41±0.12 0.22±0.09 0.36± 0.76± 0.10± 0.13±
0.16abdominales 0.13b 0.17abdominales 0.13 0.16a 0.10b 0.10b

GLDH = glutamato deshidrogenasa; NaK = suma de Na y K; BHB = beta hidroxibutirato; NEFA = ácido graso no esterificado; gamma-glutamil transpeptidasa = GGT;
aspartato transaminasa = AST; DS = día del muestreo.
a,b,c La media de los mínimos cuadrados con diferentes superíndices dentro de la misma categoría y fila difieren (PAGS≤0,05).
x,y, la media de mínimos cuadrados con diferentes superíndices dentro de la misma categoría y fila tendía a diferir (PAG >0.05 y≤0,10).

participar en la patogenia de la hipocalcemia (Goff et al., 2014). Por lo tanto, se ha
sugerido que las dietas con diferencia catiónica aniónica negativa en la dieta
disminuyen el pH de la sangre, lo que provoca una ligera acidificación metabólica
y aumenta la respuesta de los tejidos a la hormona paratiroidea (PTH), que a su
vez estimula la movilización de Ca de los huesos y aumenta la absorción intestinal
de Ca.Gof, 2006;Horst et al., 1997;Goff, 2008). Sin embargo, el papel del Na, K y Cl
en la incidencia y el desarrollo de la cetosis no se ha estudiado de forma
exhaustiva.Zhang et al. (2011) no encontraron cambios significativos en las
concentraciones séricas de Na y K en vacas con cetosis subclínica y concluyeron
que el Na y el K no están involucrados en su patogénesis. Más recientemente,
Zhang et al. (2017)informaron múltiples alteraciones de elementos minerales en el
suero y la orina de vacas lecheras semanas antes del diagnóstico de cetosis, pero
nuevamente las concentraciones séricas de Na y K no difirieron entre las vacas
cetósicas y las de control.
Por el contrario, en el estudio actual, las concentraciones preparto de Na y K y su
suma NaK fueron mayores en las vacas que posteriormente desarrollaron
hipocalcemia o cetosis en comparación con las vacas de control, lo que respalda el
concepto de alcalosis metabólica preparto como uno de los mecanismos
subyacentes. para ambas enfermedades. Por lo tanto, los hallazgos respaldan
nuestra hipótesis de que estas enfermedades comparten características
metabólicas preparto comunes, que merecen una mayor investigación.
Las concentraciones séricas preparto de GLDH fueron más bajas solo en vacas que
desarrollaron metritis clínica. Las vacas con metritis clínica continuaron teniendo una
concentración sérica más baja de GLDH posparto, además de Ca sérico total más bajo,
albúmina, urea y colesterol. Similarmente,Dervishi et al. (2018)informaron que las vacas
diagnosticadas con metritis tenían concentraciones posparto más bajas de urea en la
orina en comparación con las vacas de control. Curiosamente, en el presente estudio la
concentración sérica del hígado

340
E. Dervishi et al.
la enzima GLDH que se requiere para la síntesis de urea, fue más baja antes y después
del parto en vacas que desarrollaron metritis clínica. Por lo tanto, una concentración más
baja de GLDH podría haber llevado a una concentración más baja de urea después del
parto en vacas diagnosticadas con metritis clínica. Además, las concentraciones séricas
posparto de Ca total, colesterol, albúmina y GLDH fueron más bajas tanto en vacas
hipocalcémicas como métricas. Actualmente, la concentración sérica total de Ca junto con
los signos clínicos se utilizan para diagnosticar la hipocalcemia. Generalmente se acepta
que una concentración en sangre de Ca total≤2,1 mmol/L es indicativo de hipocalcemia
subclínica, mientras que una concentración sanguínea de Ca por debajo de 1,5 mmol/L es
indicativo de hipocalcemia clínica. En el presente estudio, la concentración media de Ca
sérico total en vacas con hipocalcemia fue de 2,01 mmol/L, que se encuentra en el rango
de hipocalcemia subclínica. El mantenimiento de la homeostasis del Ca en el cuerpo es
un proceso complejo que está influenciado por varios componentes, uno de ellos es la
albúmina circulante (pavo real, 2010). El Ca extracelular es transportado principalmente
por la albúmina y una pequeña cantidad por la globulina.pavo real, 2010), por lo que se
puede argumentar que una concentración más baja de albúmina sérica podría contribuir
a una concentración más baja de Ca sérico. Cabe señalar que la perturbación posparto de
las concentraciones de Ca y albúmina no fue exclusiva de las vacas diagnosticadas con
hipocalcemia. Las vacas diagnosticadas con metritis clínica también tenían
concentraciones más bajas de Ca y albúmina en comparación con su grupo de control,
aunque la concentración promedio de Ca total posparto en vacas con metritis clínica se
encuentra dentro del rango normal (2,26).±0,03mmol/L). Nuestros resultados, en vacas
con metritis clínica, concuerdan con los dePinedo et al. (2017), quienes informaron que
las vacas diagnosticadas con metritis puerperal tenían una concentración de Ca posparto
más baja en comparación con el control. Además, tanto las vacas hipocalcémicas como
las métricas tenían una concentración de GLDH más baja en comparación con su grupo
de control. Se ha informado que la disminución de la GLDH es un indicador de deterioro
de la función hepática (Du et al., 2017), por lo tanto, es razonable especular que las vacas
con hipocalcemia o metritis clínica experimentan deterioro de la función hepática
además de la alteración del metabolismo del Ca.
En el estudio actual, la concentración de haptoglobina posparto aumentó en
las vacas diagnosticadas con metritis clínica, hipocalcemia o cetosis en
comparación con las vacas de control, sin embargo, la haptoglobina preparto no
difirió entre los grupos, lo que limitó su uso como marcador de detección preparto
para predecir la incidencia de enfermedades de transición. . Las concentraciones
séricas de haptoglobina antes y después del parto se han asociado previamente
con enfermedades uterinas posparto.Dubuc et al., 2010;Huzzey et al., 2015). La
haptoglobina aumenta notablemente durante la enfermedad inflamatoria activa y
se ha informado que es un indicador útil de la respuesta aguda, con un aumento
significativo entre uno y cinco días después de la aparición de la inflamación.
Huzzey et al. (2009)propusieron una amplia gama de valores de corte de
haptoglobina sérica (≥0,2 g/L a≥1,4 g/L) dependiendo del tipo de intervención
elegida. Los autores informaron que un punto de corte de≥ 0,4 g/L podría
identificar animales que requieren un control diario de la temperatura corporal
para detectar los primeros signos de enfermedad, mientras que un punto de corte
de 1 g/L puede ayudar en el diagnóstico temprano de metritis posparto en vacas
lecheras. De acuerdo, nuestros hallazgos sugieren que un aumento en la
concentración de haptoglobina sérica es un buen indicador de un proceso
inflamatorio, pero no está asociado con una enfermedad en particular. Los
resultados del estudio actual muestran que las concentraciones de BHB y NEFA en
suero posparto fueron mayores solo en vacas con cetosis, lo que concuerda con
un informe anterior deOspina et al. (2010). Las concentraciones sanguíneas de
BHB entre 1,2 y 2,9 mmol/L se utilizan como referencia para la cetosis subclínica y
las concentraciones≥3,0 mmol/L para cetosis clínica (Oetzel, 2007). En el presente
estudio, la concentración sérica promedio de BHB en vacas cetósicas fue de 1.6±
0,17 mmol/L, que es más alto que el valor de corte comúnmente aceptado para
diagnosticar la cetosis subclínica. Sí observamos diferencias significativas en la
concentración sérica posparto de BHB cuando el grupo de cetosis no solo se
comparó con su grupo de control sino también con el grupo métrico o
hipocalcémico, lo que respalda la sugerencia de que el valor predictivo de BHB es
mayor durante el período posparto (Overton et al., 2017). Las concentraciones de
NEFA antes del parto fueron mayores en vacas con cetosis, pero la concentración
sérica de NEFA fue
341
Investigación en Ciencias Veterinarias 135 (2021) 335–342
afectados por el día de muestreo. De acuerdo con los resultados reportados por
Oetzel (2004), las vacas cuya muestra fue recolectada entre 0 y 5 días antes del
parto, tuvieron mayores concentraciones de NEFA.
Otros factores ambientales como época y número de lactancias afectaron
significativamente la concentración de indicadores estudiados antes y después del
parto. En este sentido, observamos que la concentración sérica preparto de Na fue
mayor en verano en comparación con la caída en el análisis realizado entre vacas
hipocalcémicas y control. Además, BHB fue mayor en primavera en comparación
con el verano en el análisis entre vacas cetósicas y control. Es posible que los
cambios en la concentración sérica de los indicadores estudiados sean el resultado
de cambios en la dieta. Existe evidencia de que la estación tiene un efecto
significativo sobre los indicadores metabólicos circulantes en las vacas lecheras (
Yokus y Cakir, 2006;Cozzi et al., 2011). Es comúnmente aceptado que rasgos como
la producción de leche o el contenido de grasa en la leche se ven afectados por la
paridad y la etapa de lactancia, y por factores ambientales como la estación y la
temperatura (Yang et al., 2013), por lo tanto, se puede argumentar que los
factores ambientales probablemente también podrían afectar los indicadores
fisiológicos. Creemos que esta es una información importante para la industria
láctea, ya que es posible que se requieran ajustes nutricionales para el ganado
lechero durante ciertos períodos para evitar efectos negativos en la salud, el
rendimiento productivo y reproductivo. Otra implicación importante de nuestros
resultados es que los factores ambientales deben tenerse en cuenta para la
interpretación adecuada de los indicadores metabólicos séricos en el ganado
lechero.
En conclusión, los resultados del presente estudio respaldan
nuestra hipótesis de que la hipocalcemia y la cetosis comparten
características metabólicas preparto comunes, antes de que ocurra la
enfermedad. La hipocalcemia y la metritis clínica comparten
características metabólicas posparto comunes. El aumento de las
concentraciones séricas preparto de Na y K podría ser uno de los
mecanismos subyacentes de la hipocalcemia y la cetosis, que merecen
una mayor investigación. Esta es también una información crítica, que
podría ayudar a los productores lecheros a ajustar el manejo
nutricional a corto plazo y diseñar estrategias nutricionales para
mitigar el impacto negativo de estas enfermedades en la producción y
la reproducción.
Agradecimientos
Este proyecto fue apoyado financieramente por Growing Forward 2 (una
iniciativa federal, provincial y territorial), Alberta Agriculture and Forestry,
(2018F009R), NSERC, Canada Research Chairs Program, Genome Canada y
Alberta Innovates. Los autores agradecen a los productores lecheros y
veterinarios participantes por su cooperación. Los autores también
agradecen a la Dra. Irene Lopez Helguera (Universidad de Lleida, España), al
Dr. Mohanathas Gobikrushanth (Universidad de Saskatchewan, Canadá) y al
Sr. Amir Behrouzi (Universidad de Alberta, Canadá) por su ayuda durante el
estudio.
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