REPLICACIN DEL ADN Una vez que se comprob que el ADN era el material hereditario y se descifr su estructura, lo que

quedaba era determinar como el ADN copiaba su informacin y como la misma se expresaba en el fenotipo. Matthew Meselson y Franklin W. Stahl disearon el experimento para determinar el mtodo de la replicacin del ADN. Tres modelos de replicacin era plausibles.

1. Replicacin conservativa durante la cual se producira un ADN completamente nuevo

durante la replicacin.

Modificad a 2. En la replicacin semiconservativa se originan dos molculas de ADN, cada una de ellas compuesta de una hebra de el ADN original y de una hebra complementaria nueva. En otras palabras el ADN se forma de una hebra vieja y otra nueva. Es decir que las hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas.

Modificada de NCBI

3. La replicacin dispersiva implicara la ruptura de las hebras de origen durante la replicacin que, de alguna manera se reordenaran en una molcula con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de ADN.

El experimento de Meselson-Stahl consiste en cultivar la bacteria Escherichia coli en un medio que contenga nitrgeno pesado (15Nitrgeno que es mas pesado que el istopo mas comn: el 14 Nitrgeno ). La primera generacin de bacterias se hizo crecer en un medio que nicamente contena 15Nitrgeno como fuente de N. La bacteria se transfiri luego a un medio con 14N. Watson y Crick haban pronosticado que la replicacin del ADN era semiconservativa, de ser as el ADN extrado de las bacterias luego de cultivarlas por una generacin en 14N tendra un peso intermedio entre el ADN extrado del medio con 15N y el del extrado de medio con 14N y as fue. Los detalles del experimento que incluye un proceso de ultracentrifugacin en cloruro de Cesio (CeCl2) puede encontrarse en el Curtis. La replicacin del ADN, que ocurre una sola vez en cada generacin celular, necesita de muchos "ladrillos", enzimas, y una gran cantidad de energa en forma de ATP (recuerde que luego de la fase S del ciclo celular las clulas pasan a una fase G a fin de, entre otras cosas, recuperar energa para la siguiente fase de la divisin celular). La replicacin del ADN en el ser humano a una velocidad de 50 nucletidos por segundo, en procariotas a 500/segundo. Los nucletidos tienen que se armados y estar disponibles en el ncleo conjuntamente con la energa para unirlos. La iniciacin de la replicacin siempre acontece en un cierto grupo de nucletidos, el origen de la replicacin, requiere entre otras de las enzimas helicasas para romper los puentes hidrgeno y las topoisomerasas para aliviar la tensin y de las protenas de unin a cadena simple para mantener separadas las cadenas abiertas.

Una vez que se abre la molcula, se forma una rea conocida como "burbuja de replicacin" en ella se encuentran las "horquillas de replicacin" . Por accin de la la ADN polimerasa los nuevos nucletidos entran en la horquilla y se enlazan con el nucletido correspondiente de la cadena de origen (A con T, C con G). Los procariotas abren una sola burbuja de replicacin, mientras que los eucariotas mltiples. El ADN se replica en toda su longitud por confluencia de las "burbujas". Dado que las cadenas del ADN son antiparalelas, y que la replicacin procede solo en la direccin 5' to 3' en ambas cadenas, numerosos experimentos mostraron que, una cadena formar una copia continua, mientras que en la otra se formarn una serie de fragmentos cortos conocidos como fragmentos de Okazaki . La cadena que se sintetiza de manera continua se conoce como cadena adelantada y, la que se sintetiza en fragmentos, cadena atrasada. Para que trabaje la ADN polimerasa es necesario la presencia, en el inicio de cada nuevo fragmento, de pequeas unidades de ARN conocidas como cebadores, a posteriori, cuando la polimerasa toca el extremo 5' de un cebador, se activan otras enzimas, que remueven los fragmentos de ARN, colocan nucletidos de ADN en su lugar y, una ADN ligasa los une a la cadena en crecimiento.

CROMOSOMA Los cromosomas son agregados de ADN y protenas llamadas histonas, en forma de X que se forman a partir de la cromatina durante la divisin celular. Cualquier alteracin en el nmero y/o en la morfologa de los cromosomas constituye una alteracin cromosmica Los cromosomas vienen en pares. Normalmente, cada clula en el cuerpo humano tiene 23 pares de cromosomas (46 cromosomas en total), de los cuales la mitad proviene de la madre y la otra mitad del padre.

Dos de los cromosomas, el X y el Y, determinan si una persona nace como nio o como nia (sexo) y se denominan cromosomas sexuales. -

Las mujeres tienen 2 cromosomas X. Los hombres tienen un cromosoma X y uno Y.

La madre siempre le aporta un cromosoma X al hijo, mientras que el padre puede contribuir ya sea con un cromosoma X o con un cromosoma Y. Por lo tanto, es el padre el que determina el sexo del hijo. Los cromosomas restantes se denominan cromosomas autosmicos y se conocen como pares de cromosomas del 1 al 22.

(en

Diagrama de un cromosoma eucaritico duplicado y condensado metafase mittica). (1) Cromtida, cada una de las partes idnticas de un cromosoma luego de la duplicacin del ADN. (2) Centrmero, el lugar del cromosoma en el cual ambas cromtidas se tocan. (3) Brazo corto. (4) Brazo largo.

ALTERACIONES NUMRICAS Las alteraciones nmericas son un cambio en la dotacin de cromosomas. Cuando existen uno o ms juegos de cromosomas completos, se habla de euploda (triploida, tetraploida y en general poliploida). En el caso de existir un defecto de cromosomas, se habla de monosoma. Si el defecto o exceso es de cromosomas incompletos, se habla de aneuploidias Casi la mitad de las alteraciones cromosmicas que se encuentran en el recin nacido son la presencia de un cromosoma extra (aneuploida) ya que las monosomas totales son incompatibles con la vida. Las trisomas constituyen la anomala cromosmica ms frecuente y, dentro de estas, las ms conocidas son la trisoma 21 (sndrome de Down), la trisoma 18 (sndrome de Edwards) y la trisoma 13 (sndrome de Patau). Solo los nios con sndrome de Down sobreviven hasta la edad adulta, mientras que los que tienen trisomas 18 y 13 mueren por lo general antes del primer ao. Las anomalas de los cromosomas sexuales tienen una menor repercusin fenotpica que la de los restantes autosomas y suele ser la esterilidad. Las alteraciones ms frecuentes de los cromosomas sexuales son el sndrome de Turner (45, X), el sndrome de Klinefelter (47, XXY), el sndrome de la triple X (47,XXX) y el sndrome de la doble Y (37, XYY). Adems de estas alteraciones numricas, los cromosomas sexuales pueden experimentar, como los autosomas, alteraciones morfolgicas (translocaciones entre dos cromosomas sexuales o translocaciones entre un cromosoma sexual y un autosoma) ALTERACIONES ESTRUCTURALES Las alteraciones estructurales se refieren a cambios en la forma y/o tamao de un cromosoma. Cuando el material gentico se conserva en el cromosoma alterado, la alteracin es equilibrada, mientras que si se gana o pierde material gentico, la alteracin es desequilibrada. Son la consecuencia de la rotura y uniones anmales de los cromosomas bajo la influencia de agentes externos que la clula no puede reparar. Las alteraciones estructurales bsicas son las roturas que ocasionan bien la formacin de una delecin (cromosoma al que le falta un fragmento) o de un fragmento sin centrmero

ORGANIZACIN DEL ADN: EL CROMOSOMA EUCARITICO El ADN es una larga molcula constituida por pares de bases que se encuentra organizada tridimensionalmente para ocupar un espacio dentro del ncleo celular La organizacin del ADN vara en funcin del grado de condensacin. El mximo nivel de condensacin lo manifiesta durante la metafase en forma de cromosomas. El mnimo nivel durante la interfase en forma de cromatina

EL NUCLEOSOMA Unidad bsica de condensacin del ADN (146 PB). Cuentas de rosario Unin del ADN a protenas estructurales de la familia de las histonas LA FIBRA DE 30 NM Siguiente nivel de organizacin del material hereditario Mayor grado de condensacin Menor espacio ocupado

NIVELES SUPERIORES DE ORGANIZACIN

Cromosoma metafsico

ADN Fibras 30 nm Cromatina Nucleosomas ms condensada

ORGANIZACIN DEL ADN El ADN es una molcula que se ha organizado de manera eficiente que permite almacenar la informacin gentica para que se pueda mantener a travs del tiempo y ser traspasada de generacin en generacin entre las especies. Si observamos la molcula de ADN veremos que est conformada por una doble hlice que se va condensando fuertemente para ocupar el menor espacio posible dentro de la clula. Toda la molcula se enrolla en unas protenas con forma circular conocidas como las Histonas, el ADN se enrolla en un conjunto de 8 histonas que dan esta forma circular que se denomina octmero. Luego el ADN se superenrolla sobre los octmeros pasando por distintos estadios hasta llegar a condensarse tanto como un cromosoma. Cada cromosoma representa una molcula de ADN y por tanto un conjunto de genes, sin embargo el ADN no siempre se encuentra tan condensado y si se observa al microscopio tiende a estar en forma de hilos enredados e imposibles de contabilizar, a este estado se le llama Cromatina o ADN laxo.

ESTRUCTURA DEL ADN La informacin con la que se fabrican las molculas necesarias para el mantenimiento de las funciones celulares est guardada en una molcula de cido nucleico llamada cido desoxirribonucleico (ADN). En este apartado describiremos su estructura y explicaremos cmo se almacena dentro del ncleo celular. En la dcada de los cincuenta, el campo de la biologa fue convulsionado por el desarrollo del modelo de la estructura del ADN. James Watson y Francis Crick en 1953 demostraron que consiste en una doble hlice formada por dos cadenas. El ADN es un cido nucleico formado por nucletidos. Cada nucletido consta de tres elementos: un azcar: desoxirribosa en este caso (en el caso de ARN o cido ribonucleico, el azcar que lo forma es una ribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada Si la molcula tiene slo el azcar unido a la base nitrogenada entonces se denomina nuclesido. Las bases nitrogenadas que constituyen parte del ADN son: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). Estas forman puentes de hidrgeno entre ellas, respetando una estricta complementariedad: A slo se aparea con T (y viceversa) mediante dos puentes de hidrgeno, y G slo con C (y viceversa) mediante 3 puentes de hidrgeno. Los extremos de cada una de las hebras del ADN son denominados 5-P (fosfato) y 3OH (hidroxilo) en la desoxirribosa. Las dos cadenas se alinean en forma paralela, pero en direcciones inversas (una en sentido 5 3 y la complementaria en el sentido inverso), pues la interaccin entre las dos cadenas est determinada por los puentes de hidrgeno entre sus bases nitrogenadas. Se dice, entonces, que las cadenas son antiparalelas.

Figura 1. Estructura del ADN. El cido desoxirribonucleico es un polmero de dos cadenas antiparalelas (orientacin 5 3 y 3 5). Cada cadena est compuesta por unidades de un azcar (desoxirribosa), un fosfato y una base nitrogenada unidas entre si por enlaces fosfodister. Las bases presentes en el ADN son: adenina (A), timina (T), citosina (C) y guanina (G). Para recordar cmo aparean entre s las bases podemos pensar en las iniciales de dos grandes personajes del tango: Anbal Troilo (adenina es la base complementaria de timina) y Carlos Gardel (citosina es la comlementaria a guanina).

SEGREGACIN DE GENES EN LA MEIOSIS Una de las maneras en que la meiosis produce variacin gentica, es a travs de las diferentes formas que los cromosomas maternal y paternal son combinados en las clulas hijas.

El nmero de posibles combinaciones de cromosomas en los ncleos haplodes es muy grande potencialmente- En general, el nmero de posibles combinaciones en los cromosomas es 2n, donde n es el nmero de pares de cromosomas. Por ejemplo, en las moscas de la fruta, que tienen 4 pares de cromosomas, el nmero de posibles combinaciones es 2n, 16. Para los humanos, con 23 pares de cromosomas, hay cerca de 8 millones de combinaciones.

ESTRUCTURA DE LOS GENES:

Los genes tienen la estructura que se muestra en la figura 2a, que consiste en segmentos denominados exones e intrones; siendo los exones los que llevan el mensaje para la formacin de la protena. Para ello, en la transcripcin del mensaje gentico, lo primero que ocurre es la copia completa del gen(con los exones e intrones) formando un pre-ARNm (fig. 2b). Posteriormente, se produce una separacin de los intrones que dando slo los exones formando as el ARNm (fig. 2c). Este proceso de separacin de los exones y los intrones, y la posterior unin de los exones se denomina en ingls splicing, que significa unin. No obstante, en los ltimos aos, se esta observando que los intrones tambin tienen importancia en estos procesos.

CLONACIN DE GENES La clonacin de genes es una tcnica mediante la cual se selecciona un gen que interesa por alguna razn, generalmente porque produce alguna protena de inters para el hombre (antibiticos, vacunas, protenas teraputicas, hormonas, etc.), se introduce en una clula sencilla, normalmente bacteriana o de algn protista sencillo, como las levaduras, y se hace que esa clula se divida muchas veces y que fabrique la protena que nos interesa; luego se purifica la protena y se puede distribuir para su uso. Las fases del proceso son las siguientes: * Obtener del fragmento de ADN que contiene el gen que se quiere clonar * Insertar dicho gen en otra molcula de ADN que sirva de transportador (vector), generalmente ADN de virus y bacterias * Introducir el vector de clonacin con el gen que nos interesa en una clula de otro organismo (clula hospedadora); la clula hospedadora suele ser una clula bacteriana por su sencillez y rapidez de multiplicacin * Multiplicar la clula hospedadora para obtener muchas copias del gen Hoy en da existe una tcnica para clonar genes que es la PCR (Polymerase Chain Reaction), en la que a partir de un fragmento de ADN cualquiera, se obtienen muchas copias por la accin de la enzima ADN polimerasa, responsable de la replicacin del ADN. PROYECTO DEL GENOMA HUMANO El principal avance de este milenio en el campo de la biologa, ha sido la caracterizacin minuciosa de las instrucciones genticas que conforman nuestro ser. El Proyecto del Genoma Humano, iniciado en 1990 y que se ha descrito como un proyecto con mtodos concienzudos y precisos, sacar partido de todas las ramas de la biologa. Dicho proyecto empez con clulas sanguneas y espermticas. Se cortaron luego fragmentos del ADN de cada cromosoma, se identific la secuencia de bases del ADN y, por ltimo, se localiz y se agrup cada retazo de ADN situado a sus dos lados en el cromosoma. Se fueron elaborando secuencias de segmentos gnicos de genes completos, de cromosomas completos y del genoma entero. El continuo inters de este proyecto ha dado como resultado el borrador de la secuencia de un genoma y la secuencia completa del cromosoma 21, implicada en muchas enfermedades. El objetivo principal de este proyecto es trazar diversos mapas de genomas, incluyendo la secuencia nucleotdica completa del genoma humano. El descubrimiento de la secuencia completa del ADN traer respuestas que se plantean sobre la evolucin de los organismos, la vida in vitro, y otras cuestiones. Las bases del genoma humano, llenara ms de 200 gruesos directorios telefnicos, sin determinar que opera cada una de las secuencias de ADN. Las protenas son las enzimas que catalizan las reacciones bioqumicas de la vida. Debido a la relacin entre los genes y las protenas, que son las enzimas, al principio estas parecan la sustancia fundamental que determinaba la herencia. Pero Oswald Theodore demostr que el ADN era el encargado de esta funcin. Desde que esta hiptesis se demostr, se llego a la conclusin de que debe haber un proceso mediante el cual las bases nitrogenadas transmitan la informacin. Mediante este proceso se podra explicar cmo los genes controlan las formas y funciones de las clulas, tejidos y organismos.