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4.-Biología Molecular de Los Transportadores de Glucosa
4.-Biología Molecular de Los Transportadores de Glucosa
Valmore Bermúdez, Fernando Bermúdez, Nailet Arraiz, Elliuz Leal, Sergia Linares, Edgardo Mengual, Lisney Valdelamar, Moisés Rodríguez, Hamid Seyfi, Anilsa Amell,
Marisol Carrillo, Carlos Silva, Alejandro Acosta, Johnny Añez, Carla Andara, Verónica Angulo, Gabriela Martins.
Hexosas como la glucosa, galactosa y fructosa cumplen Hexoses like glucose, galactose and fructose serve as basic
funciones importantes en las células eucarióticas. Estas fuel molecules for eucaryotic cells. These molecules are un-
moléculas son incapaces de difundir directamente a través able to diffuse across cellular membranes, and require trans-
de las membranas celulares por lo que requieren proteínas porter proteins for entry into and exit from cells. Three dis-
transportadoras especializadas para entrar al interior celular. tinct groups of hexose transporters have been identified and
Dichas biomoléculas pertenecen a un grupo de transporta- classified based on their dependence on cellular energy and
dores constituida por 2 familias de proteínas: la familia de los its chemistry structure. Each of the transporters has different
Glut´s (del inglés Glucose Transporters) y la familia de los affinities for glucose and the other hexoses, which largely dic-
co-transportadores de sodio y glucosa. tates their function. The hexose transporters are large integral
membrane proteins. Based on the deduced amino acid se-
Según la información obtenida de la secuencia de aminoá- quences of their cloned cDNAs, they have similar structures,
cidos por medio de librerías de cADN todos poseen una es- consisting of 12 or 14 membrane-spanning regions with cyto-
tructura básica similar: 12 (Gluts) o 14 (SGLT) dominios tras- plasmic C-terminal and N-terminal tails. Also, they all appear
membrana. Igualmente todos parecen estar glicosilados en to be glycosylated on one of the extracellular loops. Transport 6
alguna de sus asas extracelulares. of sugars across membranes appears to result from a series
of conformational changes which “flips” the transporter be-
En los últimos siete años ha habido un explosivo incremen-
tween alternate states with the substrate binding site either
to en la información sobre estos transportadores, de hecho,
facing the extracellular or cytoplasmic side of the membrane.
hasta hace diez años solo se conocían 6 transportadores
Transport in either direction is thus possible, depending on
pero esta familia ha crecido rápidamente hasta llegar a 14
relative substrate concentrations on either side of the mem-
miembros para los Gluts y 6 miembros para los SGLT´s. El
brane. The original protein, GLUT1, was identified in molecu-
impacto de estos descubrimientos se hace notar cuando se
lar term’s 12 years ago. In the subsequent 15 years, a family of
analizan los procesos en los que se involucran estas proteí-
related transporters was identified (GLUTs 1-14). The impact
nas: Control de la glicemia basal y post-prandial; mecanismos
of these discoveries is better realized when we list a sample of
de absorción de la glucosa y fructosa en el intestino delgado;
the processes that utilize different members of the GLUT fam-
absorción de fructosa en los espermatozoides; reabsorción
ily: control of glycemia; insulin dependent glucose utilization;
de glucosa a nivel tubular renal y yeyuno; maduración de la
transport pathways in brain neurons and glia; mechanisms of
expresión de Glut´s en la mama en lactación; incorporación
glucose and fructose uptake in the intestinal track; reabsorp-
de glucosa al músculo durante el ejercicio; mecanismo sen-
tion of glucose in kidney tubules and jejunum; maturation of
sor en la secreción de insulina y respuestas adaptativa del
transporters during lactation and weaning; sensing of glucose
metabolismo energético durante estados de estrés, etc.
levels by the pancreas and the liver; control of glucose uptake
Palabras clave: Glut, Glucosa, transportador, difusión facili- in high fat feeding; glucose uptake in response to exercise,
tada, SGLT-1, SGLT-2, Co-transportador. adaptive response of energy metabolism to cellular stress.
Los carbohidratos son sustancias químicas orgánicas de am- En el epitelio intestinal y epitelio de los túbulos contorneados
plia distribución en la naturaleza. En las plantas son produci- proximal y distal existen sistemas de co-transporte de glu-
dos por el proceso de la fotosíntesis e incluyen a la celulosa cosa acoplados a Na+ que permiten la absorción rápida de
como ejemplo de un carbohidrato estructural y al almidón esta molécula desde el íleo hacia el sistema portal y además
como carbohidrato de almacén. En las células animales los de la reabsorción de la glucosa filtrada en el glomérulo nue-
carbohidratos - en forma de glucosa o en su polímero de vamente al torrente circulatorio. Este sistema se denomina
almacén, el glucógeno – sirven como fuente importante de SGLT (Sodium/Glucose Transporters), del cual se conocen 6
energía para las actividades vitales de la mayoría de las es- isoformas (SGTL1-6) que aprovechan el transporte del Na+ a
pecies vivientes que habitan el planeta. favor de su gradiente de concentración para generar una cor-
riente electroquímica que produce los cambios conformacio-
Para poder llevar a cabo importantes funciones como la oxi- nales necesarios para la traslocación de la glucosa a través
dación y el almacenaje, la glucosa debe entrar al interior de de la membrana plasmática5,6,7,8.
la célula para incorporarse a la vía metabólica que predomine
según las condiciones hormonales y energéticas del momen- Al comparar las estructuras primarias de estos transportado-
to1. Una célula puede sobrevivir si evita que su medio interno res se encuentra que el SGLT-2, SGLT-3 y SGLT-4 tienen un
se mezcle y establezca el equilibrio con el medio ambiente. 70, 59 y 54 % de homología con el SGLT-1 respectivamente.
Este semi-aislamiento es proporcionado por la membrana
celular, de naturaleza lipídica y relativamente impermeable SGLT-1 (SLC5A1)
a moléculas polares como la glucosa. Es por esta caracter-
El gen del SGLT-1 (Fig. 1) se denomina SLC5-A1 y fue aislado
ística que moléculas como los carbohidratos requieren algún
a partir de librerías de cDNA de intestino delgado de conejo.
elemento transportador que les permita cruzar el escollo que
Con una extensión de 80 Kb y 15 exones se ubica en el cro-
significa la membrana; así, la naturaleza, a través de mil-
mosoma 22 en la región q13.1. Su trascripto es una proteína
lones de años de evolución biológica desarrolló moléculas
de 664 aminoácidos y 73KDa con una estructura secundaria
proteicas que cruzan completamente la membrana y que son
formada por 14 α-hélices cuyos extremos amino y carboxilo
capaces de formar “poros” que comunican el exterior con el
terminales se encuentran en el espacio extracelular.
interior celular, permitiendo el flujo de moléculas como los
aminoácidos, vitaminas y carbohidratos en un sentido u otro.
En este orden de ideas, los transportadores para glucosa
trabajan de manera coordinada con factores hormonales, re-
ceptores, y segundos mensajeros para mantener el flujo de
este metabolito en condiciones normales.
El gen de este co-transportador se aisló de librerías de tejido Si se considera cualquier Glut dentro del contexto de una
renal humano en el cromosoma 16 p11.2 que se expresa gran familia de proteínas puede notarse de forma inmediata
fundamentalmente en la corteza renal y en mucho menor que todos poseen características comunes que en términos
grado en el íleo. Este transportador es una proteína integral bioquímicos se denominan “firma molecular de los trans-
de membrana de 672 aminoácidos con una estructura se- portadores de glucosa” y que no es más que un conjunto
cundaria similar al resto de los miembros de esta familia y de secuencias primarias aminoacídicas extremadamente
que se encuentra en las células epiteliales del túbulo con- conservadas que determinan estructuras secundarias y
torneado proximal, de allí, que la función principal de este terciarias (dominios o motifs) que son responsables de las
co-transportador es la reabsorción de Na+, glucosa y agua características funcionales de la proteína: especificidad por
a nivel renal bajo los mismos principios del SGLT-110. Sin uno o más carbohidratos, afinidad por el sustrato, distribu-
embargo, el descubrimiento y la caracterización de la acua- ción tisular, ubicación celular, regulación de su actividad por
porina 2 en el túbulo contorneado proximal y las acuaporinas hormonas, etc4.
2 y 6 en los túbulos colectores obligarán en un futuro próximo Las primeras firmas en los Gluts pueden estudiarse histórica-
a la revisión de los procesos de transporte de solutos y agua mente con el descubrimiento del primer transportador de glu-
a través del epitelio tubular renal9. cosa en 1977 a partir de membranas de eritrocitos humanos
por Michihiro Kasahara y Meter Hinkle de la Universidad de
SGLT-3 (SLC5A4 ó SAAT1)
Cornell y el trabajo clásico llevado a cabo ocho años después
El gen de este Co-transportador se ubica en el cromosoma en un proyecto conjunto dirigido por Mike Mueckler y Harvey
22q12.2-q12.3 y se aisló por primera vez de librerías de riño- F. Lodish del instituto Whitehead de investigaciones biomédi-
nes de cerdo y posteriormente en riñones humanos, ubicán- cas, en el cual se dilucidó la secuencia de aminoácidos de
dose solo a 0,10 mb corriente abajo del gen del Glut-1 con este transportador. Los investigadores trabajaron en sentido
una distribución de exones e intrones similar, por lo que se inverso mediante una sencilla estrategia que consistió en el
cree que se originó de una duplicación de éste último. Este aislamiento del ADN que codificaba la proteina, secuenciación
gen codifica una proteína de 659 aminoácidos que se ha de- del número y orden de las bases que integraban ese ADN y fi-
tectado en músculo esquelético, sistema nervioso central y nalmente, aplicación del código genético, con lo que se dedu-
en neuronas de los plexos nerviosos sub-mucosos y mioen- jo que codificaba una proteína de 492 aminoácidos que podía
téricos a nivel de la placa motora. Este transportador tiene organizarse en 25 segmentos, 12 de los cuales eran seg-
baja afinidad por la glucosa (50mM) así como una muy baja mentos hidrofóbicos que cruzan el espesor de la membrana
capacidad de transporte para la misma. Evidencia reciente plasmática denominados segmentos T (T = trasmembrana)
indica que se comporta como glucosensor en la membrana con una estructura α helicoidal, y 13 segmentos muy hidrofíli-
79 plasmática de las neuronas colinérgicas y del tejido muscular cos, llamados asas (intra o extracelulares) que conectan a los
liso y estriado, regulando de una forma aún desconocida la segmentos trasmembrana. Este transportador característico
actividad muscular11. de los eritrocitos recibió el nombre de Glut 12 (Fig. 4).
Este Glut posee una alta afinidad por la glucosa (Km = 1-2
mM) por lo que es capaz de transportarla al interior de las
células prácticamente a cualquier concentración, por lo que
se considera como un transportador basal de glucosa que
Figura 5. Dendrograma de alineamiento múltiple de todos los miembros de la familia
de los Gluts. El alineamiento fue realizado mediante el programa HUSAR mostrando mantiene su concentración intracelular estable, hecho de
la relación entre cada Glut. gran importancia en aquellas células que requieren un sumi-
nistro constante de la misma para la producción de energía,
GLUT 1 (SLC2A1): Un Glut de alta afinidad presente en teji-
tal como sucede en tejido nervioso y eritrocito.
dos que utilizan a la glucosa como combustible principal
Al analizar la posible estructura secundaria de este Glut me-
Este Glut también se conoce transportador de glucosa de er-
diante programas de simulación se ha predicho que este
itrocito/cerebro cuya cinética de transporte se ha investigado
posee un 82% de su estructura como alfa-hélices, un 10
desde hace más de 40 años principalmente en eritrocitos
% como giros beta, y un 8% de enrollamientos al azar. La
humanos cuando Widdas y colaboradores en 1952 propusi-
orientación de las 12 alfa-hélices dentro de la membrana
eron la existencia de un mecanismo de transporte de glucosa
plasmática y la posición relativa de cada una de ellas ha sido
saturable en la placenta humana. Sin embargo, era moderna
propuesta por Mueckler y cols, la cual presenta un canal ac-
del estudio de este transportador comenzó en 1977 cuando
uoso central formado por la yuxtaposición de 5 de las 12 alfa
Kasahara y Hinkle lograron purificarlo en 1977 a partir de
hélices: 3,5,7,10 y 11, cada una de las cuales posee carácter
las membranas de eritrocitos, hecho que fue posible gracias
antipático. Sin embargo, en un modelo alternativo derivado
a que representa el 5% del total en peso de la membrana
de estudios de mutagénesis de cisteína en las alfa-hélices 2,
plasmática eritrocitaria3 (Fig. 6).
5, 10 y 11 se ha demostrado que todas tienen residuos ac- Otro caso interesante es la intervención del Glut-2 en el me-
cesibles a moléculas de agua capaces de formar un canal ca- tabolismo hepático de la glucosa. Después de las comidas, el
paz de transportar glucosa y agua. Estudios posteriores han hígado es capaz de incorporar la glucosa proveniente de los
demostrado que la hélice 7 es la más sensible a los estudios alimentos gracias al Glut-2 para ser convertida rápidamente
de mutagénesis de cisteína lo que sugiere que se encuentra en glucógeno. De forma inversa, durante el período post-pan-
mas centralmente posicionada a la hora de formar el poro drial tardío (período comprendido de 6 a 8 horas después
de entrada de la glucosa. La confirmación de este modelo de las comidas) el glucógeno sufre degradación generando
requiere determinaciones más directas en lo que concierne a moléculas de glucosa que salen de la célula hepática a la
las distancias inter-hélices. sangre, manteniendo así los niveles de glucosa plasmática
dentro de límites normales. De esta forma, es fácil notar que
Las propiedades cinéticas de este Glut han sido extensam- el Glut-2 es un transportador de tipo bidireccional que puede
ente estudiadas pero todavía resulta un foco de polémica la transportar glucosa desde la sangre al tejido o desde el tejido
manera de cómo maneja las moléculas de glucosa de un lado hacia la sangre, hecho particularmente cierto a nivel hep-
a otro de la membrana. Según la propuesta más aceptada, ático y renal funcionando como sensor de la concentración
el transporte facilitado de glucosa ocurre mediante cambios plasmática de glucosa y permitiendo su intercambio entre la
conformacionales en la estructura terciaria de transportador sangre y el hepatocito dependiendo de la condición alimen-
inducidos por la unión de la molécula de glucosa a un sitio de taria predominante en el momento19.
unión para ésta en la cara extracelular del transportador y su
movimiento progresivo hacia la cara intracelular del mismo Recientemente se ha descubierto que el Glut-2 tiene también
donde existe otro sitio de unión para la glucosa. Según este la habilidad de transportar fructosa gracias a un motif denom-
modelo, ambos sitios no pueden estar ocupados al mismo inado HVA en el alfa-hélice Nº 7 que también está presente
tiempo, por lo que debe transportarse una sola molécula de en el Glut-5 (transportador de fructosa clásico) y sustituye al
glucosa a la vez. Inconsistente con este modelo es el hecho motif QLS que se observa normalmente en los Gluts de alta
de que aparentemente ambos sitios de unión pueden estar afinidad por la glucosa como el Glut-1.
ocupados al mismo tiempo, por lo que una propuesta alter-
nativa ha sido postulada por Carruthers y cols en el cual el GLUT 3 (SLC2A3): El Glut de más alta afinidad por la glucosa
Glut 1 existe como un homotetrámero que presentan interac-
El Glut-3 es un transportador de glucosa de alta afinidad (Km
ciones cooperativas positivas entre sí formando dos dímeros
= 1-2 mM) que fue caracterizado primariamente en cerebro.
funcionales: dentro de cada dímero, un monómero posee su
Bajos niveles de Glut-3 se han detectado en miocardio fetal
sitio de extracelular unión a la glucosa libre mientras que el
y adulto, placenta, hígado y músculo. La presencia de este
otro monómero tiene su sitio de unión a la glucosa intracelular
transportador co-agregado con el Glut-1 en tejido nervioso
libre. Al mismo tiempo, el otro dímero tiene una conformación
habla a favor de que este transportador tenga funciones de
opuesta, lo que permite cambios recíprocos que permiten la
mantenimiento del nivel basal de glucosa en neuronas y pla-
entrada de la glucosa al interior celular. Este modelo explica
centa20 (Fig. 6). Recientemente se ha comprobado su expre-
la mayoría de los datos cinéticos que se encuentran en con-
sión en las células de trofoectodermo de embriones de ratón.
flicto con el modelo de transporte original3.
El bloqueo de la expresión de este Glut conlleva a la muerte
GLUT2 (SLC2A2): Un Glut con función glucosensora por apoptosis del embrión comprobando la importancia de
este transportador en el desarrollo embrionario.
El Glut-2 es un transportador de glucosa de baja afinidad
81 GLUT 4(SLC2A4): Un Glut con gran movilidad
(Km = 15–20 mM) que se expresa en el hígado humano adul-
to, riñón, células beta de los islotes de Langerhans y en la
El Glut-4 es un transportador de alta afinidad para la glu-
membrana basolateral de las células epiteliales del intestino
cosa (Km = 5 mM) que se expresa fundamentalmente en
delgado. Su gen se ubica en el cromosoma 3q26.1-26.3 y
tejido muscular estriado, tejido muscular cardíaco y adipocito
posee una extensión de 186,9 MB17.
(Fig. 7). Su gen se ubica en el cromosoma 17p13 y tiene
Gracias a su elevado Km este Glut transporta glucosa pro- una extensión de 8,4 MB21,22,23,24. Este transportador no se
porcionalmente a su concentración por lo que se le atribuye expresa en tejidos embrionarios (ni pre ni post-implantación)
la propiedad de glucosensor en las células que lo poseen, en y es único en el sentido de la regulación de su localización
especial en hígado y célula beta pancreática; así, por ejem- en el citosol o en la membrana por la insulina25. En condi-
plo, con una baja concentración de glucosa en plasma este ciones basales, la vasta mayoría de las moléculas de Glut-4
Glut no es capaz de transportar glucosa al interior de la cé- se encuentran localizadas dentro de vesículas en el citosol
lula beta y por ende, la secreción de insulina es muy baja. Sin que forman dos tipos de compartimientos bien definidos, ya
embargo, después de las comidas, cuando se incrementa la que un grupo de estas vesículas responden a la señal de la
concentración plasmática de glucosa en suficiente magnitud insulina y otro grupo responde fundamentalmente al estímulo
para poder ser transportada al interior de la célula beta, la que representa la actividad física. Este comportamiento rep-
generación de ATP producto del metabolismo de la glucosa resenta un mecanismo muy fino de regulación del metabo-
es capaz de estimular la liberación de insulina. En este caso, lismo de la glucosa que solo permite la entrada de glucosa al
el Glut-2 actúa como un regulador que solo permite la en- tejido muscular cuando es lo suficientemente elevada como
trada de glucosa cuando está lo suficiente elevada en plasma para estimular la secreción de insulina y que en última instan-
como para requerir la liberación de una cantidad significativa- cia favorecerá la entrada del excedente de glucosa al interior
mente importante de insulina18. muscular. Cuando el nivel de glucosa en plasma es bajo la
liberación de insulina también lo es, por lo que durante el
ayuno la mayoría de las moléculas de glucosa son derivadas Glut-1 y el Glut-4. Este transportador no posee uno de los
a los tejidos que tienen Glut´s de alta afinidad (Glut-1 y Glut- dominios de reconocimiento de la glucosa, el dominio QLS,
3) que no son sensibles a la presencia de la insulina. De esta en la alfa hélice Nº 7.
forma, durante el ayuno el músculo es incapaz de incorporar
glucosa en cantidades significativas (a menos que se haga Más allá del mecanismo de absorción de fructosa en intesti-
actividad física enérgica) preservándola para el tejido nervi- no, mucha polémica ha generado el mecanismo de obtención
oso y eritrocito26,27,28,29,30. de energía de los espermatozoides humanos. A pesar que
los datos disponibles en la actualidad son consistentes con
el concepto de que estas células usan fundamentalmente a
la glucosa como fuente de energía, es un hecho cierto que
la concentración de glucosa en los túbulos seminíferos es
muy baja y que la concentración de ésta en el líquido seminal
es muy variable, desde un nivel muy cercano a cero hasta
90 mg/dl. La expresión de varios transportadores de hexo-
sas con diferentes afinidades puede representar una adap-
tación funcional para transportar diferentes sustratos energé-
ticos cuya concentración varía durante el ciclo de vida de los
espermatozoides, de hecho, estudios previos han concluido
que en el espermatozoide humano se expresan también los
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