UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACUTAD DE INGENIERÍA DE SISTEMAS E INFORMÁTICA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE SISTEMAS

Herencia ligada al cromosoma X

CURSO: BIOLOGÍA PARA CIENCIAS E INGENIERÍA
PROFESOR: BORJA LUIS HUAMÁN TINCO
GRUPO 1:
- CHRISTIAN LUIS CHUQUICHAICO RAMOS (LÍDER)
- FELIPE SANTIAGO TRIVEÑO DAZA
- FRANKLIN JOEL SANCHEZ FERNANDEZ
- JOSEMANUEL CAMARGO PUMACAYO
- JORGE LUIS SANTAMARÍA APAZA

LIMA, 2022
ÍNDICE
1. Antecedentes.......................................................................1
2. Introducción.........................................................................1
3. Objetivos..............................................................................1
4. Metodología..........................................................................1
4.1. Pacientes................................................................................. 1
4.2. Criterios de selección.............................................................1
4.3. Muestras de sangre................................................................2
4.4. Evaluación de la función oxidativa de neutrófilos
mediante el ensayo DHR..............................................................2
4.5. Consideraciones éticas..........................................................2
4.6. Análisis estadístico.................................................................2
5. Resultados...........................................................................2
6. Conclusiones.......................................................................4
7. Bibliografía...........................................................................5
1. Antecedentes

El actual informe que estamos redactando se realizó en base al artículo:

“Enfermedad granulomatosa crónica. diagnóstico mediante el ensayo de
dihidrorodamina”. Recibido: 19 de noviembre de 2018; Aceptado: 2 de
septiembre de 2019.

2. Introducción

Los cromosomas son las estructuras portadoras de la información genética de

cada individuo, los cuales se localizan en el núcleo de la célula. Los
cromosomas están formados de un material llamado cromatina, que se
encuentra conformada por histonas y ADN. Dentro de los cromosomas se
encuentran las unidades de información hereditaria llamados genes. Cuando
uno de estos genes sufre una mutación se genera un cambio en el ADN, lo que
conlleva a originar una enfermedad. En el presente se han encontrado más de
4000 enfermedades causadas por anomalías en los genes. Más de 600 de
estas enfermedades están ligadas al cromosoma X.
Una de estas enfermedades es la granulomatosa crónica, que es una patología
genética que ocurre en aproximadamente 1:250.000 nacidos vivos. Esta
enfermedad se presenta como inmunodeficiencia primaria rara causada por
anomalías en la encima NAPH oxidasa de las células fagocíticas,
principalmente en neutrófilos, lo que resulta en la producción deficiente de
especies reactivas del oxígeno, siendo este mecanismo primordial para la
eliminación de bacterias y hongos.

Patrones de herencia de la EGC Porcentaje

de casos
Mutaciones en el gen CYBB 70%

Mutaciones autosómicas recesivas en el gen 20%

NCF1(p47phox)
Mutaciones en los genes CYBA(p22phox) 5%

Mutaciones en los genes NCF2(p67phox) 5%

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3. Objetivos

Tratar de encontrar algún patrón de herencia entre los casos de EGC en niños
y sus familiares femeninos usando el ensayo DHR.

4. Metodología

4.1. Pacientes

Se tomaron en cuenta a ambos sexos y menores de 18 años. Entre marzo del

2014 y julio del 2017, los niños con indicios de EGC fueron derivados de
diversos hospitales al centro donde se realizará la investigación. Además, a los
pacientes diagnosticados con EGC, también se incluyeron sus familiares
femeninos de lado materno.
4.2. Criterios de selección

Se escogieron niños con características sugerente al EGC, los pacientes

seleccionados manifestaban una neumonía grave, linfadenipatías, infecciones
bacterianas o fúngicas, abscesos cutábeos, fiebre prolongada de origen
desconocido y osteomielitis. Se excluyeron niños con inmunodeficiencias
secundarias por uso de medicamentos o infección de VIH. A los familiares que
se incluyeron en la investigación, las madres, una abuela y dos tías, fueron
analizadas sus muestras.
4.3. Muestras de sangre

Se extrajo 1ml de sangre por punción venosa y se introdujo en un tubo con

EDTA como anticoagulante. La muestra se conservó a temperatura ambiente y
se llevó al centro de investigación, en el caso de los pacientes hospitalizados.
El ensayo DHR se realizó en un periodo que no excedió a las cuatro horas
después de la extracción de sangre.
4.4. Evaluación de la función oxidativa de neutrófilos mediante el ensayo
DHR

Se realizo según el protocolo descrito por Acosta et al.

En resumen, se añadió 4ml de solución lisante NH4CL 0.83g %a 100 ul de
sangre durante 3 minutos, se centrifugo a 1200 rpm por 3 minutos y se
suspendieron en 1 ml de buffer PBS.
Se usaron 2 tubos uno E (estimulado) y NE (no estimulado) con 340 uL de
suspensión celular y 150 uL de solución DHR en concentración final e 87 uM y
se incubaron a 37° C durante 5 minutos, luego se añadió 150 uL de solución
PMA 3.54 uM al tuve E y 150 de uL de PBS al tubo NE incubando por 15
minutos a 37°C, posteriormente se analizaron con el citómetro de flujo Facs
Calibur. Los resultados se expresaron del índice de estimulación (IE) de
neutrófilos entre la intensidad media de fluorescencia (IMF) del tubo E y la IMF
del tubo NE.
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4.5. Consideraciones éticas

Se obtuvo el consentimiento oral y escrito de los padres o tutores de los niños.

Los familiares femeninos del lado materno de los niños con EGC firmaron el
consentimiento informado y las portadoras recibieron consejo genético. Los
datos fueron recaudados con absoluta confidencialidad. El protocolo fue
aprobado por el Comité de Ética en la Investigación del Instituto de
Investigación de ciencias de la salud.
4.6. Análisis estadístico

Los datos se almacenaron en una hoja de cálculo de Microsoft Excel versión

8.0 y el software estadístico Epi InfoTM CDC versión 7.2. Las variables
categóricas descritas como frecuencias absolutas y relativas, las variables
cuantitativas expresadas como medianas y rangos intercuartílicos (RIQ) o
desviaciones estándar (DS) según de la variable.

5. Resultados

En el presente estudio se incluyeron 107 pacientes entre 1 mes y 15 años, de

los cuales el 58% (62/107) eran de sexo masculino. Las manifestaciones
clínicas más frecuentes fueron neumonía 45% (48/107), infecciones cutáneas
18% (19/107), linfadenopatías 13% (14/107) y abscesos 9% (10/107). En el
23% (24/107) de los pacientes, se observaron antecedentes familiares
relacionados a inmunodeficiencia primaria y/o enfermedad granulomatosa
crónica.
Al considerar a la población total, el IE promedio fue de 39,7 ± 13,8 (RIQ: 32,0 -
50,6). Sin embargo, en 3/107 niños se observaron valores de IE tan bajos como
1,0 (pacientes #1 y #2) y 4,8 (paciente #3). La Tabla 1 muestra en detalle las
características descritas.

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En los neutrófilos de 101/107 pacientes se observó un desplazamiento
completo de la señal de fluorescencia (Figura 1A), lo que indica un estallido
respiratorio normal de neutrófilos. Sin embargo, en 2/107 niños, los pacientes
#1 y #2 mencionados anteriormente (ambos niños de un año de edad), no se
observó ningún desplazamiento de fluorescencia en el histograma (Figura 1B),
resultando en ambos casos un IE de 1,0. Estos hallazgos indican ausencia de
estallido respiratorio de neutrófilos. En un tercer paciente (paciente #3, niño de
7 años), se observó un leve desplazamiento de la señal de fluorescencia con
un IE de 4,8 (Figura 1C), lo que se interpreta como una producción muy baja de
estallido respiratorio de neutrófilos en este paciente.
Hemos descrito a 101/107 pacientes y controles sanos presentan un estallido
respiratorio de neutrófilos normal, además de la muy baja producción de
estallido respiratorio en los pacientes #1, #2 y #3. Se observo un patrón
anormal de DHR en los histogramas de 3/107 niños. Se encontraron
desplazamientos de fluorescencia incompletos, los valores de IE fueron: 20,3,
17,9 ,14,6. Los resultados apuntan a una menor producción de estallido
respiratorio de neutrófilos comparado con los controles sanos.

Las madres de los pacientes #1, #2 y #3 fueron evaluadas por el ensayo DHR y
en el caso del paciente #2, el ensayo se efectuó con dos tías y en su abuela.
Los ensayos estimulados de 4/6 de los familiares maternos, se observaron dos
picos de flourescencia (patrón bimodal) que corresponde a una población de
neutrófilos no activados (20-30% con un IE=1,0-1,7) y otra población de
neutrófilos (70-80% con un IE=32,9-38,5) que fue activada normalmente. La
otra tía del paciente #2 igualmente presento un patrón bimodal pero la

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población de neutrófilos activos fue de 48% con un IE=34,7. Un patrón bimodal
en el ensayo DHR indica un estado de portadora y el patrón de herencia más
probable en estos casos es la EGC ligada al cromosoma X.
No se observó un patrón bimodal, en la madre del paciente #3. Con el
histograma de DHR se mostró solo una población de neutrófilos con
estimulación normal y un IE=42,3. Se infiere que el patrón más probable sea la
EGC AR.

6. Conclusiones

Se detecta 3 casos de EGC en una población infantil con infecciones

recurrentes y se identificaron 5 portadoras a través del ensayo DHR, siendo la
primera vez que se utiliza esta técnica en Paraguay.
También se obtuvo información sobre el patrón de herencia más probable,2
casos de posible EGC ligada al cromosoma X y 1 caso probable de EGC AR,
esos casos detectados en un periodo de 3 años podrían indicar una mejora en
el diagnóstico de la EGC en Paraguay.

7. Bibliografía

1. Sanabria, D., Giménez, V., Martínez De Cuéllar, C., Carpinelli, M.,

Benegas, S., & Insaurralde, S. (2020). Chronic granulomatous disease.
Diagnosis by the dihydrorhodamine assay. Revista Chilena de Pediatría,
91(1), 19–26. https://doi.org/10.32641/rchped.v91i1.986

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2. Armienta, E. (2004). Enfermedades ligadas al cromosoma X. Boletín
Médico - Facultad de Medicina UAS, Num. 5 Vol. 1, 20-24.
https://biblat.unam.mx/hevila/BoletinmedicoCuliacanMexico/2004-05/vol1/
no5/4.pdf

3. https://www.udocz.com/apuntes/129775/enfermedad-granulomatosa-
cronica