Farmacocinética plasmática

Para el ensayo de respuesta de evitación condicionada (CAR) también se evaluó la

farmacocinética del compuesto plasmático en grupos satélite de ratas Wistar macho de la
misma edad

Y se recolectó sangre mediante punción cardíaca cerrada bajo anestesia con isoflurano

Los compuestos se administraron como se describe anteriormente en Compuestos de

fármaco y se recogió sangre 30 minutos más tarde.

La sangre completa se recolectó en viales recubiertos con K3-EDTA

Se separó mediante centrifugación a 4 °C a 10 000 rpm

Se transfirió a viales de muestra etiquetados individualmente que se congelaron

rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 °C

Para los estudios de ganancia de peso, al día siguiente de la última medición de peso, se
recogió sangre entera por punción cardíaca bajo narcosis de CO2

El inhibidor altamente selectivo de VMAT (RRR-DHTBZ) se cuantificó mediante

cromatografía líquida en tándem con un detector espectrométrico de masas (LC-MS/MS). 

ESTADÍSTICAS

Para  ensayos de inhibición prepulso (PPI), ensayo de respuesta de evitación

condicionada (CAR), y concentraciones plasmáticas se realizó un análisis estadístico con
ANOVA y para comparaciones múltiples (TUKEY)

También se realizó estadísticas para el aumento de peso con PRUEBA DE WILLIAMS,

PRUEBA DE DUNNETT

RESULTADOS

Para la Eficacia del inhibidor selectivo de VMAT2 RRR-DHTBZ en modelos animales

de esquizofrenia

La tetrabenazina ha demostrado previamente eficacia en modelos animales de

esquizofrenia e inicialmente se decía que los efectos estaban mediados solo por  inhibición
de la actividad de VMAT2.

Pero algunos de los metabolitos de la tetrabenazina también inhiben otros receptores que
modulan la actividad antipsicótica, aunque a menor potencia. 

Inhibición de prepulso

La cepa de ratón endogámica C57BL/6J muestra un nivel reducido de PPI de sobresalto acústico en
comparación con la línea parental C57BL  Esta reducción se puede revertir con antipsicóticos (es
decir, los compuestos aumentan la PPI en ratones C57BL/6J) 

En el modelo genético de PPI RRR-DHTBZ ↑ PPI en ratones C57BL/6J dependiendo de la

dosis a intensidades de estímulo de 74, 78 y 82 dB con un efecto estadísticamente significativo
observado a 10 mg/kg

La tetrabenazina provocó un aumento dependiente de la dosis de PPI con un efecto

estadísticamente significativo observado a 30 mg/kg

El aumento de PPI observado con las dosis más altas de RRR-DHTBZ y tetrabenazina no
fue significativamente≠ del efecto del haloperidol  solo (utilizado como Control +)
Entonces estos resultados indican que la inhibición selectiva de VMAT2 provoca una eficacia
en el modelo PPI equivalente al antipsicótico haloperidol.

Evitación condicionada

El efecto de RRR-DHTBZ sobre la evitación condicionada se probó en ratas.

En la figura se muestra el paradigma experimental y los métodos de puntuación del

comportamiento.

El día de la prueba, las ratas previamente entrenadas en una caja de lanzadera de dos
compartimentos fueron expuestas al estímulo condicionado (un pulso de 10 segundos de ruido
blanco a 80 dB). 

 Si la rata se movía al segundo compartimento tras la presentación del estímulo condicionado, esto
se calificaba como evitación. Un animal que no sale de la cámara representa la inhibición de la
evitación.

 La inhibición de la evitación puede resultar de la inhibición del comportamiento condicionado

(eficacia antipsicótica) o del deterioro de la capacidad del animal para moverse fuera de la cámara
(sedación/deterioro motor). 

Estas posibilidades se diferenciaron aplicando un “Foot shock” a la cámara de prueba

  Un animal que abandona la cámara después del inicio de “Foot shock” representa la inhibición
de la evitación condicionada, el comportamiento de interés. Este evento representa la eficacia del
compuesto de prueba en el modelo y se calificó como un escape 

El animal que no sale de la cámara representa una inhibición del movimiento más que una
inhibición del comportamiento condicionado. Este resultado se calificó como un fallo de escape.

Para los inhibidores de la señalización dopaminérgica, la falla de escape probablemente se deba a la

sedación en dosis más bajas y al deterioro motor grueso en dosis más altas

Para evaluar aún más el potencial de deterioro motor grueso, se probó una cohorte separada
de animales midiendo la catalepsia usando la prueba de la barra.

RRR-DHTBZ produjo una supresión dependiente de la dosis de la evitación condicionada, que se

manifestó como un aumento en el número de escapes.

La dosis más baja que provocó un efecto estadíst. signific.fue de 0,3 mg/kg (no hubo catalepsia
detectable). Dosis más altas provocó un mayor # escapes > supresión de la evitación
condicionada.

Por lo tanto La inhibición específica de VMAT2 puede suprimir la respuesta de evitación

condicionada en la misma medida que los antipsicóticos conocidos.