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FACULTAD DE FARMACIA
UNIVERSIDAD COMPLUTENSE
D.N.I.: 02673914A
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ÍNDICE
1. RESUMEN ..………………………………………………… 3
Este trabajo tiene una finalidad docente. La Facultad de Farmacia y el/la Tutor/a no se hacen responsables de la información contenida en el mismo.
3. OBJETIVOS ...………………………………………………13
4. METODOLOGÍA …………………………………………...13
6. CONCLUSIONES ………………………………………….17
7. BIBLIOGRAFÍA …………………………………………...18
8. ABREVIATURA …………………………………………...20
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1. RESUMEN
Este trabajo tiene una finalidad docente. La Facultad de Farmacia y el/la Tutor/a no se hacen responsables de la información contenida en el mismo.
Las formas activas de la vitamina D son compuestos de importancia en la práctica clínica por
su significación biológica, cuyo estudio se ha incrementado en los últimos años. La vitamina
D desempeña funciones de regulación del metabolismo del calcio y fósforo. También es
considerada un factor preventivo de enfermedades crónicas como enfermedades
cardiovasculares, diabetes, cáncer y enfermedades autoinmunes. Debido al posible papel de la
vitamina D en estas patologías se han buscado métodos de determinación de los niveles de
vitamina D en plasma, que sean exactos y eficaces.
El método analítico escogido para esta revisión bibliográfica es el de la
quimioluminiscencia,el cual se basa en la generación de especies electrónicamente excitadas
en el transcurso de diferentes reacciones químicas, las cuales son generalmente oxidaciones.
Las especies excitadas originadas en la reacción química de oxidación emiten radiacciones
electromagnéticas al desactivarse, pasasando del estado excitado al fundamental. Existen dos
tipos: quimioluminiscencia directa e indirecta o “sensibilizada”.
Para la determinación de los niveles séricos de vitamina D mediante quimioluminiscencia, en
los análisis rutinarios se utiliza el producto comercializado bajo el nombre de Diasorin
Liaison.
Actualmente el uso de la quimioluminiscencia como técnica analítica para la deteccion de
múltiples compuestos, esta despertando mayor interés, debido a que presenta una alternativa
muy sensible, exacta y con pocas interferencias con respecto a otros métodos.
ABSTRACT
The active forms of vitamin D are important elements in clinical practice for their biological
significance, whose study has increased in recent years. Vitamin D plays the role of regulating
the metabolism of calcium and phosphorus. It is also a preventive factor of chronic diseases
such as cardiovascular diseases, diabetes, cancer and autoimmune diseases. Due to the
possible role of vitamin D in these pathologies, have been searched methods to determine
plasma vitamin D levels, which are accurate and effective.
The analytical assay chosen for this bibliographical review is that of chemiluminescence,
which is based on the generation of electronically excited species in the process of different
chemical reactions, which are usually oxidations. The excited species originated in the
chemical reaction of oxidation emit electromagnetic radiations when deactivating, passing
from the excited state to the fundamental. There are two types: direct and indirect
chemiluminescence or "sensitized".
For the determination of serum vitamin D levels by chemiluminescence, the marketed
product under the name of Diasorin Liaison is which is used for routine analyses.
Currently the use of chemiluminescence as an analytical thecnique for the detection of
multiple elements, is growing greater interest, because it presents a very sensitive, accurate
and with little interference, compare with other methods.
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2. INTRODUCCIÓN Y ANTECEDENTES
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vitamina D también llamado calcitriol. Diferentes células, entre ellas macrófagos activados,
queratinocitos y células óseas, producen localmente 1,25(OH)2D (Figura 1B). (6–8).
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Los procesos de luminiscencia se clasifican según la forma en la que se generan las especies
en estado excitado.
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2.4 Quimioluminiscencia
La quimioluminiscencia se define como la emisión de la radiación electromagnética
(normalmente en la región del visible o del ultravioleta) producida por una reacción química.
Si la radiación proviene de organismos vivos se define como bioluminiscencia.
La intensidad de emision depende de la concentración de las especies químicas implicadas en
la reacción quimioluminiscente. Para que se dé la quimioluminiscencia es necesario que la
reacción produzca un exceso de energía, lo cual es bastante frecuente en reacciones rédox,
pero el hecho de que este exceso de energía se disipe con emisión quimioluminiscente,
depende en gran medida de la estructura molecular de los intermedios o productos de
reacción.
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En general la medida de la radiación quimioluminiscente obedece dos mecanismos
básicos(Fig.2):
- Quimioluminiscencia directa: Se parte de dos reactivos, A y B, normalmente un substrato y
un oxidante, en presencia de algunos cofactores, los cofactores son necesarios en una o mas
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Entre los factores que influyen en la emisión de quimioluminiscencia encontramos:
- La estructura química del precursor quimioluminicente.
- La naturaleza y concentración de otras sustancias que afectan el proceso
quimioluminiscente y que favorecden otros procesos competitivos no radiantes.
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- El catalizador selecdionado.
- La presencia de iones metálicos, implicados en los procesos de oxidación.
- La temperatura, pH y fuerza iónica.
- La hidrofobicidad del disolvente y la composición de la disolución
- La presencia de aceptores de la energía transferida(14).
Las principales ventajas de los sistemas quimioluminiscentes que los hacen adecuados para el
análisis cuantitativo en química analítica son:
- Elevada sensibilidad y amplio intervalo dinámico de concentraciones, llegando en
algunos casos a límites de detección del orden de los femtomoles.
- No excitación de las muestras por vía radiante, por tanto, no requiere fuente de
excitación externa, lo que se traduce en ausencia de dispersión y de señales de fondo,
en la reducción de interferencias debidas a procesos de excitación no selectivos y en la
utilización de una instrumentación más sencilla que otros procesos luminiscentes.
- Versatilidad: Se puede utilizar la técnica para determinar cualquiera de las especies
que participan en el proceso quimioluminiscente: sustratos, catalizadores, inhibidores,
fluoróforos, especies que dan reacciones acopladas aumentando o disminuyendo la
concentración de los reactivos implicados en la reacción quimioluminiscente.
- Se acoplan fácilmente como método de detección en cromatografía de líquidos,
electroforesis capilar o inmuno-análisis.
Entre las limitaciones de estas reacciones para el análisis, los siguientes parámetros se han de
tener perfectamente controlados:
- Los factores experimentales que afectan al rendimiento cuántico y la velocidad de
reacción. Estos son: la estructura química del precursor quimioluminiscente, la
naturaleza y concentración de sustancias que favorecen procesos competitivos no
radiantes, el catalizador elegido, la temperatura, la fuerza iónica, la presencia de
aceptores de la energía transferida, la presencia de iones metálicos, la hidrofobicidad
del disolvente y la composición de la disolución.
- El tiempo de medida de la señal, debido a que la emisión quimioluminiscente varía en
función del tiempo. Tras la mezcla de los reactivos, la emisión de luz alcanza
inmediatamente un máximo y después cae hasta la línea base en un rápido destello
menor que un segundo o en emisión continua que puede durar desde minutos a horas.
En la Figura 3, se muestra un ejemplo de la variación de la señal quimioluminiscente con
el tiempo, para la reacción del luminol/H2O2, utilizando Cr(III) como catalizador
(concentración final Cr(III) 5.5 g/l). Como se puede observar, la emisión es muy rápida,
aproximadamente de 1 segundo, y por tanto, el tiempo al que se registre la señal será
decisivo.
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2.6 Tipos de reactivos utilizados
Las reacciones quimioluminiscentes se utilizan con éxito para la detección sensible de
analitos de interés en clínica. Algunos de los reactivos son:
- El luminol (5-amino-2,3-dihidro-1,4-ftalazindiona) se oxida casi cuantitativamente a
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- Los derivados de peroxioxalato. Con estos rectivos se requiere el empleo de
quimioluminiscencia indiecta o sensibilizada. Se produce la oxidación por peróxido de
hidrógeno de un éster aril oxalato en presencia de fluoróforo. A través de un
intermediario de alta energía, 1,2-dioxietanodiona, que forma un complejo de carga
con el fluoróforo, donando un electrón al intermediario. Este electrón es transferido al
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continua. Este hecho es crucial para la selección del sistema más conveniente para la
incorporación de los reactivos. (14,18)
Dependiendo de la configuración del dispositivo y del método de introducción de muestra y
reactivos, los sistemas pueden clasificarse en: estáticos (introducción de cantidades discretas
de reactivos y muestra en un recipiente) o sistemas en flujo.
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Un ejemplo es el Fluorímetro Hitachi F-4500, 700v (Tokio, Japan) equipado con una celda de
1 cm de camino óptico.
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3. OBJETIVOS
4. METODOLOGÍA
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5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
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Figura 7.- Esquema del nuevo ensayo 1,25-(OH)2 D. Descripción general de los componentes, las
incubaciones y los pasos de lavado del ensayo totalmente automatizado que se ejecutará en un
instrumento LIAISON® XL. El tamaño de muestra requerido es de 75 μl, y el tiempo para el primer
resultado es de 65 min. PMP: partículas paramagnéticas; ABEI: derivado del isoluminol.
Otro inmuno-análisis, en este caso basado en la medida de radioactividad y no de
quimioluminiscencia es el radioinmunoanalisis (RIA), el cual se realiza mediante un
procedimiento de dos pasos. En el primero se extrae rápidamente la 25OH D y otros
metabolitos hidroxilados presentes en el suero, mediante acetonitrilo. En la segunda etapa la
muestra se somete a un RIA de equilibrio de antígeno( vitamina D) y anticuerpo, siendo
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6. CONCLUSIÓN
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7. BIBLIOGRAFÍA
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8. ABREVIATURAS
1,25- dihidroxivitamina D → (1,25(OH) 2D)
1,25- dihidroxivitamina D3 →( 1,25-(OH)2 D3)
25- hidroxivitamina D → (25(OH) D)
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