PRACTICA DE LABORATORIO

Cálculos con absorbancia y concentración

Lo que tienes que tener muy claro: para un mismo espesor de muestra, paso óptico o
anchura de la cubeta, la absorbancia es proporcional a la concentración.
En consecuencia, se pueden establecer proporciones directas entre A y c. Se usan
cubetas de 1 cm de paso óptico.

Por ello, los problemas se pueden resolver mediante una regla de tres (pero bien
planteada: la absorbancia de una muestra es proporcional a la concentración en esa
muestra del compuesto que absorbe, y la constante de proporcionalidad es siempre la
misma para un compuesto dado;  a mayor concentración, mayor absorbancia).

A=abc  o bien A =   c 

 A = absorbancia a una longitud de onda dada, 
 a = absortividad =   = coeficiente de extinción, a esa 
 b =   = paso óptico o espesor de la muestra
 c = concentración del compuesto que absorbe

Si c es una concentración molar (se mide en moles/volumen), Mol / L

a y   se llaman absortividad molar y coeficiente de extinción molar.

1.Una disolución 15 mM de un colorante azul tiene una absorbancia de 0.600.

¿Cuál es la concentración de una muestra del mismo colorante cuya absorbancia es
0.400?

2. Un compuesto de color rojo disuelto a 0.10 M tiene una absorbancia de 1.20. ¿Cuál
es la concentración de una muestra del mismo compuesto cuya absorbancia es 0.90?

3.Una disolución con 5 mg/mL de una proteína coloreada tiene una absorbancia de
0.250. ¿Cuál es la concentración de una muestra de esa proteína cuya absorbancia es
0.90?

4.Una muestra se diluye añadiendo 20 µL a 780 µL de agua. Su absorbancia es

entonces de 0.950. Una muestra patrón del mismo compuesto 3.0 mM da una
absorbancia de 0.475. ¿Cuál es la concentración de la muestra problema?

5. Se mide la velocidad de una reacción mediante la producción de un compuesto

coloreado, encontrando que aumenta la absorbancia a una tasa de 0.72 unidades por
minuto. Si una disolución 25 µM del compuesto puro da una absorbancia de 0.36,
¿cuál es la velocidad de la reacción en unidades de concentración?

6. Una reacción produce en 6 minutos un color de 0.90 unidades de absorbancia. Si se

sabe que una disolución con 10 mg/mL del producto da una absorbancia de 0.50,
¿Cuál es la velocidad de la reacción en unidades de concentración?

7. Se realiza una reacción para la cual se mezclan 100 µl de disolución 48 mM de

sustrato, 50 µl de muestra que contiene la enzima y 650 µl de tampón. Cuando
comienza la reacción, la absorbancia es de 1.20, y en los siguientes 12 minutos
disminuye hasta 0.90. Calcula la velocidad de la reacción (en unidades de
concentración).
8. Una muestra 0.2 M se diluye 40 veces, ofreciendo entonces una absorbancia de
0.81. Este compuesto se consume en una reacción a una tasa de 0.09 unidades de
absorbancia por segundo.

a) Calcula la velocidad de la reacción (en unidades de concentración).

b) Si esa reacción es el resultado de una catálisis enzimática, indica el valor de la

concentración de actividad enzimática presente, en unidades internacionales y en
unidades del S.I.

9.Tienes una disolución 150 mM del compuesto DCPIP, cuya absorbancia es

demasiado alta para poderla medir con precisión. Por ello, la diluyes 5 veces,
consiguiendo una lectura de absorbancia de 1.5 a 600 nm. Calcula la concentración de
una muestra de DCPIP cuya A600 = 0.5

10.Se sabe que una solución de un compuesto orgánico con una concentración de 0.008739 M
presentó una absorbancia de 0.6346, medida a λ=500 nm y con una celda de 0.5 cm de
longitud. Calcule cuál es la absortividad molar del complejo a dicha longitud de onda.
A partir de estos datos puede despejarse directamente ε:
ε= 0.6346/(0.5cm)(0.008739M)
145.23 M-1∙cm-1

10. Se tiene las siguientes absorbancias medidas a diferentes concentraciones de un complejo

metálico a una longitud de onda de 460 nm, y con una celda de 1 cm de longitud:
A: 0.03010  0.1033  0.1584  0.3961  0.8093
c: 1.8∙10-5   6∙10-5   9.2∙10-5   2.3∙10-4   5.6∙10-4
Calcule la absortividad molar del complejo.
Hay un total de cinco puntos. Para calcular ε es necesario graficarlos colocando los valores de
A en el eje Y, y las concentraciones c en el eje X. Una vez hecho esto, se determina la recta de
los mínimos cuadrados, y con su ecuación se podrá determinar ε.
En este caso, graficados los puntos y trazada la recta con un coeficiente de determinación
R2 de 0.9905, la pendiente es igual a 7∙10 -4; es decir, εb= 7∙10-4. Por lo tanto, con b=1cm, ε será
de 1428,57 M-1.cm-1 (1/7∙10-4).

11. El % de transmitancia de una solución medida a cierta longitud de onda en una celda de
1,00 cm es de 63,5% . Calcule el % de transmitancia de esta solución en celdas de trayectoria
optica de A) 2,0 mm ; b) 2 ,0 cm y c) 5,00 cm . R: a) 91,3 %T ; b) 40,4 %T ; c) 10,3 %T

12. El compuesto orgánico 3-ciano-5- metilpirrolina ( C7H6N2 , PM :118,14) Presenta una

banda de absorción UV en 272 nm en solucion de etanol. Una solucion que contiene 0,274 mg
de este compuesto en 10 ml de etanol dio una absorbancia de 0,700 en una celda de 1,00 cm.
Calcule: a) la absorbilidad , b) la absorbilidad molar del compuesto
R: a) a = 25,6 L/g cm b) ε = 3018,5 L/mol cm

13. A partir de una solución patrón de 100 ppm ( 100 mg/L) de un compuesto orgánico que
presenta una banda de absorción máxima a 270 nm se preparó una curva de calibracion : se
obtuvieron los siguientes datos :
Concentració A
n
1 1 0,1282
1.5 0,1940
2 0,2615
3 0,3995
4 0,5422

Si 2 ml de una solución desconocida de este compuesto son diluidos a 50 ml se obtiene una

absorbancia de 0,425. Calcule la concentración de la muestra en mg/l.
R: 79 ppm

14. Un método para la determinación cuantitativa de Pb++ en la sangre proporciona una

Absorbancia de 0,712 en una muestra de 5,00 ml de sangre . Tras añadir a la muestra de
sangre 5,0µL de un patron de Pb++ con 1,560 ppb se determina una absorbancia de 1,546 .
Indique la concentración de Pb++ en la muestra de sangre original

R: 1,343 ·10-3 ppb