METODOS DE SEPARACIÓN

1.- Se realizó el análisis de una muestra por Cromatografía de Líquidos de alta eficiencia
en fase inversa.

1.- Qué aseveración es falsa?

a) No se puede realizar el análisis cuantitativo de los compuestos D y E.
b) La resolución entre los picos A y B es menor de 1.0.
c) El detector usado para el análisis, no es el adecuado para obtener una buena
resolución de los compuestos.
d) El compuesto F es el compuesto con mayor afinidad a fase estacionaria

2.- Si el análisis se realizó por cromatografía de fase inversa, para lograr la separación
de los compuestos A y B se requiere:
a) Aumentar el flujo de la fase móvil
b) Cambiar la polaridad de la fase estacionaria
c) Incrementar la proporción del disolvente menos polar en la fase móvil
d) Incrementar la proporción del disolvente más polar en la fase móvil

3.- Qué aseveración es falsa?

a) El compuesto C se encuentra en menor concentración en la muestra
b) El compuesto E se encuentra en mayor concentración en la muestra
c) Se debe determinar el factor de respuesta para cada compuesto para realizar el
análisis cualitativo
d) Para determinar la concentración de cada compuesto se debe conocer su factor de
respuesta

4.- Al incrementar la proporción del disolvente menos polar:

a) Los tiempos de retención de los compuestos disminuyen al igual que los parámetros
cromatogràficos
b) Los parámetros cromatogràficos no se modifican
c) La separación aumenta, al aumentar la retención de los compuestos
d) En fase inversa no se utilizan disolventes polares

5.- Al incrementar la proporción del disolvente más polar:

a) Los tiempos de retención de los compuestos disminuyen al igual que los parámetros
cromatogràficos
b) Los parámetros cromatogràficos no se modifican
c) La separación aumenta, al aumentar la retención de los compuestos
d) En fase inversa no se utilizan disolventes polares
2.- Se realizó el análisis cuantitativo de los siguientes esteres metílicos E16, E18, E18:1 en
una muestra de grasa. Para ello se preparó una solución estándar y los esteres se
extrajeron de la muestra de la siguiente manera:

Disolución Patrón: Se pesaron 2 mg de E16, 1.03 mg de E18 y 3.06 de E18:1 y se

disolvieron en 10 ml de hexano.

EI: Se pesaron 5 mg de E15 y se disolvieron en 10 ml de hexano.

Disolución Estándar: Se tomo 1 ml de la disolución patrón más 1 ml de EI y se llevó a

un volumen final de 5 ml. De esta solución se inyectó 1 l en el cromatografo.
Obteniendo los siguientes resultados:

Esteres Areas
metílicos
E15 860927
E16 1621271
E18 983778
E18:1 2632936

Preparación de la muestra:
Se pesaron 1.5 mg de grasa, se le adicionaron 2 ml de KOH/CH3OH, HCl hasta un
pH=2.0 posteriormente se adicionaron BF3/CH3OH para obtener los esteres metílicos,
se agregó agua y hexano para extraer y finalmente se adiciona 1 ml de EI, y se lleva a
un volumen final de 5 ml. De esta disolución se inyectó 1 l en el cromatografo.

Resultados:
Esteres Areas
metílicos
E15 294926
E16 237024
E18 30876
E18:1 290701

¿Cuál es el contenido de cada uno de los esteres metílicos en mg/g de grasa?

3.- Se determinó el contenido del ácido glutámico en una presentación en tabletas,

empleando cafeína como estándar interno, para esto se prepararon las disoluciones de
calibración y de la muestra de la siguiente manera:

-Disolución patrón de estándar interno:

Se pesaron 5.02g de cafeína y se colocaron en un matraz aforado de 10 ml, se
disolvieron y aforaron con etanol, ésta fue marcada como la disolución “1”.
Se tomó 1ml de la disolución “1” y se colocó en un matraz aforado de 100 ml y se lleva
al aforo con etanol, ésta fue marcada como la disolución “2”.

-Disoluciones de calibración:
Se prepararon disoluciones de calibración de ácido glutámico de 2, 4, 6 y 8x10 -5 g/ml
en matraces de 100 ml, agregando 1 ml de la disolución patrón de estándar interno “2”
a cada uno antes de aforar.
Muestra
Se realizó un muestreo de un lote 100 tabletas (se marca en la caja de la muestra un
peso de 600 mg por tableta) representativas al lote, éstas se molieron y se tomó el peso
aproximado de 10 tabletas (el peso fue de 6.13 g), se pasó a un vaso de precipitados y
se agregaron 50 ml de etanol para extraer el ácido glutámico, luego se pasó la disolución
resultante filtrándola a un matraz aforado de 100 ml y se agregó 10 ml de la disolución
patrón de estándar interno “1” llevándose al aforo con etanol.
De esta disolución se tomó una alícuota de 10 ml y se colocaron en un matraz de 100
ml, de esta disolución se tomó una alícuota de 10 ml y se colocaron en un matraz aforado
de 100 ml, de esta disolución se tomó una alícuota de 1 ml y se colocaron en un matraz
aforado de 10 ml.
En todos los casos se llevó al aforo las disoluciones con etanol.

Se inyectaron las disoluciones de calibración y la última de la preparación de la muestra

al cromatógrafo a las condiciones adecuadas de separación y estadística, obteniéndose
los siguientes resultados:

Conc. Ac. Glut. Area prom. Ac. Glut. Area prom. Cafeina

(g/ml)

2x10-5 340 000 590 000

4x10-5 653 000 565 000

6x10-5 958 000 552 000

8x10-5 1 251 000 572 000

Muestra 538 000 582 000

Indique la cantidad del ácido glutámico (mg) en cada tableta.

4.- El naproxeno es un medicamento que se utiliza por su actividad analgésica y

antiinflamatoria. Se desea cuantificar por cromatografía de líquidos utilizando una fase
estacionaria C18 y como fase móvil una mezcla de 50% metanol /agua 50:50%v/v. El
tiempo de retención del naproxeno es de 7 minutos. Cada TABLETA contiene 250 mg
de naproxeno Para realizar la curva patrón se realizan los siguientes pasos: Se pesaron
20 mg del estándar de naproxeno y se disolvieron en 20 mL de agua, posteriormente de
esta disolución se tomaron alícuotas que se muestran en la tabla y se obtuvieron los
siguientes resultados y la siguiente curva de calibración:

Estándar Alícuota Aforo C final Área promedio

(mL) (mL) (mg/mL)
1 1 1030
2 3 2050
3 5 10 3010
4 7 4080
 5 9 5009

La muestra se preparó disolviendo una tableta en un matraz Phillips con 20 mL de agua

y después de 20 minutos se filtró en un matraz de 50mL, se llevó al aforo con agua
destilada y de este matraz se tomó 1mL y se llevó al aforo a 10 mL (de esta solución se
realizaron 5 inyecciones). El área promedio de la muestra después de las inyecciones
fue 3017. (Para este análisis es necesario considerar la ordenada)

5.- Se requiere cuantificar dos drogas cardíacas, Pindolol (A) y Oxprenolol (B). Tomando
en cuenta la siguiente información.

Compuesto Concentración Área

(mg/mL)
A 0.202 18625
B 0.420 34644

Se realizó el procedimiento de extracción de los compuestos en la muestra: se utilizó un

cartucho de 3 mL/60 mg. Se acondicionó con 1 ml de metanol/ 1 ml de agua se cargó
con 1 ml de sangre humana entera y se lavó el cartucho con 1 ml de MeOH al 5 % en
agua. Se eluyó con 1 ml de MeOH tres veces. Se evaporó y se reconstituye a un
volumen final de 1 ml con metanol, se filtró con una membrana de 0.45 mm, la disolución
obtenida se inyectó por triplicado y se obtuvieron las siguientes áreas promedio para
cada compuesto: A= 17,150 y B= 35,056.
¿Cuál es la concentración del Pindolol y Oxprenolol (mg/mL) en la muestra?