46 Modulation of Solanum tuberosum L.

Morphogenesis and Antioxidative Status in a

Stem Explant Culture by Limitation of Gas Exchange: Putative Effects of Ethylene

Resumen
El principal objetivo del presente estudio fue probar la hipó tesis de que el aumento de
las concentraciones de etileno en condiciones de intercambio gaseoso limitado
durante el cultivo in vitro de explantes de tallo de papa (Solanum tuberosum L.) puede
conducir a una mayor capacidad de defensa antioxidante. Al variar la hermeticidad del
cierre y la aplicació n de inhibidores de la biosíntesis de etileno, fue posible acumular
varias concentraciones de etileno en la atmó sfera interna de los matraces de cultivo,
que dependían de la biosíntesis de etileno inducida por el estrés de la escisió n. En
cultivos fuertemente cerrados se produjo inhibició n del crecimiento lineal, promoció n
de la expansió n radial y desarrollo de un gancho apical. El tratamiento con inhibidores
de la acció n del etileno y la biosíntesis de etileno impidió la inhibició n del crecimiento
de los brotes. Los resultados sugieren que la acumulació n de etileno producido
endó genamente en los frascos de cultivo debido a la limitació n del intercambio de
gases y al estrés causado por la herida puede causar cambios en la morfogénesis de
los brotes de papa. Se indujo la actividad de ascorbato peroxidasa en brotes recién
desarrollados mediante intercambio de gases limitado y tratamiento con etefó n. La
limitació n del intercambio de gases condujo también a un aumento de las actividades
de otras enzimas del sistema antioxidante. Se encontró un efecto permanente del
precultivo en alta concentració n de etileno sobre la producció n de etileno y el estado
antioxidante de las microplantas de papa durante el cultivo posterior. Los datos
sugieren que el cultivo de tejidos de tallos de patata a mayores concentraciones de
etileno puede conducir a una mejor tolerancia al estrés oxidativo endó geno.
Introducció n
Está bien establecido que el etileno es producido por todos los tejidos vegetales
cultivados, puede acumularse en recipientes de cultivo sellados y puede afectar aú n
má s el desarrollo de los tejidos. El problema ha recibido atenció n reciente debido a la
necesidad de estrategias de optimizació n estrictamente controladas en el cultivo de
tejidos vegetales (para revisiones, véase Buddendorf-Joosten y Woltering, 1994;
Kumar et al., 1998).
Se observó el efecto del etileno acumulado sobre la morfogénesis en cultivo de tejidos
para varias especies, resultando en
tanto en la estimulació n como en la inhibició n de la regeneració n (Kumar et al., 1996;
Pua et al., 1996; Goh et al., 1997; Gonzalez et al., 1997; Magdalita et al., 1997). Sin
embargo, se han descrito la mayoría de los efectos nocivos del etileno sobre el
crecimiento y desarrollo del cultivo. En la mayoría de los casos, el etileno promueve la
proliferació n de células mientras que se inhibe el crecimiento de los ó rganos
inducidos y se acelera la senescencia (Buddendorf-Joosten y Woltering, 1994).
Ademá s de la biosíntesis de etileno inducida por la herida durante el establecimiento
de cultivos in vitro, se deben tener en cuenta las respuestas al estrés oxidativo
durante las fases iniciales del cultivo, así como durante el desarrollo posterior en
condiciones subó ptimas. Recientemente, varios estudios se han centrado en las
respuestas antioxidantes relacionadas con el estrés en el cultivo de tejidos vegetales
(O'Kane et al., 1996; Fadzillah et al., 1996; van Rossum et al., 1997; Li y van Staden,
1998). ; Ló pez-Delgado et al., 1998; Piqueras et al., 1998).
La investigació n de los mecanismos de defensa antioxidantes en cultivos de tejidos
vegetales es de gran importancia. Primero, con la comprensió n de las reacciones que
confieren resistencia a las condiciones de cultivo subó ptimas, puede ser posible
mejorar los resultados en la prá ctica de propagació n. En segundo lugar, como se ha
demostrado que niveles relativamente altos de enzimas antioxidantes indican una
mayor protecció n contra las especies de oxígeno activo (Gossett et al., 1994; Mittler y
Zilinskas, 1994), esto puede permitir la selecció n de clones resistentes con
características mejoradas. para las necesidades de multiplicació n en masa.
Aunque se ha demostrado que el etileno está involucrado en la regulació n de los genes
de defensa de las plantas (O'Donell et al., 1996), no se han descrito experimentos que
vinculen las respuestas antioxidantes y los efectos del etileno acumulado debido a la
limitació n del intercambio de gases en el cultivo de tejidos. lejos. La presente
investigació n tuvo como objetivo probar la hipó tesis de que el aumento de las
concentraciones de etileno durante el cultivo de tejidos vegetales puede conducir a
una mayor resistencia celular a los factores de estrés debido a la activació n de la
defensa antioxidante. Como primer paso, informamos aquí sobre la modulació n de la
morfogénesis y las respuestas antioxidantes en explantes de papa (Solanum
tuberosum L.) por limitació n del intercambio de gases en los recipientes de cultivo. Se
prestó especial atenció n a los posibles efectos permanentes de la exposició n
transitoria al etileno sobre el estado antioxidante durante el cultivo posterior de los
tejidos.

Materiales y métodos
Cultivo in vitro
Se introdujo en cultivo patata (Solanum tuberosum L. cv. Agrie Dzeltenie) utilizando
segmentos nodales. Se cultivaron durante 4 semanas a 25°C en tubos de vidrio de 25 x
200 mm cerrados con tapones de algodó n en 15 mL de medio Murashige-Skoog (MS)
libre de hormonas solidificado con agar (Murashige y Skoog, 1962). El fotoperiodo fue
de 16h con luz fluorescente e incandescente a una irradiancia de 75 a 90~molm-2s-l.
Los nudos superiores segundo y tercero se usaron para experimentos cuando las
explantas habían producido de 6 a 7 entrenudos. Se extirparon segmentos nodales (de
aproximadamente 10 mm de longitud) y se colocaron en medio MS solidificado con
agar. Se cultivaron lotes de 10 explantes en frascos de vidrio de 120 mL en 20 mL de
medio MS que contenía 20 gL-I de sacarosa y 8gL-I de agar. El medio se ajustó a pH 5,7
con NaOH y se esterilizó en autoclave durante 20 min (110 ·C, 1,4 kgcm-2). Se
utilizaron tres tipos diferentes de cierre, lo que resultó en varios grados de
intercambio de gases entre la atmó sfera interna del matraz y el ambiente externo:
tapones de algodó n, tapones de silicona y tapones de silicona con un tapó n de algodó n
insertado en una abertura de 5 mm en el tapó n. Otras condiciones de cultivo fueron
las mencionadas anteriormente.
Tratos
Para el tratamiento con el inhibidor de la biosíntesis de etileno, AOA, se sumergieron
explantes de nó dulos de tallo de patata en 1 mmol L-I de AOA durante 5 min antes del
trasplante. Concentraciones má s altas de AOA o tiempos de incubació n má s largos
dieron como resultado efectos citotó xicos significativos. El tiosulfato de plata se
preparó como se describe en otra parte (Veen, 1983), se esterilizó en autoclave y se
añ adió a los matraces de cultivo como una solució n de 0,2 mmol L-1, 0,5 ml por
matraz. Para evitar efectos citotó xicos, el inhibidor de la acció n del etileno,
norbornadieno, se aplicó en alícuotas de 200 µL en pequeñ os frascos de vidrio
abiertos dentro de los frascos de cultivo, lo que permitió la evaporació n de la
sustancia. Se usó el mismo diseñ o para el tratamiento con etefó n, donde se aplicaron
200 µl de solució n de etefó n 0,1 mol L-I.
Para el tratamiento con H 20 2 se cultivaron explantes de tallo de papa en probetas de
35 mL hasta la etapa de 6 a 7 entrenudos. Luego, se agregó a cada tubo 1 mL de 0.5
mol L-I H2O 2 . Los tubos se sellaron con tapones de silicona y 24 h después se midió
el etileno acumulado en la fase gaseosa. Después de la determinació n de etileno, las
muestras de tejido se usaron para el aná lisis de ascorbato peroxidasa.

Mediciones de etileno
La concentració n de etileno en los matraces de cultivo se midió por cromatografía de
gases. Las muestras (1 ml) de la fase gaseosa de los matraces de cultivo se extrajeron
con una jeringa hipodérmica hermética a los gases. El contenido de etileno se analizó
en un Chrom 5 GC (Repú blica Checa) equipado con un detector de ionizació n de llama
y una columna de vidrio llena de alú mina. Se utilizó helio como gas portador.
ascorbato peroxidasa
Muestras de tejido de tallo de patata, de 0,1 a 1,0 g, se congelaron en Nz líquido, se
molieron con mortero y se extrajeron inmediatamente con tampó n HEPES 50 mmolL-
1 (pH 7,2; 6 mlg-1 de peso fresco) que contenía 1 mmol de LI EDTA, 1 mmol de
Ascorbato de sodio LI y PVP insoluble al 1% durante 15 min a 4°C. El homogeneizado
se filtró a través de tela de nailon y se centrifugó a 15.000 g" durante 15 min. Se
determinó la actividad de ascorbato peroxidasa (EC 1.11.1.11) en un sobrenadante de
acuerdo con Nakano y Asada (1981). El ensayo se realizó en un recipiente final.
volumen de 1 mL que contenía 50 mmol L- I de tampó n fosfato de sodio (pH 7,0), 1
mmol L- I NaEDT A, 1 mmol L- I Na de ascorbato y 100 µL de sobrenadante. La
reacció n se inició mediante la adició n de 0,5 mL 3 mmol LI H2O 2. Se registró la
disminució n de la absorbancia a 290 nm.

Superoxido dismutasa
La superó xido dismutasa (SOD; EC 1.15.1.1) se extrajo y midió segú n Wingsle et al.
(1992). En breve, los tejidos de papa se congelaron en Nz líquido, se molieron con
mortero y se extrajeron en 50 mmol L-I de tampó n de fosfato de sodio (pH 7,0) con 4
% (p/p) de PVP (360 000), 2mmolL-I de EDTA y 20mmolL de -Ditiotreitol. Después de
la precipitació n de la PVP (15 min), la parte no precipitada se centrifugó (15.000 g) y
el sobrenadante se cromatografió en una columna Sephadex G-25 equilibrada con 50
mmol L-fosfato de sodio (pH 7,0) con 2 mmoil- Yo EDTA. Se usó el mismo sistema
tampó n para la cromatografía. El contenido de proteína se midió con el método de
unió n proteína-colorante (Bradford, 1976).
La actividad de SOD se ensayó midiendo la capacidad del extracto enzimá tico para
inhibir la reducció n fotoquímica de NBT. La mezcla de reacció n contenía 1,17 µmol VI
de riboflavina, 10 mmol L-I de metionina, 56 µmol L-I de NBT y 200 µL de muestra de
proteína en 50 mmolL-I de fosfato só dico (pH 7,8). La reacció n se inició por
iluminació n con lá mparas fluorescentes a 30 ºC. Después de 30 min de iluminació n, se
midió la absorbancia a 560 nm. Una unidad de actividad de SOD se definió como la
cantidad de enzima que proporcionaba una inhibició n del 50 % de la reducció n de
NBT.

Glutatió n reductasa
La actividad de glutatió n reductasa (EC 1.6.4.2) se midió en el mismo sistema que se
ha descrito anteriormente para la actividad de SOD. El ensayo de la actividad de la
glutatió n reductasa se basó en el seguimiento de la oxidació n de NADPH a 340 nm en
una mezcla de reacció n de 1 ml que contenía 25 mmo1L-1 de fosfato de sodio (pH
7,8), 170 µmol L-1 de NADPH, 1 mmol L-1 de GSSG y 100 µL de el extracto enzimá tico
(Wingsle et al., 1992).
Catalasa

Los tejidos de papa se envolvieron en nitró geno líquido y se extrajeron con 25 mmol
L-1 de HEPES (pH 7.2) durante 15 min a 4 .c. El homogeneizado se filtró a través de
una tela de nailon y se centrifugó a 15 000 Kn durante 15 min. La actividad catalasa
(EC 1.11.1.6) se ensayó mediante la incubació n de 200 il del extracto enzimá tico en
medio de reacció n (3 mL) que contenía 0,05 mol L-1 de fosfato de potasio (pH 7,0) y
0,03 mol L-1 de peró xido de hidró geno. La desaparició n del peró xido de hidró geno se
siguió espectroscó picamente a 240 nm (Aebi, 1984).

peroxidasa de guayacol
Los extractos enzimá ticos para medir la actividad de la peroxidasa de guayacol (EC
1.11.1.7) se prepararon como se describe anteriormente para la actividad de la
catalasa. La actividad se determinó en una mezcla de reacció n (3 mL) que contenía
0.05 mol L-1 de fosfato de potasio (pH 7.0), 15 mmol L-1 de guayacol, 0.03 mol L- de
peró xido de hidró geno y 20 ilL de la enzima extraer. La actividad se determinó
controlando el aumento de la absorbancia a 470 nm después de la formació n de
tetraguayacol (Maehly y Chance, 1954). Estadísticas
Los errores está ndar para las medias individuales se derivaron de un aná lisis de
varianza (ANOVA). Se utilizó la prueba de rango mú ltiple de Duncan para la
comparació n entre medias. Todos los experimentos se repitieron de dos a cuatro
veces con resultados similares.

Resultados
Modificació n del contenido de etileno en recipientes de cultivo por un tipo de cierre
Se lograron diferentes grados de intercambio de gases por la hermeticidad del cierre
de los recipientes de cultivo. Esto condujo a diferentes grados de acumulació n de
etileno en la atmó sfera del espacio de cabeza. En matraces de cultivo de 120 ml con 10
explantes de patata formadores de brotes internodales en los que se limitó el
intercambio de gases cerrando los matraces con un tapó n de silicona con una
abertura, la concentració n de etileno después de 2 semanas de cultivo fue de
aproximadamente el 10 % de la de los matraces herméticamente cerrados con un
tapó n de silicona sin apertura (Fig. 1). La concentració n de etileno en los matraces
sellados con tapones de algodó n era casi similar a la del aire del laboratorio. Con el fin
de evaluar posibles artefactos de liberació n de etileno del medio de cultivo o del
tapó n, se determinó el etileno en matraces bien cerrados 24 h después del cierre (que
contenían solo medio de crecimiento sin tejidos vegetales). La concentració n de
etileno en los matraces no superó la del aire del laboratorio (datos no mostrados).
Dado que se puede esperar que una parte significativa del etileno que se acumula en
los matraces se deba a la promoció n de la biosíntesis de etileno después de la lesió n
del tejido, el curso temporal de la acumulació n de etileno en matraces de cultivo
pequeñ os (10 ml) incluye explantes de patata en medio MS solidificado con agar. fue
analizado. La Figura 2 muestra un perfil típico de acumulació n de etileno durante el
cultivo in vitro de explantes de papa en frascos herméticamente cerrados. Hubo un
gran aumento de la acumulació n de etileno durante el primer día de cultivo para todos
los tipos de explantes, seguido de un lento aumento en una semana. Cuando el
intercambio de gases de los frascos de cultivo se limitó solo después de 24 h de
cultivo, solo hubo una acumulació n moderada de etileno (Fig. 2).
Cuando los explantes nodales se trataron con un inhibidor de la biosíntesis de etileno,
AOA, antes del cultivo, hubo una reducció n significativa de la concentració n de etileno
en frascos herméticamente cerrados después de 2 semanas de cultivo (Fig. 1). Sin
embargo, el tratamiento con inhibidores de la acció n del etileno, tiosulfato de plata y
NBD, no condujo a una reducció n de la concentració n de etileno.
El efecto de un tipo de cierre en el desarrollo de los brotes
Se observó la formació n de brotes y raíces de novo a partir de explantes de tallos
nodales de patata cultivada en medio MS. Los nuevos brotes comenzaron a
desarrollarse al tercer día de subcultivo. Las diferencias morfoló gicas fueron
evidentes cuando los explantes crecieron en frascos con diferentes grados de
intercambio de gases. Una de las respuestas má s típicas fue la modificació n de la
altura de los brotes recién desarrollados. La limitació n parcial del intercambio de
gases resultó en un aumento significativo en la longitud de los brotes (Fig. 3). En
matraces herméticamente cerrados, se inhibió fuertemente el crecimiento de los
brotes. El tratamiento con inhibidores de la acció n del etileno, tiosulfato de plata y
NBD, así como un inhibidor de la biosíntesis de etileno, AOA, impidió la inhibició n del
crecimiento de los brotes en frascos herméticamente cerrados (Fig. 3).

Efecto de la limitació n del intercambio de gases sobre el estado antioxidante de brotes

de patata recién desarrollados
El curso temporal de la actividad de la peroxidasa de ascorbato en brotes recién
desarrollados bajo diferentes condiciones de crecimiento se muestra en la Figura 4. En
los matraces cerrados con tapó n de algodó n, la actividad de la peroxidasa de
ascorbato disminuyó continuamente durante todo el período del estudio. Sin
embargo, en presencia de etefó n en los matraces de cultivo, la actividad de ascorbato
peroxidasa durante todo el período de cultivo fue mayor que en los controles. Ambos
tipos de intercambio gaseoso limitado condujeron a una disminució n má s lenta de la
actividad de la ascorbato peroxidasa en comparació n con los brotes de control. La
limitació n completa del intercambio de gases resultó incluso en un fuerte aumento de
la actividad en el día 12.
La limitació n del intercambio de gases afectó también a otras enzimas de defensa
antioxidante. La actividad de la peroxidasa de guayacol y la actividad de la catalasa en
los brotes recién desarrollados aumentó en paralelo con la limitació n del intercambio
de gases (Tabla 1). La actividad de la superó xido dismutasa también aumentó en
condiciones de intercambio gaseoso limitado. Por el contrario, la actividad de la
glutatió n reductasa fue solo mayor que la de los controles en matraces bien cerrados.
En matraces cerrados con un tapó n con abertura, la actividad de la glutatió n reductasa
tendió a ser menor que en los matraces cerrados con tapó n de algodó n; sin embargo,
la diferencia no fue estadísticamente significativa.
Efecto a largo plazo del tipo de cierre sobre la producció n de etileno y las actividades
enzimá ticas antioxidantes
Para determinar si el cultivo de explantes de tallos de papa en condiciones de
intercambio de gases limitado puede tener un efecto prolongado sobre la intensidad
de la producció n de etileno y el estado antioxidante, se extirparon segmentos de tallos
nodales de brotes desarrollados en frascos con diferentes grados de limitació n de
intercambio de gases y se crecido en frascos sellados con tapones de algodó n. El
desarrollo de nuevos brotes se controló dentro de los 10 días posteriores al
subcultivo. La altura de los brotes recién desarrollados mostró una tendencia a
disminuir cuando el intercambio de gases es limitado (tapó n de silicona con y sin
apertura) (Fig. 5). Sin embargo, la diferencia no fue estadísticamente significativa.
Hubo un aumento estadísticamente significativo de la intensidad de producció n de
etileno, la actividad de la peroxidasa de ascorbato y la actividad de la peroxidasa de
guayacol con la limitació n del intercambio de gases. En contraste, la actividad de la
catalasa disminuyó progresivamente en los brotes precultivados en alta concentració n
de etileno (Fig. 5). Sin embargo, se midió una disminució n estadísticamente
significativa en la actividad en los segmentos de tallo de los explantes tratados.

Discusió n
Entre los diferentes efectos del etileno sobre el crecimiento de las plantas, el má s
conocido es la llamada «respuesta triple», que se utilizó como bioensayo en los
estudios de etileno antes de la introducció n de la cromatografía de gases (Abeles et al.,
1992). Estos efectos, a saber, el desarrollo del gancho apical, la inhibició n del
alargamiento y la promoció n de la expansió n radial, se observaron en los presentes
experimentos en brotes recién desarrollados de explantes de tallo de patata
cultivados en condiciones de intercambio gaseoso limitado. La sugerencia de que el
etileno inducido por heridas acumulado en los matraces de cultivo es responsable de
los efectos observados fue respaldada por las siguientes observaciones. Primero, la
acumulació n má xima de etileno ocurrió dentro de las 24 horas de cultivo (Fig. 2). En
segundo lugar, el tratamiento de los explantes con el inhibidor de la biosíntesis de
etileno, AOA, antes del cultivo en frascos bien cerrados, eliminó tanto la acumulació n
de altos niveles de etileno como la inhibició n del crecimiento de brotes recién
desarrollados (Figs. 1 y 3). Tercero, con la inclusió n de inhibidores de la acció n del
etileno, tiosulfato de plata y NBO, en los frascos de cultivo, no se registró inhibició n
del crecimiento de los brotes, a pesar de un alto nivel de acumulació n de etileno sin
cambios (Figs. 1 y 3).
Se ha informado que algunos artefactos, como el etileno liberado de los tapones
(Oacobsen y McGlasson, 1970) o del medio (Leonhardt y Kandeler, 1987), pueden
afectar el crecimiento de las plantas en cultivo in vitro. Nuestros resultados no
variaron la existencia de este fenó meno particular en nuestras condiciones
experimentales porque la acumulació n de etileno no ocurrió en matraces cerrados en
ausencia de material vegetal (datos no mostrados).
Ademá s del etileno, se deben tener en cuenta otros factores en la atmó sfera interna de
los frascos de cultivo cerrados, como el agotamiento de O2 y la acumulació n de CO2
(Buddendorf-Joosten y Woltering, 1994; Zobayed et al., 1999), que pueden afectan la
morfología y fisiología de los tejidos cultivados. Sin embargo, nuestros datos
sugirieron que los efectos morfoló gicos observados se debieron principalmente a la
acumulació n de etileno.
En los presentes experimentos, se observaron dos tipos diferentes de respuestas
antioxidantes en tejidos de papa cultivada debido a la limitació n del intercambio de
gases. Primero, se encontró una activació n significativa de varias enzimas en brotes de
papa desarrollados a partir de explantes nodales en condiciones de intercambio
gaseoso limitado (Fig. 4, Tabla 1). En segundo lugar, cuando los explantes nodales de
los brotes desarrollados en diferentes condiciones se subcultivaron y crecieron en
condiciones idénticas de intercambio de gases ilimitado, hubo diferencias
significativas tanto en la formació n de etileno como en el estado antioxidante en los
tejidos recién formados segú n el tipo de condiciones antes del trasplante. (Figura 5).
Los presentes resultados demuestran que la actividad de la ascorbato peroxidasa, una
enzima clave que elimina H20z, aumentó en los tejidos de papa tanto en condiciones
de mayor contenido de etileno debido a la limitació n del intercambio de gases como
en cultivos tratados con etefó n (Fig. 4) concuerdan con los hallazgos previos de que la
ascorbato peroxidasa podría ser controlada positivamente por el etileno en diferentes
tejidos vegetales (Mehlhorn, 1990; Ievinsh et al., 1995).

El hecho de que la limitació n del intercambio de gases haya llevado a un aumento en

las actividades de otras enzimas del metabolismo antioxidante ademá s de la ascorbato
peroxidasa, a saber, catalasa, superó xido dismutasa y glutatió n reductasa, indica
alteraciones significativas del estado antioxidante debido a las condiciones de cultivo.
Es interesante notar que se ha informado que el etileno induce actividad de
superó xido dismutasa y catalasa (Masia, 1998). Se supone que las plantas que poseen
altos niveles de enzimas antioxidantes son má s tolerantes al dañ o oxidativo endó geno
resultante del estrés ambiental (Gossett et al., 1994).
Se ha argumentado que incluso pequeñ os cambios en la actividad de la ascorbato
peroxidasa son suficientes para eliminar niveles considerablemente elevados de H 0
(Mittler y Zilinskas, 1994). Por lo tanto, en base a los datos presentados, es tentador
postular que el cultivo de tejidos de tallo de patata a mayores concentraciones de
etileno puede conducir a una mejor tolerancia al estrés que es
má s o menos estable dentro de los pasos posteriores de recultivo.
La inducció n tanto de la producció n de etileno como de la actividad de ascorbato
peroxidasa en tejidos tratados con H 20 y (Fig. 6), lo que está de acuerdo con los datos
publicados previamente (Mehlhorn, 1990), sugiere una participació n del H 20 2 en la
regulació n de la respuesta. H 20 2 es una de las señ ales durante el estrés abió tico
(Foyer et al., 1997). Estudios recientes sobre la tolerancia al estrés han indicado que
un aumento en la formació n de H2O2 como señ al transitoria para la inducció n de
enzimas antioxidantes es importante para los procesos de aclimatació n (Prasad et al.,
1994; Lopez-Delgado et al., 1998). Ademá s, en un experimento reciente con
microplantas de patata cultivadas in vitro, el H2O2, al tiempo que provocaba una
disminució n de la altura del tallo, aumentaba significativamente la termotolerancia
(Ló pez-Delgado et al., 1998). La evidencia indirecta de un estado antioxidante
alterado de las microplantas subcultivadas debido a las condiciones de cultivo está
asociada con el hallazgo de que ha habido una disminució n significativa de la actividad
de la catalasa en las microplantas de patata después del cultivo en condiciones de
intercambio gaseoso limitado a pesar de un aumento de ascorbato peroxidasa y
guayacol peroxidasa actividades (Fig. 5). Se ha demostrado previamente que la
disminució n de la actividad de la catalasa es un síntoma de estrés muy general y
preferencial de las hojas de las plantas a la luz (Streb et al., 1993). Sin embargo, una
baja actividad de catalasa no significa necesariamente una menor protecció n
antioxidante, ya que en las plá ntulas de mostaza se encontró una disminució n de la
actividad de catalasa durante el período de termoprotecció n inducida (Oat et al.,
1998).
En consecuencia, puede sugerirse que el efecto persistente a largo plazo de la
limitació n del intercambio gaseoso sobre el estado antioxidante y la producció n de
etileno de las plantas de papa subcultivadas en los presentes experimentos (Fig. 5)
está relacionado con un aumento en la concentració n tisular de H2O2 indirectamente ,
está respaldado por el hecho de que se encontró que la estabilidad de la
termotolerancia inducida por H2O2 en microplantas de papa perdura durante
períodos prolongados de tiempo, o incluso en la pró xima generació n de plantas
(Ló pez-Delgado et al., 1998).
En conclusió n, los resultados del presente trabajo indican la posibilidad de utilizar el
tratamiento con etileno en cultivos de tejidos vegetales como herramienta para
estudios de tolerancia al estrés.