Nombre de la práctica

Preparación de soluciones y elaboración del espectro de absorción en un

espectrofotómetro de luz visible.

Objetivo
Aprender a preparar soluciones estándar y hacer diluciones, así como elaborar el
espectro de absorción para hierro.

Fundamento
El espectrofotómetro es un instrumento para medir la absorbancia o la transmitancia de
una muestra en solución, en función de una longitud de onda determinada. Es ideal para
el análisis cuantitativo de sustancias que tienen una amplia banda de absorción en la
región visible o ultravioleta cercano.
En la práctica, se registra un espectro de ultravioleta/visible cuando se irradia la muestra
con luz UV/visible de longitud de onda de variación continua. Cuando la longitud de
onda corresponde al nivel de energía requerida para excitar un electrón a su nivel mas
elevado, se absorbe la energía. Esta absorción se detecta y se despliega en una grafica
en la que se muestra la longitud de onda en comparación con la absorbancia.

Material y Equipo
1,10 Fenantrolina
Cloruro de hidroxilamina
Acetato de sodio
Sulfato de sodio
Sulfato de hierro (II)
Acido sulfúrico concentrado
Agua destilada
5 Matraces volumétricos de 100 ml.
1 Matraz de 1000 ml.
1 Pipeta
Tubos de ensaye para el espectrofotómetro
Espectrofotometro Spectronic 21

Metodología / Procedimiento
Prepare las siguientes soluciones.
(a) Disuelva 0.1 g de 1,10 fenantrolina monohidratada en 100 ml. de agua destilada,
si es necesario, caliente para disolverla.
(b) Disuelva 10 g. de cloruro de hidroxilamina en 100 ml. de agua.
(c) Disuelva 10 g. de acetato de sodio en 100 ml. de agua destilada.
(d) Pese con exactitud 0.07 g. de sulfato de amonio y hierro (II) puro, disuélvalos en
agua y transfiera la solución a un matraz volumétrico de 1 litro. Agregue 2.5 ml.
de ácido sulfúrico concentrado y diluya la solución hasta la marca. Calcule la
concentración de la solución en miligramos de hierro por mililitro.
Pipetee en cinco matraces volumétricos de 100 ml. 1, 5, 10, 25 y 50 ml. de la solución
estándar de hierro. En otro matraz coloque 50 ml. de agua destilada para que sirva de
blanco. A cada matraz adiciónele 1 ml. de la solución de hidroxilamina, 10 ml. de la
solución de 1, 10 fenantrolina y 8 ml. de la solución de acetato de sodio. Lugo diluya
todas las soluciones hasta la marca de 100 ml. y déjelas reposar durante 10 minutos.
Empleando el blanco como referencia y cualquiera de las soluciones que preparó, mida
la absorbancia a diferentes longitudes de onda en el intervalo de 400 a 600 nm. Tome
lecturas de 5 nm entre 505 y 515 nm. Grafique la absorbancia contra la longitud de onda
y una los puntos para formar una curva. Seleccione la longitud de onda adecuada para la
determinación de hierro con 1, 10 fenantrolina.
Procedimiento de Funcionamiento del Spectronic Modelo 21
1. Conecte el instrumento a un tomacorriente con descarga a tierra.
2. Encienda el instrumento utilizado la llave de ENCENDIDO a la derecha del
panel inferior. Aunque el instrumento puede utilizarse casi enseguida de
encenderlo, para un mejor funcionamiento es mejor dejarlo calentar de 15-30
minutos.
3. Seleccione la longitud de onda deseada utilizando el selector de longitud de
onda. La longitud de onda elegida se muestra en el dial a la izquierda del
selector.
4. Escoja cubetas apareadas del paso apropiado al método analítico. Use las
mismas para blanco, estándar y muestras.
NOTA: Los tubos de vidrio suministrados con el instrumento solo deben ser
empleados por encima de 325 nm. Cubetas de cuarzo deben ser utilizadas por debajo de
325 nm.
5. Abra el compartimiento de muestras.
6. Llene una cubeta con el blanco a utilizar e inserte la misma en el compartimiento
de muestras. Llene la cubeta lo suficiente como para cubrir el haz de luz. Los
tubos de ensayo MILTON ROY están provistos de una marca horizontal para
indicar el nivel correcto. También poseen una marca vertical para alinear estos
con la marca en el compartimiento de muestras.
NOTA: Calibración.
a. El nivel de solución debe ser por lo menos 20 nm de alto en las cubetas
cuadradas de 10 mm (usando adaptador de cubetas).
b. El nivel de solución debe ser por lo manos 32 nm de alto en las cubetas
tipo tubo de ensayo (usando adaptador universal).
7. Cierre el comportamiento de muestras.
8. Seleccione el modo de operación- TRANSMITANCIA, ABSORBACIA, ó
CONCENTRACIÓN usando el selector de modo.
9. Ajuste el interruptor de SENSIBILIDAD localidad en el centro del panel inferior
a LO.
10. Ajuste a 100%T, 000A o 000C en el blanco, utilizando para ello el control de
100%T/cero A ubicado en la izquierda en la parte inferior del panel. Si no hay
energía suficiente para ajustar 100%T, 000A o 000C con el blanco, cambie el
interruptor de sensibilidad a M (Medio) o si es necesario a la posición HI.
Asegúrese de reajustar el control 100%T/CERO A cada vez que se haga un
cambio en el interruptor de sensibilidad.
11. Remueva el blanco.
12. Llene cada una de las cubetas apareadas con la muestra o el estándar a medirse.
Luego proceda al paso 16 según el modo en el cual este operando.
Nombre de la práctica
Determinación de la curva de calibración y la concentración de hierro con 1,10-
fenantrolina haciendo uso de un espectrofotómetro de luz visible.

Objetivo
Elaborar la curva de calibración con las soluciones de hierro preparadas con base en la
longitud de onda máxima encontrada en la practica anterior. Determinar la
concentración de una solución problema contenido hierro.

Fundamento
Para realizar el método e la curva de calibrado se introducen en el instrumento varios
patrones que contienen concentraciones exactamente conocidas del analito y se registra
la señal instrumental. Normalmente esta señal se corrige con la correspondiente señal
obtenida con el blanco. En condiciones ideales el blanco contiene todos los
componentes de la muestra original excepto el analito. Los datos obtenidos se
representan para obtener una gráfica de la señal corregida del instrumento frente a la
concentración de analito.

Material y equipo
Soluciones con diferentes concentraciones de hierro
Solución problema conteniendo hierro
Agua destilada
Espectrofotómetro de luz visible Spectronic 21

Metodología / Procedimiento
Curva de calibración
Repita el paso 6 de la practica anterior. Compruebe el 0 y 100%T al inicio de cada
medición con el blanco después haciendo uso de las diferentes soluciones de
concentraciones conocidas, anote la absorbancia desplegada en el Spectronic. Grafique
absorbancia vs mg/ml.
• En caso de iniciar la práctica tome en consideración los pasos 1, 2 y 3.
Muestra problema
Continuación del procedimiento de funcionamiento del Spectronic Modelo 21 de la
práctica anterior
13.- Análisis de la muestra.- Se inserta la celda que contiene la muestra en la gradilla
como en el paso 5. Inmediatamente se lee la absorbancia. Se retira la celda y se observa
si la lectura de 0%T ha variado. Además se vuelve a insertar la celda y se toma
nuevamente la absorbancia. Si hay una leve diferencia entre las partículas se toma el
promedio.
14.- Revisión del aparato.- Si se van a usar otras longitudes de onda, siga las
instrucciones del paso 6. Después de terminar las mediciones, enjuague todas las celdas
con agua destilada. Si el aparato va a ser usado por otros estudiantes, el profesor puede
indicar que se dejen encendidos el aparato y el regulador hasta que finalice el periodo.
De los contrario, apague y desconecte el regulador de la línea; se sobrecalentará si no se
desconecta.