27/05/2013

INGENIERÍA GENÉTICA

Ingeniería genética: conjunto de técnicas utilizadas para

obtener, amplificar y manipular fragmentos específicos del ADN,
lo que posibilita la creación de nuevas especies, la corrección de
defectos genéticos y la fabricación de numerosos compuestos
mejorados.

Medicina
Agricultura
Alimentos
Medioambiente

AGRICULTURA

•Plantas resistentes a herbicidas

•Plantas resistentes a insectos
•Plantas resistentes a enfermedades
•Proteccion al congelamiento
•Mayor durabilidad de frutos

ALIMENTACIÓN

•Mayor durabilidad
•Valor nutricional incrementado
• Sabores mejorados

Arroz ha sido transformado genéticamente

para poder acumular b-caroteno, el cual es
convertido en vitamina A en el cuerpo
humano

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La ingeniería genética incluye un conjunto de técnicas, entre las

que se destacan:

La tecnología del ADN recombinante: con la que es posible

aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para
introducirlo en otro.

La secuenciación del ADN: técnica que permite saber el orden

o secuencia de los nucleótidos que forman parte de un gen.

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR): con la que se

consigue aumentar el número de copias de un fragmento
determinado de ADN, por lo tanto, con una mínima cantidad de
muestra del ADN, se puede conseguir todo lo que se necesite
para un determinado estudio.

Tecnología del ADN recombinante

Tecnología del ADN recombinante: con la que es posible aislar y
manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo
en otro.

Primero debe debe seleccionar una muestra de ADN que contenga el

gen de interés (ADN donante). Luego este ADN donante debe ser
introducido en cromosomas accesorios no esenciales (plasmidos o
virus bacterianos). Éstos cromosomas accesorios serán portadores del
gen de interés y lo amplificarán, por eso se los denomina vectores.
Cuando el gen de interés (ADN donante) se inserta en el vector, se
obtiene un ADN recombinante. Ésta molécula de ADN recombinante
luego debe insertarse en una célula bacteriana. La bacteria que capte
el ADN recombinante se irá multiplicando al igual que el vector que
contiene el ADN recombinante (amplificación del ADN recombinante,
clonación de ADN). Luego hay que seleccionar las bacterias que
contengan éste gen de interés.

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1-Corte específico del ADN

Las largas moléculas de ADN deben ser cortadas en fragmentos más pequeños.
Este corte se realiza mediante la utilización de enzimas de restricción. Estas
enzimas cortan en secuencias de ADN específicas llamadas dianas de restricción.
Otra propiedad que tienen estas enzimas es que crean extremos cohesivos o
pegajosos.

2-Unión del ADN donante con el vector

Luego este ADN donante debe ser introducido en cromosomas accesorios no

esenciales (plasmidos o virus bacterianos). Éstos cromosomas accesorios serán
portadores del gen de interés y lo amplificarán, por eso se los denomina vectores.

Normalmente se digieren tanto el ADN donante como el vector con la misma

enzima de restriccion para que produzca extremos cohesivos complementarios. En
este momento, las moléculas híbridas no tienen todavía un esqueleto azúcar
fosfato unido covalentemente. Esta estructura puede ser sellada gracias a enzimas
ADN ligasas, que crean enlaces fosfodiéster en los puntos de unión.

Cuando el gen de interés (ADN donante) se inserta en el vector, se obtiene un ADN

recombinante.

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Los vectores deben cumplir con ciertas características:

•Deben ser capaces de replicarse en la célula hospedadora.

•Ser de tamaño pequeño para su fácil manipulación.
•Tener marcadores de selección, que permita distinguir células que incorporaron el
gen de interés de las que no. Ejm: R a ATB. Así cultivando todas las células en
presencia de ese ATB, sólo sobrevivirán las células que tenga R al ATB que son las
que incorporaron el gen de interés.

Los posibles vectores de clonación para células procariotas a utilizar son plásmidos
o bacteriófagos.

Plásmidos: moléculas de ADN extracromosómico circular, con un tamaño menor

que el del cromosoma. Se replican de manera independiente al cromosomas
bacteriano. Contiene genes con R a ATB.

Bacteriófagos: se inserta el gen de interés en un fragmento de ADN vírico.

Porteriormente, se ensamblarán las distintas partes del virus. Así quedará el virus
completo y podrá insertar el gen en la células infectada.

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Se cortan tanto el gen de interés

como el plasmido con la misma
enzima de restricción para generar
VECTOR: PLÁSMIDO extremos pegajosos y unirlos en una
molédula de ADN recombinante

GEN DE INTERÉS

ADN RECOMBINANTE

3-Introducción del vector en una célula hospedadora

El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen de
interés en la célula hospedadora (generalmente la bacteria E. coli), para que ésta,
al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto.

En bacterias, la inserción del vector puede realizarse mediante:

Transformación: la célula capta moléculas de ADN externo, las introduce en su

interior. Algunas bacterias la realizan de manera espontánea y otras lo consiguen
mediante tratamientos fisicos o químicos.

VECTOR: PLÁSMIDO

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VECTOR: BACTERIOFAGO

Transducción: éste método consiste en

introducir el ADN en la célula hospedadora
mediante un virus, utilizando como vector de
clonación el genoma del virus.

4-Amplificación dentro de una célula hospedadora

Un unico vector recombinante entra en una célula bacteriana y es amplificado

mediante la replicacion que tiene lugar durante la división celular. Por lo tanto,
después de la amplificación varias bacterias tendrán el DNA recombinante y otras
no.

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5-Recuperación de las moléculas recombinantes

amplificadas

Luego se debe seleccionar las

bacterias que tengan el ADN
recombinante. Por ejemplo, si se
usan plasmidos, puede utilizarse R a
ATB.

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Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Es una técnica que permite duplicar un número ilimitado de veces un
fragmento de ADN. Mediante esta técnica puede generarse millones
de moléculas idénticas, a partir de una molécula de ADN.

La reacción es un proceso cíclico:

1. La molécula de ADN que va a copiarse es sometida a calor para
que se separen las dos hebras (desnaturalice).
2. Cada una de las hebras es copiada por la ADN polimerasa (se
utiliza una que sea resistente al calor).
3. Las cadenas así formadas son separadas de nuevo por la acción
del calor y comienza otro ciclo de copias.

TÉCNICA MUY POTENTE, A PARTIR DE UNA SÓLA MOLÉCULA DE ADN, LA PCR

PUEDE GENERAR 100.000 MILLONES DE MOLÉCULAS IDÉNTICAS EN UNA
TARDE!!!!

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APLICACIONES DE LA PCR

1. SECUENCIACIÓN: formación de una suficiente cantidad de ADN

molde, para luego poder secuenciarlo (conocer su secuencia de
nucleótidos).

2. ESTUDIOS EVOLUTIVOS: mediante PCR se pueden amplificar genes

de organismos ya extinguidos. Se pueden comparar estos genes
con los genes de organismos actuales y poder construir árboles
filogenéticos.

3. HUELLAS DACTILARES DEL ADN: mediante esta técnica es posible

comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si
pertenecen al mismo individuo o no, etc.

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Plantas transgénicas

Mediante la ingeniería genética han podido modificarse las

características de gran cantidad de plantas para hacerlas más
útiles al hombre, son las llamadas plantas transgénicas.

Hay distintos tipos de técnicas que hacen posible estos cambios

en plantas:

•Técnicas indirectas: transformación de células mediada por

Agrobacterium tumefaciens.
•Técnicas directas: electroporación, microinyección y métodos
químicos.

Técnica indirecta: uso de Agrobacterium tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens, es una bacteria presente en el

suelo, que es capaz de producir tumores en plantas. Contiene un
plásmido Ti que contienen los genes responsables de su
virulencia, llamados genes onc. Cuando la bacteria infecta la
planta una parte del plasmido Ti (T-DNA), que contiene los genes
onc, es tranferido al nucleo de la célula vegetal y se inserta en el
cromosoma de la planta. De estar forma la bacteria modifica la
información genética de la planta.

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Si en el plásmido Ti se eliminan artificialmente los genes onc

y se sustituyen por otros genes que interesen clonar (ejemplo,
resistencia a herbicidas), se habrá obtenido un sistema muy
eficaz para introducir ADN a la planta, al mismo tiempo que
se evita la aparicion de tumores.

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PLANTAS TRANSGÉNICAS… para que???

1. DEFENSA FRENTE A PLAGAS DE INSECTOS: por ejemplo, al maíz se

le inserta un gen que codifica una proteína insecticida.

2. RESISTENCIA CONTRA HERBICIDAS: por ejemplo, la soja que tiene

resistencia al herbicida glifosato. El herbicida así sólo mata la
maleza y no la soja.

3. MEJORA EN LA CALIDAD DE LOS PRODUCTOS AGRÍCOLAS: por

ejemplo, en el tomate se insertan genes que retardan su
maduración.

4. DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE PRODUCCIÓN.

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