Sistemas de identificación semiautomáticos y automáticos

MicroScan Walkaway

El Walkaway (Dade MicroScan, West Sacramento CA) es un instrumento completamente

automático que incuba cualquier combinación de hasta 96 paneles convencionales o Rapid
MicroScan en forma simultánea, agrega automáticamente reactivos a paneles convencionales,
lee e interpreta los resultados de los paneles e imprime los resultados, todo sin intervención
del operador (lámina en color 6-6F). Existen paneles de nuo rescencia rápida además de los
paneles MicroScan convencionales para utilizar con el instrumento Walkaway. Los paneles
rápidos utilizan compuestos marcados fluorescentes y necesitan sólo una incubación de 2
horas para la identificación bacteriana. Cada sustrato fluorescente consiste en un fluoroforo,
ya sea metilumbeliferona (MEU) 7-amino-4-metilcumarina (AMCx) unida a un compuesto de
fosfato, azúcar o aminodici do. Se producen dos tipos de reacciones: fluorogénicas y
nuorométricas. En las reacciones fluorogénicas, si se presenta una enzima específica en la
suspensión bacteriana, escinde el compuesto nuorescente, liberando el fluoroforo, el cual
luego da fluorescencia. Por ejemplo:

Alanina L-alanina-AMC (no fluorescente) aminopeptidasa

Alanina + AMC (fluorescente)

Las reacciones fluorométricas detectan cambios en el pH como ocurre con la fermentación de

hidratos de carbono. La producción de ácido resultante produce una caída en el pH y una
disminución en la fluorescencia. Además, se utilizan ocho reacciones de velocidad
fluorogénica. Estas reacciones miden la velocidad de liberación del fluoroforo y se utilizan para
diferenciar especies fenotipicamente similares. Los resultados de las reacciones ID son
convertidos en biocódigos de 15 dígitos para su interpretación por el ordenador. El sistema
óptico colo interferencia sobre una rueda de colores y es enfocada sobre las fibras ópticas, 96
de las cuales reflejan la configuración de un panel de 96 celdas. El fotómetro 97 proporciona
una lectura basal con la cual se determinan las proporciones de las señales del fotómetro.
Durante cada ciclo de lectura, la rueda de colores que rota proporciona lecturas en seis
longitudes de onda dile rentes a través del espectre visible. Para las reacciones bioquí micas, el
ordenador selecciona la lectura en la longitud de onda que mejor discrimina la reacción que
ocurre en cada celda. Clayland y cols, han publicado una revisión de la tecnología del
Walkaway, Varios estudios han mostrado que Walkaway pro porciona una identificación
precisa de los microorganismos per Isnscientes a la familia Enterobacteriacra. . .13

El panel de identificación rápida en 2 horas fluorogénico de MicroScan ha sido actualizado

para aumentar significativa mente la precisión de la identificación y ampliar la cantidad de
taxones en la base de datos. El panel actualizado (Panel rápido para identificación de
gramnegativos 3. RNID)) consiste en 36 pruebas recientemente formuladas y una base de
datos nueva compuesta por 119 taxones, que cubre un total de 150 especies, que incluyen
12 sspesies nusyas adicionales. Ashondo y cols. comunicaron que el sistema nueva tiene una
precisión del 98,4% (92.5% de resultados correctos para las especies, 1.6% de resultados
correctos para el género y 4.3% de resultados correctos para las especies con pruebas
adicionales) y 99.3% de las cepas aisladas clinicamente significativas (97,4% de las especies
correctas, 1,0% de los géneros correctos y 0.9% de las especies correctas mediante pruebas
adicionales. La preci sión y el rendimiento del panel RNID3 fueron examinados en una
evaluación multicentrica en la cual se evaluó un total de 405 aislados que comprendían 54
especies: 96,8% de estas especies fueron identificados correctamente. En el mismo estudio,
se examinaron 465 aislados para la reproductibilidad intralaboratorio e interlaboratorio y
dieron una concordancia del 99.8%.

Sistema Vitek

El sistema Vitek (Legacy) (bio Mérieux) fue introducido inicialmente para realizar pruebas
automáticas de sensibilidad a los antibióticos, con modificaciones ulteriores para mejorar la
precisión. En 1982, se introdujo la Enterobacteriaceae-plus Biochemical Card (EMB +), que
proporciona la identificación automática de las enterobacterias dentro de las 8 horas de la
incubación. En 1996 se mejoró la tarjeta de identificación para gramnegativos. La nueva
versión, denominada Tarjeta GNI+, agregó 20 especies a la base de datos, mejoró el
rendimiento y aumentó la velocidad de identificación. Moss y cols, comunicaron que GNI+
identifica los microorganismos fermentadores de la glucosa en 2 a 8 horas y los
microorganismos no fermentadores de glucosa en 4 a 12 horas y el 40,1% de los
microorganismos evaluados son identificados en 3 horas, Hansen y cols, evaluaron la precisión
de las tarjetas Vitek GNI+ utilizando la inoculación directa desde frascos de hemocultivos
positivos empleando una suspensión elaborada mediante la centrifugación diferencial de caldo
de hemocultivo positivo. El método directo condujo a un 75% de identificaciones correctas, un
9% de identificaciones erróneas y un 17% de falta de identificación. Todos los aislados mal
identificados fueron E coli, de los cuales se comunicó que el 80% cran Salmonella ser. Arizona
200 El sistema Vitek Legacy tiene un amplio uso en los laboratorios de microbiología clínica y
por lo general ha sido aceptado como un enfoque confiable para la rápida identificación de los
bacilos gramnegativos hallados comúnmente. La construcción y los procedimientos operativos
de las versiones anteriores del sistema Vitek, idea das al principio para realizar pruebas
automatizadas de sensi bilidad a los antibióticos, se describieron con cierto detalle en la
segunda edición de este libro (cuadro 10-5).

VITEK 2 (bio Mérieux) es un sistema modular integrado que consiste en una unidad de llenado-
selladora, un lector-incuba dar un modulo de control Computariade na terminal de datos y una
impresora de múltiples copias (véase lámina en color 6-60). Además, incorpora varias mejoras
técnicas que auto matizan muchos procedimientos que se realizan manualmente con el
sistema VITEK legacy. El sistema detecta la prolifera Cion bacteriana y los cambios metabolicos
en las microceldas de las tarjetas delgadas de plástico utilizando una tecnologia basada en la
nuorescencia (a fines de 2004 se introdujo un ins trumente de base colorimétrica). La tarjeta
de identificación para los bacilos gramnegativos (tarjeta ID-GNB) para el VITEK 2 es una tarjeta
de plástico con 6-4 celdas que contiene 41 pruebas bioquímicas fluorescentes, que incluyen 18
pruebas enzimáticas para aminopeptidasas y oxidasas. Los sustratos utilizados para la
detección de las aminopeptidasas suelen estar acoplados con la 7-amino-metilcumarina
(7AMC): los sustra tos para la detección de Oxidas suelen estar acoplados con
metalumeliferona (4MU). Además, existen 18 pruebas de fer mentación, dos pruebas de
descarboxilas y otras tres pruebas Hay dos celdas de control negativas y las celdas restantes
estan vacías. Los resultados son interpretados por la base de datos de ID-GNB después de un
periodo de incubación de 3 horas. En un estudio de Funke y cols. se mostró que el sistema
VITEK identificaba correctamente el 84.790 de las especies seleccio nadas que representaban
70 taxones diferentes de enterobacte rias y bacterias no entéricas dentro de las 3 horas, Lingy
cols, en un estudio mucho más pequeno que representó a 31 taxones diferentes de las
enterobacterias más recuperadas y especies de fermentadores, obtuvo un 950 de identificaci
nes correctas a nivel de especies con el VITEK 2. Estos mis W ivestigadores evaluar el VITEK 2
para una identifica ción rápida de bacilos gramnegativos a partir de frascos de

hemocultivos positivos y comunicaron que 97 (82,2%) de las cepas cran identificadas

correctamente a nivel de las especies y 21 (17.8%) no fueron identificadas. No hubo
identificaciones erróneas. En otros dos estudios, O'Hara y Miller 117 comunicaron una
precisión del 93% para la identificación de cultivos de stock entéricos y Gavin y cols.188
informare una precisión del 95,3% Enterobacteriaceae. 95.9% no Enterobacteria: Cede, 92.5%)
con el VITEK 2

Sistema de autolidentificación para gramnegativos Sensititre

El sistema de incubación y lectura automática Sensititre (ARIS) (TREK Diagnostic Systems) es un

sistema automático que utiliza la tecnología de fluorescencia para detectar la proli feración
bacteriana y la actividad enzimática. El sistema con siste en 32 pruebas bioquímicas recién
formuladas, que incluyen medios bioquimicos clásicos seleccionados reformulados para que
proporcionen una señal de fluorescencia, junto con pruebas de fluorescencia creadas
recientemente. Cada medio de prueba bioquímico junto con un indicador apropiado de
fluorescencia está desecado en las celdas individuales de la placa Sensititre. Cada placa está
diseñada para evaluar ires microorganismos separados. Como son placas desecadas, pue: den
almacenarse a temperatura ambiente. Todas las pruebas de autoidentificación se leen en el
autolector Sensititre para detec lär la presencia usencia de fluorescencia. Los resultados se
transmiten a un ordenador para su análisis e identificación. Los resultados pueden leerse
después de 5 horas de incubación. Si no se puede obtener un nivel satisfactorio de
identificación a las 5 horas, la placa puede ser simplemente reincubada y leida después de una
incubación durante toda la noche. Debido al uso de la tecnología de fluorescencia, estas placas
no pueden leerse manualmente y sólo se pueden leer en un autolector Sensititre
correctamente estandarizado. Los datos internos de la compañía para 1 084 aislados de
enterobacterias muestran una concordancia global a las 5 horas del 92.4% y a las 18 horas del
93.45 cuando se comparan con los métodos estándares (información técnica del producto de
Sensititre).

Sistema Phoenix

El sistema microbiológico automático Phoenix (Becton Dickinson Microbiology Systems,

Sparks, MD) es un nuevo sistema de identificación y prueba de sensibilidad a los antibióticos
completamente automático. Está formado por paneles descartables que combinan tanto la
identificación como las pruebas de sensibilidad a los antibióticos y un instrumento que realiza
una lectura automática a intervalos de 20 minutos durante la incubación (lámina en color 6-
6H). El segmento de identificación para gramnegativos utiliza 45 sustratos bioquimicos, que
incluyen 16 fluorogénicos. 14 de fermentación, 8 de fuentes de carbono, Scromogénicos y
otros 2 sustratos (urea y ornitina) para identificar bacilos gramnegativos aerobios en 212
horas, con la gran mayoría de los resultados provistos en 4 horas o menos. El instrumento
controla tanto los cambios espectrales visibles como los niveles de intensidad de fluores.
cencia, según el tipo de sustrato, interpreta los resultados y proporciona una respuesta cuando
el sistema tiene confianza en la identificación. En un estudio de Stefaniuk y cols., el Phoenix
mostró una tasa alta de concordancia con los métodos de identificación convencionales, que
varió del 100% para los cocOS grampositivos hasta el 96% para los no fermentadores
gramnegativos y del 92.5% para las enterobacterias.

Sistema OmniLog ID

El sistema Omni Log ID (Biolog. Hayward, CA) es una plataforma completamente automática
para usar con el método de prueba de utilización de fuente de carbono de Biolog (véase la
descripción de Biolog GN2 Microplaca en la sección anterior). El sistema OmniLog incuba, lee e
interpreta simultáneamente las Microplacas Biolog. Este sistema procesa continuamente
muestras pero permite al usuario un acceso completo en cualquier momento durante una
corrida de la muestra. Una caracteristica singular de este sistema es la temperatura de
incubación definida por el usuario que permite que los microorganismos sean incubados a su
temperatura optima para obtener el crecimiento máximo para una identificación precisa. El
instrumento comienza la lectura de las microplacas 4 horas después de que han sido colocadas
en el lector. Se compara el patrón con la base de datos de identificación y se dice que existe
identificación cuando se han desarrollado suficientes reacciones positivas. Si no se obtiene
ningún resultado después de 6 horas, el instrumento continúa automáticamente incubando la
microplaca y comienza la lectura nuevamente luego de 16 horas hasta 24 horas. La base de
datos de Biolog contiene más de 1 400 microorganismos diferentes que incluyen 501 especies
de gramnegativos, que representan aquellos importantes tanto en microbio logía clínica como
no clínica. Muchas de estas especies no pueden ser identificadas con otros sistemas de
identificación. En resumen, los fabricantes siguen proporcionando nuevos sistemas y
modificaciones de los ya existentes para la identificación de microorganismos. Para pasar los
estándares de la Food and Drug Administration, todos estos sistemas deben tener un
rendimiento con una precisión igual o mejor a los métodos de referencia. Por lo tanto, cada
sistema puede ser utilizado en los laboratorios clínicos, pero la elección depende de diversas
variables, como el volumen de las pruebas, la experiencia del personal técnico, la necesidad de
identificaciones definitivas y el costo de la operación. Las enterobacterias, como grupo, están
aumentando con rapidez y en su mayoría son muy activas desde el punto de vista bioquímico,
por lo cual son muy apropiadas para el procesamiento por medio de siste mas automáticos y
semiautomáticos. En este libro sólo hay espacio para una reseña general de estos sistemas.
Para saber más remitimos al lector a la revisión de los sistemas automáticos escrita por Stager
y Davis.156 Pueden consultarse las referencias citadas para obtener descripciones más
detalladas y evaluaciones del rendimiento