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DESARROLLO Y EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE -BETA-CAROTENO POR Dunaliella

salina EN LA BAHÍA DE CÁDIZ

García-González, M; Cañavate, JP; Angis, V; Prieto, A; Manzano, C.

Centro de Investigación y Cultivo de Especies Marinas de “El Toruño”. Consejería de Agricultura y Pesca
de la Junta de Andalucía. Apartado 16, 11500-El Puerto de Santa María, Cádiz. España.

Resumen
Las microalgas son organismos fotosintéticos capaces de generar una amplia variedad de productos con
aplicación industrial, de ahí su interés científico y económico dentro de los campos de la biotecnología, la
acuicultura y las ciencias marinas. Entre los compuestos de mayor interés comercial sobresalen los
carotenoides, que pueden presentarse en cantidades sustanciales en las células de microalgas y para los
que estos organismos representan una excelente, y casi exclusiva, fuente biológica. La acuicultura, una
de las áreas de mayor desarrollo actual en el campo de la producción alimentaria, demanda también
cantidades crecientes de carotenoides. Por otra parte, las técnicas acuícolas actuales tienden a la
utilización de cultivos de microalgas seleccionadas para la producción de fitoplancton como alternativa a
las producciones microalgales naturales lo cual ha permitido desarrollar una tecnología específica para su
producción caracterizadas por su sencillez y economía de costos. Este conjunto de circunstancias ha
generado un creciente interés en la posible aplicación de las instalaciones disponibles en los criaderos de
acuicultura para el previsible desarrollo de las biotecnologías que actualmente se vislumbra en el dominio
marino.

Justificación
El objetivo de este trabajo es recabar toda la información y experiencia necesarios para el desarrollo
industrial de estos sistemas de cultivo de microalgas a gran escala tanto para la producción de
carotenoides como de otros compuestos de interés que se pueden obtener a partir de estos
microorganismos, siguiendo los procedimientos más adecuados para su implantación en la región
andaluza, desde distintos criterios de rentabilidad y sostenibilidad ambiental del proceso.
Por sus privilegiadas condiciones climáticas, Andalucía se configura como un territorio idóneo para el
establecimiento de cultivos masivos al exterior de microalgas al tratarse de organismos que utilizan la
radiación solar como fuente de energía y se desarrollan de forma óptima a temperaturas moderadas y
altas. Además, puede constituir una alternativa para la explotación sostenible de las salinas marítimas y
otros biotopos hiperhalinos, recursos de los que Andalucía dispone de extensas superficies, muchas de
ellas con escaso o nulo aprovechamiento económico. Igualmente, puede contribuir al desarrollo de un
sector de la industria agroalimentaria de clara repercusión económica y social en esta Comunidad.
Específicamente, se ha tratado de verificar durante, al menos un ciclo anual la operatividad de una planta
piloto para la producción al exterior de cultivos de Dunaliella salina ricos en -caroteno así como el
establecimiento de los protocolos de funcionamiento y gestión de dicha instalación.

Material y métodos
En este trabajo se ha empleado la estirpe Dunaliella salina UTEX 2538. El medio de cultivo contenía 1500
M NaNO3, 100 M NaPO4H2 y 12 M FeCl3.6H2O en agua de mar concentrada hasta una salinidad de
2M
El crecimiento se ha estimado como el incremento en biomasa determinado por el recuento celular al
microscopio óptico. Los carotenoides totales se han determinado espectrofotométricamente a 450 nm a
partir de extractos obtenidos en etanol:hexano (2:1).
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Los cultivos se han realizado en estanques abiertos de 3 y 20 m de forma alargada dotados de un
sistema de agitación mecánica por paletas Las condiciones de operación han sido: profundidad de cultivo
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de 10 cm, velocidad de la suspensión celular de 0.55 m s , densidad inicial del cultivo 0.7-0.9 x 10 cel
ml , régimen de operación en semi-continuo con ciclos de dilución cada 3-4 días, pH 7.5 ± 1.0 y sin
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control de temperatura.
Para el control de pH y suministro de una fuente de carbono se inyectaba CO2 a través de una tubería
porosa fijada al fondo de los estanques y estrictamente regulado por un sistema de caudalímetros
digitales másicos.
Se realizó un estudio de las variaciones diarias y estacionales de luz, temperatura, evaporación y
pluviometría mediante un registro en continuo de estas variables con el fin de evaluar la productividad de
la instalación en cada época del año.

Resultados y discusión
El diseño experimental seguido contempló la realización mensual de dos sistemas de producción en
régimen estanco y semicontinuo. A principio de cada mes se efectuaba la siembra de los cuatro tanques
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de 3 m a partir de los cultivos de cámara con una densidad inicial de inoculación de 400000 cél ml . Los
tanques permanecieron en régimen estanco, asegurando los requerimientos nutritivos mínimos que
permitieran una producción máxima. Cuando los cultivos alcanzaban la fase exponencial, en tres de los
tanques se estableció un régimen semicontinuo de cosecha con la consiguiente retirada de células y
adición de medio nuevo. Con ciclos de dilución de 3 a 4 días, los cultivos se mantuvieron en constante
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fase exponencial. Para llevar a cabo los cultivos en tanques de 20 m se utilizó como inóculo el cultivo
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procedente de la cosecha final mensual producida en los tanques de 3 m . Estos cultivos de gran volumen
se desarrollaron en régimen estanco.
Además del estudio de la productividad de biomasa neta anual de los cultivos de Dunaliella salina en los
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tanques de 20 m , también se realizaron mensualmente cultivos deficientes en nitrógeno y en régimen
estanco para la inducción de -caroteno (cultivos de enriquecimiento).
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La radiación promedio durante el periodo de estudio fue superior a 6 MJ m día entre primavera y otoño
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y nunca inferior a 1,5 MJ m día . Las máximas diferencias entre temperatura mínima y máxima fueron
de unos 13 ºC y los valores extremos de estas temperaturas 14 ºC y 31 ºC. Las lluvias fueron moderadas
o nulas aunque aparecieron episodios lluviosos intensos que produjeron un aumento del volumen de
cultivo que no fue compensado con la pérdida por evaporación y provocó una dilución excesiva de los
cultivos reduciendo los días del año que la instalación fue productiva. Estas condiciones unidas a las más
de 2800 horas de sol al año permiten considerar a la Bahía de Cádiz como un espacio idóneo para la
implantación de sistemas de cultivo masivo para esta microalga.
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La producción de biomasa de Dunaliella salina fue aproximadamente de 1,5 g m d al menos durante
270 días al año con una riqueza en pigmento constante del 6% que suponía una estimación promedio
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anual de 90 mg de pigmento m d . En los cultivos de enriquecimiento, la biomasa recogida fue 0,5 g m
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d pero con una riqueza en carotenoides del 15-20% en los meses de máxima irradiancia y del 10% en
los de mínima. Por tanto estos cultivos de enriquecimiento sólo serían rentables cuando la luz incidente
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fuese superior a 6 MJ m día ;el resto del año sería más productivo mantener los estanques de
producción.
Tanto los resultados de productividad en biomasa como los de carotenos permitirían concluir que el
cultivo masivo de Dunaliella salina en la Bahía de Cádiz, en tanques abiertos, agitados por paletas y con
un estricto control del proceso permitiría obtener -caroteno con rendimientos similares a los de las
plantas industriales existentes y constituiría por tanto una alternativa de desarrollo acuícola de esta zona
de salinas y marismas con un aprovechamiento adecuado de estos recursos naturales.