UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA

FACULTAD DE CIENCIAS – BIOTECNOLOGIA

Nombre: Mikey Vizuete

Curso: 5TO-G2

Fecha: 11/07/2021

Asignatura: Biotecnología Vegetal

TRABAJO EXTRA

APOMIXIX

Se refiere a la reproducción asexual por medio de semillas, en este proceso no ocurre la unión de los
gametos masculino y femenino para la formación del embrión.

TIPOS DE APOMIXIS

Se conocen 3 mecanismos diferentes por los que las plantas se reproducen por apomixis

 DIPLOSPORIA
Donde el embrión se origina de un saco embrionario no reducido.
El Nuevo embrión presenta igual numero cromosómico que la planta madre de origen
 APOSPORIA
Saco embrionario se origina una célula somática
No ocurre la meiosis
Embrión diploide
 ESPOROFITICA
Se denomina embrión nucelar
Apomixis común en los cítricos
El embrión se origina de una célula somática a nivel del ovulo de la planta madre.

EMBRIOGENESIS SOMATICA

Es la formación de un embrión a partir de una célula, sin la necesidad de la fusión de gametos

 Inductores
El nivel de auxina endógena estimula la embriogénesis somática
 Fases del embrión somático
Globular-Corazón-Torpedo

EMBRIOGENESIS DIRECTA

 Embrión somático directos sin pasar por callos

 Permita propagación clonal
 Juego cromosómico 2n
 Producto es la semilla sintética o embrión somático

EMBRIOGENESIS INDIRECTA
  Se induce a partir de un callo o de suspensiones celulares.

SEMILLA SINTETICA

La semilla es un órgano de gran importancia para la planta

 Consiste en un embrión somático encapsulado

 Son capaces de producir un vástago (brotes y ramificaciones áreas) y una raíz

TIPOS DE SEMILLA SINTETICA

 Desecadas
 Hidratadas

AGENTES ENCAPSULADORES

 Poliox (resina soluble en agua)

 Alginato de sodio

(Cortes H Castellanos, 2008)

APLICACIONES

Guardo plantas genéticamente heterocigota o plantas, sobresalientes

Embriogénesis somática como una elección con interacciona los esquejes

Recalcitrantes: Semilla sintética que muestra porque no muestra tolerancia a la desecación.

En especies auto gamas la tecnología de la semilla artificial da muchas ventajas y oportunidades

La producción de semilla artificial no implica ligar las instalaciones del laboratorio con los invernáculos.

CULTIVO DE HAPLOIDES Y DOBLE HAPLOIDES

Importancia de haploides

 La producción de haploides y doble haploides son herramientas que permiten acortar el tiempo
requerido para la obtención de nuevas variedades.
 Acortamiento delos programas de mejoras

Programas de mejora tradicional

Comprende 3 etapas fundamentales

 Generación de variabilidad genética

 Recuperación de progenies homocigóticos
 Evaluación de comportamiento de los materiales de ensayo

Haploides y sus aplicaciones en el mejoramiento vegetal

  Generación de poblaciones de mapeo
 Estudio de especies poliploides
 Fusión de protoplastos
 Variación gametoclonal
 Muta génesis
 Transformación genética
 Producción de plantas homocigóticas

Origen de haploides

 Ginogénesis
Se utiliza para describir la posibilidad de obtener plantas haploides a partir del gametofito
femenino
Polinización con polen inviable
Cultivo de ovarios
 Androgénesis
De todos las posibles, la inducción de androgénesis es la técnica más eficiente y más
ampliamente utilizada
Cultivo de haploides
Cultivo de micro esporas
Técnica de gametofito indeterminado
 Obtención de doble haploides
Planta haploide ----- estéril
Dos tipos
a) Espontanea (colchicina)
b) Inducida
 Cultivo de micro-esporas
Mayor manipulación
Aislar dos micro-esporas de la antera
Medio de inducción: Maltosa, glutamina, auxina, (APA)
Medio de regeneración: la composición del medio de regeneración puede afectar el vigor y
supervivencia de las plántulas

CULTIVO DE PROTOPLASTOS Y OBTENCION DE HIBRIDOS SOMATICOS DESCRIBIERON,

DESCRIPCION DE PROTOCOLOS, DIFERENCIAS CON HIBRIDACION SEXUAL

CULTIVO DE PROTOPLASTOS (tallos-hojas-frutas)

 Los protoplastos son células que excluyen a la pared celular

 Orgánulos típicos de una celular membrana plasmática, núcleo y vacuolas
 Citoplasma con una gran cantidad de enzimas donde se desarrollan las reacciones metabólicas
 Una vez aisladas las células vegetales se los eliminara la pared celular por medios mecánicos o
enzimáticos
 Se utiliza celulosa, hemicelulosas, pectinasas.
EL MEDIO ENZIMATICO

 La incubación de las células vegetales del explante

 En una mezcla enzimática comercial, principalmente compuesta por celulosas, hemicelulosas y
pectinasas.
 Estas enzimas se encargan de degradar la componente de la pared celular.
 Después se lleva un proceso de purificación para separar los protoplastos sanos, restos celulares
no digeridos entre otros componentes.
 Se le somete a una serie de procesos de centrifugación, filtración y lavado que resulta
finalmente en una suspensión pura de protoplastos.

HIBRIDACION SOMATICA

 Fusionados protoplastos con sus genomas completos (2n+2n) o con uno de ellos conteniendo
solo parte de su genoma
 Se contienen en la combinación de organelos de ambos progenitores produciendo nuevas
combinaciones
 Presenta algunas limitaciones, como una elevada esterilidad o imposibilidad de regenerar
plantas en algunos casos
 Totipotencia una de las capacidades de la planta que ayuda a la hibridación somática.

HIBRIDO SIMETRICO

 Genoma nuclear completo de cada parental

 Se obtiene por fusión 2 protoplastos con genomas completo

HIBRIDO ASIMETRICO

 Genoma nuclear completo de un parental y solo una parte del genoma nuclear del otro

CIBRIDO

 Genoma nuclear completo de un parental y material genético extracelular de otro parental

METODOS DE FUSION

 LA fusión de protoplastos es una técnica de biotecnológica en la cual se produce la fusión de las

membranas de dos o más células dando lugar a un hibrido somático

METODOS QUIMICOS

 15 a 45 % durante 15 a 30 min
 Inducción de la fusión debe de ser de 35 a 37 C
 La remoción del PEG se somete a lavados sucesivos de solución alcalina (PH 9-11) DE CaCl2 entre
10-50 Mm

METODOS FISICOS

 Se realiza usando una corriente eléctrica

 Esta causa un menor daño que los métodos químicos
  Perfil de los campos eléctricos aplicados a los protoplastos durante la electroporación

TIPOS DE HIBRIDOS SOMATICOS

 Heterocariontes
 Homocariontes

HIBRIDACION (Técnica de mejora para la especie)

Sexual: Cruzamiento por vía sexual se unen dos células sexuales (n+n). Células haploides

Somática: cruzamiento por vía asexual se unen dos células no sexuales (2n+2n/2n+n)

SEXUAL VS SOMATICA

 Barrera de incompatibilidad
 Herencia de genes extra nucleares mitocondrial y plastidios.

VARIACION SOMACLONAL

Soma----vegetal

Clon----- copia idéntica

Algunos cambios genéticos ocurridos en las plantas regeneradas pueden resultar variantes atractivas,
con utilidad potencial en el mejoramiento vegetal para para el desarrollo de nuevas variedades (López R,
2016)

Selección del explante

Células somáticas: son células de cualquier parte de la planta excepto los gametos masculinos o
femeninos, además estas células son diploides (2n). (López R, 2016)

Factores relacionados con la aparición de la variación somaclonal

 Genotipo
 Explante
 Vía de regeneración
 Fase de callo
 Naturaleza del callo
 Medio de cultivo
 Temperatura y deficiencia de oxigeno
 Reguladores de crecimiento
 Deficiencia o exceso de minerales
 Edad de cultivo

COMO INDENITIFICAMOS LAS VARIACIONES

 Marcadores morfológicos

Son características fenotípicas de sencilla identificación visual: hoja, tamaño

  Marcadores bioquímicos

Los polimorfismos presentes en ciertas proteínas son detectados.

 Marcadores moleculares

Fragmentos específicos de ADN que pueden ser identificados en todo el genoma.

APLIICACIONES DE LA VARIACION SOMACLONAL

 Herramienta para inducir variabilidad genética en la industria comercial

 Constituye una forma rápida de generar variabilidad genética
 Optimiza la interacción propia de los genes
 Tasa de mutación elevada. (Rica et al, 2009)

DIFERENCIAS ENTRE VARIACION SOMACLONAL Y GAMETOCLONAL

 Los explantes de origen que se va a utilizar

Somaclonal: Las células somáticas se puede usar cualquier parte de la planta
Gametoclonal: Células gamética o sexuales
 Obtención a nivel genético
Somaclonal: Plantas diploides 2n
Gametoclonal: Plantas haploides y doble haploides (Riea et al, 2009)

ANDROGENESIS

Los cultivos pueden hacerse con anteras que tengan granos de polen inmaduros o micro-esporas antes
del desarrollo de los gametofitos masculinos

GINOGENESIS

Es el proceso mediante el cual se producen células haploides in vitro por inducción de tejidos haploides
a partir de gametofitos femeninos (Roca Mroginski, 1993)

TRANSGENESIS

Se conoce como transgénesis el proceso de trasferir genes de un organismo a otro

Transgénico se refiere a una planta o a un animal en cuyas células se ha introducido un fragmento de

ADN exógeno (Roca y Mroginsky, 1993)

METODOS DE TRASNFERENCIA DIRECTAS

Son métodos físicos o químicos capaces de transferir ADN o cualquier célula o tejido con el
requerimiento de proteger al vector de la degradación mecánica o ataque de enzimas-núcleos. En estos
métodos no se utiliza ni intervienen microorganismo

 Biobalisticos
 Electroporación
 Sonicacion
  Transferencia mediada por compuestos químicos
 Fibras de carburo de silicona
 Micro inyección
 Micro láser

METODOLOGIAS DE TRNANSFORMACION INDIRECTAS

 Vectores biobalisticos
 Patogenicidad
 Genes de interés
 Agrobacterium Tumefaciens

PROCESO A SEGUIR

1. Construcción de ADN recombinante

2. Infección de células
3. Selección de células trasformadas
4. Regeneración de células del explante.

APLICACIONES

Se promueve como potenciadora de la agricultura o como su sustituta

Sus promotores sugieren que la biología sintética podría dar paso a una era de agricultura más eficientes
y productivas- una forma de hacer más con menos

MICROBIOS FOTOSINTETICOS

Arren Bar-Even y sus colegas en el instituto Weizmann de Israel usaran modelaje computacional para
proyectar las 5 mil enzimas metabólicas conocidas que existen naturalmente, con el fin de identificar
aquellas que son las más eficientes en la fijación del carbono.

METODOLOGIAS DE CONCERVACION

Limitación del crecimiento

Consiste en mantener los cultivos (yemas, plántulas, derivados de nudos o directamente Meristemas) en
condiciones físicos, factores ambientales o químicos, que permiten extender al máximo del intervalo de
transferencia a los medios frescos sin que ellos afecten la viabilidad de los cultivos.

FACTORES

 Temperatura- reducción
 Concentración de nutrimentos- carbohidratos y componentes nitrogenados
 Concentración de los reguladores de crecimiento – niveles de citoquininas
 Concentración osmótica – reducción de la absorción de agua y nutrientes del medio
Suposición del crecimiento

El riesgo de la inestabilidad citogenética cuando se conserva el germoplasma mediante el cultivo de

tejidos in vitro a largo plazo se puede minimizar utilizando tejidos organizados y reduciendo la tasa de
crecimiento mediante la baja temperatura (Roca y Roginsky, 1991).

La temperatura alcanza niveles inferiores a -150 C

Metodología de crio conservación

Crio – protección

Sustancias criprotectoras DMSO (5%-15%) Y GLICEROL (5%-20%)

PEG (10%)+GLUCOSA (8%) -----Tejidos de caña de azúcar y arroz

DMSO (10%)+GLICEROL (5%)+PROLINA (10%) -----Crio conservación de suspensiones celulares de maíz y

zanahoria.

CONGELAMIENTO

Congelamiento rápido

Nitrógeno liquido ---- 100 C min (cristales intracelulares de hielo)

Congelamiento lento

El material se congela de modo gradual 0.1 C y 3 C

Congelamiento escalonado

El material vegetal se somete sucesivamente a varias temperaturas por debajo de los 0 C

ALMACENAJE

Preferentemente a una temperatura de -196 C

Congeladores -70 C y – 100 C

DESCONGELAMIENTO

En general, cualquier procedimiento que haya sido empleado para la congelación del material vegetal,
su descongelamiento puede llevarse de forma rápida o lenta.

Descongelamiento rápido

Se realiza mediante baños de 1 a 2 min en agua a 40 C

Se debe agregar gradualmente medio de cultivo para diluir las sustancias criprotectoras y evitar la
deplosmolisis

Descongelamiento lento

Se debe exponer el material vegetal crio conservado a la temperatura de laboratorio (Wihers, 1979) o
colocándola en una corriente de aire caliente (Silbert y Wetherbee, 1977)
PRUEBAS DE VIAVILIDAD DE SEMILLA

Son técnicas o métodos que permiten la viabilidad, vigorosidad y la longitud de una semilla, varía según
la especie y depende de factores internos (genotipo, contenido de humedad y externos, temperatura
ambiental).