REPORTE PRÁCTICA N°13

REACCIONES DE LÍPIDOS
RESUMEN

Se trituró en una bolsa Ziploc un banano para romper las uniones entre las células y la pared
celular, luego en un vaso se preparó agua salada la cual fue añadida junto con gotas de
detergente a la bolsa Ziploc y se trituró nuevamente, de esta manera el detergente ayudó a
romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear, y la sal a
separar algunas de las proteínas que están unidas al ADN. Posteriormente, se filtró el contenido
para separar los restos de los tejidos del banano y el líquido que contenía el ADN. Por último
determinada cantidad del líquido filtrado fue separada y se le agregó isopropanol previamente
enfriado para que el ADN precipitara, con un palito de madera se giró (no agitó) el contenido
para concentrar el ADN en el centro del vaso y de esta manera extraerlo del alocohol.

RESULTADOS

Tabla N°1: Observaciones y cantidades utilizadas de materiales durante la práctica.

Cantidad (en mL, cucharadas Observaciones (color, olor,
Material
o gotas) estado físico, apariencia)
5 mL Líquido, incoloro, olor fuerte
Isopropanol
característico del alcohol
1 Sólido, amarillo pálido, olor
Fresa/Banano (entero)
dulce característico
Solución de agua salada 10 mL Líquido, incoloro, inodoro
3 gotas Líquido viscoso, verde
Detergente líquido
oscuro, olor a limón.

Datos experimentales obtenidos en Guatemala, zona 17.

Tabla N°2: Observaciones experimentales.

Observaciones (color, olor, estado físico,
Material/Procedimiento
apariencia)
Masa espesa, amarilla, olor dulce
Fresa/Banano (triturado, antes del paso 5) característico

Masa menos espesa, amarilla

Fresa/Banano (triturado, después del paso 5)
oscuro, olor dulce característico del banano
Líquido viscoso, amarillo oscuro, olor dulce
Filtrado
característico del banano
Masa densa, amarillo oscuro, olor dulce
Residuo
característico del banano

Datos experimentales obtenidos en Guatemala, zona 17.

Tabla N°3: Observaciones finales.
Observaciones (color, olor, estado físico,
Fase
apariencia)
Líquido viscoso, amarillo oscuro, olor fuerte
Acuosa
característico del alcohol
Liquido viscoso, incoloro, olor fuerte
Alcohólica
característico del alcohol

Datos experimentales obtenidos en Guatemala, zona 17.

DISCUSIÓN

Trituración:

El procedimiento de trituración rompe la mayoría de las membranas celulares (membrana

plasmática y membranas del retículo endoplasmático) en fragmentos que se cierran
inmediatamente sobre sí mismos formando pequeñas vesículas cerradas denominadas
microsomas (Ciochinni y Niemirowicz, s.f.)
. Es, decir al triturar el fruto se rompieron las uniones entre las células y la pared celular. Esta
homogeneización facilita el efecto de lisis o ruptura. Durante el proceso de lisis las
interacciones entre las moléculas que conforman la pared, la membrana celular y nuclear se
modifican o destruyen permitiendo que los ácidos nucleicos se liberen (Ciochinni y Niemirowicz,
s.f.)

Al principio la fruta estaba entera su apariencia era más sólida, al ser triturado pasó de solido a
una masa pastosa homogenizada que era lo que se pretendía con la trituración.

Principal conclusión de la trituración:

Para aislar los ácidos nucleicos fue necesario romper la membrana y la pared celular mediante
un método físico y así liberar las moléculas de ADN al medio extracelular.

Acción de la solución extractora:

El principal cambio fue el espesor de la masa formada de la trituración del banano, antes del
paso 5 esta se encontraba más dura y después del paso 5, esta masa pasó a ser menos espesa y
mas líquida. Este cambio se debe a que el detergente ayudó a romper la bicapa de fosfolípidos
de la membrana plasmática y envoltura nuclear. Y la sal ayudó a romper las cadenas de
proteínas, provocando una desnaturalización de las proteínas que lo conforman.

Un detergente está formado por varios compuestos químicos. Los principales son los
tensoactivos o tensioactivos, llamados también materia activa. Un tensoactivo es un compuesto
cuya molécula tiene una peculiar característica: es hidrófila e hidrófoba al mismo tiempo.
Gracias a ésta característica es capaz de fraccionar la grasa en partículas pequeñísimas llamadas
micelas y formar con ellas en el agua una disolución coloidal. En este caso, esas grasas son los
lípidos que componen a las membranas celulares y de los diferentes orgánulos: el cloroplasto,
la mitocondria, el aparato de Golgi y el retículo endoplasmático, así como el núcleo. Este paso
nos permite lisar a las células, es decir, romperlas para liberar su contenido: proteínas, ácidos
nucleicos y diferentes metabolitos (Rocha, 2002). Los lípidos de la membrana se descomponen
debido al detergente que deshace las uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el
detergente se pone en contacto con los lípidos éstos se separan de la membrana rompiéndola.
La estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso hace que se combinen, formando
una burbuja de detergente y lípidos. (Alejos et al., S.f.)

La sal está compuesta de átomos con carga positiva (el sodio) y negativa (el cloro). Los iones
positivos neutralizarán las cargas negativas del ADN y como resultado, la repulsión entre las
hebras de ADN disminuirá. El cloruro de sodio también ayuda a separar algunas de las proteínas
que están unidas al ADN (Alejos et al., S.f.).

Principal conclusión de la acción de la solución extractora:

Las moléculas de detergente ayudaron a romper las membranas celulares y liberar el ADN del
núcleo.

Filtración:

Se debe filtrar ya que de este modo se recoge el líquido que contiene los núcleos celulares.

Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una
carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su
extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga
negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante
alrededor de la molécula (Alejos et al., S.f.)

Este paso permite separar los restos de los tejidos del banano y de las células que hemos roto
en los pasos anteriores. El material que no nos interesa quedará retenido el filtro y el líquido
filtrado que conseguimos es el que contiene el ADN libre de la membrana nuclear.

Principal conclusión de la filtración del material triturado:

Los componentes no solubles como el material fibroso y las proteínas se separaron del ADN por
filtración.

Isopropanol:

El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el isopropanol a muy baja temperatura hace
que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con
etanol líquido y la capa con el extracto. El ADN es el único componente de la solución que no es
soluble en el isopropanol, y se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando
entre sí al precipitar debido a la acción de fuerzas físicas (Rocha, 2002).

El isopropanol precipita el ADN porque compite con este por el agua, deshidratándolo y
llevándolo al fondo del tubo.
El ADN es soluble en soluciones concentradas de sales (sal de cocina, por ejemplo), pero
insoluble en alcoholes (tipo etanol o isopropanol) (Alejos et al., S.f.).

Principal conclusión del uso de isopropanol:

El isopropanol frío provocó que el ADN se separara del agua y precipitará, cuando el ADN se
separa de la solución acuosa tiende agruparse, lo que hizo que fuera visible.

Material genético: Describa la apariencia del ADN recolectado en su fase alcohólica, incluyendo
su estado físico, viscosidad, dureza y color.

En la parte superior del vaso se encontraba el alcohol, en la parte inferior estaban los restos
celulares (membranas, orgánulos) del banano y los otros componentes de la solución, y en la
interfase se observó el ADN, una red o telaraña de hilos blancos muy sensibles al tacto.

Después de unos minutos se pudo observar que los hilos se convirtieron en aglomerados
blancos de consistencia viscosa. Esa sustancia está compuesta por los ácidos nucleicos que
estaban contenidos en el interior de las células del banano. Se utilizó un palito de madera para
girar suavemente en círculos al alcohol procurando no mezclar las fases. Este movimiento en
círculos se hizo para concentrar la sustancia de ADN en el centro del vaso. Una vez que estuvo
en el centro se pudo sacar del alcohol y hacer un análisis cualitativo.

Principal conclusión del material genético obtenido:

Las largas cadenas del ADN se enrollaron alrededor del palito de madera al revolver la interfase
entre las dos capas.

RECOMENDACIONES

1. Realizar un baño frío debido a que el agua fría ayuda a mantener el DNA intacto durante
el proceso de extracción. El enfriamiento de la solución ayuda a prevenir la
desnaturalización que podría destruir el DNA si se expusiera al calor de manera
prolongada (protege el ADN de enzimas que pueden destruirlo) (Martínez, 2015)

2. Utilizar zumo de piña, las moléculas de DNA están rodeadas de proteínas del tipo
histonas, y para obtener un extracto más puro de DNA es necesario eliminarlas. Para
ello hay que utilizar enzimas proteolíticos. El zumo de piña contiene bromelaína, una
enzima capaz de hidrolizar las proteinas y por tanto capaz de separar el DNA de las
histonas. Este proceso ayuda a que el DNA se desempaquete y es más fácil su extracción
(Martínez, 2015)
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Alejos, L., Aragón, M. y Cornejo, A. (s.f.) Extracción y purificación de ADN. Recuperado de:
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf

Ciochinni, A. y Niemirowicz, G. (s.f.) Ácidos nucleicos. Recuperado de:

http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2018/
QuimicaBiol/1527862563.pdf

Martínez, L. (2015). Extracción de DNA. Recuperado de:

http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart
%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf

Rocha, P. (2002) Teoría y práctica para la extracción y purificación del ADN de palma de aceite.
Bogotá: FEDEPALMA

ANEXOS

IMAGEN 1. ESTUDIANTE CON MATERIALES A UTILIZAR Y ESTUDIANTE CON EL MATERIAL

GENÉTICO OBTENIDO
IMAGEN 2. FRUTA TRITURADA ANTES Y DESPUÉS DEL PASO 5

IMAGEN 3. FILTRADO OBTENIDO

IMAGEN 4. FASES ACUOSA Y ALCOHÓLICA, ADN EXTRAÍDO