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SEP

SEMS

DIRECCIN GENERAL DE EDUCACIN TECNOLGICA INDUSTRIAL


CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIO N 91

Cd. Ixtepec, Oax.

COMPONENTE DE FORMACIN PROFESIONAL DEL BACHILLERATO TECNOLGICO

CARRERA DE TCNICO EN LABORATORSTA CLNICO

MDULO II
PROCESAR LAS TCNICAS PARA EL DIAGNSTICO MICROBIOLGICO

SUBMDULO 1 BACTERIOLOGA SUBMDULO 2 PARASITOLOGA SUBMDULO 3 MICOLOGA

SEMESTRE: III GRUPOS: J y K

BACTERIOLOGA
Microbiologa: es el estudio de los microorganismos unicelulares y sus actividades, su forma, estructura, reproduccin, fisiologa, metabolismo e identificacin como estn distribuidos en la naturaleza, sus relaciones con otros seres, los efectos benficos o perjudiciales que ejercen sobre los humanos, y las alteraciones fsicas y qumicas que provocan en su medio. Se ocupa del estudio de las bacterias, de los virus, protozoos, hongos y rickettsias.

EL DESCUBRIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS


La primera persona que observ y descubri microorganismos rigurosamente fue el holands; microscopista aficionado, Anthony Van Leewenhoek. Desde los tiempos primitivos, la gente crea en la generacin espontnea, es decir, que los organismos vivos podan originarse a partir de materia no viva. Finalmente, esta opinin fue desafiada por el mdico italiano Francisco Redi, que llev una serie de experimentos sobre la capacidad de la carne putrefacta para producir gusanos espontneamente. El naturalista italiano Lzaro Spallanzani mejor el diseo, proponiendo que el aire transportaba grmenes. Louis Pasteur, con sus experimentos, resolvi esta polmica y demostr cmo mantener las soluciones estriles.

El fsico ingls John Tyndall lanz un golpe definitivo a la generacin espontnea, demostrando que efectivamente, el polvo transportaba grmenes. El cirujano ingls Joseph Lister, aport pruebas indirectas de que los microorganismos eran agentes de enfermedades humanas, a travs de sus estudios sobre la prevencin de infecciones en heridas. La primera demostracin del papel de las bacterias como agentes causales de enfermedad se debi a la investigacin del carbunco por el mdico alemn Roberto Koch, posteriormente aplic los criterios para establecer la relacin entre Bacillus anthracis y el carbunco, demostrando que este agente etiolgico causaba carbunco. Los postulados de Koch, son criterios utilizados para demostrar la relacin causal entre un microorganismo y una enfermedad especfica: 1.- El microorganismo causal debe estar presente en cada caso de enfermedad, pero ausente en los microorganismos sanos. 2.- Hay que aislar y desarrollar en cultivo puro al microorganismo sospechoso. 3.- Al inocular el microorganismo aislado en un husped sano, se debe desarrollar la misma enfermedad. 4.- El microorganismo debe aislarse de nuevo a partir del husped enfermo.

LA MICROBIOLOGA, SU RELACIN CON OTRAS DISCIPLINAS.


La Microbiologa forj una estrecha relacin con otras disciplinas biolgicas durante la dcada de 1940, debido a su asociacin con la Gentica y la Bioqumica. Los microorganismos son instrumentos muy tiles de experimentacin porque son relativamente sencillos, se multiplican rpidamente y pueden cultivarse en grandes cantidades, se ha estudiado, la

relacin entre genes y enzimas, usando el moho del pan para demostrar que las mutaciones de genes eran verdaderamente espontneas, empleando mutantes bacterianos. Se ha demostrado que el DNA era el material gentico y transportaba informacin gentica durante la transformacin bacteriana. Las interrelaciones entre Microbiologa, Gentica y Bioqumica condujeron pronto al desarrollo de la gentica molecular moderna. La Microbiologa ha tenido un papel fundamental en el avance de la Biologa Molecular, rama de la Biologa que trata de aspectos fsicos y qumicos de la materia viva y su funcin. Los microbilogos han estado involucrados intensamente en estudios sobre cdigo gentico y los mecanismos de la sntesis de DNA y RNA y protenas. En la dcada de 1970, nuevos descubrimientos en Microbiologa permitieron el desarrollo de la tecnologa del DNA recombinante y la ingeniera gentica. Los microbilogos se pueden especializar en (virus), un grupo determinado de microorganismos, de forma que pueden denominarse virlogos, bacterilogos (bacterias), ficlogos o alglogos (algas), miclogos (hongos) o protozologos (protozoos), otros estn interesados en la morfologa microbiana o en procesos funcionales, y trabajan en reas microbiolgicas, como citologa, fisiologa, ecologa, gentica, biologa molecular y taxonoma. La Microbiologa mdica, trata del estudio de las enfermedades humanas y animales. Los microbilogos mdicos identifican el agente causal de una enfermedad infecciosa y planifican medidas para eliminarlo. Con frecuencia, participan en el descubrimiento de nuevos agentes patgenos en cuestin. La Microbiologa en salud pblica est ntimamente relacionada con la Microbiologa mdica. Los microbilogos especializados en este campo intentan controlar la extensin de las enfermedades transmisibles. La Inmunologa aborda mecanismos por lo que el sistema inmunitario protege al organismo frente a agentes patgenos y la respuesta de stos. Se ocupa tambin de problemas sanitarios prcticos, como la
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naturaleza y el tratamiento de alergias y enfermedades autoinmunitarias, como la artritis reumatoide. La Microbiologa agrcola se ocupa de los efectos de los microorganismos sobre la agricultura. Los microbilogos agrnomos intentan combatir las enfermedades de las plantas que atacan cultivos alimentarios importantes, trabajan con mtodos que aumentan la fertilidad del suelo y los rendimientos de los cultivos. El campo de la ecologa microbiana est estrechamente relacionado con la microbiologa agrcola, se estudian las relaciones entre microorganismos y sus hbitats, de la contribucin de stos a los ciclos del carbono, nitrgeno y azufre en los suelos y aguas continentales. Los eclogos microbianos estn utilizando microorganismos en el tratamiento biolgico para reducir los efectos contaminantes. Los investigadores que trabajan en microbiologa de los alimentos y productos lcteos intentan evitar la putrefaccin de los alimentos y la transmisin de las enfermedades alimentarias como el botulismo y la salmonelsis. Tambin emplean microorganismos para elaborar productos como queso, yogurt, encurtidos y cerveza. En la Microbiologa industrial, los microorganismos se emplean para elaborar productos como antibiticos, vacunas esteroides, alcoholes, vitaminas, aminocidos y enzimas. La Gentica y la Biologa molecular tratan de la naturaleza de la informacin gentica y de los mecanismos por los que regula el desarrollo y la funcin de las clulas y de los organismos. El empleo de microorganismos ha sido muy valioso para comprender la funcin de los genes. El futuro de la Microbiologa es prometedor, con la llegada de la tecnologa del DNA recombinante y la ingeniera gentica.

COMPARACIN ENTRE CLULAS PROCARITAS Y CLULAS EUCARITAS.


Existen dos clases de clulas fundamentalmente diferentes: CLULAS PROCARIOTAS: tienen una morfologa mucho ms sencilla, carecen de un ncleo delimitado por una membrana (ejemplo: las bacterias).

CLULAS EUCARIOTAS: poseen un ncleo rodeado por una membrana, tienen una morfologa ms compleja y generalmente mayores que las clulas procariotas (las algas, los hongos, los protozoos, las plantas superiores y los animales).

BACTERIA: Microorganismo unicelular, procaritico, que se reproduce asexualmente por fisin binaria o biparticin, pertenece al reino Monera, de comportamiento patgeno o no patgeno.

TAXONOMA: CLASIFICACIN, NOMENCLATURA E IDENTIFICACIN DE LAS BACTERIAS.


La taxonoma de las bacterias se refiere especficamente a tres conceptos bsicos: clasificacin, nomenclatura binomial e identificacin. La clasificacin se refiere a la divisin sistemtica de microorganismos en grupos relacionados por sus caractersticas similares e incluye a la especie como el nivel de divisin sistemtica de microorganismos en grupos relacionados por sus caractersticas similares e incluye a la especie como el nivel de divisin ms pequeo y definido. Los niveles taxonmicos como lo son familia, gnero y especie son los niveles de clasificacin ms usados para las bacterias, los protozoos y los hongos patgenos. La nomenclatura hace referencia al nombre de los microorganismos est gobernada por reglas internacionales desarrolladas y aplicadas por cientficos dedicados a la taxonoma. Los microbilogos asignan nombres a los microorganismos mediante el sistema binomial, aplicndose regla para la nomenclatura de los microorganismos. Tanto la taxonoma como la clasificacin dependen del uso de tcnicas de identificacin que consisten esencialmente en el proceso de la caracterizacin de un microorganismo dado, a fin de determinar su clasificacin, su relacin con otros microorganismos similares o diferentes y, de esta manera, asignarle un nombre. Para asignarle nombre al agente bacteriano, primero, escribiremos el gnero que se escribe siempre con letra mayscula la letra inicial y posteriormente escribiremos la segunda palabra que es la especie y se escribe con minscula. Tanto el nombre del gnero como el de la especie, se subrayan o se escriben en bastardilla cuando aparecen impresos. Ejemplo: Mycobacterium tuberculosis.

ESTRUCTURA BACTERIANA TAMAO Y FORMA DE LAS BACTERIAS.


Las clulas bacterianas tienen una gran variedad de formas y tamaos. Por lo general, tienen 0.2 a 2.0 micras de dimetro y de 1.0 a 6.0 micras de largo. Existen cuatro morfologas bsicas para identificar a las bacterias: 1.- Clulas esfricas o cocos: 2.- Clulas en forma de bastn o bacilos: 3.- Clulas con forma de espiral o espirilos: 4.- Clulas con forma de coma llamadas vibrione
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AGRUPACIONES BACTERIANAS.
1.- Diplococos 2.- Estreptococos 3.- Estafilococos 4.- Ttradas 5.- Sarcinas

ORGANIZACIN DE LA CLULA PROCARITICA.


Las clulas procariticas casi siempre estn limitadas por una pared celular qumicamente compleja. Dentro de esta pared, y separada de sta por un espacio periplsmico, se sita la membrana plasmtica. Esta membrana puede estar invaginada para formar estructuras membranosas internas sencillas. Como la clula procaritica no contiene organelos internos rodeados por membrana, su interior aparece morfolgicamente simple. El material gentico se localiza en una regin discreta, el ncleo, que no est separado del resto del citoplasma por membranas. Los ribosomas y los cuerpos de inclusin, estn dispersos por la matriz del citoplasma. Tanto las clulas Gram positivas como las Gram negativas pueden utilizar flagelos para desplazarse. Adems, muchas clulas bacterianas estn rodeadas por una cpsula o capa mucosa, externa a la pared celular. MEMBRANA CITOPLAMTICA: El citoplasma de todas las clulas bacterianas est rodeado por una membrana citoplasmtica. La membrana plasmtica rodea el citoplasma de las clulas procariticas y eucariticas. Esta membrana es el punto principal de contacto de la clula con el ambiente y, por ello, es responsable de la mayor parte de su relacin con el mundo exterior. Las membranas contienen tanto protenas como lpidos, aunque las proporciones exactas de unas y otras varan ampliamente. La mayora de los lpidos asociados a membranas son estructuralmente asimtricos, con extremos polares y no polares y se denominan antipticos. Las porciones polares interactan con el agua, son hidrfilos; los extremos no polares hidrfobos son insolubles en agua y tienden asociarse entre s. La membrana est compuesta por un 60% de fosfolpidos y por un 50% a 70% de protenas.

LOS MESOSOMAS son invaginaciones de la membrana plasmtica, para formar vesculas, se desconoce su funcin exacta. Los cuerpos de inclusin orgnicos suelen contener glucgeno que se caracteriza por ser un polmero de unidades de glucosa. LOS RIBOSOMAS aparecen como partculas pequeas y son el lugar donde se sintetizan las protenas. EL NCLEO, las clulas procariticas carecen de un ncleo limitado por membrana. El cromosoma procaritico, constituido por un nico crculo de doble cadena de cido desoxirribonucleico (DNA), est situado en una regin denominada nucleoide. Muchas bacterias poseen plsmidos, adems de su cromosoma. Se trata de molculas circulares, de doble cadena de DNA, que pueden existir y aplicarse independientemente del cromosoma o pueden estar integrados en este, no son necesarios para el crecimiento y la reproduccin del husped, aunque pueden llevar genes que aportan a la bacteria husped una ventaja selectiva. Los genes plasmdicos pueden conferir a las bacterias resistencia a los frmacos, nuevas capacidades metablicas, transformarlas en patgenos o dotarlas de otras numerosas propiedades. LA PARED CELULAR es la parte ms importante de una clula procaritica por varias razones: la mayora de las bacterias tienen una pared fuerte que les da forma y las protege de la lsis osmtica, la pared celular de muchos microorganismos patgenos tienen componentes que contribuyen a su patogenecidad, adems puede proteger a una clula frente a sustancias txicas y es el lugar de accin de varios antibiticos. La pared de una clula Gram positiva est formada por una nica capa homognea de peptidoglicanos o murena y sta es la responsable de la rigidez que presenta la pared celular. ESPACIO PERIPLSMICO: con frecuencia se presenta entre la membrana plasmtica y contiene la sustancia que recibe el nombre de periplsma. EL CITOPLASMA: es un gel amorfo que contiene enzimas, iones, organelos y una gran variedad de grnulos, muchos de los cuales constituyen reservas de alimento y energa ENDOSPORAS: Son estructuras esfricas u ovales formadas dentro de ciertas especies bacterianas que representan un estado latente o de reposo en el ciclo de crecimiento de los microorganismos bacteriano. Diversas bacterias Gram positivas pueden formar una estructura especial inactiva, de resistencia denominada endosporas. Estas estructuras son extraordinariamente resistentes a situaciones ambientales estresantes, como el calor, radiaciones ultravioletas, desinfectantes qumicos y desecacin. An no se ha determinado porque las endosporas son tan resistentes al calor y a otros agentes letales, estas estn constituidas por un 15% de cido dipicolnico.
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COMPONENTES EXTERNOS DE LA PARED CELULAR.


CPSULAS: Algunas Bacterias poseen una cpsula por fuera de la capa externa de la pared celular. La cpsula puede ser gruesa o delgada. El material capsular habitualmente es de naturaleza polisacrida. La cpsula bacteriana tiene varias funciones. Protege a las clulas de la desecacin y de materiales txicos del medio ambiente, por ejemplo metales pesados, radicales libres, la cpsula participa en la adherencia de las bacterias a las clulas y mucosas superficiales. La cpsula es antignica, tambin ofrece resistencia a la accin bactericida del complemento y de los anticuerpos sricos. FLAGELOS: Los flagelos bacterianos son largos apndices filamentosos que surgen a nivel de la membrana citoplasmtica y que se extienden a travs de la pared celular al medio circulante. Son responsables de la movilidad celular. Los flagelos generalmente se encuentran en las bacterias Gram negativas. Los flagelos se diferencian por su nmero y por su disposicin en la clula bacteriana: 1. Las bacterias con un flagelo nico en posicin polar se llaman monotrcas. 2. Las bacterias con dos o ms flagelos que se originan en un polo, reciben el nombre de lofotrcas. 3. Las bacterias con un solo flagelo en cada polo, reciben el nombre de anfitrcas. 4. Las bacterias con dos o ms flagelos en ambos polos, se llaman anfilofotrcas. 5. Las bacterias que poseen flagelos sobre toda su superficie se denominan peritrcas FIMBRIAS (PILI): Son apndices ms pequeos que se encuentran en la superficie de muchas bacterias Gram negativas. Las fimbrias estn compuestas de una protena denominada fimbrilina. Estos apndices estn involucrados en permitir el paso del intercambio de material gentico durante la conjugacin y tambin sirven de sitios de adhesin para bacterifagos.

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INTERCAMBIO GENTICO EN LAS BACTERIAS.


La replicacin bacteriana ocurre por un proceso de fisin binaria o biparticin, un proceso asexual que no involucra eventos de recombinacin y tiene como resultado la generacin de dos clulas hijas idnticas a la clula original. Actualmente se conocen tres mecanismos involucrados en el intercambio gentico bacteriano: 1.- Transformacin. 2.- Transduccin. 3.- Conjugacin. TRANSFORMACIN: Se ha encontrado que la naturaleza qumica de una clula se puede transformar por accin gentica. Por ejemplo, se pueden transformar neumococos no patgenos en patgenos. La actividad patgena de los neumococos est relacionada con la presencia de una cpsula de polisacridos que envuelve a la bacteria.

TRANSDUCCIN: El material gentico de una bacteria puede ser transferida a otra clula bacteriana mediante la accin de un virus y por lo tanto, transformar la actividad bioqumica de la bacteria receptora. El proceso consiste en que el virus inyecta su DNA a la bacteria, combinndose este ltimo con el cido nucleico bacteriano, posteriormente el virus se multiplica en el interior de la bacteria liberndose posteriormente los virus y estos invaden a una nueva clula. La bacteria infectada, al recibir la informacin del DNA viral recombinado con el DNA bacteriano adquirir la capacidad de un cambio fisiolgicobioqumico.

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CONJUGACIN: En este proceso se requiere de dos clulas, donde una de ellas, acta como receptora (hembra) y la otra clula acta como dador gentico (macho). La transferencia de material gentico del macho a la hembra es a travs de un puente de conjugacin.

NUTRICIN BACTERIANA Tomando en cuenta sus requerimientos nutricionales, las bacterias pueden ser: fototrficas y quimiotrficas. En relacin a las bacterias fototrpicas existen especies que consumen bixido de carbono como fuente principal de Carbono. Estas son denominadas fotolitotrficas. Otras necesitan un compuesto orgnico, y se denominan fotoorganotrficas (asimilan alcoholes, cidos grasos y aminocidos). Las bacterias fotolitotrficas y quimiolitotrficas frecuentemente se les denominan bacterias auttrofas, mientras que las especies fotoorganotrficas se les llama bacterias hetertrofas.
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Las bacterias hetertrofas se han estudiado ms ampliamente que las auttrofas ya que, en esencia, las hetertrofas estn ms relacionadas con el hombre. En este grupo de bacterias se pueden encontrar todas las que producen enfermedades en el hombre, animales y plantas, as como la gran mayora de la poblacin microbiana del ambiente inmediato que nos rodea. Las bacterias hetertrofas pueden tener necesidades nutricionales relativamente simples o muy complicadas, dependiendo de la especie de que se trate, esto se refiere a la complejidad de los nutrientes qumicos que necesitan para crecer las especies de cada gnero. NUTRICIN: Los nutrientes de los medios de cultivo deben contener todos los elementos necesarios para las sntesis biolgicas de los microorganismos. FUENTE DE CARBONO: Como ya se mencion, las plantas y algunas bacterias son capaces de recurrir a la energa fotosinttica para reducir el dixido de carbono a expensas del agua. Estos microorganismos pertenecen al grupo de las auttrofos, bacterias que no requieren nutrimentos orgnicos para crecer. Otros auttrofos son los quimiolitotrofos, bacterias que emplean un substrato inorgnico, como el hidrgeno o el tiosulfato como reductor y el dixido de carbono como fuente de carbono. Los hetertrofos requieren carbono orgnico para crecer, y ste debe encontrarse en una forma que pueda asimilar. Se requiere dixido de carbono para diversas reacciones biosintticas. Muchos microorganismos respiratorios producen dixido de carbono en cantidad ms que suficiente para satisfacer sus necesidades, pero otros requieren una fuente del mismo en su medio de crecimiento. FUENTE DE NITRGENO: El nitrgeno es un componente de primer orden de las protenas y los cidos nucleicos y constituyen cerca de 10% del peso seco de la clula bacteriana tpica. El nitrgeno puede suministrarse en diversas formas y los microorganismos varan en su capacidad para asimilarlo. El producto final de todas las vas de la asimilacin del nitrgeno es la forma ms reducida del elemento, el in amonio. Muchos microorganismos poseen capacidad para asimilar el nitrato y el nitrito de manera reductiva al convertir a estos iones en amoniaco. La capacidad de asimilar el nitrgeno de manera reductiva por medio del amoniaco, que se llama fijacin del nitrgeno, es una propiedad nica de las clulas procariticas, y son relativamente pocas las bacterias que poseen esta capacidad metablica. El proceso requiere de energa metablica y se inicia con facilidad por accin del oxgeno.

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La mayor parte de los microorganismos pueden recurrir al in amonio como fuente nica de nitrgeno, y muchos microorganismos poseen capacidad para producir este in a partir de las aminas. FUENTE DE AZUFRE: El azufre es un componente de muchas sustancias celulares orgnicas. Constituye parte de la estructura de diversas coenzimas. La mayor parte de los microorganismos pueden recurrir al in sulfato como fuente de azufre, al reducir al sulfato al nivel del sulfuro de hidrgeno. Algunos microorganismos pueden asimilar directamente el sulfuro de hidrgeno del medio del cultivo, pero este compuesto es txico para muchos otros. FUENTE DE FSFORO: Se requiere fosfato como componente de ATP, cidos nucleicos y coenzimas como NAD, NADP y flavinas. El fosfato se asimila siempre como fosfato inorgnico libre. FUENTES DE MINERALES: Se requieren numerosos minerales para la funcin enzimtica, los iones Magnesio y Fierro se encuentran tambin en los derivados de la porfirinas, el Magnesio y el hierro es parte de las coenzimas, de los citocromos y las peroxidasas. Tanto el Magnesio como el Potasio son esenciales para la funcin y la integridad de los ribosomas. Se requiere Calcio como constituyente de las paredes celulares de las bacterias Gram negativas, aunque es indispensable tambin para las bacterias Gram positivas. Muchos microorganismos requieren Sodio para poder crecer. FACTORES DE CRECIMIENTO: Se llama factor de crecimiento a un compuesto orgnico que debe contener una clula con objeto de crecer, pero que es incapaz de sintetizar. Muchos microorganismos, cuando reciben todos los nutrientes sealados, son capaces de sintetizar todos los elementos integrales de las macromolculas: aminocidos, purinas, pirimidinas y pentosas (precursores metablicos de los cidos nucleicos), carbohidratos, cidos grasos.

MEDIOS DE CULTIVO.
Los medios de cultivo, se han diseado para el cultivo de tipos especficos de bacterias conocidas. Se necesita un gran nmero de sustancias qumicamente puras para cultivar bacterias que tengan necesidades nutricionales. Aunque para el cultivo de bacterias hetertrofas en laboratorio de rutina, tanto si son similares a ciertas especies, generalmente se basan en medios de cultivo sintticos. En lugar de esto, se usan ciertos materiales crudos como peptonas, extracto de levadura y as el medio de cultivo que se obtiene, hace posible, el desarrollo de gran variedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando se desea un medio slido se toma el agar como agente solidificante.
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EXTRACTO DE CARNE: Extracto acuoso de carne magra de res concentrado en pasta que contiene las sustancias solubles en agua de tejidos animales, entre ellas: carbohidratos, compuestos orgnicos nitrogenados, vitaminas solubles en agua y sales. PEPTONA: Es el producto que resulta de la digestin de los materiales protenicos; por ejemplo, carne, casena y gelatina. La digestin del material protenico se efecta con cidos o enzimas, sirven para hacer medios de cultivo bacteriolgicos. Existen diferencias en las peptonas en cuanto su propiedad para permitir el crecimiento bacteriano. La peptona es fuente principal de Nitrgeno orgnico, puede contener tambin algunas vitaminas y carbohidratos, esto en relacin a la clase de material proteico digerido. AGAR: Carbohidratos complejos obtenidos de ciertas algas marinas procesadas para eliminar sustancias extraas. Se usa como agente solidificante de los medios de cultivo, se disuelve en solucin acuosa, solidifica cuando la temperatura baja de 45 grados centgrados, no se considera al agar como nutriente para las bacterias. EXTRACTO DE LEVADURA: Es un extracto en solucin acuosa de levadura, se obtiene comercialmente en polvo. Es una fuente muy rica en vitamina B, tambin contiene Nitrgeno orgnico, y compuestos de Carbono.

TIPOS DE MEDIOS.
Aunque muchos de los hetertrofos se desarrollan bien en agar nutritivo o caldo nutritivo, otros no crecen bien y otros ms, simplemente no se desarrollan. Algunos hetertrofos tienen requerimientos nutricionales muy elaborados para nutrientes especficos, por ejemplo, las vitaminas y sustancias promotoras del crecimiento. A estos organismos se les llama hetertrofos exigentes. Adems, se necesitan muchos medios de cultivo elaborados para propsitos especiales que facilitan la identificacin, aislamiento y cuantificacin de ciertos tipos de bacterias. Para conocer estas necesidades, el bacterilogo cuente con numerosos medios de cultivo a los cuales, de acuerdo con su funcin o aplicacin se les puede clasificar de la manera siguiente:

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MEDIOS ENRIQUECIDOS: La adicin de componentes como sangre, suero, o extractos de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, les proporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio pueda soportar el crecimiento de los hetertrofos exigentes. Ejemplos de medios de cultivo enriquecidos: agar sangre, agar chocolate, agar de Casman, caldo de Soya Tripticasena, caldo Tetrationato de Kauffman, caldo Tetrationato de Mueller, caldo de Infusin de CerebroCorazn, caldo Tioglicolato.

MEDIOS SELECTIVOS: La adicin al agar nutritivo de ciertas sustancias qumicas especficas, no permitir el desarrollo de un grupo de bacterias, sin inhibir al mismo tiempo el crecimiento de otros grupos. Por ejemplo, el cristal violeta en concentraciones especficas inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas sin afectar el desarrollo de variedades de bacterias Gram negativas. De manera similar, un medio en el cual la nica fuente de Carbono sea la maltosa, permite seleccionar las bacterias que slo se desarrollen en presencia de compuestos orgnicos pocos comunes agregando dichos compuestos al medio de cultivo y omitiendo todos los dems compuestos del Carbono. Ejemplos de medios de cultivo: Agar Samonella-Shigella, se emplea para aislar especies de Salmonella y Shigella. La mezcla de sales biliares inhibe muchos grupos de bacterias coniformes. Las especies de Salmonella y de Shigella producen colonias incoloras porque no son capaces de fermentar la lactosa. Las bacterias fermentadoras de lactosa producirn 16 colonias de color rosa.

AGAR SAL Y MANITOL: Se emplea para aislar a Staphylococcus, la selectividad se obtiene por la elevada concentracin de sal que inhibe el crecimiento de muchos grupos de bacterias. El manitol de este medio ayuda a diferenciar los Staphyloccus patgenos de los no patgenos, puesto que los primeros fermentan el manitol para producir cido y los ltimos no. Agar Sulfito de Bismuto: Se emplea para aislar Salmonella Typhi especialmente en muestras de heces y de alimentos. Salmonella Typhi reduce el sulfito a sulfuro, resultando colonias negras con un tono metlico. MEDIOS DIFERENCIALES: La adicin de ciertos reactivos o sustancias qumicas a los medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano o de cambios, y despus de la siembra e incubacin del medio, lo cual permite al observador diferenciar distintos tipos de bacterias. Por ejemplo, si se siembra una mezcla de bacterias, en un medio de agar sangre, algunas de las bacterias pueden hemolizar (destruir) los glbulos rojos, mientras que otras no lo hacen. Cuando aparece una zona clara alrededor de la colonia bacteriana es indicativo de de que ocurre la hemlisis. As es posible distinguir entre las bacterias hemolticas y no hemolticas que proliferan en el mismo medio de cultivo. De hecho, el medio agar sangre sirve simultneamente como medio de enriquecimiento y diferencial. Ejemplos de medios de cultivo: Agar Eosina Azul de Metileno: Este medio diferencia entre bacterias fermentadoras y bacterias no fermentadoras de la lactosa. Contiene lactosa, sales y dos colorantes; eosina y azul de metileno. Escherichia coli que fermenta la lactosa, producir colonias oscuras o colonias con brillo metlico. El agar MacConkey: Este medio de cultivo se emplea para el cultivo de Enterobacterias.

MEDIOS DE TRANSPORTE.
Para preservar satisfactoriamente las caractersticas fisiolgicas y la viabilidad bacteriana, debido a que existen bacterias que son sumamente sensibles al pH cido y donde el material biolgico no pueda procesarse de inmediato, se recurre a los medios de transporte para la conservacin de la misma. Los medios de transporte utilizados con mayor frecuencia en los laboratorios clnicos son: 1. - Stuart. 2. - Cary-Blair. 3. - Amies. 4. - Douglas. 5.- Solucin Salina reguladora con Glicerol.
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Las caractersticas que debe reunir un medio de transporte son:


a).- Que sea lquido y no seco. b).- Mantener a la poblacin microbiana estacionaria (impide su multiplicacin) c).- Que tenga un potencial de Oxido-Reduccin bajo. d).- Que tenga un indicador de pH.

CONDICIONES FISICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO BACTERIANA.


Adems de conocer los nutrientes apropiados necesarios para el cultivo de bacterias, tambin conviene conocer las condiciones fsicas del medio en donde el microorganismo puede desarrollarse mejor. As como las bacterias varan ampliamente en relacin a sus necesidades nutricionales, tambin muestran respuestas diversas a las condiciones fsicas del medio. Dicho de otra manera, para un buen cultivo de las bacterias se necesita combinar apropiadamente los nutrientes necesarios y las condiciones fsicas necesarias. TEMPERATURA: Ya que el proceso de desarrollo de las bacterias depende de reacciones qumicas y la velocidad con que se efecta stas reacciones es influida por la temperatura, el patrn de desarrollo bacteriano puede ser influido profundamente por esta condicin La temperatura puede en parte, determinar la velocidad de crecimiento y el grado total de desarrollo de los microorganismos. Las variaciones de temperatura tambin pueden influir en los procesos metablicos y en la morfologa celular. Cada especie de bacterias crece a temperatura que est dentro de ciertos lmites. De acuerdo con esto, las bacterias se pueden dividir en los siguientes grupos: 1.- Bacterias psicroflicas: Capaces de desarrollarse a cero grado centgrado, o menos, aunque crece mejor a temperaturas superiores, cercanas a 15C o 25C. 2.- Bacterias mesofilicas: Crecen mejor en lmites de temperaturas que estn entre 25C y 40C. 3.- Bacterias termofilicas: Crecen mejor entre 45C y 60C. Los lmites de desarrollo de algunas bacterias termfilas se extienden a la regin mesoflica, a esas especies se les conoce como termfilas facultativas o euritermfilas.

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NECESIDADES DE GASES.
Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano, son el Oxgeno y el Dixido de Carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al Oxgeno libre, y sobre esta base se divide en los siguientes grupos: a).- Bacterias aerobias: Estas desarrollan en presencia de Oxgeno. b).- Bacterias anaerobias: Estas desarrollan en ausencia de Oxgeno. c).- Bacterias anaerobias facultativas: Estas desarrollan tanto en presencia como en ausencia de Oxgeno libre. d).- Bacterias microaeroflas: Estas crecen en presencia de pequeas cantidades de oxgeno libre.

pH
En la mayor parte de las bacterias, el pH ptimo de crecimiento est entre 6.5 y 7.5, aunque algunas bacterias pueden desarrollarse a pH extremos, en la mayor parte de las especies los lmites mnimos y mximos corresponden a cualquier punto entre pH 4 y pH 9. Cuando se cultivan bacterias en un medio que originalmente se ajust a un pH determinado, es probable que este pH cambie como resultado de las sustancias producidas por los microorganismos, las cuales pueden ser cidas o bsicas.

CRECIMIENTO BACTERIANO.
Cuando las bacterias se siembran en un medio y condiciones adecuados, ocurre un incremento muy marcado en el nmero de clulas en perodos muy cortos. En algunas especies se alcanza la poblacin mxima en 24 horas, en cambio, en otras se necesita un perodo muy prolongado para alcanzar el mximo desarrollo. El trmino desarrollo que suele aplicarse a bacterias y otros microorganismos, se refiere por lo comn a los cambios que se producen en el cultivo de las clulas ms que a los cambios que sufre cada organismo en concreto.

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El procedimiento ms comn y sin lugar a duda, el ms importante en el ciclo de desarrollo de las poblaciones bacterianas, es la fisin binaria transversa en la cual una clula se divide en dos despus de desarrollar una pared transversa. La fisin binaria, es un procedimiento de reproduccin asexual.La supervivencia de cualquier grupo bacteriano dentro de su nicho depende en gran parte de la competencia con xito por los nutrimentos y de la conservacin de una reserva de clulas vivientes durante la privacin nutricional. CRECIMIENTO: Es el incremento ordenado en todos los componentes de un microorganismo. La multiplicacin celular es una consecuencia del crecimiento. MEDICIN DEL CRECIMIENTO. El crecimiento microbiano puede medirse en trminos de concentracin celular (nmero de clulas por unidad de volumen de cultivo) o densidad de la biomasa (peso seco de las clulas por unidad de volumen de cultivo). CURVA DE CRECIMIENTO. Si se inocula un medio lquido con clulas microbianas, tomadas de un cultivo que previamente ha crecido hasta la saturacin, en el cual peridicamente se ha determinado el nmero de clulas viables por mililitros y trazado una grfica de l, generalmente se obtiene una curva del tipo que se muestra en la figura siguiente: A.- FASE DE REZAGO: representa un perodo durante el cual las clulas, empobrecidas en metabolitos y enzimas como resultado de las condiciones desfavorables producidas al final del cultivo previo, se adaptan a su nuevo ambiente. Se forman enzimas y metabolitos intermediaros que se acumulan hasta alcanzar concentraciones que permiten que el crecimiento se reinicie. B.- FASE EXPONENCIAL: durante esta fase, las clulas se encuentran en una fase sostenida. Se sintetiza nuevo material celular a tasa constante, pero este es cataltico y la masa aumenta en forma exponencial. Esto contina hasta que sucede una de dos cosas: que uno o ms nutrientes del medio se agoten, o que se acumulen productos txicos que inhiban el crecimiento. Para los microorganismos aerobios, el nutrimento que se vuelva limitante es generalmente, el Oxgeno. C.- FASE ESTACIONARIA MXIMA: finalmente, el agotamiento de los nutrientes o la acumulacin de productos txicos hace que el crecimiento cese por completo. Sin embargo, en la mayora de los casos, hay recambio en la fase estacionaria.
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D.- FASE DE DECLINACIN O MUERTE: despus de un tiempo en fase estacionaria, que vara con el microorganismo y las condiciones de cultivo, la tasa de mortalidad aumenta hasta alcanzar un nivel sostenido. Los aspectos matemticos de la fase sostenida de muerte celular en el cultivo pueden representarse objetivamente. Frecuentemente despus de que la mayora de las clulas han muerto, la tasa de mortalidad disminuye en forma drstica, de tal manera que un pequeo nmero de sobrevivientes pueden persistir en el cultivo por meses a an aos. En algunos casos esta persistencia puede indicar recambio celular, creciendo unas cuantas clulas a expensas de los nutrientes liberados por las clulas que mueren y se liban. Para una clula microbiana, muerte significa la prdida irreversible de la capacidad de reproducirse (crecimiento y divisin).

RELACIN HUSPED PARSITO.


Un parsito es un organismo que vive sobre o dentro de otro organismo vivo, en donde logra obtener el medio y los nutrientes necesarios para su crecimiento y reproduccin. Esto no implica que el parsito tenga que causar dao a su husped. Por el contrario, los parsitos ms afortunados son aquellos que logran un equilibrio con el husped de tal manera que aseguran la supervivencia, el crecimiento y la propagacin tanto del parsito como del husped. As una gran mayora de las interacciones husped parsito no causan enfermedad, sino que la infeccin permanece latente o subclnica. La relacin entre husped y parsito est determinada tanto por aquellas caractersticas de los parsitos que favorecen su establecimiento y que daan al husped, como por los diversos mecanismos del husped que se oponen a estos procesos. Entre los atributos de los parsitos estn la infectividad, la inasividad, patogenecidad y toxicidad, estos atributos se describen a continuacin. Si el parsito lesiona al husped en grado suficiente, se presenta trastorno en este que se manifiesta como enfermedad. INFECCIN: La infeccin es el proceso por el cual el parsito entra en relacin con el husped. Los pasos esenciales, en el hombre y en los animales, son los siguientes: 1.- ENTRADA DEL PARSITO AL HUSPED: Las vas de entrada ms frecuentes son el aparato respiratorio (boca y nariz), el aparato digestivo, el aparato genitourinario y las excoriaciones en la superficie de las mucosas y la piel.

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Algunos parsitos pueden entrar o penetrar en las mucosas y la piel intactas mientras que otros son introducidos pasivamente por artrpodos a travs de estas capas directamente a los vasos linfticos o a la corriente sangunea. 2.-ESTABLECIMIENTO Y MULTIPLICACIN DEL PARSITO DENTRO DEL HUSPED: De la puerta de entrada, el parsito puede determinarse diseminndose a travs de los tejidos o puede proseguir por los vasos linfticos hasta la corriente sangunea, la cual lo distribuye ampliamente y le permite alcanzar los tejidos particularmente adecuados para su multiplicacin. La naturaleza bioqumica de los tejidos es la que en ltima instancia determina la susceptibilidad o resistencia del husped para un parsito dado.

ATRIBUTOS DE LOS MICROORGANISMOS QUE LES PERMITEN CAUSAR ENFERMEDADES.


1.- PATOGENECIDAD: Denota la capacidad de los microorganismos para producir enfermedad o de provocar lesiones progresivas. 2.- VIRULENCIA: Es el grado de patogenecidad de los microorganismos virulentos cuando se introducen en el husped en muy pequeas cantidades y causan enfermedades. 3.- TOXIGENECIDAD: Es la capacidad que tienen los microorganismos para producir sustancias txicas. 4.- INVASIVIDAD: Es la capacidad que tienen los microorganismos para entrar a los tejidos del husped, multiplicarse ah y diseminarse. La toxigenesidad y la invasividad pueden estar bajo control gentico diferente. La produccin de la mayor parte de las exotoxinas est controlada por genes en plsmidos o en virus bacterianos ms que por los genes cromosmicos de las bacterias. La virulencia se mide en trminos del nmero de microorganismos o microgramos de toxinas necesarios para matar a un husped dado cuando se administran por determinada va.

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TOXINAS.
Las toxinas microbianas habitualmente se agrupan como exotoxinas y endotoxinas. Las diferencias de estas toxinas se describen a continuacin:

EXOTOXINAS: 1.- Son excretadas por clulas vivientes, se hallan en concentraciones elevadas en medio lquido. 2.- Son polipptidos, de peso molecular 10,000 a 900,000. 3.- Son inestables relativamente, distribuidas a menudo con rapidez por calor mayor de 60C. 4.- Son altamente antignicas, estimulan la formacin de antitoxina de ttulo elevado. La antitoxina neutraliza la toxina. 5.- Pueden ser convertidas en toxoides. 6.- Son muy txicas, mortales para los animales de laboratorio en dosis de microgramos o menos. 7.- No producen fiebre en el husped.

ENDOTOXINAS: 1.- Forman parte integral de la pared microbiana de los microorganismos Gram negativos, liberadas al ser desintegrada dicha pared. 2.- Estn integradas por complejos lipopolisacridos. Porcin de Lpido A, quiz sea la responsable de la toxicidad. 3.- Son relativamente estables, soportan calor mayor de 60C, durante horas, sin prdida de la toxicidad. 4.- No estimulan la formacin de antitoxina, estimulan la formacin de anticuerpos al residuo de polisacridos. 5.- No son convertidas a toxoides. 6.- Son poco txicas. 7.- Producen fiebre en el husped con frecuencia.

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ALGUNOS MECANISMOS DE RESISTENCIA INESPECFICA DEL HUSPED.


A).- LA PIEL: pocos microorganismos son capaces de penetrar en la piel intacta, pero muchos pueden entrar por las glndulas sebceas y sudorparas o por los folculos pilosos y establecerse ah mismo. Las secreciones sebceas y el sudor, en virtud de su pH cido y posiblemente por algunas sustancias qumicas tienen propiedades antimicrobianas que tienden a eliminar a los organismos patgenos. Las lisozimas, que son enzimas, tambin se encuentran en las lgrimas y las secreciones respiratorias y cervicales. La resistencia de la piel puede variar con la edad. B).- MUCOSAS: en el aparato espiratorio una pelcula de moco cubre su superficie, la cual es arrastrada continuamente clulas ciliadas hacia los orificios naturales. Las bacterias tienden adherirse a esta pelcula. Por otra parte, el moco y las lgrimas contienen lisozimas y otras sustancias antimicrobianas.

ESTERILIZACIN.
Es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado, en el sentido microbiolgico, est libre de microorganismos vivos. Los trminos estril, esterilizar, y esterilizacin se refieren a la ausencia o destruccin completa de los microorganismos y no se usan en sentido relativo. Una sustancia o un objeto estn estriles o no estn estriles, pero no semiestriles o casi estriles. DESINFECTANTE: Es un agente, por lo regular qumico, capaz de matar las formas en desarrollo, pero no necesariamente las esporas resistentes de microorganismos patgenos. El trmino se aplica comnmente a sustancia que se usan en objetos inanimados. Desinfeccin es la operacin de destruir agentes infecciosos.

CARACTERSTICAS QUE DEBE REUNIR EL DESINFECTANTE.


Ningn agente qumico antimicrobiano slo es el mejor o ideal para uno o todos los propsitos. Las siguientes caractersticas que a continuacin se describen, deben considerase para evaluar los desinfectantes para usos prcticos: 1.- ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA: El primer requerimiento es la capacidad de la sustancia qumica a baja concentracin, deber tener un amplio espectro de actividad microbiana.
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2.- SOLUBILIDAD: La sustancia deber ser soluble en agua y otros disolventes en la medida necesaria para un uso eficaz. 3.- ESTABILIDAD: Los cambios en la estabilidad de la sustancia debern ser mnimos y no afectar considerablemente la accin germicida. 4.- NO DEBER SER TXICA AL HOMBRE U OTROS ANIMALES: La sustancia deber ser letal para los microorganismos y no daar al hombre u otros animales. 5.- HOMOGENEIDAD: La preparacin deber ser uniforme en su composicin de manera que los ingredientes activos se encuentren en cada aplicacin. Las sustancias pueden traer como consecuencia la prdida de la homogeneidad. 6.-NO DEBER REACCIONAR CON MATERIAL ORGNICO EXTRAO: Muchos desinfectantes tienen afinidad por las protenas y otros materiales orgnicos. Cuando se usan estos desinfectantes en situaciones en las que adems de bacterias hay cantidades considerables de material orgnico, muy poco, si no es que nada del desinfectante, estar disponible para actuar contra los microorganismos. 7.- TOXICIDAD: Para los microorganismos a la temperatura ambiente y a la del cuerpo, a menos que la sustancia pueda penetrar a travs de las superficies, su accin germicida se limitar al sitio de aplicacin. 8.- NO DEBER CORROER: Ni teir, no deber producir alteraciones en los metales, o teir y daar las telas. 9.- PROPIEDAD DESODORANTE: Es deseable que tenga atributos desodorantes as como desinfectantes. Lo ideal es que el desinfectante por si mismo tenga olor agradable o sea inodoro. 10.- CAPACIDAD DE DETERGENTE: Un desinfectante que a la vez sea detergente (agente limpiador) lograr dos objetivos pues la accin limpiadora aumentar la eficacia del desinfectante. 11.- EL DESINFECTANTE DEBER ESTAR DISPONIBLE EN GRANDES CANTIDADES Y A PRECIO RAZONABLE. ANTISPTICO: Toda sustancia que se opone a la sepsis o impide el desarrollo o accin de los microorganismos, ya sea por destruirlos o inhibir su crecimiento y actividad. Generalmente se refiere a sustancias aplicadas al cuerpo. SANEAMIENTO: Consiste en reducir poblacin microbiana a niveles no peligrosos por medio de un agente, segn los requerimientos de salud pblica. Por los regular, es un agente qumico que mata 99.9% de las bacterias en crecimiento. GERMICIDA: Agente que mata las formas en desarrollo pero no forzosamente las esporas resistentes, en la prctica un germicida es casi lo
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mismo que un desinfectante, aunque los germicidas se utilizan para todo tipo de grmenes y en cualquier tipo de aplicacin. BACTERICIDA: Agente que mata bacterias, de manera similar, los trminos fungicida, virucida y esporocida se refieren agentes que matan, respectivamente, hongos, virus y esporas. BACTERIOSTSIS: Es la superacin del desarrollo de bacterias (agente bacteriosttico). Los agentes que tienen en comn la capacidad de inhibir el desarrollo de microorganismos que se designan colectivamente microbiostticos. AGENTES ANTIMICROBIANOS: Son los que interfieren el crecimiento y actividad de los microbios. En el lenguaje corriente, el trmino antimicrobiano denota inhibicin del desarrollo y se refiere a grupos determinados de microorganismos. Se emplean los trminos de antimicrobiano o antifngico. Los agentes antimicrobianos que se utilizan en el tratamiento de las infecciones se denominan agentes teraputicos.

AGENTES FISICOS.
Los procedimientos prcticos en los que se emplea el calor, se dividen convencionalmente en dos categoras: I.- EL CALOR HMEDO. II.- EL CALOR SECO. CALOR HMEDO: El calor en la forma de vapor a saturacin y a presin, es el agente ms prctico y confiable para esterilizar. El vapor a presin proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullicin. Adems tiene varias ventajas, calentamiento rpido, penetracin y humedad en abundancia, que facilitan la coagulacin de las protenas. Muchas veces aunque no siempre, el autoclave se opera a una presin de 15/pulgadas aproximadamente 121 C. El tiempo para alcanzar la esterilizacin depender de la naturaleza del material por esterilizar, el tipo de recipiente y el volumen. El aparato de laboratorio diseado para usar vapor a presin regulada se denomina autoclave. Esencialmente es una cmara de vapor de doble pared equipada con dispositivos que permiten que la cmara se llene a saturacin de vapor y se mantenga a la temperatura y presin deseada durante cualquier periodo. Tindalizacin, algunos medios bacteriolgicos y sustancias qumicas no pueden calentarse a ms de 100 C sin que resulten daados; sin embargo, esos materiales pueden resistir esa misma temperatura del vapor slido y as es posible esterilizarlos por medio de la esterilizacin fraccionada o Tindalizacin. Este mtodo implica el calentamiento del material a 100C, durante tres das con sucesivos perodos de incubacin.
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Las esporas resistentes germinarn durante esos perodos de incubacin y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas. EBULLICIN: Materiales contaminados u objetos expuestos al agua hirviente no pueden ser esterilizados eficazmente. Es cierto que todas las clulas vegetativas se destruyen en minutos al ser expuestas al agua hirviente, pero algunas esporas bacterianas resisten la ebullicin durante muchas horas. Con la prctica de exponer instrumental durante perodos cortos al agua hirviente se obtiene ms de desinfeccin que esterilizacin, por tal razn no se puede y no se debe usar en el laboratorio como mtodo de esterilizacin. PASTEURIZACIN: La leche, crema y ciertas bebidas alcohlicas como la cerveza y el vino se someten a tratamientos de calor controlado que solo matan ciertos tipos de microorganismos pero no a todos. La leche pasteurizada no es estril. La temperatura seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo letal trmico (temperatura ms baja a la cual una suspensin bacteriana muere en 10 minutos) representativo para los tipos ms resistentes de microorganismos patgenos que debern ser destruidos mediante este procedimiento. Este proceso emplea temperatura de 62 C durante 30 minutos. CALOR SECO: Esterilizacin con aire caliente. Se recomienda cuando no se desea o no se requiere que el vapor a presin tenga contacto completo y directo con el material a esterilizar, como artculos de vidrio de laboratorio, cajas de petri, vasos de precipitados, matraces erlenmeyer, pipetas de vidrio, aceites, polvos y sustancias similares. El aparato que se emplea para este tipo de esterilizacin es un horno especial de gas, elctrico o domstico de cocina. Para el material de vidrio de laboratorio, se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160 grados centgrados. INCINERACIN: Este mtodo se emplea para destruir esqueletos, animales de laboratorio infectados, gasa y algodn contaminados. La destruccin de microorganismos por incineracin tambin se practica rutinariamente en los laboratorios cuando se introduce a la llama de un mechero Fischer o Bunsen, el asa de siembra para cultivos bacterianos. PRESIN OSMTICA: Osmosis es la difusin de productos a travs de una membrana semipermeable que separa dos soluciones de diferentes concentraciones. Al cabo de esta difusin, la concentracin es igual a ambos lados de la membrana. Supongamos que algunas clulas bacterianas estn suspendidas en una solucin que contenga 20% de Cloruro de Sodio. El agua pasar a travs de la membrana celular, que es semipermeable, de la regin de menor concentracin de sustancias disueltas a la solucin que rodea la clula, y como resultado, la clula se deshidratar. A este procedimiento se le denomina plasmlisis. Si una
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cepa de bacterias se ponen en una solucin que contenga cantidades de Cloruro de Sodio considerablemente menores de 1%, digamos 0.01%, la corriente se invertir y el agua pasar de la solucin al interior de la clulas. A este procedimiento se le llama plasmoptisis. Se produce una presin osmtica en la clula por la gran cantidad de agua acumulada en su interior. Si la membrana es elstica, como por ejemplo, la de los glbulos rojos, de dicha presin produce hinchazn e incluso ruptura de la clula. RADIACIONES: Son ejemplos de radiaciones, los rayos gamma, los rayos X y la luz ultravioleta. Muchos materiales celulares pero ms por los cidos nucleicos, donde la absorcin y las reacciones se efectan predominantemente en las bases pirimdicas de los cidos nucleicos. Las lmparas de luz ultravioletas germicidas (regin 2,600 a 2,700 Amstrong) se usan para reducir la poblacin microbiana en quirfano, cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica, donde se tienen que pipetear productos estriles para ponerlos en pequeos recipientes o ampolletas, as como en la industria de alimentos y leche para tratar superficies contaminadas. Una consideracin prctica e importante en el uso de estos mtodos para destruir microorganismos es que la luz ultravioleta tiene muy poca capacidad para penetrar la materia. RAYOS X: Son letales para los microorganismos y formas superiores de vida, tienen considerable energa y capacidad de penetracin. Sin embargo, no son prcticos para el control de poblaciones microbianas porque: 1.- Cuesta mucho producirlos en cantidades suficientes. 2.- Son difciles de utilizar eficientemente, ya que las radiaciones salen en todas direcciones a partir del punto de origen. An as, los rayos X se han empleado mucho en experimentos para producir mutantes microbianas. RAYOS GAMMA: Debido a su gran poder de penetracin y efecto microbicida, los rayos gamma resultan cmodos para usarlos en la esterilizacin de materiales de considerables grosor o volumen, como alimentos empacados. Sin embargo se tienen que resolver ciertos problemas tcnicos para poder usarlos en aplicaciones prcticas, por ejemplo, el desarrollo de una fuente de radiaciones para uso a gran escala o el diseo de equipos que eliminen cualquier posibilidad que afecte al operador.

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FILTRACIN.
Algunos materiales, particularmente los lquidos biolgicos como el suero de los alimentos o las soluciones de sustancias como las enzimas y algunas vitaminas o antibiticos, son termolbiles o sea se destruyen por calor. As mismo, otros agentes fsicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprcticos para esterilizarlos. En consecuencia, queda la opcin de hacerlo por la filtracin. FILTROS BACTERIOLGICOS: Durante muchos aos gran variedad de filtros bacteriolgicos han estado a disposicin de los microbilogos. Estos filtros se hacen de distintos materiales: placas de asbesto en los filtros Seitz, tierra de diatomeas en los Berkefeld, porcelana en los Chamberland-Pasteur, discos de fibra de vidrio en otros filtros. Los dimetros de los poros de los filtros bacteriolgicos miden aproximadamente una micra. Casi todos los filtros estn comercialmente basados en el promedio de abertura de sus poros. Sin embargo, se debe entender que no actan slo como cribas mecnicas, la porosidad sola no es nico factor que impide el paso de los microorganismos. Otros factores, como la carga elctrica de los microorganismos y la naturaleza de los lquidos que se van a filtrar, tienen que ver con la eficacia de la filtracin. En los ltimos aos se han desarrollado nuevos filtros (de membrana o moleculares) en los cuales los poros son de tamao uniforme y especfico predeterminado. Los filtros de membrana o moleculares estn compuestos por esteres biolgicos inertes de celulosa. Se preparan como membranas circulares de aproximadamente 150 micras de grueso y contienen millones de poros microscpicos de dimetro muy uniforme.

PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUMICOS ANTIMICROBIANOS.


A continuacin se refieren algunos de los principales qumicos antimicrobianos: 1.- FENOL Y COMPUESTOS FENLICOS. 2.- ALCOHOLES. 3.- HALGENOS. 4.- COLORANTES. 5.- DETERGENTES.

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FENOL: El fenol tiene la doble distincin de haber sido usado por Lister durante la dcada de 1860 en su trabajo para desarrollar tcnicas quirrgicas aspticas y de ser el patrn de comparacin con otros desinfectantes para evaluar su accin bactericida. Estos compuestos actan probablemente, desnaturalizando primero las protenas de las clulas y daando luego las membranas celulares, algunos reducen la tensin superficial y esta propiedad sin lugar a dudas contribuye a su accin antimicrobiana. Los compuestos fenlicos son bactericidas o bacteriostticos, dependiendo de la concentracin a la que se usen. ALCOHOLES: El alcohol etlico, a concentraciones entre 50% y 70%, es efectivo contra las clulas vegetativas y no productoras de esporas. Con frecuencia se afirma que el alcohol etlico al 70% es la concentracin bactericida ms eficaz. Otras concentraciones tambin son tiles. Los alcoholes superiores como el proplico, butlico, amlico son ms germicidas que el alcohol etlico. Los alcoholes desnaturalizan las protenas y esta propiedad puede en gran medida, contar para su actividad antimicrobiana. Los alcoholes tambin son disolventes de lpidos, de ah que daen la membrana celular. Tambin son agentes deshidratantes, el alcohol reduce la flora microbiana de la piel y sirve para la desinfeccin de los termmetros clnicos bucales. HALGENOS. YODO: Es un agente germicida ms antiguo y eficaz. Este elemento se usa tradicionalmente como agente germicida en la forma conocida como tintura de yodo. El yodo es un agente bactericida eficaz y el nico que tiene efecto contra toda clase de bacterias. Tambin tiene propiedades esporicidas, fungicidas y antivirales. Las soluciones de Yodo se usan principalmente para desinfectar la piel. CLORO: Representa uno de los desinfectantes de uso ms comn. En el mercado hay muchos compuestos de Cloro que pueden ser manejados como hipocloritos. El hipoclorito de Calcio y el hipoclorito de Sodio, son compuestos ampliamente utilizados en la industria y en el hogar. Pueden ser adquiridos en forma de polvo o soluciones lquidas y a distintas concentraciones, dependiendo del uso que se les vaya a dar. Productos que contienen entre 5 y 70% de hipoclorito de Sodio a una concentracin de 1% se usa para higiene personal y como desinfectante casero, concentraciones entre 5 y 12% tambin se emplean como blanqueadores y desinfectantes caseros y como agentes de saneamiento en establecimientos que procesan productos lcteos y alimentos.

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COLORANTES: Tienen especial inters como agentes antimicrobianos, destacndose el verde de malaquita, el verde brillante y el cristal violeta. Como regla general, los microorganismos Gram positivos son ms susceptibles a estos compuestos que los Gram negativos, el cristal violeta inhibe cocos Gram positivos, el verde de malaquita inhibe a Staphylococcus aureus. El cristal violeta tambin se utiliza como fungicida. Se preparan medios selectivos a concentraciones bajas con colorantes como el cristal violeta, el verde brillante y el verde de malaquita, en medios de cultivo slo crecern bacterias Gram negativas. DETERGENTES: Los depresores de la tensin superficial o agentes humectantes, empleados principalmente para la limpieza de superficies se llaman detergentes. Los jabones reducen la tensin superficial y por lo tanto incrementan el poder humectante del agua en la cual se disuelven. El agua jabonosa tiene la propiedad de emulsionar y dispersar aceites y polvos. Los microorganismos despus son atrapados por el jabn y arrastrado por el agua corriente. Se han agregado varias sustancias qumicas a los jabones para incrementar su actividad germicida. Se sabe que los detergentes catinicos son ms germicidas que los compuestos aninicos.

TCNICAS DE MICROSCOPA
FIJACIN BACTERIANA: Procedimiento utilizado para
matar a las bacterias sin destruirlas y adherirlas, con calor al portaobjetos. Generalmente se requieren tinciones biolgicas para visualizar bacterias en forma adecuada y poner en evidencia los detalles finos de las estructuras internas. Las tinciones consisten en preparaciones orgnicas o acuosas de colorantes que proporcionan diversos colores a microorganismos, plantas y tejidos animales u otras sustancias de importancia biolgica.

TCNICA DE TINCIN DE GRAM:


1.- Cubrir la preparacin con cristal violeta, durante 10 a 60 segundos. 2.- Lavar con agua de la llave. 3.- Cubrir la preparacin con lugol, durante 30 segundos. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Decolorar con alcohol-acetona, durante 10 a 20 segundos. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Cubrir la preparacin con safranina, durante 30 segundos. 8.- Lavar con agua de la llave.
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9.-Dejar secar la preparacin a temperatura ambiente y observar al microscpico con el objetivo de inmersin (100X). El cristal violeta sirve como colorante primario, y se une a la pared celular bacteriana luego de un tratamiento con solucin dbil de yodo, que sirve como mordente para la unin del colorante. Algunas especies de bacterias, debido a la naturaleza qumica de sus paredes celulares, tienen la capacidad de retener el cristal violeta incluso luego del tratamiento con un decolorante orgnico, como por ejemplo una mezcla en parte de alcohol etlico al 95% y acetona. Las bacterias que retienen el colorante se ven negroazuladas cuando se observan al microscopio, y se denominan entonces Gram positivas. Algunas bacterias pierden la coloracin primaria con cristal violeta cuando son tratadas con el decolorante, presumiblemente debido al alto contenido de lpidos de su pared celular. Estas bacterias decoloradas toman el colorante de contraste, la safranina, y se ven rojas cuando se observan al microscopio, denominndose Gram negativas.

TCNICA DE TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN:


1.- Cubrir la preparacin con carbol-fucsina y calentar a emisin de 6 a 7 minutos, cuidando que no se seque, ni hierva el colorante. 2.- Lavar con agua de la llave. 3.- Decolorar con alcohol-cido, durante 30 a 60 segundos. 4.- Lavar con agua de la llave. 5.- Cubrir la preparacin con azul de metileno, durante 30 segundos. 6.- Lavar con agua de la llave. 7.- Dejar secar a temperatura ambiente y observar al microscopio. Las micobacterias estn cubiertas de un material grueso, ceroso, que resiste la tincin; no obstante, una vez que se tien las paredes celulares bacterianas resisten la decoloracin por solventes orgnicos fuertes, como el alcohol-cido. Consecuentemente, dichas bacterias son conocidas como resistentes al cido. Se requiere un tratamiento especial para que el colorante primario, el colorante carbol-fucsina, penetre en el material ceroso de los bacilos resistentes del cido. Consecuentemente, dichas bacterias son conocidas como bacilos-cido-alcohol-resistentes (BAAR). Se utiliza calor, una vez que el colorante carbol-fucsina se deposita en la superficie del extendido (frotis bacteriano) a teir, se pasa por debajo del portaobjetos, hacia atrs y hacia delante, la llama de un mechero de Bunsen. El calentamiento del extendido prosigue hasta el desprendimiento de vapores, y se detiene poco antes de la ebullicin. Los bacilos resistentes al cido se ven rosas o rojos.
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TCNICA DE TINCIN DE SCHAEFFER-FULTON.


1. Cubrir la preparacin con verde de malaquita, calentar a emisin de vapor durante 1 minuto. 2. Lavar con agua de la llave. 3. Cubrir la preparacin con safranina, durante 30 segundos. 4. Lavar con agua de la llave. 5. Dejar secar a temperatura ambiente y observar al microscopio. Esta tcnica se utiliza para teir esporas bacterianas. Las esporas se tien de color verde y el soma celular de color rojo.

PROCESAMIENTO DE LOS CULTIVOS:


CULTIVO PURO: Poblacin de clulas que procede de una nica clula, para caracterizar una especie individual. SIEMBRA EN PLACA POR EXTENSIN Y EN ESTRAS. Si se extiende una mezcla de clulas en una superficie de agar, de manera que cada clula crece formando una colonia independiente cada colonia representa un cultivo puro. La siembra por extensin es una forma directa y fcil de conseguir este resultado. Se pasa un volumen pequeo de una mezcla microbiana diluida conteniendo entre 100 y 200 clulas, al centro de una placa de agar y se extiende uniformemente sobre la superficie con una varilla doblada de vidrio estril. Las clulas dispersas desarrollan colonias aisladas. Como el nmero de colonias debera ser igual al nmero de organismos de la muestra, este tipo de siembra puede usarse para contar una poblacin microbiana. Las colonias puras se pueden obtener tambin mediante siembra por estras. Se pasa la mezcla microbiana a un extremo de la placa de agar, con un asa de inoculacin o un hisopo, se extiende formando estras sobre la superficie siguiendo uno de los posibles patrones recomendados, desarrollando colonias separadas. SIEMBRA EN PROFUNDIDAD: La siembra en profundidad, que se emplea ampliamente con bacterias y hongos, puede tambin generar colonias aisladas. La muestra original se diluye varias veces para reducir la poblacin microbiana lo suficiente, con el fin de obtener colonias separadas cuando se siembren. A continuacin se mezclan volmenes pequeos de varias muestras diluidas con agar lquido, que se ha enfriado hasta
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aproximadamente 45 grados centgrados, y la mezcla de vierte inmediatamente en placas de cultivo estril. La mayora de las bacterias y hongos no se destruye con una exposicin breve al agar calentado. Despus de endurecer el agar, cada clula se fija a un lugar y forma una colonia individual.

MORFOLOGA COLONIAL:
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar nos permite identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto caracterstico. La interpretacin de los cultivos primarios luego de una incubacin de 24 a 48 horas requiere de habilidad considerable. A partir de la observacin inicial se debe evaluar el crecimiento de las colonias y decidir si son necesarios procedimientos adicionales. Las colonias puntiformes corresponden a bacterias de crecimiento lento, existen microorganismos que exhiben olores distintos como las Pseudomonas (sumo de uva), especies de Proteus (chocolate quemado), especies de Clostridium (fecal, ptrido, Pasteurella multocida (picante). A continuacin se mencionan las caractersticas morfolgicas de las colonias bacterianas:

1.- Tamao: dimetro en mm. 2.- Color:

3.- Forma: ___________________________________________________


puntiforme circular filamentosa irregular rizoide con forma de huso

4.- Elevacin: _________________________________________________


plana elevada convexa pulvinada umbonada

5.- Borde:

entero,

irregular.

6.- Aspecto: hmedo, seco. 7.- Superficie: lisa, rugosa.

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8.- Luz transmitida: opaca, traslcida, transparente.

9.- Luz reflejada: brillante, mate. 10.- Consistencia: suave (butirosa, mucoide o viscosa, friable o quebradiza), dura.

Reacciones en agar sangre que se emplean en la identificacin de bacterias.


Alfa hemlisis:
parcial aclaracin de la sangre alrededor de las colonias, con decoloracin verde del medio; borde de clulas rojas intactas. Beta hemlisis: zona de completo aclaracin de sangre alrededor de las colonias, debido a la lisis de los eritrocitos. Gamma hemlisis: no hay cambio en el medio alrededor de la colonia; no hay lisis ni decoloracin de los glbulos rojos de la sangre.

Procedimientos bioqumicos directos para la identificacin preliminar de bacterias.


Prueba de catalasa: Unas pocas gotas de perxido de hidrgeno (agua
oxigenada) al 3% se colocan directamente sobre la colonia. La efervescencia rpida indica produccin de oxgeno molecular y que la prueba es positiva. Puede ser difcil obtener resultados precisos si la prueba se realiza sobre colonias que estn creciendo en agar sangre, debido a la presencia de la enzima peroxidasa en los eritrocitos. Sin embargo, la reaccin de la peroxidasa producida por los eritrocitos es dbil y lenta, y usualmente puede diferencirselas en forma rpida de las reacciones altamente activas e inmediatas producidas por bacterias catalasa positivas. La prueba de la catalasa se utiliza frecuentemente para diferenciar estafilococos (positivos) de estreptococos (negativos).

Prueba de la oxidasa: Por el mtodo indirecto, se utilizan discos o tiras


reactivas de Clorhidrato de tetrametil-p-fenilndiamina u oxalato de paminodimetilanilina, hmedos impregnados con agua destilada estril colocando en una caja de Petri o en un portaobjetos limpio y libre de grasas; una asada de colonia sospechosa proveniente del medio slido. Observar los cambios de color: una reaccin positiva se pone de manifiesto de color rosa a color negro, debe ocurrir en segundos.
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Prueba de solubilidad de la bilis: Unas gotas de una solucin al 10%


de sales biliares desoxicolato de sodio sobre la colonia que se presume sea Streptococcus pneumoniae. Posterior a la clarificacin de la turbidez dentro de los 30 a 60 minutos de incubacin a 35 grados centgrados, indica solubilidad por la bilis.

Prueba de la coagulasa en portaobjeto y en tubo: Se emulsiona


sobre un portaobjeto una colonia sospechosa de pertenecer a una especie de Staphylococcus en una gota de plasma de conejo. El agrupamiento de las bacterias dentro de los dos minutos indica la presencia de coagulasa unida, y constituye un resultado positivo de la prueba.

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