Producción de enzimas

Daniel Arturo León R. MSc., PhD.

  En microbiología industrial, la producción de enzimas es un
mercado en crecimiento

 Los procesos microbiológicos están reemplazando catálisis

Introducción químicas en entornos industriales

 Las enzimas tienen ventajas operativas tales como la temperatura

de operación, pH y presiones normales
  Se traduce en ahorros operativos ya que se disminuyen gastos
tales como energía o equipos especializados

 Las enzimas como se sabe, son específicas, selectivas, y no

Introducción generan productos no deseados, generando ahorros en procesos
tales como purificación de productos

 Algunas pueden operar en medios no acuosos hidrofóbicos

 1. Oxidorreductasas
2. Transferasas
3. Hidrolasas
Clasificación 4. Liasas
de las enzimas 5. Isomerasas
6. Ligasas
  En algunos entornos industriales se pueden usar suspensiones de
células o esporas para que lleven a cabo reacciones específicas
Ventajas de (Sobre todo cuando se necesitan coenzimas), pero…
usar enzimas
 … Existen ciertas limitantes
 1. Las células pueden representar gastos energéticos innecesarios
Ventajas de
usar enzimas 2. Las células generan subproductos o desechos que pueden
mermar el rendimiento de los productos blancos
 3. Las condiciones para el desarrollo celular pueden ser diferentes
a las de generación de producto
Ventajas de
usar enzimas 4. Las condiciones de aislamiento de producto se pueden
dificultar por la presencia de sobrenadantes celulares
  Las enzimas tienen ventajas comparativas, tanto que en ciertas
industrias se está cambiando el uso de células por uso de
Ventajas de preparados enzimáticos

usar enzimas
 Esto ha llevado que la producción industrial de enzimas alcance
unos USD 1500 millones
  La gran mayoría de enzimas producidas son de origen microbiano,
aunque hay algunas de origen vegetal o animal
Industria de
enzimas  Muchas de ellas son extracelulares y varias provienen de
diferentes especies de Bacillus
  Las enzimas de Bacillus son de amplio uso entre otras causas por
su estabilidad térmica
Industria de
enzimas  Se usan proteasas, amilasas, etc., y tienen campo amplio de
aplicación
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Industria de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
  Aunque la gran mayoría de enzimas se conocen como enzimas de
bulto
Industria de
enzimas  Tienen aplicaciones varias y son producidas a escala con
características mínimas de utilidad de acuerdo a las necesidades
de los consumidores
  Otras enzimas, de más alta pureza y con mayores controles de
calidad también empiezan a ser altamente demandadas
Industria de
enzimas  Se usan en procesos médicos, biomédicos, biotecnológicos,
investigación…
Imagen tomada de Industrial Microbiology:
An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Imagen tomada de Industrial Microbiology:
An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
  Debido a sus procesos de calidad, son más costosas
Enzimas de
alta pureza  Algunas se usan de forma inmovilizada, que facilitan su
purificación y empaquetamiento y recuperación
Imagen tomada de Industrial Microbiology:
An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Imagen tomada de Industrial Microbiology:
An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
  Las enzimas inmovilizadas presentan otras ventajas entre las que
se destacan:

Enzimas 1. Reusabilidad
inmovilizadas 2.
3.
Aplicabilidad en procesos continuos
Los productos que se obtienen son libres de la enzima en cuestión
4. Mayor estabilidad
5. Reducción de problemas relacionados con desperdicios
Enzimas
inmovilizadas

Imagen tomada de Modern Industrial Microbiology and

Biotechnology, Okafur N. , 1ed, 2007
  El enlace covalente se establece entre un grupo funcional no
Inmovilización esencial de la enzima y un grupo reactivo en un soporte no soluble
en agua
por enlaces
covalentes  Entre las reacciones de formación tenemos acilación, aminación,
alquilación
  Entre los soporte se tiene agarosa, celulosa, dextranos, quitina,
Inmovilización almidón, pectinas, polivinil alcohol, poliestireno, polipropileno,
vidrio, entre otros
por enlaces
covalentes  El proceso debe ser mediado por algún agente
  Ventajas:
Inmovilización
1. Facilidad de reacción y lavado de excesos
por enlaces 2. El complejo enzima-soporte tiene gran cantidad de aplicaciones
covalentes 3. Método ampliamente descrito en literatura
4. Los soportes son ampliamente disponibles
  Es un método simple y barato

 Consiste en poner en contacto la enzima con una superficie de un

material no soluble en agua y lavado de exceso
Inmovilización
por adsorción  Se usa como soporte alúmina, celulosa, carbonato de calcio,
fosfato de calcio, vidrio

 Desventaja, a veces se pierde la enzima por poca adsorción

  Consiste en el encerramiento de las enzimas en cápsulas de
5~300um de diámetro

Inmovilización por  Se puede hacer de manera permanente (cápsulas con membrana

microencapsulación semipermeable) o no permanente (membranas líquidas)

 El primero es el más usado

  Ventajas de la microencapsulación permanente:
Inmovilización por
microencapsulación 1. Grandes superficies de las cápsulas para las enzimas
2. Se puede mejorar la especificidad de las cápsulas para la toma de
sustratos específicos
Inmovilización  No se genera ningún tipo de reacción entre la enzima y el soporte

por
 El soporte solo genera una matriz alrededor de la enzima
atrapamiento (poliacrilamida)
  Ventajas:

1. Simplicidad
2. Poca cantidad de enzima usada
Inmovilización 3. Poca probabilidad de daño de la enzima
4. Aplicable para enzimas insolubles en el agua
por
atrapamiento  Desventajas:

1. Posibilidad de pérdidas por escape

2. Daños durante polimerización de la matriz
Producción comercial
de enzimas
  La mayor parte de enzimas en la industria son producidas por
fermentación sumergida
Producción de
enzimas  Otras son producidas por fermentación en fase sólida: la primera
enzima producida fue producida por medio de esta técnica en
1884
Fermentación
sumergida

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Fermentación
en estado
sólido

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
  Como cualquier productos, las enzimas requieren de la selección
de microorganismos especializados con las características
Producción de necesarias
enzimas
 Se debe determinar las condiciones ideales para la producción
Producción de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Producción de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
Producción de
enzimas

Imagen tomada de Industrial Microbiology:

An introduction, Waites et al. , 1ed, 2001
  La inclusión de enzimas en
las formulaciones de los
detergentes trae varios
beneficios

Detergentes
 Permite un ahorro en energía
ya que no se deben calentar
los lavados y evita la adición
de más contaminantes
químicos
  Las primeras enzimas
producidas comercialmente
para uso común fue para la
industria de los detergentes
Detergentes
 En 1959 se incluyeron
proteasas bacterianas que
reemplazaron la tripsina de
origen animal
  Desde 1960 se incluyeron
mejoras a esa enzima que
permitió que su resistencia a
cambios de pH fuese mayor
Detergentes
 Desde los años 80s se
incluyen también lipasas y
amilasas
  EL almidón es un polisacárido
compuesto de amilosa y
amilopectina

Procesamiento  Amilosa: unidades lineales de

glucosa con enlaces 1-4α
de almidón
 Amilopectina: unidades
poliméricas ramificadas de
glucosa con enlaces 1-4 y 1-
6α
  La α-amilasa es una enzima
de alto interés en industria

 Rompe de manera aleatoria

los enlaces 1-4α generando
Procesamiento glucosa y maltosa
de almidón
 Desde 1950, se usan amilasas
fúngicas para hacer siropes
de azúcar en medios en los
cuales no se pueden usar
hidrólisis convencionales
  También son utilizadas en
industria panadera para la
licuefacción de almidón
Procesamiento
de almidón  Otra enzimas son las
amiloglucosidasas que
rompen el almidón y las
dextrinas en glucosa
Imagen tomada de Modern Industrial Microbiology and
Biotechnology, Okafur N. , 1ed, 2007
  La enzima lactasa o β-
galactosidasa es
ampliamente en industria
láctea

 Se aplica para producir la

Enzimas hidrólisis de lactosa en
glucosa y galactosa en leche
lactasas y productos lácteos

 Para la producción de helado

es útil ya que genera un
producto uniforme que da
una mejor textura
  Se obtiene de diferentes
especies de levaduras
Enzimas
 Generalmente se venden en
lactasas formas inmovilizadas para
tener mayores rendimientos
en industria
  Como se había mencionado,
el queso es un producto
fermentado de la leche que
data de miles de años
Enzimas en la
producción de  La producción inicial se hacía
quesos usando los estómagos de
diferentes especies de
ganado (terneros, corderos),
que más tarde se usaría el
cuajo de forma aislada
  El cuajo contiene la enzima
quimosina, una proteasa que
hidroliza la caseína de la
leche que forman agregados
Enzimas en la al principio del proceso de
fermentación
producción de
quesos  En la industria, el cuajo de
origen animal se usó
ampliamente hasta los años
60s, en la que hubo una baja
en la disponibilidad
Enzimas en la  A partir de acá se usaron
alternativas como hongos,
producción de extractos vegetales o incluso
bacterias modificadas para la
quesos producción de enzimas
  Muchas enzimas son
utilizadas en la industria de
jugos vegetales

Enzimas en la
 La más común son las
producción de pectinasas
jugos
vegetales  Las frutas y las bayas
contienen pectina que son
sustancias que permiten la
unión entre las diferentes
células
  En el proceso de extracción
de jugos vegetales, las
pectinas son extraídas junto
con éstos lo que ocasiona una
mayor viscosidad y un menor
rendimiento de producto
Enzimas en la
producción de  Esto se evita adicionando
jugos pectinasas a los preparados
previo al prensado
vegetales
 Este tipo de preparado se usa
por ejemplo para la
producción de aceite de oliva,
de palma y de coco
  La pectinasas industriales
contienen una formulación
que incluye varias enzimas
Enzimas en la
producción de  Otros productos requieren de
otras enzimas, por ejemplo
jugos las manzanas contienen
almidón por lo que se
vegetales requieren amilasas, en la
producción de vinos se usan
enzimas que permiten la
recuperación de color
Imagen tomada de Modern Industrial Microbiology and
Biotechnology, Okafur N. , 1ed, 2007
  El uso de enzimas en la
industria ha ido en aumento

 Se usa para tratamiento en

Enzimas en productos finalizados

industria textil
 Las telas son fortalecidas con
un proceso de adición de
almidón, luego para poder
adicionar color a las telas se
debe eliminar dicho almidón
  El cuero debe ser procesado
retirar elementos tales como
pelos, también para hacer
curados y sellados

Enzimas en la  Para estos procesos se

usaban químicos agresivos y
industria de altamente contaminantes

cuero
 Entre los procesos más
importantes está el
remojados, acá se adicionan
proteinasas y lipasas que
ayudan a la remoción de
materiales animales
  La industria de papel es un
motor económico de
importancia

Enzimas en el  Es un producto antiguo, que

tradicionalmente utilizaba
tratamiento de químicos para el
procesamiento de las fibras
pulpas de naturales de la madera
madera
 Además, está creciendo la
cultura del reciclaje, que
necesita aplicaciones
importantes
  En la actualidad se usa
tecnología basadas en
Enzimas en el enzimas, que reducen la
necesidad de químicos
tratamiento de contaminantes
pulpas de
madera  Estas enzimas se usan para
varios pasos en el
procesamiento del papel
 1. Digestión de la pulpa
2. Drenaje de la pulpa

Enzimas en el 3. Flexibilización de las fibras

4. Remoción de xilanos
tratamiento de
5. Remoción de resinas
pulpas de 6. Promoción de blanqueo
madera 7. Remoción de
contaminantes
8. Fibrilación de la pasta