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6 Enzimas
6 Enzimas
Enzimas
1
Recomendaciones generales
1. Puntual asistencia al horario de dictado de la
asignatura.
2. Prestar atención y no perturbar el desarrollo del
contenido del tema.
3. Repasar todos los días los contenidos impartidos en
las sesiones de teoría.
4. Preparar y estudiar el contenido de los talleres
sobre las Enzimas a ser discutidos durante las
sesiones prácticas en las Semanas de Docencia Nro.
7y8
2
Objetivos Específicos
1. Describir las características estructurales y funcionales de las enzimas.
• Características generales de las enzimas. Nomenclatura.
• Clasificación de acuerdo a la Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular (UIBBM).
• Mecanismos de acción. Catálisis enzimática.
• Cinética enzimática. Cinética de Michaelis-Menten. Cinética de la inhibición reversible.
• Enzimas regulatorias: características generales y cinética.
3
Enzimas
Definición:
Son catalizadores producidos por los células y cuya función es
incrementar la velocidad de las reacciones que catalizan sin
alterar las constantes de equilibrio.
4
Definición:
Enzimas
7
Enzimas de Naturaleza Proteica
PROTEINAS PURAS:
no requieren cofactor (tripsina, quimotripsina, elastasa)
HOLOENZIMAS:
Porción proteica ó Apoenzima
9
Sitios de la Enzima
SITIO ACTIVO:
Contiene los grupos químicos específicos implicados en la catálisis
(cadenas laterales de aminoácidos o nucleótidos), pudiendo estar
cercanos o alejados en su estructura primaria. Puede integrar o no
al sitio de unión al sustrato.
Ser
Asp
His
Glucosa 6-fosfotransferasa
10
Sitios de la Enzima
Sustrato: H 2O2
Sitio Activo
Sustrato
Sitio Activo
SITIO ALOSTÉRICO:
12
Especificidad enzimática
Especificidad de sustrato
Absoluta
Relativa
Especificidad de acción
Absoluta
13
Especificidad enzimática
Especificidad de Sustrato
Sustrato
Sitio
Activo
14
Especificidad enzimática
Especificidad Absoluta
15
Especificidad enzimática
16
Modelos que explican la Especificidad enzimática
Sitio +
activo +
+ +
Conformación del
estado de transición
19
Especificidad de acción
(absoluta)
1. ÓXIDOREDUCTASAS
2. TRANSFERASAS
3. HIDROLASAS
4. LIASAS
5. ISOMERASAS
6. LIGASAS
20
Clasificación de las enzimas
Clase I. Oxidorreductasas:
NAD+ NADH H+
OH O O O
CH3– CH – CH2 – C – O¯ CH3– C – CH2 – C – O¯
-hidroxibutirato
-hidroxibutirato Acetoacetato
deshidrogenasa
COO¯ COO¯
COO¯ + Alanina
H3N– CH COO¯ O=C
aminotransferasa +
O=C + CH2 H3N – CH + CH2
CH3 PLP
CH2 CH3 CH2
Piruvato COO¯ COO¯
Alanina
Glutamato -cetoglutarato
Ejemplo:
COO¯ COO¯
+ +
H3N– CH H3N– CH
CH2
Glutaminasa CH2 +NH
+ HOH + 4
CH2 CH2 Amoníaco
O = C – NH2 O = C – O¯
Glutamina Glutamato
23
Clasificación de las enzimas
Histidina + CO2
descarboxilasa
Histidina Histamina
Clase V. Isomerasas:
H–C=O H – C – OH
Fosfotriosa
H – C – OH O¯ isomerasa H–C=O O¯
CH2 – O – P = O CH2 – O – P = O
O¯ O¯
Gliceraldehído 3-Fosfato Dihidroxiacetona Fosfato
25
Clasificación de las enzimas
ATP ADP+ Pi
+NH +NH
3 3
O O O O
+NH
Glutamato 4
Glutamina
HOH
28
Curso de una reacción espontánea
S P
Energía libre de Gibbs (G)
G‡ S P.
G‡ P S.
P G ’
Curso de reacción
Estado de transición (‡)
29
Mecanismo general de la catálisis enzimática
E+S ES P
2 ‡
G‡Sin cat.
Energía libre, G
4
‡
1
5
G‡cat.
ES EP
3
2. Debe alcanzar un nivel energético más alto que se corresponde con el valor del
estado de transición.
4. La formación del estado de transición representa una barrera energética que debe
ser aportada por el entorno para que la reacción tenga lugar. Esa barrera energética
es lo que constituye la energía de activación, la cual, en las reacciones no
catalizadas por enzimas, puede ser aportada por incrementos de temperatura o
variaciones de pH.
31
Mecanismos que utilizan las enzimas para
aumentar la velocidad de las reacciones
¿CÓMO LO HACEN?
32
Las enzimas crean vías alternas de menor energía
de activación y lo hacen por dos mecanismos
fundamentales:
33
MODELOS DE FORMACION DEL COMPLEJO ES
- Modelo llave-cerradura de Fisher
+ ++ -
- -- + ++ + ++
+ + + - + + - +
+ + + -- -
- + -- - -- + + ---- - +
- - - - -
-
‡
Formación de un complejo ES
muy estable que no favorece Energía libre, G G‡Sin cat.
la transformación del sustrato
en el estado de transición, ya
S
G‡cat.
que cualquier transformación
posterior produciría perdidas
de las interacciones, siendo ES P
energéticamente desfavorable Reacción catalizada vs reacción no catalizada
Estado de transición (‡)
34
- Modelo de ajuste inducido de Koshland
+ + + +
- - - -- -
+ ------- ------- + +
----- --- -- + --- +
- - - -
1 2 3
Complejo ES Complejo EP
‡
1.Se forma un complejo ES con
interacciones leves, que se G‡Sin cat.
acentúan cuando el sustrato
Energía libre, G
alcanza el estado de transición. ‡
Catálisis covalente:
Ocurre en aquellas reacciones en donde el sustrato o parte de él
forma un enlace covalente con la enzima. La reacción se ejecuta
en dos etapas:
El sustrato o parte de él se une a la enzima formando un
intermediario unido covalentemente a la enzima.
E + A-X → E-X + A
Transferencia del grupo a un nuevo sustrato.
E-X + B → B-X + E
Los grupos funcionales que participan en este mecanismo de catálisis
son: Imidazol, Tiol, Alcohol (serina) y carboxilo (aspartato)
Las coenzimas que intervienen en este tipo de catálisis fosfato de
piridoxal (PLP) y Pirofosfato de tiamina (PPT)
40
Mecanismos químicos de catálisis
41
Cinética Enzimática
42
Cinética Enzimática
Velocidad de una reacción
Es el cambio de la concentración de un reactante o de un
producto por unidad de tiempo
Cinética enzimática:
Es el campo de la bioquímica que se encarga de la medición
cuantitativa de los índices de reacciones catalizadas por
enzimas, y del estudio sistemático de los factores que
afectan estos índices.
Proporciona información sobre las velocidades de reacción y
la afinidad de las enzimas por los sustratos e inhibidores.
Entre las aplicaciones prácticas de este estudio, están la
mejor comprensión de las fuerzas que regulan las rutas
metabólicas y el diseño de tratamientos más adecuados. 43
Unidades de medida de la actividad enzimática
Katal:
Moles de sustrato transformado por segundo
Actividad Específica:
Micromoles de sustrato transformado por minuto por miligramo
de proteína
UI/miligramo de proteína (medida de la pureza de la enzima)
44
Efecto de la concentración de enzima
sobre la velocidad de la reacción
Velocidad inicial, V0
Vmáx
0 10 20 30 40 50
Temperatura, ºC
Temp. óptima
47
Efecto del pH sobre la velocidad de la
Velocidad inicial, V0 reacción
Vmáx
Enzima:
Pepsina
Quimotripsina
0 2 4 6 8 10 12
pH óptimo pH óptimo pH
48
Efecto del pH sobre la velocidad
de la reacción
Sustrato
Enzima
52
En 1913, Michaelis y Menten propusieron un modelo donde las
reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas:
E+S ES E+P
En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato.
En la segunda, el complejo enzima - sustrato da lugar a la
formación del producto, liberando el enzima libre.
53
la ecuación de Michaelis-Menten está basada en cuatro
supuestos:
54
Cinética enzimática de Michaelis - Menten
Velocidad inicial, V0
Vmáx
1/
2Vmáx
1/V0
1/Vmáx
1/Km
1/[S]
56
Tipos de inhibidores de las enzimas
Inhibidores irreversibles: enlazan covalentemente a la enzima.
Inhibidor
Sustrato e inhibidor
pueden unirse al
lugar activo
Inhibidor
impide la unión
del sustrato
Productos 58
Inhibidor competitivo
E+S ES P+E
+
I
EI Con inhibidor
V0 1/V0 competitivo
Sin inhibidor Vmax
Con inhibidor
competitivo
Sin inhibidor
Vmax/2
1/Vmax
Inhibidor
Productos
Sustrato unido al
lugar activo
El Inhibidor no
En ausencia del impide la unión
inhibidor se forman del sustrato
los productos
60
Inhibidor no competitivo
E+S ES P+E
+ +
I I
EI + S EIS
V0 1/V0 Con inhibidor
Sin inhibidor Vmax no competitivo
Vmaxi
Con inhibidor Sin inhibidor
Vmax/2 no competitivo
1/Vmaxi
Vmaxi /2
1/Vmax
EIS
V0 1/V0
Vmax Con inhibidor
Sin inhibidor acompetitivo
Vmaxi
Con inhibidor
Vmax/2
Vmaxi /2 1/Vmaxi
1/Vmax
ENZIMA
Precursores
(aminoácidos)
66
Control por regulación de la eficiencia catalítica de las enzimas
• Compartimentación:
Consiste en la separación espacial de enzimas, sustratos y
moléculas reguladoras en diferentes regiones o
compartimentos celulares, permitiéndole a la célula usar de
forma eficaz recursos relativamente escasos.
• Asociaciones multienzimáticas:
Son organizaciones de varias enzimas que participan en una
misma vía metabólica en asociaciones que pueden ser de
naturaleza diversa, con el fin de lograr sistemas de máximo
rendimiento energético.
67
Control por regulación de la eficiencia catalítica de las enzimas
68
Control por regulación de la eficiencia catalítica de las enzimas
2. Regulación Alostérica:
Las enzimas alostéricas son invariablemente proteínas, con
múltiples lugares activos, presentan cooperatividad de unión
de sustrato (homoalosterismo) y una regulación de su
actividad por otras moléculas efectoras (heteroalosterismo)
69
Características de las enzimas alostéricas
1. Son proteínas con múltiples subunidades y con múltiples sitios
activos. (oligoméricas)
71
Regulación Alostérica
A B C D E
‒
72
Control por regulación de la eficiencia catalítica de las enzimas
3. Modificación covalente:
Zimógenos o proenzimas:
73
Modificación covalente reversible:
74
Enzimas en el diagnóstico clínico
75
Marcadores hepáticos
Alanina aminotransferasa (ALT) ó
transaminasa glutámico-pirúvica
(TGP). Distribución en orden
decreciente en hígado, riñón,
corazón, músculo esquelético
76
Marcadores hepáticos
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Marcadores pancreáticos
78
Marcadores cardíacos
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Marcadores musculares
Creatinfosfocinasa (CK-MM): Su concentración en suero aumenta en
la poliomielitis, distrofias musculares, y algunos trastornos
metabólicos (hipotiroidismo, acromegalia, miopatía relacionada con
alcoholismo e hipertermia maligna.
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Marcadores diversos