Antecedentes académicos

Equipo 2:
-Hernández Martínez Jessica Evelin
-Hernández Santos Erick Eduardo
-Maturano Fernández María Natalia
-Miranda Cuevas Isaac Joshua
-Orozco Romero Sonny Lizet
Ley de Lambert Beer

Relación entre el rayo incidente y el transmitido a través de placas coloreadas de espesor diferentes,
anunciando la ley en la que señala que existe una relación logarítmica entre la intensidad del rayo transmitido y
el espesor de la placa.

Beer aplicó la ley de Lambert a soluciones coloreadas, enunciando la siguiente ley: “La absorbancia de los
cuerpos coloreados en solución es directamente proporcional a la concentración, además de serlo a su espesor”

C
 A
Limitaciones de la aplicabilidad de la Ley de Lambert-Beer
● Desviaciones químicas

Debidas a reacciones del absorbente con el disolvente, como en el caso del dicromato en disoluciones no
amortiguadas

● Es una ley límite

La ley de Lambert-Beer se justifica considerando las propiedades absorbentes de las soluciones diluidas, y en ese
sentido es una ley límite.
 ● Concentración

A concentraciones altas las distancias medias entre las partículas disminuyen hasta tal punto que cada partícula afecta
la distribución de carga de cada una.
Ley de Lambert - Beer, Expresión Matemática

La ecuación anterior es fundamental para aplicar la espectroscopia en química analítica.

● La absorbancia, A, es adimensional.
● La concentración de la muestra, C, se suele expresar en moles/litro (M) o en g/litro.
● La longitud del camino óptico, b, se expresa en cm. = M-1 -1

● La cantidad ε se llama absortividad molar y sus unidades son litro/mol ×cm. Cuando la concentración es expresada
en g/l, debe hablarse de la absortividad (a) y sus unidades
 son litro/g×cm. Es una característica de la sustancia que nos dice cuanta luz absorbe a una lomgitud de onda
determinada
Para sistemas biológicos, el valor aceptable es a partir de
0.96.
Además al hacer las determinaciones para la curva estándar
varias veces (por duplicado, triplicado, etc) se puede calcular
la incertidumbre de los valores de la pendiente y de la
ordenada al origen mediante cálculos de deviación estándar

La absortividad o absortividad molar es la propiedad característica de las sustancias que indica cuánta luz se
absorbe a una longitud de onda dada.

Los valores de A y ε dependen de la longitud de onda. Por lo tanto, es conveniente escribir la ley de Lambert –
Beer como una función de la longitud de onda.
 Para sistemas biológicos, el valor aceptable es a partir de
0.96.
Además al hacer las determinaciones para la curva estándar
varias veces (por duplicado, triplicado, etc) se puede calcular
la incertidumbre de los valores de la pendiente y de la
ordenada al origen mediante cálculos de deviación estándar

La absorbancia y la transmitancia, tal como se define en la ley de Lambert – Beer, no pueden ser medidas en el
laboratorio, porque la solución para su estudio debe estar contenida dentro de un recipiente.

La absorbancia medida experimentalmente se define, pues por la ecuación:

En adelante, cuando nos refiramos al término absorbancia, entenderemos el cociente definido por la ecuación anterior,
siendo P0 la potencia de la radiación después de atravesar una celda que contiene el solvente y P la potencia después de
atravesar una celda idéntica con la solución del analito.
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se

mide en función de la concentración de un analito.

Se realiza mediante un modelo de línea recta que consiste en encontrar

la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de “n” puntos

Cada punto se encuentra definido por

- Una variable “x” (variable independiente, generalmente concentración del analito de interés)
 - Una variable “y” (variable dependiente, generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se encuentra
definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la ecuación y = mx + b . A partir de la curva de
calibración y a fin de asegurar que la recta encontrada con los puntos experimentales se ajuste correctamente al
modelo matemático de la ecuación se calculan los valores:

- La ordenada al origen
- La pendiente
- Coeficiente de determinación
El método de los mínimos cuadrados

Este método busca la recta del calibrado que haga

que la suma de los cuadrados de las distancias
verticales entre cada punto experimental y la recta
de calibrado sea mínima o tienda a cero. A la distancia vertical entre cada punto experimental y la recta de calibrado se le
conoce como residual.
Si bien con dos puntos se puede construir una curva,
estadísticamente se requieren por los menos tres para que
la curva sea confiable

Para construir la curva de calibración se utilizan

disoluciones que contienen concentraciones conocidas de
analito, llamadas disoluciones patrón o estándar.

Se llaman disoluciones blanco o simplemente blancos a las

disoluciones que contienen todos los reactivos y
disolventes usados en el análisis, pero sin el analito. Los
blancos miden la respuesta del procedimiento analítico a las
impurezas o especies interferentes que existan en los
reactivos.

los parámetros que se determinan a partir de las curvas de

calibración obtenidas con cualquiera de ellas son:
 - La sensibilidad
- El límite de detección
- El límite de cuantificación
- El intervalo analítico
Linealidad del tusistema de medición

Calcular:

● La pendiente (m)
● La ordenada al origen (b)
● El coeficiente de determinación (r2 )
● Señal de respuesta (absorbancia) (y) ● Concentración
(x) r2 >0.98Criterio de aceptación
Para sistemas biológicos, el valor aceptable es a partir de
0.96.
Además, al hacer las determinaciones para la curva
estándar varias veces (por duplicado, triplicado, etc) se
puede calcular la incertidumbre de los valores de la
pendiente y de la ordenada al origen mediante cálculos de
deviación estándar
 Parámetros que se determinan a partir de las
curvas de
calibración

Sensibilidad

Límite de detección (LD)

Límite de cuantificación (LC)

Intervalo analítico
El límite de linealidad se pierde a mayores
concentraciones del analito (Ley de lambert-Beer
es una ley limítrofe
Recomendaciones par el diseño de una curva estándar

● Proponer una concentración aproximada.

● Contar con la solución patrón.
● Determinar un intervalo de patrón para generar la curva estándar.
● Elegir mínimo 4 concentraciones distintas de patrón.
 ● Preparar el blanco de reactivos.
● El volumen final de los tubos de ensayo deberá ser el mismo.
● Hacer diluciones del problema (si es necesario) para asegurar que los datos estén dentro del intervalo de
las concentraciones elegidas del patrón.
● Realizar una curva por duplicado

Curva de calibración con adición estándar

En Laboratorio de BCTI no usamos esta alternativa

El método de adición estándar es un tipo de enfoque de análisis

cuantitativo en el que el estándar se agrega directamente a las
alícuotas de la muestra analizada.

Este método se usa en situaciones donde la matriz de muestra

también contribuye a la señal analítica, una situación conocida
como el efecto de matriz, lo que hace que sea imposible comparar la señal analítica entre muestra y estándar
utilizando el enfoque tradicional de curva de calibración.
Esta es una alternativa en métodos de validación, cuando no
se dispone de muestras control con valores de analito conoci- Escriba el texto aquí dos, Si quieres leer más al respecto
puedes consultar el do-
cumento PDF o Power Point en "trabajo de clase" o el "tablón" de este classroom
Un procedimiento típico consiste en preparar varias soluciones que contienen la misma cantidad de muestra
problema, pero diferentes cantidades de solución estándar
Por ejemplo, cinco matraces volumétricos de 25 ml se llenan cada uno con 10 ml de la muestra problema. Luego, el
estándar se agrega en cantidades diferentes, como 0, 1, 2, 3 y 4 ml. Los matraces se diluyen entonces hasta la
marca y se mezclan bien.
Ejemplo
La idea de este procedimiento es que la concentración total del analito es la combinación de la muestra problema y la
solución estándar, y que la concentración total varía linealmente. Si la respuesta de la señal es lineal en este rango de
concentración, se genera una gráfica similar a la que se muestra arriba.
 Bibliografía
● Curso de Análisis Químico - Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales -UNLP. ().
INTRODUCCIÓN A LOS MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS. La Plata, Provincia de Buenos
Aires, Argentina. Universidad Nacional de La Plata Recuperado de
https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/35287/mod_resource/content/2/1%20espectros cop%C3%ADa
%202017%20%281%29.pdf
● Harris Daniel C. “Análisis Químico Cuantitativo”, 2ª edición. Editorial Reverte, España 2001.
● Herrera, M., Moncada, F. y Valdés, P. (2010). Física l. Santiago (Chile): Santillana.
● Miller James N., Miller Jane C. “Estadística y Quimiometría para Química Analítica”, 4ª