DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA

MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2019

TRABAJO PRÁCTICO 5

Determinación de proteínas totales

Electroforesis - Western blot
Proteínas plasmáticas - Proteinograma
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MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina

básica para el diagnóstico de enfermedades y también en el laboratorio de investigación cuando se
aborda un esquema de purificación de una proteína o cuando se quiere conocer la actividad específica
de una preparación enzimática. Existen muchos métodos para medir la concentración de proteínas
totales (PT) en muestras biológicas. Algunos métodos se basan en la capacidad de las proteínas para
absorber luz ultravioleta. La cantidad de luz absorbida (absorbancia) es directamente proporcional a la
especie absorbente, en este caso, la proteína. Ciertos métodos, denominados colorimétricos, se basan
en generar mediante reactivos específicos un producto coloreado a partir de una proteína. En estos
últimos se incuba la solución proteica con el reactivo de color y luego se mide la absorbancia (A) a una
determinada longitud de onda, en un aparato denominado espectrofotómetro o fotocolorímetro. Es
importante recalcar que existe una dependencia lineal entre la absorbancia y la concentración del
compuesto coloreado y por ende, entre la absorbancia y la concentración de proteínas.
• Método de Lowry: se basa en la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau provocada por el
complejo unión peptídica-Cu2+ en medio alcalino con la participación de restos fenólicos (tirosilos).
Las proteínas producirán distintas intensidades de color dependiendo primariamente de su
contenido de residuos tirosina o triptofano.
• Método de Biuret: se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos
NH de los enlaces peptídicos. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la
cantidad de proteínas (enlaces peptídicos).
• Método de Bradford: consiste en la medición del cambio en la absorción del colorante Coomasie
Blue G-250que en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se
unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante que absorbe a 595 nm.

MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS

ELECTROFORESIS
Introducción y técnica básica
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de éstas
en un campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte
sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a través de una matriz porosa
(electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use,
la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

La electroforesis puede aplicarse como método de separación de proteínas. Las proteínas

suelen tener carga neta; por lo tanto, si se aplica un campo eléctrico a una solución que contenga una
mezcla de proteínas, éstas migrarán a una velocidad que dependerá de su carga neta, forma y peso

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molecular. Generalmente para separar una mezcla de proteínas el soporte de elección son los geles
de poliacrilamida. Estos geles son químicamente inertes y se preparan fácilmente por polimerización
de monómeros de acrilamida. El polímero forma una red porosa que actúa como un tamiz que permite
la separación de las moléculas.La electroforesis de proteínas en geles con una matriz de poliacrilamida,
comúnmente denominada electroforesis en poliacrilamida (PAGE, ‘poliacrilamide gel electrophoresis’)
es, sin duda alguna, una de las técnicas más ampliamente usadas para caracterizar mezclas complejas
de proteínas. La electroforesis en geles de poliacrilamida es un método conveniente, rápido y
económico pues se requieren sólo cantidades de proteína del orden de microgramos.
En función del estado de las proteínas (nativo o desnaturalizado) a lo largo del proceso
electroforético, éstas se clasifican en electroforesis nativas o desnaturalizantes, respectivamente.
a) Electroforesis desnaturalizante: la electroforesis que se realiza en forma más
frecuente, es la que somete a las proteínas a migración asegurando la completa desnaturalización
(pérdida de la estructura tridimensional). En esta situación, la migración es proporcional al tamaño
de la molécula pero no a su forma, ni a su carga. El agente desnaturalizante más empleado es el
dodecilsulfato de sodio o SDS, un detergente.
b) Electroforesis nativa: es aquella en la que se somete a las proteínas a migración
sin desnaturalización. En esta situación, las proteínas migran en función de su carga, de su tamaño
y de su forma.

Algunas características destacables de la electroforesis en geles de poliacrilamida son:

• Los geles de poliacrilamida se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de un
agente entrecruzador (‘cross-linking’), la bisacrilamida.
• Las proporciones relativas de poliacrilamida y bis-acrilamida determinan la porosidad del gel.
• El porcentaje total de acrilamida/bis acrilamida determina el rango de separación del gel.
Habitualmente los geles se denominan en función del porcentaje de acrilamida/bis acrilamida
que contienen. Así, la mayoría de las proteínas se separan bien en el rango de 5 a 10%. Un
porcentaje menor (mayor tamaño de poro) es mejor para separar proteínas de gran tamaño.

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SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico)
SDS-PAGE es la electroforesis de proteínas más ampliamente usada. Su nombre indica que
la electroforesis en geles de poliacrilamida se realiza en presencia de SDS (‘SDS-PoliAcrilamide Gel
Electrophoresis’). La mezcla de proteínas se disuelve primero en un medio que contiene
dodecilsulfato de sodio (SDS), un detergente iónico que se une a las proteínas y es capaz de romper
todas las interacciones no covalentes de las proteínas. También está presente un agente reductor de
puentes disulfuro como pueden ser el ditiotreitol (DTT) o el β-mercaptoetanol. De esta manera, las
proteínas se desnaturalizan y son separadas
en sus polipéptidos constitutivos (en caso de
tener estructura cuaternaria).
El SDS es un detergente Desnaturalizantes
Nativa
desnaturalizante que se une a las cadenas
polipeptídicas con una relación constante de SDS por g de proteína, uniéndose aproximadamente una
molécula de SDS por cada dos aminoácidos de la cadena. Esta unión masiva de moléculas de SDS
desnaturaliza a la proteína bloqueando su carga propia y confiriéndole al complejo una carga neta
negativa proporcional a su masa, haciendo que todas las proteínas formando complejos con SDS
migren hacia el ánodo.
En estas condiciones todas las moléculas tienen la misma forma y su carga es negativa. Por lo
tanto, la separación de las proteínas en un campo eléctrico ya no será dependiente de estos dos
factores. Sin embargo, al estar migrando dentro de una red porosa, las proteínas de menor peso
molecular se desplazarán más fácil y rápidamente, en tanto que las de mayor peso molecular quedarán
más retrasadas. En consecuencia la separación de los complejos SDS-proteína es proporcional sólo
al tamaño de la proteína. Las proteínas mayoritarias (en el orden de los µg) se detectan tiñendo el gel
con un colorante, como el azul de Coomasie, mientras que las proteínas minoritarias (en el orden de
los ng) se visualizan tiñéndolas con sales de plata.
Se puede determinar el peso molecular aparente de cualquier proteína por comparación con
un patrón de proteínas de pesos moleculares conocidos, o Proteínas Marcadoras de peso molecular
(PM), o markers (M). Las movilidades de las proteínas en los geles de SDS-PAGE son funciones
lineales del logaritmo de su peso molecular (PM). Esta técnica permite estimar el PM de una proteína,
comparando su movilidad electroforética con la de proteínas de PM conocido. Estas determinaciones
poseen un margen de error de ~10%. La determinación del PM de proteínas mediante la separación
en geles de poliacrilamida con SDS es válida cuando se analizan cadenas proteicas individuales
(subunidades), en donde se han reducido todos los enlaces disulfuro y por ende, se ha distendido toda
la cadena proteica para su interacción con el SDS.
A continuación se muestra un esquema de los distintos componentes del sistema utilizado para
realizar el fraccionamiento de proteínas por electroforesis.

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Esquema de una cuba de electroforesis vertical

Proteínas de más alto

peso molecular.
Corren menos en el
campo eléctrico.

Proteínas de más bajo

peso molecular.
Corren más en el
campo eléctrico.

Imagen de un gel SDS-PAGE sembrado, corrido y teñido con azul de Coomasie

Calles 1 y 8: Mezcla de proteínas de peso molecular conocido.
Calles 2 y 3: Proteína purificada (una sola banda).
Calles 4 a 7: Muestras correspondientes a distintas mezclas de proteínas.

WESTERN BLOT

El Western blot o inmunoblot es una técnica analítica usada en biología celular y molecular para
identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, tal como la que se presenta en
extractos celulares o de tejidos. La técnica consta de tres etapas: separación de proteínas por tamaño,
transferencia a un soporte sólido y, finalmente, visualización mediante la marcación de proteínas con
el uso de anticuerpos apropiados.

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En esta técnica, luego de la separación de las proteínas de la mezcla compleja por
electroforesis, se realiza la transferencia de éstas a una membrana sintética mediante la aplicación de
un campo eléctrico, sobre la cual quedan inmovilizadas. Seguidamente se procede a la detección de
la proteína que nos interesa mediante sistemas de detección especialmente diseñados para la tinción
de ‘blots’. El procedimiento es análogo al desarrollado por el Prof. E. Southern para la separación e
identificación de fragmentos de ADN (‘Southern blot’) y por ello se le denominó ‘Western’.
Trabajar con las proteínas fijadas sobre una membrana tiene varias ventajas:
1. Son más rápidas de teñir y desteñir.
2. Se detectan cantidades menores de proteínas, pues se concentran en la superficie
y no se diluyen en todo el espesor del gel.
3. Las membranas son mucho más fáciles de manipular que el propio gel.
4. Los anticuerpos utilizados en la detección tienen mejor acceso a las proteínas.

Pasos del Western blot

1. Inmovilización de las proteínas sobre la membrana mediante electrotransferencia.

Luego de realizar la electroforesis para separar las proteínas,
gel membrana
éstas se transfieren desde el gel de poliacrilamida a una membrana
mediante la aplicación de un campo eléctrico. Para esto se arma lo
que se conoce como “sandwich”, donde se apilan sucesivamente una (-) (+)
esponja o papel absorbente, el gel, la membrana y otra esponja o
papel.). El sandwich se introduce entre dos soportes conectados a un
par de electrodos en un tanque conteniendo el buffer de transferencia
(para obtener una solución de continuidad que permita la conducción de la corriente eléctrica). El
sandwich se dispone de forma tal que el gel quede hacia el cátodo (-) y la membrana hacia el ánodo
(+) (ver esquema). Se aplica una diferencia de potencial y, debido a que la carga neta de las
proteínas separadas por electroforesis en geles de SDS-PAGE es negativa, éstas migrarán hacia
el polo positivo es decir, desde el gel hacia la membrana, donde quedarán retenidas.
Una vez realizada la transferencia, la membrana se puede analizar inmediatamente o bien
conservarla en frío. Es importante analizar en el mismo gel donde se analiza la muestra incógnita
otra muestra que funcione como control de la transferencia, ésta suele ser una mezcla de proteínas
marcadoras de peso molecular (PM). Luego de ser transferidas a la membrana, las proteínas se
tiñen con un colorante (Rojo Ponceau) para verificar si la transferencia ha sido correcta. Esta tinción
no es permanente y puede eliminarse para continuar con la técnica de Western blot.

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Esquema de una transferencia o blot

Tinción de proteínas con Rojo Ponceau

2. Saturación de todos los lugares de unión de proteínas de la membrana no ocupados para

evitar la unión inespecífica de anticuerpos (bloqueo).
Una etapa común a todos los procedimientos de inmunodetección es la que se denomina
‘bloqueo’, para prevenir la unión inespecífica a de los anticuerpos a la membrana, con el riesgo
asociado de tener un elevado ‘background’ o falsos positivos. Esto se logra incubando la membrana
con una solución conteniendo una alta concentración de proteínas. En la práctica, las dos soluciones
de bloqueo que son compatibles con casi cualquier sistema de detección y de uso generalizado son
las soluciones de leche descremada (por el aporte de caseína y otras proteínas de la leche) y las
soluciones de albúmina del suero generalmente de origen bovino (albumina sérica bovina). La
membrana se incuba durante un determinado tiempo en esta solución y se continúa con el protocolo
de detección.

3. Incubación de la membrana con anticuerpos primarios contra la/s proteína/s de interés.

Una de las técnicas usadas para la detección de una proteína específica utiliza un sistema
basado en el uso de dos anticuerpos (Ab, del inglés Antibody): 1- un anticuerpo específico para la
proteína a detectar, es lo que se denomina anticuerpo primario y 2- un anticuerpo secundario capaz
de reconocer al anticuerpo primario el cual esta acoplado a un sistema que permitirá la detección
de la proteína en cuestión.
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Luego del bloqueo la membrana conteniendo las proteínas fijadas se incuba a una
temperatura determinada, generalmente 4º C, con una solución del anticuerpo primario durante
un tiempo óptimo estipulado experimentalmente. Pasado ese tiempo, se procede a sumergir la
membrana en una solución buffer (cambiando varias veces esta solución) para lavarla
exhaustivamente y remover todo el excedente de anticuerpo primario que no se pegó a los lugares
específicos. De esta manera, luego de lavar la membrana, el anticuerpo primario quedará retenido
solamente en la posición donde quedó fijada la proteína de interés.
Por ejemplo, se quiere detectar la presencia de la proteína X en un lisado celular. Para esto
se requerirá un anticuerpo primario anti-X. Para obtener este anticuerpo se puede inmunizar un
animal de laboratorio - por ejemplo un conejo- con la proteína X purificada. El animal generará
inmunoglobulinas capaces de reconocer y unir específicamente a la proteína X. Luego, se extrae
sangre de ese animal inmunizado y se separa el plasma, el cual es utilizado como fuente de
anticuerpo primario.

4. Incubación de la membrana con anticuerpos secundarios.

Los anticuerpos secundarios son anticuerpos capaces de reconocer al anticuerpo usado
como primario.
¿Qué podemos usar como anticuerpo secundario? El anticuerpo secundario debe unir
específicamente al anticuerpo primario. Siguiendo con el ejemplo anterior, si se inmuniza otro
animal de laboratorio –por ejemplo una cabra- con inmunoglobulinas de conejo, la cabra generará
anticuerpos que reconocerán específicamente a las inmunoglobulinas de conejo. Es decir, las
inmunoglobulinas de la cabra pueden funcionar como anticuerpo secundario.
Continuando con el procedimiento de Western blot, la membrana que ya tiene fijado el
anticuerpo primario, se incuba con una solución del anticuerpo secundario, durante un tiempo
determinado y luego se lava exhaustivamente para eliminar el excedente de anticuerpo. Sin
embargo la proteína unida a los anticuerpos no será visible, por lo tanto en la etapa siguiente
veremos la estrategia seguida para obtener el resultado (revelado).

5. Sistema de revelado de las bandas de proteínas marcadas con el complejo de anticuerpos.

Existen dos grandes grupos de marcadores o sistemas de revelado empleados en el
Western blot:

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a) Enzimas unidas covalentemente al anticuerpo secundario. Se utilizan enzimas
que catalizan una reacción en la que se forma un precipitado coloreado, o en la que se emite luz.
Es común usar la peroxidasa de rábano (HRP) o la fosfatasa alcalina. Comercialmente se dispone
de anticuerpos secundarios a los que se les ha unido covalentemente alguna de estas enzimas.
Luego, si el anticuerpo conjugado se incuba con los sustratos apropiados, se producirá la reacción
de color o de emisión de luz. Como mencionamos anteriormente se incuba la membrana -que ya
tiene unido el anticuerpo primario- con una solución que contiene el anticuerpo secundario
fusionado con la enzima (anticuerpo conjugado). Luego de los lavados se realiza una incubación
de la membrana con los sustratos necesarios para que se desarrolle el producto enzimático, que
quedara fijo en la membrana aun después de lavar el sistema. Se podrá visualizar a simple vista
una banda coloreada sobre la membrana (ver esquema siguiente, izquierda). Otro sistema de
detección utiliza un segundo anticuerpo conjugado con una enzima que cataliza una reacción que
emite luz. En este caso, luego de la incubación con los sustratos, la membrana se lava y pone en
contacto con una placa radiográfica (en oscuridad). La luz emitida impresiona la placa fotográfica.
E este caso la placa será transparente con una banda negra a la altura de la membrana donde se
fijó la proteína de interés (ver esquema siguiente, derecha).

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b) Radioquímicos, que emiten radiaciones ionizantes. Se utilizan anticuerpos
marcados radioactivamente. Luego de los lavados la membrana se expone a una película
radiográfica. El átomo radiactivo emite radiación que impresiona la placa generando una banda
oscura en el lugar donde la proteína fijada se unió a los anticuerpos.

Resumen esquemático de los pasos llevados a cabo en la técnica de Western blot

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PROTEÍNAS PLASMÁTICAS

El plasma sanguíneo es una solución muy compleja que contiene un gran número de proteínas.
Las proteínas se encuentran en el plasma humano en una concentración media de 7,2 g/100 ml y
representa la mayor parte de los sólidos del mismo. Entre las funciones principales que cumplen las
proteínas plasmáticas se encuentran el mantenimiento de la volemia, actuando como factor
regulador del intercambio de líquido entre la sangre circulante y el espacio intersticial. La albúmina es
responsable de más del 70% de la presión oncótica del plasma. Además, tienen capacidad de
amortiguar el pH sanguíneo, ya que las proteínas del plasma ejercen acción buffer debido a los restos
histidina, que pueden ceder o aceptar protones, regulando el pH normal sanguíneo. Entre otras
funciones de importancia se encuentran el transporte de sustancias endógenas como hormonas,
ácidos grasos, iones, etc.; transporte de sustancias exógenas como antibióticos y drogas;
participación en eventos de coagulación, fibrinolisis y de inmunidad donde se incluyen
inmunoglobulinas y el sistema del complemento.
La técnica más común para separación de proteínas del suero es la electroforesis (conocida
como proteinograma electroforético). Cuando una corriente eléctrica es aplicada a un medio que
contenga partículas cargadas, aquellas partículas con una carga negativa migrarán hacia el electrodo
positivo y aquellas partículas con una carga positiva migrarán hacia el electrodo negativo. En el caso
Fuente de poder
del proteinograma electroforético, el soporte
comúnmente usado es el acetato de celulosa.
Dependiendo del pH del buffer de corrida, las Acetato de celulosa
Siembra de
muestras
(soporte)
proteínas pueden tener una carga positiva o
Buffer pH 8,6
negativa, o no estar cargadas. En el proteinograma
se usa generalmente un buffer de pH 8,6, condición
en la cual la mayoría de las proteínas del plasma
adquieren una carga negativa. Las proteínas se
siembran en el polo negativo (cátodo) y por lo tanto migran hacia el polo positivo (ánodo). La movilidad
electroforética de las proteínas es proporcional a la densidad de carga de las mismas, es decir al
cociente: carga/masa (densidad de carga). Una vez separadas, las bandas de proteínas son
visualizadas mediante tinción con un colorante para proteínas.
Utilizando la técnica de separación de proteínas por electroforesis con acetato de celulosa
como soporte, se pueden separarlas proteínas séricas en 6 bandas principales: prealbúmina (no
siempre llega a visualizarse) y albúmina (por ser la molécula más pequeña y tener el mayor número
de grupos cargados negativamente migra con mayor rapidez) seguida por las globulinas α1, α2, β y 
en ese orden.
IMPORTANTE: Estas fracciones o bandas no corresponden a 6 proteínas, cada banda es un
conjunto heterogéneo de proteínas características del suero, con excepción de la albumina que migra
sola.
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A su vez, si el soporte utilizado es agarosa, se puede separar la banda β en β1 y β2.
Esta es una técnica semicuantitativa, por lo tanto suele realizarse una densitometría para
estimar la cantidad de proteína contenida en cada banda.
En la figura siguiente se muestra la membrana de acetato de celulosa luego de la separación
de las proteínas del suero por electroforesis y la tinción de las mismas (arriba) y el correspondiente
análisis densitometrico (abajo) (a mayor intensidad de color corresponde mayor área bajo la curva en
la densitometría).

Bandas principales del PROTEINOGRAMA:

1. Prealbúmina:
• Valor normal: 0,3 g/100 ml,
• Incluye a la transtiretina (transporta T4 y T3). Forma complejo con la proteína ligante de
retinol (transporta vitamina A).
• Su visualización depende de que todas las condiciones técnicas sean las óptimas.
• La presencia de esta banda no se informa.
• Su disminución es un marcador sensible del estado nutricional o reacción inflamatoria.

2. Albúmina:
• Valor normal: 3,5-5,0 g/100 ml.
• Es la proteína más pequeña y con mayor número de grupos cargados negativamente; esta
característica le permite migrar con mayor rapidez.

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• Constituye una banda homogénea, puesto que se trata de una única proteína. La función de
la albúmina en el plasmaes transportar diferentes compuestos tales como ácidos grasos,
pigmentos biliares, hormonas esteroides, fármacos y otros.
• Es un reactante de fase aguda negativo, por lo que en estados infecciosos agudos está
disminuida. Ver nota al final.
• Estados asociados con hipoalbuminemia: estados de malnutrición o malabsorción,
enfermedad hepática severa (por fallas en su síntesis) o aumento de su catabolismo, no se
conoce un estado patológico con hiperalbuminemia.

3. α1-globulina:

• Valor normal: 0,1-0,3 g/100 ml.

• Banda integrada principalmente por: α1-antitripsina (mayoritaria), glucoproteína ácida α1 u
orososeromucoide, transcortina y globulina fijadora de tiroxina.
• Un aumento o disminución de esta banda se debe a un aumento o disminución de α1-
antitripsina (predomina en la fracción α1):

➢ α1-antitripsina: Cumple con el 90% de la acción antiproteásica del organismo; es el

inhibidor biológico de las enzimas proteolíticas de los lisosomas. Es un reactante de
fase aguda positivo (aumenta en estados infecciosos agudos). Aumento de α1-
antitripsina: estrés, tumores. Disminución de α1-antitripsina: estados de
malnutrición/malabsorción, enfermedad hepática severa, o aumento de su
catabolismo (procesos relacionados conla disminución de cualquier proteína).
➢ Glucoproteína ácida 1: Inhibe o inactiva a la progesterona, es un reactante de fase
aguda positivo.
➢ Transcortina: transporta 2/3 del cortisol y otros corticoides. El cortisol circulante se
une también (minoritariamente) a la albúmina. La transcortina se sintetiza en el
hígado. (aumentan en el embarazo y tras la administración de estrógenos)
➢ Proteína fijadora de tiroxina: une T3 (triyodotironina) y T4 (tiroxina). Las hormonas
tiroideas circulantes se unen también a la prealbúmina. Tanto la transcortina como
la proteína fijadora de tiroxina aumentan en el embarazo y tras la administración de
estrógenos.

4. α2-globulina:
• Es una fracción heterogénea, valor normal: 0,5-0,75 g/100 ml.
• Está integrada principalmente por: haptoglobina, α2-macroglobulina y ceruloplasmina.

➢ Haptoglobina: Su función es captar hemoglobina (Hb): La formación del complejo

Hb-haptoglobina impide que la pequeña cantidad de Hb liberada por hemólisis
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normal intravascular sea excretada por orina, evitando así el efecto tóxico de la Hb
libre y la pérdida de Fe. Es un reactante de fase aguda positivo (aumenta en estados
infecciosos agudos). Su disminución se asocia a cualquier estado patológico que
curse con hemólisis intravascular debido a un aumento de su consumo (anemia
hemolítica, etc.).
➢ α2-macroglobulina: Está aumentada fisiológicamente en el embarazo y en niños
(dada su función relacionada con el desarrollo).
➢ Ceruloplasmina: Participa en el metabolismo del hierro y el Cu++, ya que una
molécula puede fijar hasta 8 átomos de Cu++, es un reactante de fase aguda positivo,
y aumenta en tumores y leucemias. La deficiencia congénita de ceruloplasmina
desarrolla la enfermedad de Wilson.

5. β-globulinas:
• Valor normal: 0,6-1,1 g/100 ml
• β1-globulina: incluye a la transferrina y la hemopexina.
• β2-globulina: incluye a C3.

➢ Transferrina: Es una proteína que fija Fe (cada molécula puede fijar 2 Fe). Es un
reactante de fase aguda negativo, pero además siempre que disminuya la albúmina,
disminuyeβ1 (excepto en el embarazo) por disminución de la transferrina. En
procesos con déficit de Fe (por estimulación de la síntesis de su proteína
transportadora) aumenta sus niveles, al igual que en el embarazo;
➢ Hemopexina: Fija y transporta al grupo hemo liberado de la Hb en la hemólisis,
cuando está saturada su capacidad de captación por la haptoglobina.
➢ C3: Participa del sistema del complemento. Es un reactante de fase aguda positivo
y disminuye en enfermedades autoinmunes (LES, AR).

6.-globulinas:
• Es una zona heterogénea.
• Si la muestra es plasma, aparece en esta región (post β2 o -rápida) una banda homogénea
que corresponde al fibrinógeno (0,3 g/100 ml). Esto constituye una interferencia y debe
pedirse nueva muestra (suero).
• Está constituida mayoritariamente por inmunoglobulinas (sin embargo es importante
recordar en la búsqueda de algún componente monoclonal que estas proteínas pueden
migrar desde β2 hasta el punto de siembra)
• Incluye:
➢ IgG: monómero de 160 kDa, se reconocen 4 subclases; es la mayoritaria, puede atravesar
la placenta y es la principal inmunoglobulina en la respuesta inmune secundaria.
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➢ IgA: se puede encontrar como monómero, dímero o trímero, media la inmunidad de
mucosas.
➢ IgM: es una inmunoglobulina pentamérica, asimétrica, de PM hasta 1000 kDa, no atraviesa
la placenta y actúa en la respuesta inmune primaria;
➢ IgD: es una inmunoglobulina de superficie, neutralizante, con PM de 200 kDa;
➢ IgE: tiene un PM promedio de 200 kDa, está asociada a estados de alergia.

Nota :
Reacción de fase aguda: cambios en la síntesis hepática de proteínas plasmáticas como
consecuencia de la regulación de genes inducida por citoquinas inflamatorias en procesos tales
como infecciones agudas, traumatismos, neoplasias, cirugías o infartos.
Reactante de fase aguda: proteína cuya concentración plasmática se modifica durante los períodos
de inflamación. Si su concentración se incrementa, la proteína es considerada un reactante de fase
aguda positivo. Si su concentración disminuye, la proteína es considerada un reactante de fase
aguda negativo.

Descripción gráfica de las bandas que se observan en un proteinograma Se muestra también

la ubicación en el proteinograma de algunas de las lipoproteínas.

EJEMPLOS DE PATOLOGÍAS QUE PRODUCEN ALTERACIONES EN EL PROTEINOGRAMA

ELECTROFORÉTICO

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INFLAMACIÓN AGUDA: Algunas de las proteínas plasmáicas se comportan como reactantes de
fase aguda de la inflamación. Estos reactantes de fase aguda pueden agruparse en positivos y
negativos. Los reactantes de fase aguda positivos, aumentan su concentración en respuesta al
estimulo inflamatorio (α1 y α2-globulinas, particularmente se observa un aumento de α1-antripsina,
ceruloplasmina, haptoglobina y C3 dentro de las β2-globulinas). Los reactantes de fase aguda
negativos disminuyen su concentración plasmática en respuesta a la inflamación (prealbúmina,
albúmina y transferrina).

INFLAMACIÓN CRÓNICA: Se observa un aumento de la fracción de las γ-globulinas de tipo

heterogéneo. En este cuadro se encuentran elevadas todas las inmunoglobulinas del suero. Los
reactantes de fase aguda tienden a normalizarse con el tiempo.

CIRROSIS HEPÁTICA: Es una enfermedad crónica caracterizada por fibrosis y la formación de

nódulos que distorsionan la arquitectura del hígado, con la consiguiente alteración de su función.
Se observa una elevación heterogénea de la banda de las γ-globulinas y una fusión o puente β-.
Las fracciones de albúmina y β-globulinas están disminuidas.

SÍNDROME NEFRÓTICO: Es una enfermedad renal caracterizada por albuminuria, edemas,

hipoalbuminemia e hiperlipemia. Existe una franca proteinuria por una pérdida selectiva de
proteínas a través de la membrana basal del glomérulo renal. En este caso es característico un
incremento de las α2-globulinas (pues la α2-macroglobulina no filtra por su elevado peso molecular
y además está estimulada su síntesis) y un marcado descenso de la albúmina (por su bajo peso
molecular filtra fácilmente). Se observa igualmente un descenso marcado de las -globulinas.

MIELOMA MÚLTIPLE: Es un tumor maligno de las células plasmáticas en el que ocurre la

proliferación desregulada de un clon, con una producción excesiva de una clase específica de
inmunoglobulinas (un solo tipo de cadenas H y L). El proteinograma se caracteriza por una elevación
estrecha y homogénea de la fracción de las γ-globulinas (componente monoclonal). En algunos
mielomas aparecen en la circulación cadenas cortas o fragmentos de cadenas largas de
inmunoglobulinas anómalas que filtran por el riñón con facilidad debido a su bajo peso molecular,
constituyendo en orina la llamada proteinuria de Bence-Jones.

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Proteinogramas electroforéticos observables en distintas enfermedades

Albúmina

Globulinas
α1 α2 β γ

Patrón Cirrosis
Normal hepática
(gammapatìa
policlonal)

Infamación Mieloma múltiple

aguda (gammapatía
monoclonal)

Infamación Síndrome
crónica nefrótico
Representación esquemática de las densitometrías correspondientes

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 DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA
MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2019

Ejemplos de densitometrías de laboratorio

Normal

Inflamación
aguda

Cirrosis
hepática

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 DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA
MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2019

Síndrome
nefrótico

Mieloma
múltiple

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