1.

Contexto
En esta simulación, vas a transformar la bacteria E. coli mediante la técnica
de choque térmico. El propósito de la transformación bacteriana en el
laboratorio es facilitar la absorción de ADN que contiene un gen de interés.

¿Qué necesitas saber antes de empezar este experimento?

Transformarás la bacteria con el plásmido pARA-R recombinante que

contiene el gen de interés, la proteína fluorescente roja (rfp). Una vez
transformado, el gen rfp se puede expresar usando la propia maquinaria de la
bacteria. El plásmido pARA-R también contiene un gen de resistencia a la
ampicilina (ampR), que nos permite identificar las bacterias transformadas por
su capacidad de crecer en presencia de ampicilina.

El plásmido pARA-R también contiene un origen de replicación (ori) para

asegurar que el plásmido se mantenga en la población bacteriana, así como
el promotor pBAD y el gen araC, que regulan la expresión del gen.

¿Cómo incorporan las bacterias el ADN durante la transformación?

Algunas bacterias son naturalmente competentes, lo que significa que son
capaces de incorporar ADN de su entorno. Sin embargo, no todas las
bacterias son naturalmente competentes, y la transformación natural puede
ser ineficiente. En el laboratorio, las células se tratan químicamente y se
utilizan técnicas como el choque térmico o la electroporación para mejorar la
captación de los plásmidos por parte de una variedad de bacterias.

Las membranas celulares y el ADN tienen carga negativa y, por lo tanto,

normalmente se repelen entre sí. La adición de cloruro de calcio neutraliza
estas cargas y ayuda a que las células sean competentes. El choque térmico
se refiere a la incubación de bacterias a temperaturas elevadas, por lo general
42 ℃, lo que crea agujeros en la membrana a través de los cuales el ADN
puede entrar en la célula. La electroporación utiliza la corriente eléctrica para
lograr un resultado similar.
En esta simulación, se utilizará el protocolo de choque térmico.

¿Cuáles son las consideraciones de seguridad en este experimento?

Es importante recordar que estamos trabajando con bacterias. Esto significa
que debemos usar técnicas asépticas y trabajar en un ambiente estéril para
prevenir la contaminación. Todos los tubos y puntas de pipeta usados se
deben eliminar en un contenedor de residuos de riesgo biológico. Debe haber
una eliminación estricta de todos los tubos para microcentrífuga y puntas de
pipeta usados en un contenedor de residuos de riesgo biológico.

Cuando estés listo, haz clic en el botón Siguiente para continuar.

3. Predicciones
El objetivo de esta simulación es transformar la bacteria con un plásmido
recombinante mediante la técnica de choque térmico.

En este experimento incluirás dos muestras de bacterias, un grupo de control

y un grupo experimental.
Grupo de control (P-): Su grupo de control competente contendrá el E.
coli células, pero no el plásmido recombinante. Esta muestra se llama un
control negativo porque no van a ser transformados, por lo que no se espera
ningún cambio en sus propiedades.
Grupo experimental (P+): Su grupo experimental contendrá el
competente E. coli células y el plásmido recombinante.
El control negativo se utiliza para comprobar la viabilidad bacteriana y
asegurar que la transformación se ha producido con éxito, al comparar el
crecimiento de las bacterias transformadas y sin transformar en diversas
condiciones. El crecimiento bacteriano se evalúa normalmente mediante la
siembra en placa de las bacterias en un medio de agar sólido.
 4.
5. Resultados
Una vez que haya realizado su experimento de transformación, no podrá
confirmar sus resultados simplemente mirando sus tubos. El siguiente paso
experimental es colocar las bacterias en un medio sólido para que pueda
observar su crecimiento. Para este entorno simulado, hemos proporcionado
una vista hipotética de sus resultados dentro de los tubos.
 Sabes que una transformación tuvo éxito porque algunas de las bacterias del
grupo experimental contienen plásmidos. Las bacterias del grupo de control
no deberían tener plásmidos, ya que no había ninguno en el tubo. A
continuación, se muestra una representación de los resultados ideales para
un experimento de transformación.

P+: Para una transformación exitosa, el ADN plasmídico circular debe ser
absorbido por las células bacterianas.
P-: El control negativo contiene células de E. coli competentes, pero no
plásmidos, por lo que las células bacterianas no se pueden transformar.
Mencione 2 métodos por los cuales podría confirmar la transformación
bacteriana. Explique su respuesta
 Electroporación
 Un choque eléctrico resulta en que la célula sea permeable al plásmido ADN
 Cloruro de Calcio + Choque Térmico
 Las células químicamente competentes absorben el ADN después del
choque térmico

Utilizaste la técnica aséptica durante este laboratorio. ¿Por qué es

importante trabajar de forma estéril cuando se trabaja con bacterias en el
laboratorio?

¿En qué se diferencia el tubo P- del tubo P+?

¿Por qué las células se incuban a 42 °C?

¿Qué es la transformación bacteriana?