Traducción libro – kan
Como se ha descrito para
Capitulo 2 – Proteínas
2.1 Introducción
Las proteínas desempeñan un gran número de
funciones en el organismo. Por ejemplo,
desempeñan un papel estructural al proporcionar
la matriz de soporte de muchos tejidos. Como
enzimas, catalizan miles de importantes
reacciones químicas esenciales para la vida, desde
la regulación de la transcripción de los genes hasta
la conversión de los alimentos en energía. Los
cambios en los niveles de las proteínas o las
mutaciones en su estructura, que conducen a una
función alterada, son responsables de muchas
enfermedades. Como se ha comentado en otros
capítulos, las proteínas también desempeñan un
papel importante en la determinación de la
naturaleza de la interfaz tejido-implante.
2.2 Estructura primaria
Los aminoácidos son los componentes básicos de
las proteínas. Como se muestra en la figura 2.1, la
estructura general de los aminoácidos comunes
consiste en un átomo de carbono central al que se
unen un grupo carboxilo, un grupo amino, un
átomo de hidrógeno y una cadena lateral
funcional específica (R). Dependiendo del pH, los
grupos carboxilo y amino pueden estar cargados
(Fig. 2.2). A pH neutro, los aminoácidos son
zwitteriones, lo que significa que poseen
cantidades iguales de carga positiva y negativa,
porque el grupo ácido carboxílico está
desprotonado y el grupo amino está protonado.
Figura 2.1. Estructura general de un aminoácido
con los grupos funcionales importantes marcados.
Hay 20 aminoácidos para los que existe al menos
un codón específico (secuencia de codificación
genética). Según la cadena lateral, los aminoácidos
pueden dividirse en cuatro grupos: no polares
(hidrofóbicos), polares, con carga positiva o con
carga negativa (Fig. 2.3).
los grupos carboxilo y amino del carbono, las
cadenas laterales de los aminoácidos cargados
pueden contener grupos funcionales que
presentan una ionización dependiente del pH. Por
ejemplo, los aminoácidos cuyas cadenas laterales
poseen elementos amídicos pueden protonarse
para dar una carga positiva, y las cadenas laterales
terminadas en carboxilo pueden desprotonarse
para dar una carga negativa. La prolina es única
porque es cíclica, con la cadena lateral unida
covalentemente al nitrógeno del grupo amino.
Técnicamente, es un iminoácido más que un
aminoácido. La estructura cíclica limita la
flexibilidad rotacional del enlace nitrógeno-
carbono y, en consecuencia, afecta a la estructura
de las proteínas. Para simplificar la representación
de las secuencias de aminoácidos, se han
establecido abreviaturas de tres letras y de una
letra (Tabla 2.1).
Figure 2.2. pH dependence of charge of an amino
acid
Además de los 20 aminoácidos comunes, las
proteínas pueden contener aminoácidos
derivados, que son el resultado de acciones
enzimáticas sobre aminoácidos ya incorporados a
la proteína. Algunos ejemplos son los derivados
hidroxilados de la prolina y la lisina, un derivado
fosforilado de la serina y un derivado carboxilado
del ácido glutámico (Fig. 2.4).
Las proteínas se forman por polimerización de
aminoácidos en reacciones de condensación
catalizadas por enzimas (Fig. 2.5). El grupo amino
de un péptido (aminoácido) reacciona con el
grupo carboxilo de un segundo péptido,
eliminando una molécula de agua y dando lugar a
un enlace peptídico (amida). Los polipéptidos se
forman por adición secuencial de aminoácidos.
Una molécula formada por dos aminoácidos se
denomina dipéptido, tres aminoácidos, tripéptido,
cuatro aminoácidos, tetrapéptido, etc. La
secuencia lineal exacta de aminoácidos es la
estructura primaria (Fig. 2.6).

A partir de los 20 aminoácidos comunes se puede

construir un gran número de estructuras
primarias. Incluso para un polipéptido corto que
contenga 25 aminoácidos, son posibles 2025
combinaciones. Dado que los distintos
aminoácidos, con sus diferentes cadenas laterales,
permiten diferentes tipos de enlace químico, cada
polipéptido tendrá diferentes niveles superiores
de estructura proteica y, por tanto, de función.
Aunque algunas sustituciones (como la sustitución
de un péptido polar por otro de tamaño similar)
en la estructura primaria tienen un efecto mínimo,
los cambios en la secuencia pueden alterar
significativamente la estructura de la proteína. Por
ejemplo, la anemia falciforme está causada por la
sustitución de valina por ácido glutámico en la
hemoglobina, la proteína que transporta el
oxígeno en la sangre. Las moléculas de
hemoglobina alteradas (llamadas hemoglobina S)
resultantes de la mutación crean glóbulos rojos
malformados, que obstruyen los vasos sanguíneos
y restringen el suministro de sangre a los tejidos.
2.3 Estructura secundaria

Las proteínas no existen simplemente como cadenas largas y extendidas de aminoácidos. En cambio, las
interacciones entre los aminoácidos hacen que la cadena se pliegue, se doble y se enrolle para dar una
estructura tridimensional específica (conformación). Pensemos en un cable de teléfono. En lugar de ser
recto, el cable es una hélice derecha, y cuando se deja caer al azar sobre una mesa, tiene una disposición más
compleja, con la hélice entrecruzándose sobre sí misma.

La estructura secundaria se refiere a las interacciones dentro de los dominios localizados que dan lugar a
una disposición tridimensional. En el ejemplo de un cable de teléfono, la estructura secundaria está
representada por la disposición helicoidal de lo que de otro modo sería un trozo de plástico recto. En este
nivel, el enrollamiento y la curvatura son causados por el enlace de hidrógeno entre un grupo carbonilo (-
C=O) de un enlace peptídico y una amina secundaria (-NH) de otro. La flexión del polipéptido está limitada
por los ángulos de rotación de los enlaces covalentes de la cadena. Dado que el enlace peptídico tiene un
carácter parcial de doble enlace, los átomos unidos al carbono carbonilo y al nitrógeno se encuentran en un
plano común. En consecuencia, la cadena polipeptídica actúa como una cadena de placas conectadas en los
átomos de α-carbono (Fig. 2.7).

Aunque son posibles muchas estructuras secundarias, las estructuras α-hélice y β son las más estables desde
el punto de vista termodinámico. En la hélice α, cada péptido forma enlaces de hidrógeno con el cuarto
aminoácido situado por encima y el cuarto aminoácido situado por debajo (Fig. 2.8). Los enlaces de
hidrógeno son paralelos al eje de la hélice. Se pueden formar hélices con carácter espiral de mano izquierda
o derecha, pero la hélice de mano derecha es más estable. Técnicamente, hay 3,6 aminoácidos por vuelta de
la hélice α. Los dipolos de la hélice están alineados, lo que significa que los grupos C=O apuntan en una
dirección y los grupos NH en la dirección opuesta. Como se muestra en la figura 2.8, las cadenas laterales de
los aminoácidos están en el exterior de la hélice, lo que les permite interactuar fácilmente con las de otros
dominios de la proteína o en otras biomoléculas.
Además de las espirales, los polipéptidos pueden existir como cadenas extendidas en zigzag. Una región del
polipéptido con una conformación de cadena extendida se denomina cadena β. Las cadenas β se estabilizan
mediante enlaces de hidrógeno entre dos o más cadenas b (Fig. 2.9). Una β-hoja paralela se forma cuando
cada sección de la cadena va en la misma dirección. Una estructura antiparalela se forma cuando la cadena
polipeptídica se pliega hacia adelante y hacia atrás sobre sí misma, con cada sección de la cadena
corriendo en la dirección opuesta. Estas estructuras tienen el aspecto de una hoja plisada (Fig. 2.10). Las
cadenas laterales se proyectan por encima y por debajo de los planos de la lámina β.

Las regiones de otra estructura regular o aleatoria se entremezclarán con las estructuras α-helicas y β a lo
largo de una proteína (Fig. 2.11). Por ejemplo, las hélices que se desvían de la α-hélice pueden ser el
resultado de la presencia del aminoácido cíclico prolina, que impide estéricamente que los átomos N formen
enlaces de hidrógeno que estabilizan la estructura α-hélice. La repulsión de carga resultante de demasiados
aminoácidos de carga similar también puede causar una configuración más aleatoria.

2.4 Estructura terciaria

La estructura terciaria se refiere a la estructura tridimensional de la subunidad proteica completa

(Fig. 2.6). Utilizando de nuevo el ejemplo de un cable de teléfono, la estructura terciaria está representada
por el plegado del plástico enrollado hacia delante y hacia atrás. Mientras que la estructura secundaria se
rige por las interacciones localizadas entre los aminoácidos, la estructura terciaria se basa en las
interacciones entre secciones distantes de la cadena polipeptídica. El enlace de hidrógeno entre los grupos
carboxilo y amino secundario en el esqueleto es la base de la estructura secundaria, pero la interacción entre
las cadenas laterales de los aminoácidos es importante para la estructura terciaria. Dependiendo de los
aminoácidos en cuestión, pueden darse al menos cuatro tipos de interacciones químicas entre las cadenas
laterales. Entre los residuos de cisteína pueden formarse enlaces disulfuro covalentes. Pueden producirse
interacciones iónicas entre cadenas laterales con carga positiva (lisina, arginina e histidina) y cadenas
laterales con carga negativa (ácido aspártico y ácido glutámico). Los enlaces de hidrógeno pueden
producirse entre aminoácidos polares, como la serina y la tirosina, y otros aminoácidos. Las interacciones
hidrofóbicas implican a aminoácidos no polares, como la leucina, la fenilalanina, el triptófano y la valina.
En lugar de un efecto directo de atracción o repulsión entre los aminoácidos, las interacciones hidrofóbicas
se basan principalmente en la naturaleza mutua de "odio al agua" (hidrofóbica) de las cadenas laterales;
los grupos no polares se ven obligados a unirse debido a su incapacidad para interactuar con el agua.
Combinadas, estas diversas interacciones provocan la torsión y el plegado de la cadena polipeptídica.
 El plegado de las proteínas intenta maximizar la exposición de los grupos polares al entorno acuoso y
minimizar la exposición de los grupos hidrofóbicos. Así, las cadenas polipeptídicas se pliegan generalmente
para colocar las cadenas laterales hidrofóbicas hacia el interior de la estructura, lejos del entorno fisiológico
acuoso. Las cadenas laterales polares e ionizadas se orientan generalmente hacia el exterior, donde
mantienen la molécula en solución y evitan la agregación. Sin embargo, esto no significa que los
aminoácidos hidrofóbicos nunca se encuentren en el exterior de una proteína o que los aminoácidos
polares y cargados nunca estén enterrados en el interior. Cuando se encuentran en el exterior, los residuos
no polares suelen estar dispersos entre los aminoácidos polares para minimizar los efectos adversos debido a
su incapacidad para interactuar con el agua. Cuando los aminoácidos hidrofóbicos se agrupan en el exterior,
es con un propósito específico, como la unión de otros polipéptidos (véase la sección 2.5 sobre la estructura
cuaternaria) o moléculas de sustrato. Cuando un aminoácido cargado está en el interior de la proteína,
también tiene un propósito específico, como estabilizar la estructura o formar un sitio de unión activo.

2.5 Estructura cuaternaria

La estructura cuaternaria se refiere a las interacciones entre subunidades, o cadenas polipeptídicas

individuales, en las proteínas multi cadena. Siguiendo con el ejemplo de un cable de teléfono, la estructura
cuaternaria se representa colocando uno o más cables adicionales sobre el original o junto a él. Los enlaces
que estabilizan la estructura son generalmente los mismos que los de la estructura terciaria, salvo que se
producen entre aminoácidos situados en cadenas polipeptídicas diferentes (Fig. 2.6). Las diferentes cadenas
peptídicas pueden o no ser idénticas, cada una con su propia estructura primaria, secundaria y terciaria.
Una sola subunidad o cadena polipeptídica se denomina monómero, dos subunidades un dímero, tres un
trímero, cuatro un tetrámero, etc. La figura 2.12 muestra un monómero y un tetrámero de hemoglobina.

2.6 La importancia de la conformación

La importancia de la conformación de una proteína puede apreciarse considerando las enzimas,

que son proteínas que catalizan reacciones químicas específicas. En estas reacciones, la enzima se une a
una molécula de sustrato y, en consecuencia, se produce una reacción química como la hidrólisis o la
fosforilación. Consideremos la proteasa tripsina, que es una enzima digestiva que cataliza la descomposición
de las proteínas en aminoácidos que pueden ser absorbidos en los intestinos. La especificidad de la reacción
resulta de la unión del sustrato en un sitio particular de la molécula. La estructura de la enzima está
organizada de tal manera que el sitio de unión del sustrato tiene las dimensiones moleculares y la disposición
de los grupos funcionales para mediar la unión específica. La figura 2.13 muestra parte de una molécula de
sustrato que encaja en el sitio activo de la tripsina. Debido al plegamiento de la cadena polipeptídica, el sitio
activo está compuesto por aminoácidos de regiones diferentes. Según la numeración secuencial con respecto
a la estructura primaria de la tripsina, los aminoácidos de las posiciones 57 (histidina), 102 (ácido aspártico) y
195 (serina) actúan conjuntamente para posicionar el sustrato y escindir un enlace peptídico. Si la estructura
secundaria o terciaria de la tripsina estuviera alterada, la molécula de sustrato podría no ser reconocida por
el sitio activo. La desnaturalización de la proteína puede ser el resultado de cambios en la temperatura, el pH
y la fuerza iónica, que interfieren con los diversos tipos de enlaces intramoleculares que estabilizan la
conformación de la enzima. Por ejemplo, los cambios de pH pueden alterar la ionización de las cadenas
laterales (véase la Fig. 2.2), lo que puede interferir posteriormente con los enlaces iónicos entre los
aminoácidos. Consideraciones similares se aplican a las proteínas importantes en la mediación de las
interacciones entre las células y los biomateriales en la interfaz tejido-implante. Además, como se explica en
el capítulo 3, la unión de las proteínas a las superficies proporciona medios adicionales para cambiar la
conformación de las biomoléculas.
 Capítulo 3 – interacciones de la proteína-superficie
3.1 Introducción

El comportamiento de las proteínas en las superficies desempeña un papel fundamental en la

determinación de la naturaleza de la interfaz tejido-implante. Las proteínas adsorbidas afectan a la
coagulación de la sangre, la activación del complemento y la adhesión bacteriana y celular. Además, las
proteínas adsorbidas pueden influir en las propiedades superficiales de los biomateriales y en su
degradación. Este capítulo presenta los principios básicos de la adsorción de proteínas en términos de las
características de la proteína y de la superficie que afectan al comportamiento de las proteínas en las
superficies sólidas.

3.2 IMPORTANTES PROPIEDADES DE LAS PROTEÍNAS Y DE LA SUPERFICIE

Las propiedades tanto de la proteína como de la superficie con la que interactúa la biomolécula
influyen en el comportamiento interfacial (Fig. 3.1). Las tablas 3.1 y 3.2 enumeran las propiedades
importantes de la proteína y de la superficie, respectivamente.

3.2.1 Propiedades de las proteínas

Las propiedades de las proteínas que influyen en la actividad superficial están relacionadas con la
estructura primaria de la proteína, lo que significa que la secuencia de aminoácidos afecta a las
interacciones proteína-superficie. Las moléculas de mayor tamaño suelen interactuar con las superficies
porque son capaces de entrar en contacto con la superficie en más sitios (Fig. 3.2). Por ejemplo, una
molécula de albúmina (67 kDa) forma unos 77 contactos con un sustrato de sílice, y el fibrinógeno (340 kDa)
forma unos 703 contactos por molécula. Sin embargo, el tamaño no es el único factor determinante, ya que
la hemoglobina (65 kDa) presenta una mayor actividad superficial que el fibrinógeno, mucho más grande.

Debido a su hidrofilia, los aminoácidos cargados se encuentran generalmente en el exterior de las

proteínas y están fácilmente disponibles para interactuar con las superficies. Por consiguiente, la carga, así
como la distribución de la carga en la superficie de la proteína, puede influir en gran medida en la adsorción
de la misma. Sin embargo, al igual que el tamaño, la carga no es el único factor determinante.
Curiosamente, las proteínas suelen mostrar una mayor actividad superficial cerca de su punto isoeléctrico
(el pH en el que la molécula presenta carga cero, denotado pI). Aunque a primera vista esto pueda parecer
extraño, hay dos efectos que pueden explicar esta observación. En primer lugar, hay que tener en cuenta
que las moléculas de proteínas no interactúan con la superficie de forma aislada. Por ejemplo, 1 ml de una
solución que contiene 1 mg de una proteína de 50 kDa tendrá aproximadamente 1013 moléculas. Con tantas
moléculas en solución, no sólo pueden interactuar con la superficie, sino que las moléculas también pueden
interactuar entre sí (interacciones laterales). En el punto isoeléctrico, la reducción de la repulsión
electrostática entre las moléculas adsorbentes no cargadas puede permitir que se una más proteína. Una
segunda explicación está relacionada con las alteraciones en la estructura de la proteína debido a los
cambios en la carga de los aminoácidos (véase el capítulo 2). Si se altera la conformación, podrían quedar
expuestos diferentes aminoácidos en la superficie de la proteína, lo que podría cambiar la forma en que la
molécula se une al sustrato.
 Las propiedades relacionadas con el desdoblamiento de la proteína también afectan a la adsorción.
Es probable que el desdoblamiento de una proteína exponga más sitios (puntos) para el contacto proteína-
superficie (Fig. 3.3). Por lo tanto, los factores relacionados con una mayor extensión o velocidad de
desdoblamiento pueden dar lugar a una mayor actividad superficial. Es probable que las proteínas menos
estables o con menos enlaces cruzados intramoleculares se desplieguen más o más rápido. Por ejemplo, la
sustitución de la valina hidrofóbica por el ácido glutámico en la hemoglobina hace que la hemoglobina S
(véase el capítulo 2, sección 2.2) sea menos estable. La proteína desestabilizada es, en consecuencia, menos
soluble y da lugar a precipitados fibrosos que distorsionan los glóbulos rojos.

La naturaleza anfipática de las proteínas, con sus aminoácidos polares, no polares y cargados,
también contribuye a la actividad superficial (Fig. 3.1). Aunque los aminoácidos polares y cargados hidrófilos
suelen estar situados en el exterior de la molécula y los residuos hidrofóbicos en el interior, esto no es
absoluto. Así, los aminoácidos hidrofóbicos pueden estar disponibles en la superficie de la proteína para
interactuar con los sustratos. Además, el desdoblamiento de las proteínas puede exponer las regiones
hidrofóbicas y permitir la interacción con la superficie

3.2.2 Propiedades de la superficie

Las propiedades de las superficies de los biomateriales que influyen en la interacción con las
proteínas son similares a las de éstas. Al hablar de las propiedades de las superficies, se suelen agrupar en
tres categorías: geométricas, químicas y eléctricas. Los sustratos con más características topográficas
expondrán más superficie para una posible interacción con las proteínas. Por ejemplo, las superficies con
ranuras o poros tienen una mayor superficie en comparación con las superficies lisas. Otras características de
la superficie, como las marcas de la máquina introducidas durante el procesamiento, proporcionan sitios
adicionales para la interacción de las proteínas.
 La composición química de la superficie determinará qué especies funcionales están disponibles
para la interacción con las biomoléculas. La superficie oxidada (pasivada) de un biomaterial metálico
expone iones metálicos y de oxígeno. Del mismo modo, las superficies de cerámica, y algunas de vidrio,
comprenden iones metálicos y no metálicos. En la superficie de los biomateriales poliméricos pueden estar
presentes diversas especies funcionales, como los grupos amino, carbonilo, carboxilo y aromáticos.
Dependiendo de las especies expuestas, las biomoléculas (o incluso regiones particulares de la molécula)
pueden tener diferentes afinidades por diversas superficies. Por ejemplo, las superficies hidrofóbicas tienden
a unir más proteínas, así como a unirlas más tenazmente.

A escala microscópica, las superficies de los biomateriales pueden ser inhomogéneas. En las
superficies de los biomateriales pueden existir parches, o dominios, de diferente funcionalidad, y estos
parches pueden interactuar de forma diferente con las biomoléculas. Por ejemplo, muchos biomateriales
metálicos contienen al menos dos fases diferentes, como las fases a y b del Ti-6Al-4V. No sólo las diferentes
fases pueden comportarse de forma diferente al interactuar con las biomoléculas, sino que los límites de los
granos se comportan de forma diferente a los interiores de los granos. En los polímeros, la segregación
resultante del plegado de las cadenas macromoleculares puede dar lugar a dominios microestructurales.
Dependiendo de las especies químicas presentes en los distintos dominios, las proteínas tendrán diferentes
afinidades para los parches.

El potencial de la superficie influye en la estructura y composición de la solución electrolítica

adyacente al biomaterial. Los contra-iones son atraídos a la superficie, y las moléculas de agua normalmente
distribuidas isotrópicamente se ordenan. Los efectos combinados de los iones de agua, las moléculas y el
potencial superficial neto determinarán si la interacción con las biomoléculas se ve favorecida o
dificultada.

3.3 ADSORCIÓN Y DESORCIÓN

La adsorción es el proceso por el que las moléculas se adhieren a superficies sólidas. Las
interacciones proteína-superficie dan lugar a elevadas concentraciones locales de la proteína, alcanzando
concentraciones hasta 1.000 veces superiores a las de la solución a granel. Como se ha comentado en otros
capítulos, esta acumulación de proteínas, y especialmente la acumulación de ciertas proteínas, en las
superficies de los biomateriales desempeña un papel fundamental en la determinación del destino de la
interfaz tejido-implante.

Además de las propiedades de las proteínas y de la superficie descritas anteriormente, la adsorción

también depende de la disponibilidad de las moléculas para interactuar con el sustrato. Las moléculas
pueden llegar a la superficie mediante uno o varios de los cuatro principales mecanismos de transporte: 1)
difusión, 2) convección térmica, 3) flujo y 4) transporte acoplado, como la combinación de convección y
difusión. Variables como la concentración, la velocidad y el tamaño molecular son importantes para
determinar la llegada de las moléculas de proteínas a una superficie. Como ejemplo, consideremos los
efectos de la difusión. La difusión simple se describe mediante la siguiente ecuación:

donde C es la concentración, D es el coeficiente de difusión y x es la distancia. En tiempos cortos y en

condiciones en las que la tasa de adsorción es igual a la tasa de difusión.
 donde n es la concentración superficial de la proteína, C0 es la concentración global de la proteína y t
es el tiempo. La ecuación 3.2 muestra que una mayor concentración aparente y/o un mayor coeficiente de
difusión (que está inversamente relacionado con el tamaño de las moléculas) dan lugar a un mayor número
de moléculas que llegan a la superficie. En condiciones en las que la convección también está presente,
dando lugar a una difusión convectiva, el tratamiento se vuelve más complejo y depende de la geometría de
la interfaz. Para el flujo en un canal delgado:

Donde:

y V es la velocidad del flujo, x es la distancia hacia abajo del canal, y es la ubicación dentro de la
altura del canal, g es la tasa de cizallamiento de la pared, y b es la altura del canal. Tras aplicar las
condiciones de contorno pertinentes, la ecuación 3.4 debe resolverse con métodos numéricos.

Una vez presentes en la superficie, las moléculas proteicas pueden interactuar con el sustrato a
través de fuerzas intermoleculares, como el enlace iónico, las interacciones hidrofóbicas y las interacciones
de transferencia de carga. A diferencia de su importancia en la estabilización de la estructura proteica, el
enlace de hidrógeno no desempeña un papel importante en las interacciones proteína-superficie. Como el
agua es buena para formar enlaces de hidrógeno, es tan probable que forme enlaces de hidrógeno con una
superficie como lo harían los aminoácidos de la molécula de proteína. Las fuerzas intermoleculares que
rigen exactamente la interacción proteína-superficie dependerán de la proteína y la superficie en
particular (Fig. 3.1).

Incluso con una solución que contenga un único tipo de proteína, es probable que la capa de
proteína adsorbida sea heterogénea. Cuando las moléculas se adsorben a una superficie limpia, hay pocas
limitaciones en su interacción con el sustrato, y cada molécula puede formar muchos contactos con la
superficie (Fig. 3.4). Sin embargo, a medida que la superficie se va ocupando, hay menos superficie
disponible para la adsorción de las siguientes moléculas de proteína. En consecuencia, las moléculas con
diferentes orientaciones pueden ser capaces de unirse a la superficie, aunque se produzcan menos
contactos proteína-sustrato (Fig. 3.4). Las diferentes orientaciones también pueden permitir a la proteína
evitar o minimizar las interacciones repulsivas con biomoléculas previamente unidas. Además de las
razones del área de contacto disponible, las proteínas pueden existir en la superficie en diferentes estados
de orientación debido a la heterogeneidad tanto de la molécula de proteína como de la superficie (Fig.
3.5); pueden ser necesarias diferentes orientaciones para acercar funcionalidades complementarias en la
superficie y la proteína. Por ejemplo, las proteínas anfipáticas, con sus aminoácidos polares, no polares y
cargados, pueden interactuar de forma diferente con las diversas características microestructurales del
biomaterial, que tienen propiedades estructurales y químicas distintas.
 Las diferentes orientaciones de las moléculas proteicas adsorbidas no sólo afectan a la cantidad de
proteína unida a la superficie, sino que también tienen un significado funcional. Consideremos una enzima
o una proteína adhesiva, como la fibronectina, que se adsorbe a un biomaterial. Dependiendo de la
orientación de las moléculas, el sitio activo necesario para la actividad catalítica de la enzima podría ser
inaccesible, ya sea porque está interactuando con la superficie o porque el acceso al sitio activo es impedido
por moléculas adyacentes (impedimento estérico). Del mismo modo, si los dominios que contienen RGD de
la fibronectina (Fig. 2.19) no están disponibles para la interacción con las células, la proteína podría no ser
capaz de favorecer la adhesión celular.

La desorción es el proceso inverso a la adsorción; las moléculas previamente unidas a una

superficie se desprenden y regresan a la fase masiva. Para que se produzca la desorción, deben romperse
simultáneamente todos los contactos entre la proteína y la superficie (Fig. 3.6). Aunque está bien
caracterizada para moléculas pequeñas como los gases, la desorción de las proteínas es lenta o inexistente. A
menos que se realicen cambios drásticos en el entorno interfacial, como el aumento de la fuerza iónica, la
disminución del pH y el uso de agentes caotrópicos o detergentes, la adsorción de proteínas es en gran
medida irreversible debido al requisito de disociación simultánea de todas las interacciones entre la
molécula y la superficie. La dificultad o improbabilidad de la disociación simultánea de todos los contactos
se incrementa aún más en el caso de las proteínas grandes, que pueden formar un mayor número de
enlaces con la superficie. Consideremos el ejemplo de la adsorción de fibrinógeno mencionado en el
apartado 3.2.1. Para que una molécula de fibrinógeno se desorbe, todos los 703 contactos con la superficie
deben romperse al mismo tiempo. Sin embargo, como se ha comentado en el apartado 3.5, las proteínas
adsorbidas pueden ser sustituidas por moléculas del mismo o diferente tipo de proteína.

3.4 CAMBIOS CONFORMACIONALES

Las moléculas de proteínas no deben considerarse estructuras rígidas. Como se ha explicado en el

capítulo 2, las proteínas son cadenas flexibles que se han enrollado, plegado y doblado para adoptar una
conformación particular (estructura tridimensional). Los cambios en el microentorno de las proteínas, como
el pH y la fuerza iónica, pueden alterar la conformación de la molécula. Asimismo, las proteínas
experimentan alteraciones estructurales durante la interacción con superficies sólidas. Su conformación
puede cambiar, pero las proteínas adsorbidas suelen conservar al menos parte de su actividad biológica. Por
ejemplo, las enzimas adsorbidas conservan sus propiedades catalíticas, y los anticuerpos adsorbidos
mantienen su capacidad de unirse al antígeno, aunque el nivel de actividad puede verse disminuido.

Pueden producirse dos modos de cambio conformacional. En primer lugar, las moléculas de
proteínas pueden sufrir una dispersión molecular dependiente del tiempo (Fig. 3.7). Inicialmente, la
molécula puede entrar en contacto con un número mínimo de sitios de unión en la superficie mediante la
interacción de aminoácidos en el exterior de la proteína. A medida que aumenta el tiempo de permanencia
de la molécula en la superficie (tiempo de residencia), la proteína puede desplegarse, exponiendo los grupos
funcionales interiores para la interacción con sitios de unión adicionales. En general, esto da lugar a un
aumento dependiente del tiempo del número de puntos de contacto entre la proteína y la superficie. En
consecuencia, la desorción es menos probable a medida que aumenta el tiempo de permanencia debido al
mayor número de contactos formados

En segundo lugar, la alteración de la conformación puede ser el resultado de cambios en la

concentración de la solución a granel (Fig. 3.8). Con una concentración baja, cada molécula de proteína
dispone de una superficie abundante. Sin vecinos cercanos, las moléculas pueden extenderse para formar
múltiples contactos con la superficie. A altas concentraciones de masa, la cantidad de superficie por molécula
disminuye y puede producirse menos desdoblamiento, debido a las interacciones adsorbato. En
consecuencia, puede haber más proteínas en la superficie, pero cada molécula tiene menos contactos.

3.5 SOLUCIONES MULTICOMPONENTES

Aunque gran parte de los conocimientos sobre las interacciones proteína-superficie descritos
anteriormente proceden del estudio de soluciones de una sola proteína, la adsorción a partir de soluciones
multicomponentes es más relevante para la interfaz tejido-implante. Los fluidos corporales, como la sangre,
las lágrimas y la saliva, contienen numerosos tipos de biomoléculas. Por ejemplo, la sangre contiene más de
150 proteínas, por no hablar de los lípidos, los hidratos de carbono, las hormonas, etc. Lo más importante es
saber qué moléculas se acumulan en la superficie de un biomaterial y cómo se relacionan con la composición
general de la solución.

Cuando una superficie se expone a una solución multicomponente, ciertas moléculas se depositan
preferentemente desde la masa. Además, pueden producirse cambios dependientes del tiempo en la
composición de la capa adsorbida, hasta alcanzar un estado pseudo-estacionario. Las variables relacionadas
con la actividad superficial y la disponibilidad de biomoléculas en la superficie contribuyen a determinar el
perfil de las moléculas en la superficie. Así, los factores de afinidad (por ejemplo, tamaño, carga y estabilidad
conformacional) y cinéticos (por ejemplo, concentración y tamaño) descritos anteriormente son importantes.
Dado que las superficies presentan una cantidad finita de área para la unión de proteínas, las moléculas
que se acercan a la superficie compiten por los sitios de unión, y las interacciones proteína-proteína, así
como las interacciones proteína-superficie son importantes. En las soluciones de una sola proteína dominan
las interacciones intermoleculares repulsivas, pero en los sistemas multicomponentes puede producirse una
atracción entre las moléculas

Considerando una situación simple de difusión limitada en la interfaz, la Ecuación 3.2 indica que las
moléculas presentes en la solución a granel a alta concentración y/o las proteínas con tamaño pequeño
(gran coeficiente de difusión) llegarán rápidamente. Aunque su afinidad para la superficie puede no ser
óptima, la adsorción, aunque sea temporal, es probable debido a su proximidad a una superficie
''desnuda'' con abundantes sitios de unión. Con el tiempo, se acercan moléculas con mayor afinidad para la
superficie, pero con una velocidad de llegada más lenta debido a su menor concentración y/o mayor tamaño.
La superficie, sin embargo, puede estar ya ocupada por una monocapa de proteínas. En este caso, la única
manera de que nuevas moléculas se unan a la superficie es que las moléculas previamente adsorbidas se
desprendan. Como se indica en la sección 3.3, rara vez se observa una desorción pura. Sin embargo, las
moléculas adsorbidas pueden intercambiarse. El intercambio es el resultado de la competencia por los
sitios de unión entre la proteína ya adsorbida y las moléculas que llegan de la solución en masa (Fig. 3.9).
Como los enlaces entre la molécula adsorbida y la superficie se rompen periódicamente, nuevas moléculas
de proteína pueden ocupar los sitios de unión. La primera molécula se libera de la superficie cuando todos
sus contactos con el sustrato son ocupados por la nueva molécula. El intercambio prosigue hasta que la
superficie se puebla de proteínas que tienen una fuerte interacción con el sustrato. Esta serie jerárquica de
procesos de colisión, adsorción e intercambio se ha denominado "efecto Vroman" (Fig. 3.10).