Membranas:estructura,

2 o f .,2
qurmlca y tunclon

Unu característica fundamentalde todaslascélulasesla branasy los orgánulosrodeadospor membranaen el Ca-

presenciade membranasque definenlos límites de Ia cé- pítulo 4; ahoraestamospreparadospara tratar en mayor
lula y de susdiversoscompartimentos internos.Esproba- detallela estructuray funciónde la membrana.En esteca-
ble que incluso el observadorocasionalde micrografías pítulo,examinaremos la estructuramolecularde lasmem-
electrónicasse quedeimpactadopor la prominenciade branasy exploraremos los múltiplespapelesquelasmem-
membranasrodeandolas célulasy dentro ellas,especial- branasdesempeñan en la vida dela célula.En el Capítulo8
mentelas de los organismoseucarióticos(Figura7.1)' De trataremosel transportede solutosa travésde la membra-
maneraintroductoria,noshemosencontradocon lasmem- na poniendomás énfasisen los mecanismos implicados.

FI
n'
Chloroplast

Plasma
Plasma membrane
membranes

Vacuole
Nuclear
Nuclear
envelope

Nucleus
Nucleus
Rnr rnh trR

Mitochondria
Mitochondria

------l (b) Plantleafcell

(a) Rat pancreascells F 5;m c /¿m

FigwaT.L La importanciade las membranasque rodeany están en el intedor de las células eucariotas, Las estructurasde las células
eucariotasque estánrelacionadascon membranas son ademásde la membrana plasmática,el núcleo, los cloroplastos,lasmitocondrias, el
retículo endoplasmático (RE), los gránulos secretoresy las vacuolas.Estasestructurasse muestran aquí en (a) porciones de tres célulasdel
páncreasde rata y (b) una célula de una hoja de una planta (MET).

Membranas: química
estructura, y función 169
 Las funciones de las membranas
Comenzamosnuestra discusiónfijándonos en que las
membranasbiológicas,como se ilustra en Ia Figura7.2,
desempeñancinco papelesrelacionadosentre sí, pero
distintos. e definen los límites de la célulay limitan sus
compartimentos.@ sirve como sitio concreto donde se
realizanfunciones específicasy @ poseenproteínasde
transporte que facilitan y regulanel movimiento de sus-
tanciashaciael interior y haciael exteriorde la célulay de
suscompartimentos. Además,las membranas@ contie-
nen los receptoresnecesarios paradetectarseñalesexternas
y @ proporcionanlos mecanismos parala comunicación
intercelular.
Cadauna de estasfuncionessedescribebreve-
menteen lassiguientes cincosecciones.
e Lasmembranas definenlímitesy s¡rvencomo
barerasde permeabilidad
Una de lasfuncionesmásobviasde lasmembranasesdefi-
nir los límitesde la célulay suscompartimentosy servir
como barrerasde permeabilidad.El interior de la célula
debeestarseparado físicamentedel medioambientequele
rodeano sóloparamantenerlassustancias deseadas en la
célulasino paramantenerfuerade ellaa las sustancias no
deseadas. Lasmembranassirvenbien para estepropósito
porqueel interior hidrofóbicode la membranaesuna ba-
rrera de permeabilidadefectivaparalasmoléculashidroff-
licase iones.La barrerade permeabilidad de una célulaen
su conjuntoesla membranaplasmática(o celular),una
I Barrera
de
permeabilidad
y limite
Organización
I
y localización
de lafunción
membranaque rodeaa la célulay regulael pasode mate-
rialeshacia dentro y haciafuera de las células.Ademásde
la membranaplasmática,variasmembranasintracelula-
res sirven para compartimentalizarfunciones dentro de
las célulaseucarióticas.
@ fn las membranasse s¡túanproteÍnasespecÍficas
y portanto son los lugaresdondese real¡zanfunciones
específ¡cas
Las membranastienen funciones específicasasociadasa
ellasya que las moléculasy estructurasresponsables de es-
tas funciones-proteínas en la mayorparte de los casos-
estánincluidaso localizadas en lasmembranas. De hecho,
una de lasmanerasmásútilesparacaracterizar una mem-
branaespecífica, esdescribirlasenzimasconcretas, Iaspro-
teínasde transporte,los receptores y otrasmoléculasaso-
ciadasa ellas.
Por ejemplo,muchasenzimascaracterísticas estánpre-
sentesen las membranas, o sobreellas,de orgánulostales
como la mitocondria,el cloroplasto,el retículoendoplas-
mático (RE),el complejode Golgi,los lisosomasy los pe-
roxisomas,como aprenderemos en los Capítulos10, ll y
12.A menudo,talesenzimas,resultanútilescomo marca-
doresduranteel aislamientode orgánulosa partir de sus-
pensiones de célulasdesorganizadas. Por ejemplo,la gJuco-
safosfatasaes una enzimaligadaa Ia membranaque se
encuentraen el retículo endoplasmático.Cuando las
membranasdelREseaíslany sepurifican(comopequeñas
vesículasdenominadas microsomas), la glucosafosfatasa
se
Figwa 7 .2 Funciónde las membranas,
Las membranasO definen los límites de la
célula y de sus orgánulos,@ sirven como
sitio donde selocalizan protelnas
especÍficas,especialmente enzimasy
receptores,@ proporcionan y regulan
procesosde transporte, @ contienen los
receptoresnecesariospara detectar señales
externasy @ proporcionan mecanismos
de contacto, comunicación y adhesión
intercelular.

Na+

{o
óa

"'7'K t'
!Pro".ro, /
! Comunicación
de transporte
intercelular
] Nutrientes
or¡ Detección
O de señales

170 Capítulo
7 l\4embranas: química
estructura, y función
puedeutilizar como enzimamarcadora,que le permite al en el retículoendoplasmáticoo en el citosolsepuedenim-
investigadordeterminarla distribución de los microsomas portar por orgánulosespecíficosrodeadospor membrana
entrelas diferentesfracciones.Lasenzimasmarcadorasde como lisosomas, peroxisomaso mitocondrias. Trataremos
otros orgánulosseutilizan paraevaluarIaputezadela pre- cadauno de estos procesos
en capítulos posteriores.
paraciónfinal de microsomas,esdecir,el grado al que está
libre de contaminaciónpor estosotros marcadores.
@ Las ploteÍnasde membranadetectany tlansmiten
señaleseléctricasy quÍmicas
@ LasproteÍnasde membranaregulaneltransporte
de solutos Normalmente,las célulasreciben información de su en-
torno en forma de señaleseléctricaso químicasque afec-
Otra función de las proteínasde membranaes realizary tan a la superficieexternade la célula.Los impulsosner-
regular el transporte de sustanciashacia dentro y hacia viososenviadosdesdesusojos a su cerebroa medidaque
fuerade la célulay de susorgánulos.Nutrientes'iones,ga- Ieeestaspalabrasson ejemplosde talesseñales'como lo
ses,aguay otrassustancias secaptanen diversoscomparti- sonlasdiferentes hormonaspresentes en su sistemacircu-
mentosy variosproductosy desechosseretiran. latorio.El término utilizadopara describirtanto la detec-
Como veremosen el Capltulo 8, las modalidadesde ción de señalesespecíficas en la superficieexternade las
transportede las distintassustancias difieren' Muchassus- célulascomo los mecanismosespecíficosusadospara
tanciassemuevena travésde la membranaen la dirección transmitir talesseñalesal interior celular es la transduc-
dictadapor su gradientede concentración.Por otro lado, el ción de señales.
movimiento de un ion está determinado por strpotencial En el casode la transducciónde señalesquímicas,algu-
electroquímico, que esla suma de su gradientede concen- nas moléculasseñalentran directamenteen las célulasy
tracióny el gradientedecargaa travésdela membrana'Este actúanen su interior.Los estrógenos son un ejemplo.los
proceso,queno requiereenerglaporqueel movimientoesa estrógenos son esteroides (téase Figura 3,30a),no sonpo-
favor del gradiente,ocurre de dos formasdiferentes'Algu- laresy además pueden atravesar la membrana fácilmente.
nasmoléculascomo agua,oúgenoy etanolpuedenatrave- El resultadoesquelos estrógenos entranen suscélulasdia-
sar las membranaspor difusiónsimple.Lasmoléculasmás na e interactúancon proteínasreguladoras del interior de
grandestalescomo azicaresy aminoácidosse mueYena la célula.Sinembargo, en la mayoría de los casos, lasmolé-
travésde la membranaa¡rdadas por proteínasde transpor- culasseñalizadoras, que afectana una membrana,no en-
fe específicas,un procesodenominadodifusiónfacilitada. tran en la célula,enyezde esoseunena proteínasespecífi-
De manera alternativa,una sustanciase puede trans- cas de la superficieexternade la membranaplasmática,
portar encontradesugradientedeconcentración si no está denominadasreceptores.La unión de estassustanciasde-
cargadao en contra de su potencialelectroquímico,en el nominadasligandos,se continúaen la superficieinternade
casode un ion. Ésteesun procesodenominadotransporte la membrana,con acontecimientosqulmicos específicos
activo querequiereenergía.Solutostalescomo azícatesy generandode esemodo señales internasdenominadas se-
aminoácidosestána menudopresentes en bajasconcen- gundosmensajeros. Por eso,los receptoresde membrana
tracionesfuera de la célulay setransportanhacia el inte- permitena las célulasreconocer, transmitiry respondera
rior en contra de susrespectivosgradientesde concentra- una granvariedadde señales químicasespecíficas, un tema
ción y electroquímico. La energíanecesaria paraguiareste queexploraremos en el Capítulo14.
transporte en contra de gradienteviene proporcionada
por la hidrólisis de ATP o de un compuestosimilar de alta @ Lasploteínasde membtanamedianen la adhesión
energla,yel procesosedenomina transporteactittodirecto. celulary la comun¡cación célula+élula
De maneraalternativa, la energíapuedeserproporcionada
acoplandoel transporteen contra de gradientedel soluto Lasproteínasde membranatambiénmedianen la adhe-
al transporte a favor de gradiente de los iones de sodio o de sión y la comunicaciónentre célulasadyacentes. Aunque
protonesa travésde la misma membrana,un procesode- con frecuencia,los libros de texto representana las células
nominado transporteactivo indirecto.La fuerzaimpulsora como entidadesaisladas,separadas, la mayoríade las célu-
para el movimiento <favorable> de los ionesde sodio o de las de los organismosmulticelularesestánen contactocon
los protoneses su potencialelectroquímico,que depende otrascélulas,a travésde conexionescitoplasmáticasdirec-
del gradientede cargaydel gradientede concentracióndel tas,quepermiten,al menos,el intercambiode algúncom-
ion a travésde la membrana. ponente celular. Esta comunicación intercelular viene
Incluso se pueden transportar a través de membranas proporcionadapor las unionesgapen lascélulasanimalesy
moléculastan grandes como las proteínas' En algunos ca- por los plasmodesmos de lascélulasvegetales.
sos,vesículasintracelulares facilitan el movimiento de tales Todas las funciones que acabamos de considerar
moléculashacia la céhsla (endocitosis) o hacia fuera de la -compartimentalización, localizaciónde función' trans-
céhia (exocifosis).
En otros casos, las proteínas sintetizadas porte, detección de señales y comunicaciónintercelular-

delasmembranas 171
Lasfunciones
 dependende la composiciónquímicay de lascaracterísti_
casestructuralesde las membranas.Volveremosa estoste_
mascuandoconsideremos cómo seha elaboradoel cono_
cimientoactualde la estructurade la membrana. (a) Naturaleza
ti^í¡;^^ ¡^ ¡^
¡tPturua ug td
membrana
Modelos de la estructura Overton
de la membrana: una perspectiva
experimental (b) Monocapa
Iipídica Langmuir
Hastaque no seaplicóla microscopíaelectrónicapara el
estudiodela estructuracelular,a principiosdeIa deáda de
1950,nadiehabíavisto nunca una membrana.Hastaese
momento,lasevidencias indirectashabíanconducidoa los
biólogosa postularla existencia de membranasmuchoan_ (c) Bicapa
tes de que sehubieranpodido ver en realidad.De hecho, liní¡;^^

losinvestigadoreshabíantratadode entender, durantemás

de un siglo,la organizaciónmolecularde las membranas. Gnrior r¿

Las célulascontienenmuchostipos de membranasdife_ Grendel

rentes,por estarazón,ha supuestoun gran esfuerzoen_
contrar las característicasestructurales comunesa todas (d) Bicapalípida Davsony
ellas.Sin embargo,valió Ia penael intensoesfuerzorealiza_ cpn lámrnas Danielli
do en investigación protercas
ya quecondujoal modelodela estruc_
tura de membranadelmosaico fluido.Estemodelo, del que
ahorasepiensaque sirvepara describira todaslas mem_
branasbiológicas, imaginaa la membranacomodoscapas
de lípidosbastantefluidas,con proteínaslocalizadas den_ (e) Unidadde
tro y sobrelascapaslipídicasy orientadasde forma especí_ memDrana
fica con respectoa las dos superficies de membranu.pro_
bablementeen el futuro, el modelo del mosaicofluido se Robertson
redefiniráya que las capasde lípidos seestánconvirtiendo
en algo mucho más complejode lo que inicialmentese (f) Modelode
pensó.Sin embargo,el modelobásicotal y comoseimagi_ mosatco
na hoy en día es,casicon cerfeza,correcto. fluído
Antesde mirar el modeloen detalle,describiremos Singery
al_ Nicolson
guno de los experimentos principalesque han conducido
Unwiny
hastaestavisión de la función y de li estructurade la Henderson 1980
membrana.A medidaque lo hacemos,puedeprofu ndizar
sobre cómo se han realizadoesosdeicubrimientos,así (s)Estructura
de las
comoconocertodoslos aspectos de la diversidadde enfo_ prote¡nas
de
quesy técnicasque son necesarios para el avancedel en_ membrana
tendimiento de un fenómenobiológico.La Figura 7.3 Hélice
muestrala cronologíadblosestudiossobrela estructurade ^t+^

la membrana,que comenzóaproximadamente haceun si_ 2000

glo con el entendimientode que las capasde lípidosfor_
man parte de la estructurade la membranay finalmente
nos llevanal conocimientoactualen el que seconsideraa
lasmembranascomomosaicosfluidos.Consultela Figura
7.3cuandoleala siguientesección.
Figura7.3 Cronograma del desanollodel modelode mosaicofluido,
El modelo de mosaico fluido de estructura de membrana propuesto
por Singery Nicholson en 1972fue la culminación de unos
estudiosque seremontan a 1890y que habíansido redefinidos
de
manera muy significativa por estudiosposteriores.

Overtony Langmu¡r:los lípidosson componentes
importantesde la membrana
Un buen punto de partidaparaestarevisiónexperimental
esel trabajopionerode CharlesOvertonhacia1g90.Tia_
bajando con células de raíces aéreas de plantas, observó
que las sustanciassolublesen lípidos perritrun fácilmente
enlascélulas, rnientrasquelassolubleJenagua,no.En rea_
lidad él encontróuna buenacorrelaciónenire la naturale_
za lipofílica de una sustancia(<amantede lípidos>) y la

172 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
facilidadcon la quepuedeentrar en lascélulas.De estoses-
tudios Overtonconcluyóquelos lípidospresentesen la su-
perficie celular son una especiede <cubiertu (Figura
7.3a).Elinclusosugirióquelascubiertascelulares sonpro-
bablementeuna mezclade colesteroly lecitina,lo que se
comprobó que era claramenteprevisibleen basea lo que
ahoraconocemossobrela importanciade los esteroles y aparecea ambosladosde la membrana.Losgrupospolares
fosfolípidoscomocomponentes de la membrana.
Un segundoe importante avancevino una décadades-
puésmedianteel trabajo de Irving Langmuir,que estudió
el comportamiento de fosfolípidospurificados disueltos
en bencenoy produjo capasde esasoluciónde bencenoy
lípidossobreuna superficieacuosa.Cuandoel bencenose
evapora,las moléculaspermanecencomo una lámina de
lípidos de una molécula de ancho -que se denomina
(monocapa)-. Langmuir sabíaque los fosfolípidosson
moléculasanfipáticasque poseentanto regioneshidroftli-
cascomo hidrofóbicas(véaseFigara2.IIparailustrarlos
gruposdelascabezas polaresy las<colas>no polaresdelas
moléculasde fosfolípidos).El razon6,que los fosfolípidos
seorientansobreel aguade forma que suscabezas hidroff-
licasestánen contactocon el aguay que suscolashidrofo-
bicassobresalen del agua(Figura7.3b).Lamonocapalipí-
dica de Langmuir fue la baseque permitió nuevosestudios
sobrela estructurade la membranaen los primerosaños
del sigloxx.
Gortery Grendel:
la basede la estructura
de la membrana
es unab¡capalipidica
El siguienteavanceimportanteseprodujo en7925cuando
dosfisiólogosholandeses E. Gortery F.Grendelleyeronlos
trabajosde Langmuiry pensaronque esteenfoquepodrla
a¡rdar a contestaruna cuestiónreferentea la membrana
de los glóbulosrojos,o eritrocitos,con los que ellostraba-
jaban.Los trabajosinicialesde Overtonhabíanmostrado
la presenciade una cubiertalipídica en Ia membranacelu-
lar. ¿Perocuántascapaslipídicasestánpresentesen la cu-
bierta?Paracontestara estapreguntaGorter y F. Grendel
extrajeronlos lípidos de un número conocidode eritroci-
tos y usaronel métodode Langmuir paraexpandirlos llpi-
dosen una superficieacuosa.Encontraronque el áreade la
superficiede los llpidos sobreel aguaeraaproximadamen-
te dosveceseláreadelasmembranasde los eritrocitos,por
lo que concluyeronquela membranaplasmáticadelos eri-
trocitos no consisteen una, sino en dos capasde lípidos.
(Comosedescubriódespués, Grendely Gortercometieron
dos errores,subestimaronun tercio del áreasuperficialde
los glóbulosrojos y un tercio de la cantidadde lípidos pre-
sentesen su membranaplasmática. Más aún,no tuvieron
en cuentala porción significativaque ocupanlasproteínas
en la membranade los glóbulosrojos. Sin embargo,afor-
tunadamenteesoserroresse abolieronuno con otro, por
ello la conclusiónde Gorter y Grendelfue correctaaunque
sus datos no. Paratener una oportunidad de repetir sus
Modelos
delaestructura
cálculosy descubrirla fuentede suserrores,véaseProble-
ma7.3 al final del capítulo.
Hipotetizandola existenciade una estructurade bica-
pa, Gorter y Grendelrazonaronque seríafavorabletermo-
dinámicamenteque las cadenashidrocarbonadasno pola-
resestuvieranhaciael interior, fueradel medio acuosoque
hidrofílicos de cadacapaestaríandirigidos hacia el exte-
rior, hacia el entorno acuosoque existea cadalado de la
membrana(Figura7.3c).Susexperimentos y conclusiones
fueron temporalesya que estetrabajorepresentóel primer
intento para entenderlas membranasdesdeel punto de
vista molecular.Más aún,Ia bicapalipídica que ellosima-
ginaron llegó a serla basede cadaajustesucesivoen el en-
tendimientode la estructurade la membrana.
Davsony Danielli:las membranas
tambiéncontienen
proteinas
Pocodespuésde que Gorter y Grendelpropusieranel mo-
delo de bicapa en1925,quedóclaro que una característica
importantede la estructurade la membranaeraquesetra-
tabade una bicapalipídica simple,sin embargoestehecho,
no podía explicartodaslaspropiedadesde la estructurade
la membrana,particularmente todasaquéllasrelacionadas
conla tensiónsuperficial,permeabilidada lossolutosyresis-
tenciaeléctrica.Por ejemplo,la tensión superficialde una
películalipídica fue significativamentemayor que la de las
membranascelularespero éstase podla bajar añadiendo
proteínasa la películalipídica.Más aún, azucares, ionesy
otros solutoshidrofilicos se movían hacia dentro y hacia
fuera de lascélulasmucho másfácilmentede lo que sepo-
día explicarpor la permeabilidada las sustanciassolubles
en aguade lasbicapaslipídicaspuras.
Para explicar estasdiferencias,Hugh Davsony |ames
Danielliimaginaronla presencia de proteínasen lasmem-
branasproponiendoen 1935que lasmembranasbiológi-
casconsistenen una bicapalipídica que estánrecubiertas
en ambos lados con finas láminas de proteínas (Figura
7.3d).De maneraqueel modelooriginalde Davsony Da-
nielli eraen esenciael <modelosándwich>de proteína-lí-
pido-proteína.Su modelo fue la primera representación
detalladade la organizaciónde la membrana,que imperó
en el pensamientode los biólogoscelularesen las décadas
siguientes.
El modelo original fue modificado posteriormente
para acomodarlos descubrimientosposteriores.Particu-
larmentenotablefue la sugerencia, hechaen 1954,de que
las proteínashidrofílicaspodían atravesarla membranay
formarían porospolaresen lo que anteriormenteera una
bicapahidrofóbica.Esasproteínaspodían cambiarla per-
meabilidady las propiedadesde resistividadde la mem-
brana, que no podían ser explicadasfácilmenteen térmi-
nos de la existenciade una bicapa lipídica solamente.
Específicamente, el interior lipídico responsable
de laspro-
unapersoect¡va
dela membrana: experimental 173
piedadeshidrofóbicasde la membranay los componentes
proteicosexplicansuspropiedadeshidrofílicas.
La importanciarealdel modelode Davson-Danielli,sin
embargo,fue el reconocimientode la importancia de la
presenciade proteínasen la estructurade la membrana.
másque cualquierotra, hizo que el mo-
Estacaracterística,
delo de sándwichde Davson-Daniellifuerala baseparala
mayoríadela investigaciónposteriorsobrela estructurade
la membrana.
Robertson:todaslas membranas
compattenuna
estructurasubyacentecomún
Todoslos modelosde membranatratadoshastael mo-
mento sedesarrollaronmucho antesde que nadiehubiera
visto una membranabiológicay cadauno de ellossepen-
só específicamente como un modelo de membranaplas-
mática.Con la llegadade la microscopíaelectrónicaen la
décadade 1950,Iosbiólogoscelulares pudieronfinalmen-
te verificarla presenciade una membranaplasmáticaalre-
dedor de cadacélula.Además,observaronque la mayoría
de los orgánulossubcelulares estabanlimitados por mem-
branas similares.Además,cuando las membranasse ti-
ñeron con osmio,un metalpesado,y se examinaroncon
detallea gran aumento,seobservóque habíaregionesex-
tensascon aspectode <víaférreo que aparecíancomo dos
líneasoscurasseparadas por una zona centralteñida te-
nuemente,con un espesortotal de 6-8 nm. Estepatrón se
observaen Ia membranaplasmáticade dos célulasadya-
centesseparadas una de otra por un espaciointercelular
fino (Figura7.4).EI hechode que estemismo patrón de
Feñ.^i^
intercelular
C é l u l a1 C é l u l a2
Figwa 7.4 Aspectotdlaminar de las membranascelulares. Ésta es
una micrografía electrónicade una secciónfina entre dos células
adyacentesque muestra sus membranas plasmáticasseparadaspor
un espaciointercelular pequeño.Cada membrana aparececomo
dos líneas oscurasseparadaspor una zona central teñida
ligeramente,un patrón de tinción que le da a la membrana un
aspectotrilaminar o de <vía de ferrocarril> (MET).
174 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
tinción trilaminar,o de trescapas,seobservaseen distintas
clasesde membranascondujo a |. David Robertsona suge-
rir que todaslas membranascelularescompartíanuna es-
tructura subyacentecomún, que denominó la unidad de
membrana (Figura7.3e).
Cuandosepropusopor primeravez,la estructurade la
unidad de membrana pareciacoincidir extraordinaria-
mentebien con el modelo de Davsony Danielli.Robert-
son sugirió que el espacioligeramenteteñido (entrelas
dos líneasoscurasdel patrón trilaminar) conteníala re-
gión hidrofóbicade las moléculaslipídicas,que no sete-
ñían con facilidad.Por el contrario,se pensóque las dos
líneasoscuras,representaban los gruposde lascabezas de
los fosfolípidosy quelasfinascapasde proteínasunidasa
la superficiede la membrana,aparecianoscurasdebido a
su afinidadpor la tinción con metalespesados. Estainter-
pretaciónpareciaproporcionarun apoyosólidoal mode-
lo de Davsony Danielliqueproponíaque una membrana
consisteen una bicapalipídica recubiertapor ambassu-
perficiescon finasláminasde proteínas.
másdetalladarevelólos princ¡pales
Unainvestigación
defectosdel modelode Davsony Danielli
EI modelode Davson-Danielli, a pesarde su aparentecon-
firmación por microscopía electrónicay su extensióna to-
daslasmembranas por Robertson, seempezóa cuestionar,
a medidaqueen la décadade 1960ibansurgiendomásda-
tos queno cuadrabancon el modelo.Considere, por ejem-
plo,el problemadelasdimensiones dela membrana:si nos
basamosen la microscopíaelectrónica, seha descritoque
la mayoríade las membranastendrían entre 6 y 8 nm de
espesor y de éstos,4-5nm corresponderían a la bicapalipí-
dica.Quedanalrededorde l-2 nm de espacioen cadasu-
perficiede la bicapapara las proteínasde membrana,un
espacioque podríaacomodarse en el mejor de los casosa
una fina monocapade proteínasformadaprincipalmente
por regionesextensas con estructuraen láminaB.A medi-
da que lasproteínasde membranasefueron aislandoy es-
tudiando,sehizo evidentequela mayoríade ellaseranpro-
teínasglobularescon extensasregionescon estructuraen
a-hélice.Talesproteínastienentamañosy formasinconsis-
tentescon el conceptode ñnasláminasproteicassobrelas
dossuperficies de la membrana,sugiriendoquedebenso-
bresalirhaciael interior de la membrana.
Una complicaciónadicionalesque el modelo de Dav-
son-Danielli no se ajusta fácilmentea las características
distintivasde las diferentesclasesde membranas.Depen-
diendo de su origen,las membranasvarían considerable-
mente en su composiciónquímica y especialmenteen la
proporciónde proteínasy lípidos (Tabla7.I). La relación
proteína/lípidopuedesertan elevadacomo 3 o más en al-
gunascélulasbacterianas y tan bajo como0,23parala vai-
na de mielina que sirve de aislanteeléctricomembranoso
para los axonesnerviosos.Inclusolas dos membranasde
 Tabla7.7- Gontenidoen lÍpidos,proteÍnasy carbohidratosde las membranasbiológicas
Porcentaje aproximadoen peso
Membrana Proteína LÍpido Garbohidratos Índice proteÍna/ lipido

Membrana plasmática
Eritrocito humano 49 43 8 11L

Célula hepática de mamífero 54 36 10 1,50

Ameba 54 42 4 l)q

Vaina de mielina del axón nervioso 18 79 3

Envoltu¡a nuclea¡ oo JZ 2 2,06
Retículo endoplasmático 63 27 10
Aparato de Golgi o4 LO 10 2,46
Tilacoides del cloroplasto 70 30 0
Membrana mitocondrial externa 55 45 0 1))

Membrana mitocondrial interna 78 22 0

Bacterias Gram-positivas 75 25 0 3,00

las mitocondrias difieren de manera significativa: la pro-
porción proteína/lípido es de alrededor de 1,2 para Ia
membrana externay de cercade 3,5 para la membrana in-
terna, que contiene todas las enzimas y proteínas relacio-
nadas con el transporte de electronesy la síntesisde ATP.
Sin embargo, todas estas membranas parecen Ia misma
cuando sevisualizan al microscopio electrónico con la téc-
nica de tinción con osmio de Robertsony colaboradores.A
medida que se estudiaban más membranas se hacía cada
vez más difícil conciliar la enorme yariación existenteen el
contenido de proteína con el modelo de unidad de mem-
brana, ya que la anchura y apariencia de los uraíles, sim-
plemente no variaba en la misma proporción.
EI modelo de Davson-Danielli también se puso en
cuestión por estudios en los que las membranas se expo-
nían a fosfolipasas,enzimas que degradan los fosfolípidos
retirando los grupos de las cabezas.De acuerdo con este
modelo,los grupos hidrofilicos de las cabezasde los lípidos
de las membranasdeberíanestarcubiertospor una capade
proteínasy por tanto protegidos de Ia digestión por las fos-
folipasas.Incluso una proporción significativa (por enci-
ma del 75o/odependiendo del tipo celular) de los fosfolípi-
dos de Ia membrana de las células se degrada cuando la
membrana se expone a las fosfolipasas.Esta susceptibili-
dad a la digestión enzimátíca sugirió que muchos de los
grupos de las cabezasde los fosfolípidos estaríanexpuestos
en la membrana, en vez de estarcubiertos por una capa de
proteína. Además,la localización superficial de las proteí-
nas de membrana especificadapor el modelo de Davson-
Danielli no estababasadaen los experimentosde los cien-
tíficos que intentaron aislar esasproteínas. La mayoría de
las proteínas de membrana resultaron ser bastanteinsolu-
bles en aguay sólo podían extraersecon el uso de solventes
orgánicos o detergentes.Estas observaciones indicaban
que muchas proteínas de membrana son hidrofobicas (o
por lo menos anfipáticas) y sugeríaque se localizaban,al
menos en parte, en el interior hidrofóbico de la membrana
más que en cualquiera de sus superficies.
El modelo de Davson-Danielli fue posteriormente des-
acreditado por la evidencia experimental, se tratará más
tarde, indicando que las membranas son estructuras flui-
das en las que la mayoría de los lípidos y muchas de las
proteínasse mueven libremente en el plano de la membra-
na. La movilidad de lípidos y proteínas no se ajusta fácil-
mente a un modelo que imagina láminas de proteínas su-
perficiales unidas por puentes iónicos a la bicapa lipídica
subyacente.
Singely Nicholson:
unamembrana consisteenun
mosa¡co de proteínas
dentrode unabicapalipidicafluida
Losproblemas
previosque surgieroncon el modelode
Davson-Danielli
estimularonel interésparadesarrollar
nuevasideasrespectoa la organización de las membranas,
culminando en 1972 con el modelo de mosaico fluido
propuesto por S. Jonathan Singer y Garth Nicolson. Este
modelo, que ahora domina nuestra visión de \a organiza-
ción de Ia membrana, tiene dos característicasprincipales,
las dos aparecenen el nombre. Dicho simplemente,el mo-
delo imagina una membrana como un mosaicode proteí-
nas incluidas,o por Io menos unidas,de forma discontinua
a una bicapa lipídica fluida (Fígura 7.3f). En otras pala-
bras, el modelo de Singer-Nicholsonmantuvo la estructu-
ra de bicapa lipídica básicade modelos previos,pero veía a
las proteínasde la membrana de una forma completamen-
te diferente, no como capasfinas de proteínas sobre la su-
perficie de la membrana, sino como entidadesglobulares
discretasque se asocian a la membrana basándoseen su
afinidad relativa por el interior hidrofóbico de la bicapa li-
p í d i c a( F i g u r a 7 . 5 a ) .
Singer y Nicholson fueron unos revolucionarios cuan-
do propusieron por primera vez esta forma de pensar en

Modelos
delaestructura unaperspectiva
dela membrana: experlmental 175
 Cadenasde
carbohidratos

Rinc na

fosfolipídica
Glicoproteínas
ProteÍnade
membrana
ancladaa lípidos

Región
hidrofóbica
Membrana
Región plásmica
hidrofílica
Cadenasde
Proteína Proteína
carbohidratos
integral
de periférjca
de
*^*L-^-^
il rvil rurdrd memDrana

Bicapade (a) Modelode mosaicofluido

fosfolípidos ¡^
uE
l^
td
^^+,,,^+,.,^
EJil uuLut d
¡^
uE
l^
ta

(7-8 nm) membrana

o I
SUPERFICIE \ Fosforíeido
INTERNA
DELA -otc ll
MEMBRANA
Polipéptido
(cadenade
transmembrana N H á aminoácidos)
en o,-hélice
^^i^^^ ¡^

(b) Proteínaintegralde membrana (c) Un segmentotransmembrana carbohidratos

(20-30aminoácidos)
en a-hélice, ¿ (dela
ampliado glicoproteína)

Figura7.5 El modelode mosaicofluido de estructurade la membrana. (a) Singery Nicolson imaginaron la membrana como una bicapa de
lípidos fluida con un mosaico de proteínas asociadaso bien integraleso bien periféricas.Las proteínas integralesde membrana están
ancladasal interior hidrofóbico de la membrana por uno o más segmentoshidrofóbicos transmembrana que normalmente tienen
conformación en a-hélice (púrpura claro). Los segmentoshidrofílicos (prlrpura oscuro) se extienden hacia el exterior, hacia uno o ambos
lados de la membrana. Las proteínas periféricas de membrana se asociancon la superficie de la membrana por fuerzaselectrostáticasdébiles
que las unen a regioneshidrofílicas de otras proteínas integralesde membrana adyacenteso a grupos polaresde las cabezasde los
fosfolípidos. (b) Una proteína integral de membrana con multiples segmentostransmembrana en a-hélice como se reveló en los trabajos
posterioresde Unwin y Henderson.Muchas proteínas integralá de la membrana plasmáticatienen orientadashacia la superficie externa de
la membrana, cadenaslateralesde carbohidratos unidas a sus segmentoshidrofílicos. (c) Un segmentotransmembrana en a-hélice con
aminoácidos representadospor círculos dentro de la hélice.

las proteínas de la membrana, pero resultó que todos los
datos cuadraban bastantebien. Basándoseen el diferente
anclajea la bicapa,se reconocentres clasesde proteínasde
membrana. Lasproteínas integralesde rnembranaestán em-
bebidasen la bicapa lipídica y se mantienen en su sitio por
la afinidad de los segmentos hidrofóbicos de la proteína
por el interior hidrofóbicode la bicapalipídica.Por otro
lado,proteínasperifericas,que son mucho máshidrofilicas
y por tanto estánlocalizadasen la superficiede la mem-
brana. donde estánancladasde forma no covalentea los
grupos polaresde las cabezasde los fosfolípidosy/o a las
parteshidrofílicas de otras proteínasde membrana.Pro-

176 7 Membranas:
Capitulo química
estructura, y función
 teínasancladasa lípidos,aunqueno son parte del modelo mente de la luz del sol. Para captar estaenergíasolar,la
de mosaicofluido original, ahora se reconoce,como una bacteriorodopsina tiene,comopartede su estructura,una
terceraclasede proteínasde membrana.Estasproteínas moléculade retinal,lamismamoléculacon capacidad para
son esencialmente hidrofflicasy por estoresidenen la su- absorberluz, queutiliza el ojo humano paradetectarla luz.
perficiede Ia membrana,pero estánunidascovalentemen- Ademásde absorberla energíaluminosa,el retinal provo-
te a moléculasde lípido que estánincluidas en la bicapa. caun cambioconformacionalen la bacteriorodopsinaque
La naturalezafluida de Ia membranaesla segundaca- causaque la proteínabombeeprotonesfuera de la célula.
racterísticacríticadel modelode Singer-Nicholson. La ma- El gradientede protonesresultantea travésde la membra-
yoría de los componenteslipídicos de una membranaes- na puedeserutilizadocomofuentede energía.
tán en constante movimiento, son capacesde tener Nigel Unwin y Richard Hendersonutilizaron la mi-
moviiidadlateral(esdecir,movimiento paraleloa la super- croscopíaelectrónicapara determinarla estructuratridi-
ficie de la membrana)másque de estarbloqueadosrigida- mensionalde la bacteriorodopsina y su orientaciónen la
mente en su sitio. Muchasproteínasde la membranason membrana.Su extraordinariodescubrimiento, publicado
también capacesde moverselateralmentedentro de la en 1975,fue que la bacteriorodopsinaconstabade una
membrana,aunquealgunasestánancladasa elementoses- únicacadenapeptídicaquesepliegaunay otravez através
tructuralesde uno u otro lado de la membranay por esto de la bicapalipídicahastaun total de sieteveces.Cadauno
tienen una movilidad restringida. de los sietesegmentostransmembranade la proteínaes
La fierza del modelo de mosaicofluido está en que una r-hélice empaquetadaestrechamente y compuesta
proporciona una explicaciónfácil para la mayoría de las principalmentepor aminoácidoshidrofóbicos.Los seg-
críticasrealizadas al modelode Davson-Danielli.Por ejem- mentos transmembranasucesivos estánancladosuno a
plo, el conceptode proteínasparcialmenteembebidasen la otro por pequeñosbuclesde aminoácidos hidrofílicosque
bicapalipídica concuerdacon la naturalezahidrofobicay seextiendeny sobresalendesdelassuperficiespolaresde Ia
la estructuraglobular de la mayoríade las proteínasde la membrana.(Paraver en detallela estructuratridimensio-
membranay eliminala necesidad de acomodarlasproteí- nal de la bacteriorodopsina, consultela Figura8.14del ca-
nas de membranaen finas capassuperficiales de espesor pítulo siguiente.)Basándose en los trabajosposteriores
invariable.Además,la variabilidad de la proporción de realizadospor muchos laboratorios,los biólogosde la
proteínas/lípidosde membranasdiferentes,simplemente membranaahoracreenquetodaslasproteínastransmem-
significaque algunasmembranastienen relativamentepo- brana estánancladasa la bicapalipídicapor uno o más
casproteínasembebidas en la bicapalipldica,mientrasque segmentostransmembrana,un tema al que volveremos
otrasmembranastienenmásproteínasde estetipo. La ex- mástarde en estecapítulo.
posiciónde lascabezas de los lípidosen la superficiede la
membranaesobviamentecompatiblecon su susceptibili-
Descubrimientos
lecientesmejorannuesttos
dad a la digestiónpor lasfosfolipasas, mientrasqúela flui-
conoc¡m¡entos
sobrela estructurade la memblana
dezde lascapaslipídicasylamezclade lípidosy proteínas
dentrode la membranahacemásfácilimaginarla movili- Casidesdeel momentoen queSingery Nicolsonlo propu-
dadtanto de lípidoscomode proteínas. sieron,el modelodel mosaicofluido revolucionóla mane-
ra en la que los científicospensabanacercadela estructura
de las membranas.El modelo lanzabauna nuevaera en la
Unwiny Hendersonl la mayoÍa de las proteínas
investigación de la membranaque no sóloha confirmado
de membrana contienensegmentostlansmemblana
el modelobásico,sino que Io ha aumentadoy extendido.
La ilustraciónfinal en el cronograma(Figura7.3g)repre- Además,nuestrosconocimientossobrela estructurade Ia
sentaunapropiedadimportantedelasproteínasintegrales membranacontinúan expandiéndosea medida que nue-
de membranaque los biólogoscelularesempezarona en- vos descubrimientos científicosmejoran y modifican el
tenderenla décadade 1970:la mayoríadelasproteínastie- modelobásico.
nen en su estructuraprimariauna o mássecuencias hidro- Descubrimientosrecientesenfatizanel conceptode que
fóbicasque abarcanla bicapalipídica (Figura7.5b y c). las membranasno son estructurashomogéneasen las que
Estossegmentos transmembranaanclanlas proteínasa la suscomponentessemezclande forma libre, sino quetanto
membranay las sostienenalineadascorrectamentedentro los lípidoscomolasproteínastiendena ordenarse, estando
de la bicapalipídica. susmovimientos con frecuenciarestringidospor mecanis-
El ejemplode la Figura7.3ges dela bacteriorodopsina, mos difícilesde evidenciara partir de la estructurabásica
primeraproteínade membranaque sedemostróque po- mostradaen la Figura7.5.Dehecho,la mayoríade lospro-
seíaestacaracterísticaestructural.La bacteriorodopsina
es cesoscelularesqueimplican a lasmembranas,dependende
una proteína de la membranaplasmáticaencontradaen los complejosestructuralesespecíficos de lípidos y proteí-
una arqueobacteria del géneroHalobacterium, donde su nas La señalizacióncelulat un tema del que trataremosen
presenciale permitea las célulasobtenerenergíadirecta- el Capítulo 14,esun ejemplode estetipo de procesos.

Modelos
delaestructura unaperspectiva
dela membrana: experimental L 7 7
 Hastaahora,para entenderlos procesosasociadosa las
membranas,hemos necesitadoalgo más que el modelo
original de mosaicofluido, con lípidos y proteínasflotan-
do alrededorsimplementeal azar.No obstante,el modelo
de mosaicofluido esbásicopara entenderla estructurade
la membrana,de maneraqueesimportanteparanosotros
examinaren detallesuscaracterísticas esenciales.Estasca-
racterísticasincluyen,la química,la distribución asimétri-
cay la fluidezdeloslípidosde membrana,las relacionesde
lasproteínasde membranacon la bicapay la movilidad de
lasproteínasen la bicapa.Comentaremos cadauna de es-
tas característicaspor orden, centrándonosen las eviden-
ciasque lo apoyany en las implicacionesde cadacaracte-
rísticaen la función de la membrana.
Los lípidos de membrana: la parte
nas varían significativamentedependiendodel origen de
éstas(Figura7.7).Porejemplo,la esfingomielinaesuno de
los principalesfosfolípidosde las membranasplasmáticas
animales,pero estáausenteen las membranasplasmáticas
de plantasybacteriasy tambiéndelasmembranasinternas
de mitocondriasy cloroplastos.
Glicolipidos.Como su nombre indica,los glicolípidosse
forman al añadira los lípidosgruposcarbohidrato.Algo-
nos glicolípidostienen como baseglicerol,pero la mayoría
derivan de la esfingosina¡ por tanto, sellaman glicoesfin-
golípidos.Los ejemplosmáscomunesson los cerebrósidos
y los gangliósidos.Los cerebrósidossedenominanglicolí-
pidosneutrosya que cadamoléculatiene ,¡n azicar no car-
gado como grupo principal -galactosa-, en el casodel
galactocerebrósido que se muestraen la Figura 7.6b.Por
otro lado,un gangliósido, siempretieneun grupo princi-

"fluida" del modelo

Empezaremosel estudiodetalladode lasmembranascon-
siderandolos lípidos,que son componentesimportantes
de la parte<fluida>del modelode mosaicofluido.
Lasmemblanascontienenvariasde las plincipalesclases
de lípidos
Una propiedadevidentedel modelo de Singery Nicholson
es que mantienela bicapalipídica propuestainicialmente
por Gorter y Grendel,aunquecon una mayor diversidady
fluidez de los componenteslipídicos de la que los investi-
gadoresanterioresreconocieron. Lasprincipalesclasesde
lípidos de membranasonlassiguientes: /osfolípidos,glicolí-
pidosyesteroles. La Figura7.6haceun listadodelosprínci-
paleslípidosde cadauna de estascategorías y representa la
estructurade algunosde ellos.
Fosfolipidos.Comoya sabemos desdeel Capítulo3,los Ií-
pidos que se encuentranen mayor abundanciaen las
membranasson los fosfollpidos(Figura7.6a).Lasmem-
branascontienenmuchasclasesde fosfolípidosdistintos,
incluyendo tanto a fosfoglicéridos basadosen glicerol
como a los esfingolípidosbasadosen esfingosina.Los fos-
foglicéridosmáscomunes sonfosfatidilcolina, fosfatidileta-
nolamina,fosfatidilserinay fosfatidilinositol.El esfingolípi-
do más común es la esfingomielina,su estructura se
muestraen la Figura7.6a.Lasclases, orlgenesy proporcio-
nes relativasde los fosfolípidospresentesen las membra-
pal oligosacáridoque contieneuno o más residuosde áci-
do siiílico cargadosnegativamente, que le proporcionana
la moléculacarganetanegativa.Loscerebrósidos y los gan-
gliósidospredominanespecialmente en lasmembranasce-
rebralesy en lascélulasnerviosas.Losgangliósidosexpues-
tos en la superficiede la membranaplasmáticatambién
funcionan como antígenosque son reconocidospor anti-
cuerposen lasreaccionesinmunes,incluyendolasreaccio-
nesresponsables de lasinteraccionesentregrupossanguí-
neos.Por ejemplo,los grupos sanguíneos humanosABO,
implicana los glicoesfingolípidos quesirvencomomarca-
doresde la superficiecelularde los glóbulosrojos.
Algunas de las enfermedadeshumanasmás gravesse
producencomoconsecuencia de dañosen el metabolismo
de los glicoesfingolípidos.El ejemplomejor conocidoesla
enfermedad de Tay-Sachs,que seorigina por la ausenciade
una enzimalisosomal,la B-N-acetilhexosaminidasa A, res-
ponsablede uno delos pasosde la degradación de los gan-
gliósidos.Como resultadodel defectogenético,los gan-
gliósidosse acumulanen el cerebroy en otros tejidos
nerviosos, dañandolosnerviosy afectandoa la funciónce-
rebral,provocandofinalmenteparálisis,deterioro mental
severoy muerre.
Esteroles.Ademásdefosfolípidosy glicolípidos,las mem-
branasde la mayoríade lascélulaseucariotastambiéncon-
tienen cantidadessignificativasde esteroles(Figura7.6c).
El principal esterolde lasmembranascelularesanimaleses
el colesterol,mientras que las membranasde las células
vegetalescontienen pequeñascantidadesde colesteroly

Figura7.6 (Páginaopuesta)Tres clases pÍncipales de lipidosde membrana. Cada clasede lípido es ilustrado mediante un diagrama
esquemático(en la izquierda), su estructura química (en el medio) y mediante modelos de ocupación espacial(en la derecha).
(a) Los fosfolípidos consistenen una cabezacon un grupo polar pequeño (del tipo colina, etanolamina, serina o inositol) unido a un
esqueletolipídico, formando fosfoglicéridos (basadosen glicerol) o esfingolípidos (basadosen esfingosina).Para conocer la estructura de
colina, etanolamina, serina e inositol, úaseFigura 3.29 en la p. 69). (b) Los glicolípidos estántambién basadosen glicerol o en esfingosina,
estosúltimos son los más habituales.Un cerebrósidotiene un azúcar neutro, como grupo principal, mientras que un gangliósido tiene una
cadenade oligosacáridoque contiene uno o más residuosde ácido siálico y ademástiene carganegativa.(c) Los esterolesmás comunes de la
membrana son el colesterolen animalesy varios fitoesterolesen las plantas.

178 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
 Diagramaesquemático Estructuraqulmica Reconstrucción
espacial
(A) FOSFOLÍPIDOS
(en la imagen)
Fosfatidilcolina
---t--,
'fcdrr---] H.C

H"C
,/N\,/CH,
H.C
\^
CH"

Y
Fosfatidiletanolamina
---t---
I
O:P-o-
Fosfatidilserina I Fosfato I I
o
Fosfatidiltreonina HóH
Fosfatidilinosito!
Fosfatidilglicerol
glicerol(cardiolipina)
Difosfatidil
-rr-
__l_
I Glicerol I o:c/
I
H-C-C-H
'-c:o

rt o-t tlo-l l'l)"n, l'l>.*

tattal
tsltsl l'l>.* l'l>.n,
lo,llol F¿L:^,, n2w\^,,
tottol
tcttol
l()llol ",.:::' "dl*
tft lfj Fau_^,,

nrc'"*
n*\^u

Hr¿'""2

-T,
fcd*-l H.C
- \ r / C&"
NCH,Y
/ \/\ t]
(unesfingolípido)
Esfingomielina H3c Hp o-?--

I Fosfato I
---T--* o
I
cH,-oH

I l

ry"-fi-ll"
I--f-*-l
Esfingosina I
":l
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I ","í^
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(b)cLrcoLíPrDos
,fs"",o"
Cerebrósidos
(galactocerebrósido,
en la imagen) ---T---
tEd"ctosal -"lL:
Gangliósidos ?
-T-_l HCH
lgH
I Esfingosina I **-3-lr^

A tl
I :iÍ:,."*
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E] ;';i"",
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:":il:
(c) ESTEROLES
Colesterol(en la imagen)
CampesterolI
Sitosterol i Fitoesteroles
EstigmasterolJ

| \^/\^/ :..
cH3 F, E-"'3

Loslípidos la parteufluida,
demembranas: delmodelo 179
 Membrana
plasmática
(E. coli)
o^^
obu
:é
o
a

6
c
¿o
(Ú
p
c)
'd'
2n
C
c)
O

I Fosfatad iletanolami
na I Fosfatidilinositol
ffi Fosfatidilcolina t Fosfatidilglicero
T Fosfatidrlserina (cardiolipina)
1,ffiDifosfatidilglicerol
Esfingomielina

y su composición
Figura7 .7 Variasclasesde membranas de fosfolípidos. La abundanciarelativade distintasclasesde fosfolípidosde ias
membranasbiológicasvaríaenormementedependiendode la membranade origen.

grandescantidadesde fitoesteroles, entre los que se inclu-
yen el campesterol,sitosteroly estigmasterol.Hasta donde
sesabe,las membranas de hongos y protistas también con-
tienen esterolessimilaresen su estructura al colesterol.
No se han encontrado esterolesen las membranas de
las células procariotas y también están ausentes de las
membranas internas de mitocondrias y cloroplastos,que
secreeque derivan evolutivamentede membranasplasmá-
ticas de células procariotas. Sin embargo, la membrana
plasmáticade por lo menos algunos procariotas,incluyen-
do tanto bacteriascomo cianobacteriascontienen molécu-
las similaresa los esteroles,denominadashopanoides, que
sustituyen a los esterolesen la estructura de la membrana.
La molécula de hopanoide esrígida y fuertementehidrofó-
bica, con una cadenalateral corta e hidrofílica que se ex-
tiende desdeuno de los lados (Figura 7.8). Los hopanoides
son abundantes en los depósitos de petróleo, sugiriendo
que podrían haber sido componentesde las membranas de
los antiguos procariotas que contribuyeron, presumible-
mente, a la formación de los combustiblesfósiles.
una placa de vidrio o placa metálica, mientras que Ia fase
mór'il es una mezcla de solventesapropiados.
En el experimento, lo primero es extraer los lípidos de
la preparación de membrana usando una mezcla de sol-
l,entesorgánicos.Después,se aplica una gota de la mezcla
del extracto en un extremo de la placa tratada con ácido si-
lícico, concretamenteen un área pequeña denominada el
origen (Figura7.9a).Unavez el solventese ha evaporado,
se mete el extremo de la placa en un sistemasolventeque
normalmente consiste en cloroformo, metanol y ugr.tu.A
medida que el solventese mueve, pasa por el origen y as-
ciende por la placa por capilaridad, los lípidos se separan
at-.t ^t-.1

(a) Un hopanoide
Lacromatografía encapafinaes unatécnicaimportante
parael análisis
deloslípidos
¿Cómo sabemostanto acercade los componenteslipídicos
de las membranas?La respuesta,por supuesto,es que los
biólogos y bioquímicos han aislado,separadoy estudiado
los lípidos de las membranas durante más de un siglo.Una HO
técnica importante para el análisisde los lípidos es la cro-
(b) Colesterol
matograffa en capa fina (TLC) (del inglés, thin layer chro-
matography),representadaesquemáticamenteen la Figura Figura7.8 Estructutade los hopanoides. (a) Un hopanoide,un
7.9.Esta técnica separadiferentesclasesde lípidos basán- tipo de molécula similar al colesterolque parecefuncionar en las
membranas plasmáticasde algunos procariotas,como lo hacen los
dose en sus afinidádesrelativaspor una fasi estacionaria
esterolesen ias membranasde las célu1as eucariotas.(b) La
hidrofílica y una fase móvil hidrofóbica. Normalmente la estructura del colesterol.Una cadenalateral débilmente hidrofflica
fase estacionariaes una capa fina de ácido silícico sobre (-CHTOH o -OH) sobresalede cadamolécula.

r80 Capitulo
7 Membranas: química
estructura, y función
 Frente componentes estánpresentes en menorescantidades
y es
del solvente menosprobablequesedetectenpor TLC.No obstante,es-
tos últimos lípidos son componentesimportantesde la
I o Colesterol membrana,que abundanen otros tipos de membranas.
Los esfingolípidos, por ejemplo,son especialmentefre-
I vrt cuentesen el tejido nervioso,comoya seha comentado.
¡ lec
\ OPS Losácidosgrasosson esenc¡ales
en la estructura
6 Origen lo y funciónde la membrana
Losácidosgrasossoncomponentes de todosloslípidosde
(a) (b) la membranaexceptode los esteroles. Sonesenciales para
Figura7.9 Usode la clomatografiaen capafina parael análisisde
la estructura de la membrana debido a que sus largas colas
fos fipidosde membrana. La cromatografiaen capafina (TLC') es hidrocarbonadas forman una barrerahidrofóbicaefectiva
una técnica útil para ana\zar los lípidos de membrana. Los lípidos para la difusiónde los solutospolares.La mayoríade los
seextraena partir de una preparaciónde membranascon una ácidosgrasosde las membranastienenentre 12 y 20 áto-
mezcla de solventesorgánicosy (a) se aplica una gota de la muestra mos de carbono de longitud, siendoespecialmente fre-
en un áreapequeña de la placa de vidrio o de la placa de metal
tratada con una capafina de ácido silícico.Cuando la mezcla seha
cuentes los ácidos grasos de 16 y 18 átomos de carbono.
secadoen el punto de origen,la placasesumergeen un sistema Esterangode tamañospareceserel óptimo paraIa forma-
soiventeque normalmente estácompuesto por una mezcla de ción de la bicapa,debidoa que lascadenascon menosde
cloroformo, metanol y agua.A medida que el solventeasciendepor 12 o con más de 20 átomosde carbonoson incapaces de
la placapor capilaridad,Ios iípidos seseparanen función de su
formar una bicapaestable. De estaforma,el espesorde las
polaridad:los lípidos no polarescomo el colesterolno seadhieren
con fuerza al ácido silícico y asciendenpor la placa,mientras que la
membranas(alrededorde 6-8 nm, dependiendo de su ori-
mayoría de lípidos polaresse mantienen cercadel origen (b) gen) vendría dictado principalmente por la longitud de la
cuando el frente del solventese acercaalazona superior de la placa, cadenadeácidosgrasosnecesaria paraquela bicapaseaes-
se retira la placa del sistemasolvente y cadauno de los lípidos table.
separadosserecuperay seidentifica.El patrón que semuestra
Los ácidosgrasosencontradosen los lípidosde mem-
correspondea Ia membrana plasmáticadel eritrocito. Los
componentesprincipales son el colesterol,la fosfatidiletanolamina brana no sólopresentandiferencias en longitud,sino que
(PE),la fosfatidilcolina(PC) v la fosfatidilserina(PS). tambiénvaríanconsiderablemente enla presencia y núme-
ro de doblesenlaces. La Tábla7.2 muestralas estructuras
de diferentes ácidosgrasosespecialmente frecuentes en los
basándose en su polaridad-es decir,por susafinidades
Iípidosde membrana.Elácidopalmíticoyel ácidoesteárico
relativaspor las fasesestacionaria y móvil-. Los lípidos
son ácidosgrasossaturadoscon 16y 18 átomosde carbo-
no polares,como el colesterol, tienenpocaafinidadpor el
no respectivamente. El ácidooleicoy el ácidolinoleicoson
ácido silícico(la faseestacionaria) y por tanto ascienden
ácidosgrasosinsaturadoscon uno o dos doblesenlaces
por la placacon el sistemasolvente(la fasemóvil). Loslí-
respectivamente. Otrosácidosgrasosinsaturados habitua-
pidosmáspolares,comolos fosfolípidos, interactúanfuer-
lesen lasmembranassonel ácidolinolénicocon 18carbo-
tementecon el ácidosilícico,queralentizasu movimiento.
nosy tresdoblesenlaces y el ácidoaraquidónico con20 car-
De estaforma, lípidos diferentesse separanprogresiva-
bonosy cuatrodoblesenlaces(véaseTabla 3.6).Todoslos
mente a medida que el frente de avancede la fasemóvil
ácidosgrasosinsaturadosde las membranasestánen la
continúa ascendiendo por la placa.Cuandoel frente de
configuraciónclsprovocandouna torsiónbrusca,un rizo,
avanceo frentedelsolvente se acercaa la superficie,la placa
dela cadenahidrocarbonada en cadadobleenlace.Debido
seretira del sistemasolventey seseca,y entonceslos lípi-
a que suscadenas lateralesno sonlineales,los ácidosgra-
dos separados serecuperande la placa(disolviendocada
soscon doblesenlacesno seempaquetan bien en la mem-
gota individualizadao cadabandaen un solventecomo el
brana,característica éstacon considerables implicaciones
cloroformo)parasu posterioridentificacióny estudio.
paralafluidezde la misma,comoveremosen breve.
La Figura 7.9 muestrael patrón de TLC visto en la
membranaplasmáticadel eritrocito.El componenteprin-
cipalde estamembranaesel colesterol(25o/o) ylos fosfolí- AsimetÍa de membrana:la mayoriade los lÍpidosse
pidos (55%),con fosfatidiletanolamina (PE),fosfatidilco- distribuyende manetadesigualentrelas dos monocapas
lina (PC)y fosfatidilserina (PS)comolos fosfolípidosmás
Puestoque lasmembranascontienenmuchasclasesde lí-
importantes.La membranaplasmáticadel eritrocitotam-
pidos diferentes, la preguntaque surgeessi los diferentes
bién contienefosfatidilinositol y esfingolípidos, pero estos
lípidossedistribuyeno no, al azar,entrelas dosmonoca-
pas de lípidos que constituyenuna bicapalipídica. Estu-
'
N. del T.: TLC de Thin Layer Cromatography dios químicosque incluyenmembranasderivadasde una

Loslípidos la parteufluida,
demembranas: delmodelo 181
 E
(,
G
IL
o
o
c
I
.()
(,
=
o
g
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a
o
,É,

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r82 Gapítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
ampliavariedadde tipos celularesdiferentesrevelaronque
la mayoúade los lípidos sedistribuyende forma desigual
entre las dos monocapas.Estaasimetría de la membrana
incluye diferenciastanto en las clasesde lípidos presentes
como en el grado de instauraciónde los ácidosgrasosde
las moléculasde fosfolípidos.Por ejemplo,lamayoríade
los glicolípidospresentesen la membranaplasmáticade
una célulaanimal -y tambiénla mayoríade las glicopro-
teínas- serestringea la más externade las dos monoca-
pas.El resultadoes,que susgruposcarbohidratosobresa-
len de la superficiede la membrana externa,en donde
estánimplicadosen una granvariedadde acontecimientos
relacionadoscon la señalizacíóny el reconocimiento.Por
otro lado,la fosfatidiletanolamina,el fosfatidilinositoly la
fosfatidilserinason más importantesen la monocapain-
terna,donde estánimplicadosen la transmisiónde varios
tipos de senalesdesdela membranaplasmáticahaciael in-
terior de la célula.Nos esperanmásdetallessobrela detec-
ción de señales y la transducciónen el Capítulo14.
La asimetríade la membranase establecedurante su
biogénesis por la inserciónde diferenteslípidos o por la
existenciade proporcionesdiferentesde varios lípidos en
cadauna delasdosmonocapas. Unavezestablecida, la asi-
metrla tiendea mantenersedebidoa que el movimiento de
los lípidosde una monocapaa la otra requierequelos gru-
pos hidrofílicosde suscabezas pasena travésdel interior
hidrofóbicode la membrana, un acontecimientoque es
desfavorable termodinámicamente. Aunqueocurrede ma-
nera ocasional,este nflip-flopr, o difusión transversade
los lípidosde membrana,esrelativamente raro.De hecho,
una moléculade fosfolípidotípica experimenta flip-flop
el
menosde una vez ala semanaen una bicapafosfolipídica
pura. Estocontrastanotablementecon la rotación de las
moléculasde fosfolípidoalrededorde su ejey con la difu-
sión lateral delos fosfolípidosen el plano de la membrana,
movimientosque ocurrenlibremente,de forma rápiday al
azar.LaFigura7.10ilustraestostrestiposde movimientos
lipídicos.
Difusiónlateral
Difusióntransversal
("flipJlop"¡
Mientras que el flip-flop fosfolipídicoesrelativamente
raro, su frecuenciaes mayor en las membranasnaturales
que en las bicapas lipídicas artificiales ya que algunas
membranas-la del retículo endoplasmáticoliso (ER),en
particular- tienen proteínasdenominadastranslocado-
res lipídicos, o flipasas,que catalizanel flip-flop de los 1í-
pidosde membranade una monocapaa la otra.Estaspro-
teínasactúansólo sobreclasesespecíficas de lípidos. Por
ejemplo,una de estasproteínasen la membranadel retícu-
lo endoplasmáticoliso, catalizala translocaciónde fosfati-
dilcolina de un lado de la membranaal otro pero no reco-
noce a otros fosfolípidos. Esta capacidadpara mover
moléculaslipídicasselectivamente de un lado de la bicapa
al otro esuna contribución mása la distribución asimétri-
ca de los fosfolípidosa travésde la membrana.El papeldel
retículo endoplasmáticoliso en la síntesisy flip-flop selec-
tivo de los fosfolípidosde la membranaesun tema al que
volveremosen el Capítulo 12.
La bicapalipídicaes fluida
Una de las propiedadesmás llamativasde los lípidos de
membranaes que más que tener un sitio fijo en la mem-
brana, forman una bicapa fluida que permite la difusión
lateral tanto de los lípidos como de Ias proteínasen la
membrana.Las moléculaslipídicas se mueven especial-
menterápido debido a que son mucho más pequeñasque
lasproteínas.Por ejemplo,una moléculafosfolipídicatlpi-
ca,tiene un pesomolecularde alrededorde 800 y puede
viajarla longitud de una célulabacteriana(en la mayorla
de los casos,unaspocasmicras)en un segundoo menos.
Lasproteínassemuevenmucho máslentamentequelos lí-
pidos,en parteporquesonmoléculasmuchomayores, con
pesosmolecularesvariasvecessuperioresa los de los fosfo-
lípidos,pero principalmentedebido a sus interacciones
con lasproteínasdel citoesqueletodel interior de la célula.
La difusión lateral de los lípidos de membranasepue-
de demostrarexperimentalmente por una técnicadenomi-
delasmoléculas
7.10 Movimientos
Figura defosfolipido
enlas
memblanas, Una molécula de fosfofpido es capazde realizar tres
clasesde movimientos en la membrana; rotación alrededor de su
eje mayor; difusión lateral al azar i¡tercambiando sitios con
moléculasvecinasde la misma monocapa; difusión transversalo
<flip-flop>, de una monocapa ala otra. A37 oC en una monocapa
de fosfolípidos pura, una molécula lipídica típica intercambia su
sitio con moléculasvecinas,unos diez millones de vecespor
segundoy semueve lateralmente a una velocidad de varias micras
por segundo.Por el contrario, la frecuencia con la que una
molécula de fosfolípido individual difunde por flip-flop de una
capa ala otra, oscila,entre menos de una vez a la semanaen una
bicapa fosfoüpídica pura, aunavez cadapocashoras en algunas
membranas naturales.Esta ultima diferencia,se debe,a la presencia
en algunasmembranas,de enzimasdenominadastranslocadores
fosfolipídicos, o flipasas,que catalizanla difusión transversalde
moléculasde fosfolípido de una monocapa a la otra.
la parte.fluidao
demembranas:
Loslípidos delmodelo r83
nada recuperaciónde la fluorescenciadespuésde foto-
blanqueamiento(Figura7.11).El investigador etiqueta,o
marca,las moléculaslipídicasdela membranade una célu-
la viva uniéndolascovalentemente a moléculasde un mar-
cadorfluorescente.Seutiliza entoncesun rayoláserde alta
intensidadqueblanqueael coloranteen un punto peque-
ño (unaspocasmicrascuadradas) de la superficiecelular.
Si seexaminala superficiecelularinmediatamentedespués
con un microscopiode fluorescencia, se observaráen la
membrana,un punto oscuro,no fluorescente. Sin embar-
go,unossegundos después los extremosdel punto semel-
ven fluorescentes, ya que moléculaslipídicasblanqueadas
difunden fuera del áreatratadacon el lásery moléculasli-
pídicasfluorescentes, procedentes de regionesadyacentes
de la membrana,penetranen ella.Finalmente,el punto es
indistinguibledel restodela superficiecelular.Estatécnica
no sólo demuestraque los lípidosde membranaestánen
un estadofluido más que en un estadoestático,sino que
proporcionauna maneradirectade medir el movimiento
Iateralde moléculasespecíficas.
Lasmemblanas
funcionan
correctamente
sóloen estado
fluido
Como puedesuponet la fluidezde la membranacambia
con Ia temperatura, disminuyendoa medidaquela tempe-
ratura decaey aumentandoa medidaque Ia temperatura
crece.De hecho,a partir de estudiosrealizadosconbicapas
Iipídicasartificiales,sesabeque cadabicapalipídicatiene
una temperaturade transicióncaracterística (T-) parala
cual se gelifica(<secongelar)cuandose enfríay se hace
otrayez fluida (nsefunde>)cuandosecalienta.Estecam-
bio en el estadode la membranasedenominatransición
de fasey esen ciertamedidasimilaral cambioque experi-
mentan la mantequilla o la margarina al calentarlas o en-
friarlas. Para que una membrana funcione correctamente
debe mantenerse en el estado fluido -es decir, a una tem-
peratura por encima de su valor d. 7.-.A una tempera-
tura por debajo del valor de 7-, todas las funciones que de-
penden de la movilidad o del cambio conformacional de
las proteínas de membranas se verán dañadas o interrum-
pidas, incluyendo procesosvitales tales como el transporte
de solutos a travésde la membrana, la deteccióny la trans-
misión de señales,y la comunicación intercelular (consul-
te la Figura 7.2).
La técnica de calorimetría diferencial de barrido per-
mite determinar la temperatura de transición de una
membrana dada. Esteprocedimiento monitoriza la absor-
ción de calor que se produce durante la transición desde
un estado ffsico a otro -la transición del estado de gel al
estadofluido- en el casode las membranas.La membra-
na de interés se sitúa en una cámarasellada,el calorímetro,
y la absorción de calor se mide a medida que se va aumen-
tando lentamentela temperatura. El punto de máxima ab-
sorción de calor corresponde a Ia temperatura de transi-
ción (Figura 7 .I2a).
Losefectosde la composiciónde ácidosgrasosen la fluidezde
la membtana. La fluidez de la membrana dependeprinci-
palmente de las clasesde lípidos que contiene. Hay dos
propiedades del componente lipídico de una membrana
que resultan especialmenteimportantes para determinar
su fluidez: la longitud de las cadenaslateralesde los ácidos
grasosy su grado de instauración (es decir, el número de
dobles enlaces presentes).Los ácidos grasos de cadena
larga tienen temperaturas de transición más elevadasque
los ácidos grasos de cadenascortas, lo que indica que las
membranas ricas en ácidos qrasosde cadenalarea tienden

.(Ú
O
c
c)
O
a
q)

f
G
(s

)*€*.$*-*ffi* c)

(d
p
a
c
c)
E
Tiempo

Superficiecelular Moléculasde la Un rayoláser Moléculasmarcadas Medidade la velocidadde

no marcaoa superficiecelular blanqueaun áreade con el compuesto difusiónde la fluorescencia
marcadascon un la superficiecelular fluorescentedifunden haciael área blanqueada
colorantefluorescente haciael área con respectoal tiempo
blanqueada

Figura7.11 Medidade la movilidadlipídicaen la membranapor recuperación de la fluorescencia despuésde fotoblanqueamiento.Los lípidos

de membrana semarcan con un compuesto fluorescente,y en una zonalocalizada de la membrana esafluorescenciaseblanquea irradiando
Ia célula con un rayo láser.La fluidez de la membrana semide determinando la velocidad a la que difunden moléculasfluorescentesdesde
zonascercanasal áreablanqueada,provocando asíla reaparición de la fluorescenciaen el punto blanqueado por el láser.Sehan realizado
experimentos similarescon proteínas de membrana; yéaseIaFigtra 7.28.

184 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función

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0 20 40 60
('C)
Temperatura
(a) Membrana
normal
1 Enriquecida
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O oe carDono
a
-o
020406080
("C)
Temperatura
(b) lVembranaenriquecidacon ácidooleicoo con ácido esteárico
Figwa 7.12 Determinación de la tempenturc de transiciónde la
membranapol calorimetrÍadiferencialde barrido. (a) Cuando la
temperaturade una preparaciónde membranaseaumenta
lentamenteen una cámarade calorimetría,la temperaturade
transición ( T.) del estadogel al estadofluido viene marcadapor un
pico de absorciónde calor.(b) Lasmembranascelularesque crecen
en un medio enriquecidocon ácido oleico,un ácido graso
insaturado,son más fluidasque las membranasnormalesy por
tanto tienen una menor temDeraturade transición.Lasmembranas
de las célulasque crecenen mediosenriquecidoscon ácido
esteárico,un ácido grasosaturado,son menosfluidasque las
membranasnormalesy por tanto tienen una temperaturade
transición más alta.
a ser menos fluidas. Por ejemplo, a medida que la longitud
de la cadena de los ácidos grasos saturados aumenta de 10
a 20 átomos de carbono, los puntos de fusión aumentan de
32"C a76"Cy por tanto, de manera progresiva,la mem-
brana se vuelve menos fluida (Figura7.l3a). La presencia
de instauracionesafectaconsiderablementeal punto de fu-
sión. Para ácidos grasoscon 18 átomos de -arbono, los
puntos de fusión son 70, 16,5y -11 "C para cero,uno, dos
y tres dobles enlaces,respectivamente(Figura 7.13b). En
consecuencia,las membranas que contienen muchos áci-
dos grasos insaturados tienden a tener temperaturas de
transición más bajas y además son más fluidas que las
membranas con muchos ácidos qrasossaturados.La Fieu-
BO
70
60
c
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o
P.^
ó'"
10
10 12 14 16 18 20 0123
Númerode átomos Númerode átomos
de carbono
(a) Efectode la longitudde la (b) Efectode la instauración
cadenaen el puntode fusión en el puntode fusión
Figura7.13 Efectode la longitudde la cadenay el númerode dobles
enlacesen la temperatufade fusiónde los ácidosgrasos. El punto
de fusión de los ácidosgrasos(a) aumentacon la longitud de la
cadenapara los ácidosgrasossaturadosy (b) disminuye
dramáticamentecon el número de doblesenlacespara ácidos
grasoscon una longitud de cadenafija. La parte (b) muestra
datospara los ácidosgrasosde 18 carbonos,ácidosesteárico,
oleico,linoleicoy linolénico con 0, 1, 2 y 3 doblesenlaces,
respectlvamente.
ra 7.l2b ilustra esteaumento de fluidez en membranas ri-
cas en ácido oleico (18 carbonos y un doble enlace)frente
a membranas enriquecidascon ácido esteárico(18 carbo-
nos saturados).
El efecto de la instauración en la fluidez de la mem-
brana es tan drástico debido a que los giros que los dobles
enlacesintroducen en los ácidos grasosevitan que las ca-
denas hidrocarbonadas encajen.Los lípidos de membra-
na con ácidos grasos saturados están bien empaquetados
(Figura 7.I4a), mientras que los lípidos con ácidos grasos
insaturados, no (Figura 7 .l4b). Los lípidos de la mayoría
de las membranas plasmáticas contienen ácidos grasos
que varían tanto en la longitud de la cadena como en el
grado de instauración. De hecho, la variabilidad es a me-
nudo intramolecular, ya que los lípidos de membrana
contienen normalmente un ácido graso saturado y un
ácido graso insaturado. Esta propiedad ayuda a asegurar
que las membranas estén en estado fluido a temperaturas
fisiológicas.
LoslÍpidos la parteufluida,
demembranas: delmodelo 18s
 tipos celulares.Una célula animal típica, por ejemplo,
contiene grandescantidadesde colesterol-por encima
del50%o del total de los lípidosde membranaen basemo-
lar-. Normalmente las moléculas de colesterolse en-
cuentran en las dos capasde la membrana plasmática,
pero una moléculadadaselocalizaen una de lasdos capas
(Figura7.15a).La moléculase orienta en la capacon su

(a) Lípidosconácidosgrasossaturados
encajanbien
en la memorana

$grg&t[grgggrg
Colesterol

(a) Colesterol plasmática

en la membrana

CH^-CH-CH^
ltl'
Pu,entede hidrógeno
ó ó

to
Fosfolípido

(b) Lípidoscon una mezcla de ácidos grasossaturados
e insaturadosno encaianbien en la membrana
Figura7,14 El efecto de los ácidosg¡asosinsaturadosen el
empaquetamientode los lípidosde membrana. (a) Los fosfolípidos
de membrana con ácidos grasossaturadosencajanestrechamente
debido a que las cadenasde ácidos grasosdiscurren paralelasunas a
otras. (b) Los lípidos de membrana con uno o más ácidos grasos
insaturadosno encajantan estrechamentedebido a que los dobles
enlacesen clsprovocan torsiones en las cadenas,que interñeren con
el empaquetamiento.Cada una de las estructurasmostradas esuna
molécula de fosfatidilcolina, con dos ácidos grasosde 18 carbonos
saturados(ácido esteárico)(parte a) o dos ácidosgrasosde 18
carbonos,uno de ellos saturado (ácido esteárico)yel otro con un
doble enlace(ácido oleico) (parte b).
Losefectosde los esterolessobrela fluidezde la membmna.
-princi-
En lascélulaseucariotas,la presenciade esteroles
palmentecolesterolen las membranasde célulasanimales
y fitoesterolesen las membranasde célulasvegetales-
afectaa la fluidez de la membrana.Los esterolesson los
componentesprincipales de las membranasde muchos
>
- Colesterol
I,
\,,-
)-
(b) Bondingof cholesterol
to phospholipid
Figura7,15 Odentaciónde las moléculasde colesterolen una
bicapalipidica. (a) Las moléculas de colesterolestánpresentesen
ambascapasde las membrana plasmáticade la mayoría de las
célulasanimales,pero una molécula dada selocaliza en una de las
dos capas.(b) Cada molécula se orienta en la capa lipídica de tal
forma que su un único grupo hidroxilo se sitúa cercadel grupo
polar de Ia cabezade una molécula de fosfolípido vecina,para que
forme un puente de hidrógeno con el oxígeno de un enlaceéster
entre el esqueletode glicerol y el ácido graso.El anillo esteroidey la
cadenalateral hidrocarbonada de la molécula de colesterol
interactúan con cadenashidrocarbonadasadyacentesde los
fosfolípidos de la membrana.

186 7 Membranas:
GapÍtulo química
estructura, y función
único grupo hidroxilo -la única parte polar de una mo-
léculahidrofóbica- cercadel grupo polar de la cabezade
una moléculade fosfolípidovecino,donde puedeformar
un puentede hidrógenocon el oigeno de un enlaceéster
del esqueletode gliceroly un ácidograsode la moléculade
fosfolípido(Figura7.Isb). Los anillosde esteroideshidro-
fóbicos rígidos y la cadenalateral hidrocarbonadade la
moléculade colesterolinteractúancon porcionesde lasca-
denashidrocarbonadasadyacentes que estánmáscercade
lascabezasde los fosfolípidos.
Intercalarmoléculasrígidas de colesterolen la mem-
brana de una célulaanimal haceque a temperaturasmás
elevadasla membranaseamenosfluida de lo que debería
ser.Sin embargo,el colesteroltambiénevitade maneraefi-
caz que las cadenashidrocarbonadasde los fosfolípidos
encajena medidaquela temperaturava disminuyendo,re-
duciendode estemodo, la tendenciade las membranasa
gelificarseal enfriarse.Además,el colesteroltiene el efecto
paradójicode disminuirla fluidezde la membranaa tem-
peraturaspor encimade la 7- y a aumentarlaa tempera-
turaspor debajode la 7-. Losesteroles de lasmembranas
de otroseucariotas presumiblemente funcionande la mis-
ma manera.
Ademásde susefectossobrela fluidez de la membrana,
Ios esterolestambién disminuyenla permeabilidadde una
bicapalipldicaa los ionesy a pequeñas moléculaspolares.
Probablemente lo hacen,rellenandolos espacios entrelas
cadenashidrocarbonadas de los fosfolípidosde las mem-
branas,tapandodeestaformapequeñoscanales a travésde
los cualespodríanpasarionesy pequeñasmoléculas.En
general,una bicapalipídicaque contieneesteroles esme-
nospermeablea los ionesy a moléculaspequeñas que una
bicapaque carecede esteroles.
La mayoÍa de los organismospuedenregularla fluidez
de la membmna
Lamayoriade los organismos, tantoprocariotascomoeu-
cariotas,soncapaces de regularla fluidezde la membrana,
principalmentecambiandola composiciónlipídica de las
mismas.Estahabilidadesespecialmente importanteen los
poiquilotermos-organismos como bacterias,hongos,
protistas,plantasy animalesndesangrefrío que no pue-
den regularsu propia temperatura-. Ya que la fluidez li-
pídica disminuyea medida que la temperaturadesciende,
las membranasde estosorganismosse gelificaríancon el
enfriamientosi el organismono tuviera manerade com-
pensarlos descensos de la temperaturaambiente.(Usted
puedehaberexperimentadoesteefectoaunqueseaun ho-
meotermo,u organismo <de sangrecaliente>:en los días
fríos,susdedosde lasmanosy de los piespuedenestartan
fríos que las membranasde las terminacionesnerviosas
sensitivasdejan de funcionar quedando temporalmente
entumecidos.)Por otro lado, a elevadastemperaturas,las
bicapaslipídicasde los poiquilotermossehacentan fluidas
que ya no funcionan como una barrerade permeabilidad
eftcaz.Por ejemplo,la mayoríade los animalesde sangre
fría separalizana temperaturassuperioresa 45 'C, debido
probablementea que las membranasde lascélulasnervio-
sasselrrelventan permeablesa los ionesquelos gradientes
iónicos no se mantieneny de forma global se impide la
funciónnerviosa.
Afortunadamente la mayoría de los poiquilotermos
puedencompensarlos cambiosde temperaturaalterando
la composiciónlipídica de susmembranas,regulandode
esemodo la fluidezde la misma.Estacapacidadsedeno-
mina adaptación homeoviscosadebido a que el efecto
principal de esaregulaciónesmantenerla viscosidadde la
membranaaproximadamenteigual a pesarde lasvariacio-
nes de temperatura.Considere,por ejemplo,qué pasa
cuando las célulasbacterianassetransfierende un medio
ambienteciíIidoa otro másfrío. En algunasespecies del gé-
nero Micrococcus,unpequeñoaumentoen la temperatura
desencadena un aumento en una proporción de ácidos
grasosde 16 carbonosfrentea ácidosgrasosde 18 carbo-
nos en la membranaplasmática,que a¡rda a la célula a
mantenerla fluidezde la membrana(recuerdeque la pre-
senciade cadenasde ácidosgrasosmás cortasaumentala
fluidez de la membranaporque disminuyela temperatura
de fusión).
En estecasoparticular,el aumentode fluidez de mem-
branadeseado, sealcanzaactivandouna enzimaqueretira
dos carbonosterminalesde las colashidrocarbonadas de
18 átomosde carbono.En otras especies bacterianas, la
adaptacióna la temperaturaambienteimplica una altera-
ción en el gradode instauraciónde los ácidosgrasos,más
que en su longitud.Por ejemplo,en la bacteriaintestinal
comúnEscherichia coli,undescenso enla temperaturaam-
biental desencadena la síntesisde una enzimadesaturasa
queintroducedoblesenlaces en lascadenas hidrocarbona-
dasde los ácidosgrasos.Como estosácidosgrasosinsatu-
radosseincorporanen los fosfolípidosde membrana,dis-
minuyen la temperatura de transición de la misma,
asegurandode estaforma que la membranase mantenga
fluida a una temperaturamásbaja.
Laadaptaciónhomeoviscosa tambiénseproduceen le-
vadurasy en plantas.En estosorganismoslos cambiosde
fluidez de la membranarelacionadoscon la temperatura
parecendependerdel aumentode solubilidaddel oxígeno
en el citoplasmaa temperaturasmás bajas.El oúgeno es
un sustratopara el sistemade la enzimadesaturasa impli-
cado en la generaciónde ácidosgrasosinsaturados. Con
másoÍgeno disponiblea temperaturas másbajas,los áci-
dos grasosse sintetizanen mayor proporción y la fluidez
de la membranaaumentacompensandoademásel efecto
de la temperatura.Estacapacidadtieneun efectosignifica-
tivo en la agricultura ya que las plantas que se pueden
adaptarde estaforma, son resistentesal frío (resistentesal
enfriamiento)y puedencreceren ambientesmásfríos.Los
animalespoiquilotermoscomo los anfibiosy reptilestam-
Loslípidos la parteufluidao
demembranas: delmodelo t87
bién se adaptan a temperaturasmás bajas aumentando la
proporción de ácidos grasosinsaturados en sus membra-
nas. Además, estos organismos pueden aumentar la pro-
porción de colesterol en la membrana, disminuyendo las
interacciones entre las cadenashidrocarbonadas y redu-
ciendo la tendencia de la membrana a gelificarse.
En general,aunque la adaptación homeoviscosaes de
mucha más relevancia para los organismos poiquilo-
termos, también es importante en los mamíferos que hi-
bernan ya que, a menudo, la temperatura corporal decae
sustancialmentea medida que un animal entra en hiberna-
ción -un descensode más de 30 "C para algunos roedo-
res-. Un animal que entra en hibernación se adapta a este
cambio incorporando una mayor proporción de ácidos
grasos insaturados en los fosfolípidos de la membrana a
medida que su temperatura corporal decae.
Lasbalsaslipídicas
sonreg¡ones
concretas
de lípidosde
membranaqueestánimplicadasenla señalización
celular
Hastahacepoco,el componentelipídicode una membra-
na seconsideraba queerauniformementefluido y relativa-
mentehomogéneodentrode una monocapadada,y sesu-
poníaque lasproteínasproporcionaban lascaracterísticas
estructuralesprincipalesde la membrana.Sin embargo,en
pocosaños,un descubrimiento ha generadomuchaexpec-
tación,la existenciade regionesde lípidos de membrana
que secuestran proteínasimplicadasen Ia señalización ce-
lular. Estasregionesse denominanmicrodominios, o más
popularmentebalsas lipídicas, término generalmente
acuñadopor los biólogoscelulares, que estudianel trans-
portelipídicointracelular. Lasbalsaslipídicasseidentifica-
ron por primeravezen la monocapaexternade la mem-
branaplasmáticade lascélulaseucariotas pero tambiénse
han detectadoen lasmonocapas internas.
Las balsaslipídicasde las monocapasexternasde las
membranasse caracterizan por tener niveleselevadosde
colesteroly glicoesfingolípidos.Los esfingolípidos tienen
colasde ácidosgrasosmás largasy más saturadasque la
mayoríade los lípidosde membrana.Además,losfosfolí-
pidospresentes en Iasbalsaslipídicasestánmuchomássa-
turadosquelos queestánsituadosen la membranaquelas
rodea.Estaspropiedades, ademásdela rigidezy dela natu-
ralezahidrofóbicadel colesterol, permitenel buen empa-
quetamientodel colesteroly de las colashidrocarbonadas
de glicoesfingolípidos y fosfolípidos.El resultadoes que,
lasbalsaslipídicasson másespesas y menosfluidasque el
resto de la membrana,permitiendoasí su identificación
como microdominioslipídicos diferenciados. Las caveolas
estánestrechamente relacionadas con las balsaslipídicas
tanto en estructuracomo quizásen función. Las caveolas
son pequeñasinvaginaciones de la membranaplasmática
con forma defrascoqueestáncubiertaspor caveolina,pro-
teína de unión al colesterol,y que se consideracomo un
Capitulo
7 Membranas: química
estructura, y función
subgrupo de balsa lipídica. Mucha de la expectación que se
ha generadoalrededor de las balsasde lípidos y de las cave-
olas está relacionada con su papel en la detección y res-
puesta a señalesquímicas que afectan a las células desde el
exterior, un tema que consideraremos en detalle cuando
lleguemos al Capítulo 14. Por el momento, simplemente
prestaremosatención a las diferentesproteínas receptoras
implicadas en la detección de señalesquímicas que están
localizadasen la monocapa lipídica externa de la membra-
na plasmática (revisión en la Figura 7.2,\a función 4).
Cuando se unen a susligandos específicos,ciertos recepto-
res se mueven hacia balsaslipídicas concretasque también
están localizadasen la monocapa externa. Se cree que las
balsaslipídicas que en la monocapa externa contienen re-
ceptoresestán acopladasfuncionalmente a balsaslipídicas
de la monocapa interna. Estas baisas lipídicas contienen
quinasasespecíficas,enzimas que generan segundosmen-
sajerosdentro de la célula, catalizando la fosforilación de
sustanciasespecíficas.De esta forma, señalesdetectadas
por las proteínas receptoras en la monocapa externa se
transmiten al interior de la célula por ios nexos funciona-
les existentesentre las balsaslipídicas de las dos monoca-
pas de membrana.
Proteínas de membrana: la parte
<mosaico" del modelo
Despuésde observar en detalle el aspecto<fluido> del mo-
delo del mosaico fluido, vamos ahora a la parte del <mo-
saicor.Esto puede incluir a lasbalsaslipídicasy a otros do-
minios lipídicos, pero los principales componentes del
mosaico de membrana son las proteínas de membrana,
como inicialmente imaginaron Singery Nicolson. Primero
veremoslas evidenciascon las que los microscopistasesti-
pularon que la membrana era un mosaico de proteínas y
despuésconsideraremoslas clasesprincipales de proteínas
de membrana.
Lamembrana consiste
en unmosaicode proteínas:
evidenc¡as
demicroscopiaconcriofractura
Losindiciosmássólidossobreel modelodemosaico
flui-
do procedían de estudiosrealizadoscon bicapasartificiales
y con membranas naturales preparadaspara microscopía
electrónica con criofractura. En esta técnica, una bicapa
lipídica o una membrana (o una célula que contuviera
membranas) se congela rápidamente y despuésse golpea
bruscamentecon una cuchilla de diamante. A menudo, la
fractura resultantesigue el plano entre las dos capasde Ií-
pidos de membrana, debido a que el interior no polar de la
bicapa es la vía de menor resistenciade la muestra conge-
Iada.Como resultado,la bicapa se escindeen sus monoca-
pas interna y externa, revelando la superficie interna de
cada una de ellas (Figura 7.16a).
 Glicoproteína

Monocapaexterna
uara E - Monocapaextera

Proteína
integralde Cadenas
membrana
de carbohidratos Cara P
Cara P
I
Membrana
plasmática

Proteínas
de membrana
ancraoas Proteína
a línidne
periférica
de membrana

(a) (b)

Figuta 7.16 Análisisde una membranapor crioúrac'tura. (a) Dibujo de una membrana criofracturada en donde el plano de fractura pasaa
través del interior hidrofóbico de la membrana, revelandolas superficiesinternas de las dos monocapas.Los segmentoshidrofóbicos de las
proteínas semuestran en púrpura claro, los segmentoshidrofflicos en prirpura oscuro. Las proteínas integralesde membrana que quedan en
la monocapa externa seven en la cara E (exoplásmica),mientras que los que quedan en la monocapa interna seven en la cara.P
(protoplásmica). (b) Dibujo de una membrana criofracturada con micrograffas electrónicasde las carasE y P de la membrana plasmáticade
una célula tubular renal de ratón sobrepuestassobre el dibujo.

Lasmicrograffaselectrónicasde lasmembranasprepa- ternasde las membranas,denominadascarasE (por exo-

radasde estaforma proporcionanclarasevidenciasde que
las proteínasestán realmentesuspendidasdentro de las
membranas.Cuandoel plano de fracturaescindela mem-
brana en susdos capas,seobservanpartículascon tamaño
y forma de proteínasglobularesen las dos superficiesin-
plásmica)y P (por protoplásmica)(Figura7.16b).Además,
la abundanciade partículassecorrelacionacon el conteni-
do proteico de la membranaen estudio.Las micrograflas
electrónicasde la Figura 7.I7 ilastran bien estepunto. La
membrana plasmáticade los eritrocitos tiene un índice

(a) Membranaplasmáticadel eritrocito ' 'o,2p.m

0,5¡rm (b) Membranadel cloroplasto

Figwa7,L7a Proteínas de memblana vistasconm¡croscop¡a y criofiactula. Lasprotelnasdemembranaaparecen

electtónica como
incluidasen la bicapalipíüca.Labajadensidaddelaspartículasen la membranadeleritrocito(a) comparadas
partículasdiscretas conla
membranadelcloroplasto(b) seajustaconel índiceproteína/lípidodelasdosmembranas(I,l4y 2,33,respectivamente) (METs).

Proteínas la parteumosaicoD
de membranas: delmodelo 189
proteína/lípido bastantebajo (1,14; véaseTabla 7.1) y
cuandosesometea criofracturapresentaun índicede den-
sidad de partículasbastantebajo (Figura 7.17a),mientras
que la membrana del cloroplasto tiene un índice proteí-
na/lípido más alto (2,33) y en comparación,una mayor
densidadde partículasintramembra.nosas, especialmente
en la capalipídica interna (Figura7.17b).
La confirmación de que laspartículasobservadaseran
proteínas vino del trabajo de David Deamer y Daniel
Branton, quienesutilizaron la técnica de la criofractura
para examinarlas bicapasartificialescon y sin proteínas
añadidas.Las bicapasformadas a partir de fosfolípidos
puros no mostrabanevidenciasde partículasen sus su-
perficiesinternas (Figura 7.I8a). Sin embargo,cuando se
añadieronprotelnasa lasbicapasartificialessevieron par-
tículassimilaresa las observadasen las membranasnatu-
rales(Figura7.18b).
Las membranascont¡enenprote¡nasintegrales,ptoteínas
per¡fédcasy proteÍnasancladasa lípidos
Lasproteínasde membranadifieren en su afinidad por el
interior hidrofóbieode la membranay por tanto en la ma-
nera en la que interactúancon la bicapalipídica. Esto de-
termina, en cambio, cómo de fácil o de diffcil es extraer
una proteínaconcretade la membrana.Si nos basamosen
las condicionesque serequierenpara extraerlasy por ex-
tensión,en la naturalezade su relacióncon la bicapaüpfdi-
ca, las proteínasde membranaentrarían en una de estas
tres categorías:integrales,periféricaso ancladasa lípidos.
Consideraremoscadauna de ellaspor separado,refirién-
donos en cadacasoa los esquemasque semuestranen la
Figura7.19.
(a) Bicapas artificialessin proteínas (b) Bicapasartificialescon proteínas ' 0 , 1
190 Gapítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
La membranaplasmáticadel eritrocito humano,que se
muestraen la Figura 7.20,proporcionael contextocelular
para nuestradiscusión.Éstaesuna de las membranasmás
estudiadasdesdelos tiempos de Gorter y Grendeldebido,
principalmentea la facilidadcon la que sedisponede célu-
lassanguíneas ylo sencilloque resultaobtenerpreparacio-
nesde membranaplasmáticapura,a partir de ellas.Nos re-
feriremosa la membranaplasmáticade los eritrocitos en
variospuntos de la discusiónpara apuntar ejemplosde ti-
pos de proteínasdiferentesy su papelen la membrana.
Proteínasinteglalesde membrana.La mayoríade las pro-
teínasde membranason moléculasanfipáticasque poseen
una o másregioneshidrofóbicasque exhibenafinidadpor
el interior también hidrofóbico de la bicapalipídica.Estas
proteínassedenominanproteínasintegralesde membra-
na ya que sus regioneshidrofobicasestánincluidas en el
interior de la membrana,de tal forma que estasmoléculas
no sepuedenextraercon facilidad.Sin embargo,estaspro-
teínastambién presentanuna o más regioneshidrofllicas
que extiendenhacia el exterior de la membrana,hacia la
faseacuosade uno o de los dosladosde la membrana.De-
bido a su afinidadpor la bicapalipídica,lasproteínasinte-
gralesde membranason dificilesde aislary de estudiarpor
lastécnicasestándarde purificación de proteínas,ya quela
mayoríaestándiseñadaspara proteínassolublesen agua.
Parasolubilizary ertraerlas proteínasintegralesde mem-
brana suelesernecesarioel tratamientocon un detergente
que rompa la bicapalipldica.
Sólo se conocen unas pocas proteínas integralesde
membranaque esténincluidasen ellay que ademássobre-
salganpor uno sólo de los ladosde la bicapa;éstassedeno-
minan proteínas integralesmonotópicas (Figura 7.I9a).
Figura7.18a Gdofiacturacompalando
bicapaslipídicascon y sin proteínas
añadidas. Esta figura compara el
aspectode (a) bicapaslipídicas
artificiales sin protelnas y (b) bicapas
artificiales a las que se han añadido
proteínas mediante microscopla
electrónica con criofractura. Las líneas
blancas de las membranas artificiales
de la parte a representan bicapas
lipídicas inüviduales en una muestra
con múütiplescapas,y las regiones
grises muestran donde se han
escindido las bicapas sencillas para
revelar superficies lisas. Por el
contrario,la membrana artificial de la
parte b muestra un gran número de
partículas globulares en la superficie
de fractura. Éstasson las proteínas que
se añadieron a la preparación de
membrana (METs).
pm'
SUPERFICIE
EXTERNA

SUPERFICIE (g) Anclaje

INTERNA a GPI
(a) Protelnas (b) Proteínasde (c) Proteínas (d) Proteína (e) Proteína (0 Anclaje
integrales Paso Único multipaso multisub- periférica a ácidosgrasos
monotóPicas unidad de membrana o a prenil

Proteínasintegralesde membrana Proteínasde membrana

ancladasa lípidos

Figula 7.19 Clases pdncipalesde proteínm de membrana. las proteínas de membrana se clasifican de acuerdo a su forma de anclaje a la
membrana. Las proteínas integrales de la membrana (a-d) contienen una o más regiones hidrofóbicas incluidas dentro de Ia membrana
lipídica. (a) Unas pocas proteínas integrales de membrana p¿uecenestar incluidas en la membrana Por un solo lado de la membrana
(proteínas integrales monotópicas). Sin embargo, la mayoúa de las proteínas integrales son protelnas transmembrana que cruzan
Ia bicapa lipldica o (b) una vez (proteínas de paso único) o (c) muchas veces(protelnas de paso múltiple). Las protelnas de paso múltiple
consistenen un único polipéptido, como en la parte c, o (d) varios polipéptidos asociados(proteínas multisubunidades). (e) Las protelnas
periféricas de membrana son demasiadohidrofllicas como para penetrar en la membrana pero están ancladasa Ia membrana por uniones
electrostáticasy puentes de hidrógeno que las fijan a proteínas de membrana adyacenteso a gruPos dela cabezade fosfollpidos.
Las proteínas ancladasa lípidos (f-g) son hidrofllicas y no penetran en Ia membrana, estánligadas covalentementea moléculas lipldicas
queistán incluidas en la bicapa lipídica. (f) Normalmente las protelnas de la superficie interna de la membrana estánancladaso bien a
ácidos grasoso bien a grupos prenil. (g) En la superficie externa de la membrana, el lípido de anclaje más habitual es el
glicosilfosfatidilinositol (GPI).

externa
Superficie
de la membrana
Glicoforinas
banda4.1
Proteína Anouirina

Espectrina(tetrámero)

Bicapa
lipídica

Superficieinternade la membrana
(a) 5¡¿m (b)

Figura7.20 CaracteÍsticas estructutalesde la membranaplasmáticadel edtrocito. (a) Un eritrocito esuna célula pequeñacon forma de
disco con un diámetro de alrededor de 7 pm. Un eritrocito de mamlfero no tiene nricleo ni otros orgánulos,hecho que permite obtener coit
facilidad preparacionesde membrana plasmáticamuy puras sin contaminación por membranas de orgánulos, como sucedea menudo con
las preparacionesde membrana plasmáticade otros tipos celulares.(b) La membrana plasmáticadel eritrocito vista desdeel interior de la
célula,La membrana tiene una composición proteica relativamentesimple. Las dos proteínas integralesmás importantes de la membrana
son la glicoforina y una proteína intercambiadora de aniones conocida por su movilidad electroforéticacomo banda 3, La membrana está
ancladaal citoesqueletosubyacentepor filamentos largos y finos de espectrinatetramérica (uf)2, qte a su vez, estánligadasa las moléculas
de glicoforina por la proteína b anda4,1y a la protelna banda 3 por anquirina, otra proteína Periférica de membrana. Los extremoslibres de
los tetrámeros adyacentesde espectrinase mantienen unidos por cadenascortas de actina y de banda 4,1. No semuestra otra proteína,
banda 4,2, que a¡rda a Ia anquirina a anclar a la espectrinaa la protelna banda 3. Paraver el fraccionamiento electroforético de estas
protelnas, véase Figrxa 7.22.

la parteumosaico,
de membranas:
Proteínas delmodelo 191
 Sin embargo, la mayoría de las proteínas integrales de
membrana son proteínas transmembrana, lo que signifi-
ca que cruzan la membrana y que tienen regiones hidrofí-
licas que sobresalende la membrana por los dos lados. Th-
les proteínas atraviesan la membranavnavez (proteínas de
paso único; Figura 7.L9b) o varias veces(proteínas de paso
múltiple, Figura 7.19c).Algunas proteínasde paso multiple
consistenen un único polipéptido (Figura 7.19c),mientras
que otras tienen dos o más polipéptidos (proteínas multi-
subunidades;Figura 7.19d).
La mayoria de las proteínas transmembrana están an-
cladas a la bicapa lipídica por uno o más segmentos trans-
membrana hidrofóbicos, uno por cadavez que la proteína
atraviesala bicapa. En la mayoría de los casos,la cadena
polipeptídica pareceque cruza la membrana con una con-
formación en hélice a formada por unos 20-30 residuosde
aminoácidos,lamayoriade los cuales-a veces,incluso to-
dos- tienen grupos R hidrofóbicos. Sin embargo,en algu-
nas proteínas de paso múltiple varios segmentos trans-
membrana se colocan como lámina B, del tipo lámina B
cerrada-la denominada barril B-. Esta estructura es es-
pecialmente relevante en un grupo de proteínas trans-
membrana formadoras de poros denominadas porinas,
que se encuentran en la membrana externa de muchas
bacterias,cloroplastosy también mitocondrias. Indepen-
dientemente de su conformación, normalmente los seg-
mentos transmembrana están separados en la estructura
primaria de la proteína por secuenciashidrofílicas que so-
bresaleno forman bucles hacia el exterior de los dos lados
de la membrana.
Las proteínas de membrana de paso único tienen un
único segmentotransmembrana,con un extremo carboxi-
lo (C-) hidrofflico extendiéndosehacia el exterior de la
membrana en un lado y un extremo amino (N.-) hidroftli-
co sobresaliendopor el otro lado. Dependiendo de cada
proteína en particular, el extremo C- puede sobresalir en
cualquier lado de la membrana. Un ejemplo de una pro-
teína de paso único esla glicoforina,:unaproteína impor-
tante de la membrana plasmática del eritrocito (Figura
7.20b).La glicoforina seorienta en la membrana de tal ma-
nera que su extremo C- está en la superficie interna de la
membrana y su extremo N- está en la superficie externa
(Figura 7.21a).
Las proteínas de membrana de paso multiple tienen va-
rios segmentostransmembrana, en un rango de 2 ó 3 a 20
o más segmentos.Un ejemplo de una proteína de paso
múltiple en la membrana plasmática del eritrocito es una
proteína de transporte dimérica denominada proteína
banda 3 (también conocida como la proteína de intercam-
bio de aniones).Cada uno de estos dos polipéptidos atra-
viesala bicapa lipídica por Io menos seisveces,con ambos
extremos el C- terminal y el N- terminal en el mismo lado
de Ia membrana. Los modelos actualesde estaproteína di-
mérica aceptan la existencia de un total de doce segmentos
transmembrana.
192 Capítulo
7 lVembranas: química
estructura, y función
Cadena lateral
de carbohidratos
SUPERFICIE
EXTERNA
SUPERFICIE
INTERNA Segmento
transmem-
o brana Canal
ll de protones
-U-U'
(a) Glicoforina (b) Bacteriorrodopsina
Figura7.21 Estructurade dos proteínasintegralesde membrana,
(a) La glicoforina esuna proteína integral de la membrana de paso
único. Su segmentotransmembrana en a-hélice consta enteramente
de aminoácidoshidrofóbicos.El extremoN-terminal sobresalepor
la superficie externa,el extremo C-terminal por la superficie
citoplasmática.La gücoforinaesuna glicoproteína,con l6 cadenas
de carbohidratounidasa su superficieexterna.(b) La
bacteriorrodopsinaesuna proteínaintegralde membranade paso
múltiple situada en la membrana piasmáticade Halobacterium. Sus
sietesegmentost¡ansmembrana, que cuentan con el 70olode sus
248 aminoácidos,seorganizanen un canalde protones.Los
extremosC-terminal y N-terminal de la proteínatienen segmentos
hidrofílicoscortos,que sobresalenpor las superficiesinterna y
externa de la membrana plasmática,respectivamente.Los
segmentoshidrofílicos cortos seligan a cada uno de los segmentos
transmembrana.
Uno de los ejemplosmejor estudiadosde una proteí-
na de pasomúltiple esla bacteriorrodopsina, la proteína
de la membranaplasmáticaque funcionaen lashalobac-
teriascomo una bombade protones(Figura7.3g).
En I975 Unwin y Hendersonpresentaron su estructura
tridimensional,basándose en la microscopíaelectrónica.
Resultóquela bacteriorrodopsina teníasietesegmentos en
hélicea que atravesaban la membrana,cadauno de ellos
correspondíaa una secuenciade aproximadamente 20
aminoácidoshidrofóbicosde Ia estructuraprimaria de la
proteína(Figura7.21b).Los sietesegmentostransmem-
brana se colocanen la membranapara formar un canal,
activadopor luz, quefaciliteel bombeoo el transporteac-
tivo de los protonesa travésde la membrana,un temaso-
bre el quevolveremos en el Capítulo8.
Proteínasperiféricas
demembrana.En comparaciónconlas
proteínasintegralesde membrana,algunasproteínasaso-
ciadasa la membranacarecende secuencias hidrofóbicas
diferenciadasy por tanto no penetranen la bicapalipídica.
Envezde esto,estasproteínasperiféricasde membranase
unen,mediantefuerzaselectrostáticas débilesy puentesde
hidrógeno,a la superficiede la membranaa travésde las
porcioneshidrofílicasde lasproteínasintegralesy qtizás a
travésde los grupospolaresde lascabezasde los lípidos de
la membrana(Figura7.I9e). Las proteínasperiféricasse
extraenmás fácilmentede la membranaque las proteínas
integralesy normalmenteseextraencambiandoel pH o la
fuerzaiónica.
Las principalesproteínasperiféricasde la membrana
plasmática ankirinay vna
del eritrocitosonlaespectrina,la
proteínadenominadabanda4.1(véaseFigara 7.20b).Estas
proteínasseunen a la superficieinternade la membrana
plasmática,donde forman un entramadoesqueléticoque
sirvede soportea la membranaplasmática y a¡rda a man-
tenerla forma del eritrocito(véaseFigura7.20a).
Proteínasde membrana ancladasa lípidos, Inicialmente
cuandoSingery Nicolsonpropusieronsu modelode mo-
saicofluido, todaslasproteínassecatalogaban comopro-
teínasperiféricaso comoproteínasintegralesde membra-
na. Ahora, sin embargo,se reconoceuna terceraclasede
proteínasque no esni específicamente periféricani inte-
gral,peroquetienealgunasdelascaracterísticas de lasdos.
Lascadenas polipeptídicas de estas proteínas de membra-
na ancladasa lípidos se localizan en una de las superficies
de la bicapa lipídica pero estánunidas covalentementea
moléculaslipídicasincluidasdentro de la bicapa(Figura
7.Iefy g).
Lasproteínasancladasa los lípidossefijan a lasmem-
branasmediantevariosmecanismos. Lasproteínasunidas
a la superficieinterna de la membranaplasmáticase an-
clanpor medio de la formaciónde enlacescovalentes con
un ácidograsoo con un derivadoisoprenodenominado
grupoprenil (Figura7.I9f). En el casode lasproteínasde
membranaancladasa ácidosgrasos,la proteínasesinte-
tiza en el citosol y despuésse une covalentemente a un
ácido grasosaturadoincluido dentro de la bicapade la
membrana,quenormalmenteesel ócidomirístico(I4 car-
bonos)o el ácidopalmítico(16 carbonos).Por otro lado,
lasproteínas de membrana preniladas sesintetizanen el
citosolcomoproteínassolublesdespués semodificanaña-
diéndolesun grupo prenil,normalmentew grupofarne-
silde 15 carbonoso un grupo geranilgeranil de 20 carbo-
nos.Despuésde la unión, tanto el grupo farnesilcomo el
grupo geranilgeranil seinsertanen la bicapalipídicade la
membrana.
Muchasproteínasancladasa lípidos y que se fiian ala
superficie externa de la membrana plasmáticase unen
covalenteme nte a glicosilfosfatidilinositol (GPI), un glicoli
pido unido a la monocapaexternade Ia membranaplas-
mática (Figura 7.I9g). Estasproteínas de membrana an-
cladasa GPI se sintetizanen el retículo endoplasmático
comoproteínastransmembrana de pasoúnico,queposte-
riormenteeliminaránsussegmentos transmembrana y los
sustituiríanpor anclajesa GPI.Posteriormente lasproteí-
nassetransportandesdeel REhastael exteriorde la mem-
branaplasmática por unavía quecomentaremos en el Ca-
pítulo l2.Unavez que llegan a la superficie laspro-
celular,
teínasancladasa GPI se liberan de la membrana por la en-
zima fosfolipasaC, que es específica para los enlaces
fosfatidilinositol.
Lasproteínasse puedensepatarpor electrofofes¡s
en gelesde poliacdlamida
conSDS
Antesde continuar con nuestradiscusiónsobrelas proteí-
nas de membrana,nos seráútil considerarbrevemente
cómo se aíslany se estudianlas proteínasde membrana.
Primeroveremosel problemageneraldela solubilizacíóny
extracciónde proteínasde membranay despuésaprende-
remos una técnica electroforéticade gran utilidad en el
fraccionamientoy caracterízaciónde proteínas.
Aislamiento de proteínasde membrana.El mayor desafíode
los químicosde proteínasha sido la dificultad para aislary
estudiarlas proteínasde membrana,ya que muchasde
éstasson hidrofóbicas.Lasproteínasperiféricasde mem-
branason,en general,bastantesensibles a lastécnicasem-
pleadasparasu aislamiento.Como seapuntópreviamente,
estánunidasa Ia membranapor interacciones electrostáti-
casdébilesy puentesde hidrógeno,por las porcioneshi-
drofílicasde las proteínasintegralesde membranao por
los grupospolaresde lascabezas de los lípidosde la mem-
brana.Además,Iasproteínasperiféricassepuedenextraer
de la membranamediantecambiosen el pH o en la fuerza
iónica.De hechoa lasproteínasperiféricasde membrana,
inicialmenteselasdefiniócomoaquellas proteínasquepo-
dían serextraídasde la membranacon una soluciónalcali-
na de carbonatosa un determinadopH y con una deter-
minada fierza iónica.Lasproteínasperiféricastambién se
pueden solubilizar mediante el uso de agentesquelantes
(queseunen a cationes)que extraenel calcioo añadiendo
urea,que rompe los puentesde hidrógeno.Lasproteínas
ancladasa llpidos son igualmentesusceptibles al aisla-
miento,aunqueserequiere la ruptura previa de la unión
covalenteal lípido. Una vez extraídas de la membrana, la
mayoría de las proteínasperiféricasde membrana y las
proteínasancladasa los lípidossonlo suficientemente hi-
drofílicascomo para ser purificadasy estudiadascon las
técnicasutilizadashabitualmentepor los químicosde pro-
teínas.
Por otro lado, las proteínasintegralesde membrana,
son difícilesde aislarde ésta,especialmente de forma que
sepreservesu actividadbiológica.En la mayoríade los ca-
sossepuedensolubilizarsolamentemedianteel uso de de-
tergentesque desorganizan las interacciones hidrofóbicas
y disuelvenla bicapalipídica.Como veremosahora,el uso
de detergentes fuertementeiónicoscomo el dodecilsulfato
sódico(SDS)permiteno sóloaislarlasproteínasintegrales
de membranasino fraccionarlasy analizarlasmediantela
técnicade la electroforesis.
la parte(mosaicou
demembranas:
Proteínas delmodelo 193
 Electroforesiscon gel de poliacrilamiday SDS. Las células
contienen miles de macromoléculas diferentes que deben
ser separadasunas de otras antes de investigar las propieda-
des de cada componente de manera individual. Uno de los
enfoques utilizados habitualmente para separar moléculas
es la electroforesis, conjunto de técnicas relacionadas que
utilizan un campo eléctrico para separar moléculas carga-
das eléctricamente. La velocidad a la cual una molécula
dada semueve durante la electroforesisdepende tanto de su
carga como de su tamaño. La electroforesii puede llevarsea
cabo utilizando una gran variedad de medios de soporte,
talescomo el papel, acetatode celulosa,almidón, poliacrila-
mida o agarosa (un polisacárido obtenido de las algasma-
rinas). De todos estosmedios, los gelesrealizadoscon po-
liacrilamida o con agarosa son los que proporcionan la
mejor resolucióny son los que seempleanhabitualmente
en laselectroforesisde ácidosnucleicosy proteínas.
Cuandose utiliza la electroforesispara estudiarpro-
teínasde membrana,primero hay que solubilizarlos frag-
mentosde membranacon el detergenteSDSque desor-
ganiza Ia mayoría de las uniones proteína-proteina y
proteína-lípido.Las proteínasse desnaturalizan, desple-
gándosecomo varillas polipeptídicasrígidasque no se
puedenreplegardebidoa quesussuperficies estáncubier-
tas con moléculasde detergentecargadasnegativamente.
Los polipéptidossolubilizadosy cubiertoscon SDS,se
carganentoncesen la zonasuperiordel gel de poliacrila-
mida, seaplicaun potencialeléctricoque atraviesael gel,
de tal forma que la basedel gel seconvertiráen el ánodo
cargadopositivamente (Figura7.22).Debidoa quelospo-

+SDS

Fragmentos
de membrana Gel
Placas
de vidrio

Número
de banda
Fuentede alimentación
Y
I
Gel migrado r-..:._:_. _l=_
234 Anquira-t-\;,¿

- Polipéptidos
T
Se retirael gel y se
t
Hñ;;".*.l-; ,
tamaño tiñeparaver las
proteínas
: - .......--..*
o uE dl llvl lEs lO-
+,¿

polipépt¡dos
- de pequeño 4,9
tamaño Actrna 5
GPD 6

o 7

Figwa 7,22 Electrofotesisde ptoteínasde membranaen gel de poliacrilamidacon SDS. Los fragmentos de membrana sesuspenden
en un
tampón y O se tratan con dodecilsulfatosódico(SDS).@ Una pequeña muestra de los polipépiidos solubilizados seaplica ei uno
de los
pocillos.de la parte superior de un gel de poliacrilamida que se ha polirnerizado entre do, piaias de vidrio (sólo se utiiiza
en el eiemplo uno
'le los cinco pocillos numerados,
Pero en la práctica secolocarían iruestras en los otros po.illo, también). é S. aplicu r" p"r."'.l"ii,il"i."
al gel @ que provoca la migración de las mo-léculaspolipeptídicas hacia el extremo más alejado del gel
é iaaa póUpeptido desciendeen el
gel a unavelocidad que estáinversamenterelacionaáa.ó.r su tamaño. @ Cuando los pohpáptido,,iás p"quenos están
cercade la base,el gel
se retira de las placasy setiñe con un colorante que seune,a los polipéptidos y los haceviiibles. (ras bandáscoloreadasque
se muestran en
los pasos4 y 5 no son visibles hastaque e1gel seseparade las placasy setiñe): @ El perfil polipeptídico que se muestra aquí,
es el de las
principales proteínas de la membrana del eritrocito. Las bandásde proteína separadisinicialmente seidÉntificaron
utilizándo números
secuenciales,por ejemplo <banda 1>,<banda2> etc.Ahora sabemoi la identidid de algunasde estasproteínas separadas;por
ejemplo Ia
banda 3 es una proteína de intercambio de aniones y la banda 6 esla gliceraldehído3 fosfato deshidiogenasa(Cp¡l).

194 Capítulo
7 lVlembranas: química
estructura, v funcjón
lipéptidosestáncubiertoscon moléculasde SDScargadas identificarhélicestransmembrana.Sin embargo,desdeen-
negativamente, migrarán,descendiendo por el gel,haciael tonces,ha habidouna verdaderaexplosiónde datosde cris-
ánodo.Sepuedepensaren el gel de poliacrilamidacomo talografrade rayosX paraproteínasintegralesde membra-
en una red fina que dificulta másel movimiento de lasmo- na.De acuerdocon los datosreunidospor StephenWhite y
léculasgrandesque el de las moléculaspequeñas.El resul- colaboradoresen la Universidadde California,Irvine, en
tadoesquelospolipéptidosdescienden por el gela unave- 1997solamentesehabíandeterminadolasestructurastridi-
locidad que estárelacionadainversamentecon su tamaño. mensionalesde 18 proteínas,pero desdeentonces,se han
Cuandolos polipéptidosmás pequeñosseacercana la añadidoa la lista másde 60 proteínas.Inicialmente,la ma-
basedel gel,el procesoterminay el gel setiñe con un colo- yoría de las proteínaseran de origenbacteriano,reflejando
rantequeseune a lospolipéptidosy leshacevisibles.(El co- asíla relativafacilidadconla queseaislabanlasproteínasde
lorantequeseutiliza habitualmentecon estepropósito,esel membranade los microorganismos. Sin embargo,cadavez
azulbrillantedeCoomassie.) El perfil polipeptídicoparticu- másproteínasde membranade origeneucariotaestánsien-
lar que semuestraen la Figura7.22esel de lasproteínasde do analizadas de rayosX.
por cristalografra
membranade los eritrocitoshumanos,a la mayoríade las
Análisishidropático.Parala mayoríade lasproteínasinte-
cualesya nos hemosreferido(recordarFigura7.20b). gralesde membranaque todavíano sehan analizadopor
cristalograffade rayosX, sepuedeinferir el número y loca-
Resultacadavezmásviabledeterminal la esttuctula lización más probablede sussegmentostransmembrana,
túdimensional de las proteínasde membtana siempreque,la proteínapuedapor 1omenos,aislarse y se-
cuenciarse. Unavez que seconoce la secuencia de aminoá-
Determinar la estructuratridimensional de las proteínas
cidosde una proteína,sepuedeinferir el númeroy posi-
integralesde la membranaha estadolleno de dificultades
ción de los segmentostransmembranaa partir de una
durante muchos años. Primero) porque estasproteínas
representaciónde hidropatía (o hidrofobicidad), como
eran difícilesde aislary de purificar. Sin embargo,resulta- seconstru-
semuestraen la FiguraT.23.Talrepresentación
ron cadavez más susceptibles al estudio pot cristalografía que identifica
ye utilizando un programa de ordenador
derayosX, que determinala estructurade lasproteínasque gruposde aminoácidos hidrofóbicos.La secuencia de ami-
sepuedenaislaren forma cristalina. noácidosde la proteínaseescanea a travésde una seriede
Paralasproteínasque no puedenestudiarpor cristalo- (ventanas>de aproximadamente10aminoácidoscadavez;
graflaseutiliza un abordajealternativodenominadoanáli- a medida que sesucedenlasventanas,seva avanzandoun
sishidropáticosiemprequela proteínasepueda,al menos, aminoácidomásen la secuencia.
aislary secuenciar.Examinaremosbrevementecadauna Basándose en los valoresde hidrofobicidadconocidos
de estastécnicas. oara los diferentesaminoácidos,secalculaun índice de hi-
dropatíaparacadaventanaconsecutiva, calculandola media
Cristalografia de tayosX. La cristalografia de rayos X se de los valoresde hidrofobicidadde los aminoácidosde la
utiliza generalmentepara determinar la estructuratridi- ventana.Por convención,los aminoácidoshidrofóbicostie-
mensionalde lasproteínas.Seincluyeuna descripciónde nenvaloresdehidropatíapositivosy losresiduoshidrofflicos
estatécnicaen el Apéndíce(véasepp. A1-A30).Durante tienenvaloresnegativos(comosedescribeenla leyendadela
muchosaños,la dificultad para aislarproteínasintegrales Figura7.23).Elíndicedehidropatíaserepresenta frentea las
de membranaen forma cristalina,prácticamenteexcluyóa posicionesde lasventanasen la secuencia de la proteína.La
estasproteínasdel análisiscristalográfico.El primer éxito representaciónhidropáticaresultante,predice,basándose en
fue presentadopor Hartmut Michel,JohannDeisenhofery el númerodepicospositivos,cuántasdelasregionespresen-
Robert Huber, quienescristalizaronel centro de reacción tesen la proteínacruzaránla membrana.La representación
fotosintéticode la bacteriapúrpura, Rhodopseudomonashidropáticaquesemuestraen la Figura7.23aesde una pro-
viridis,y determinaronsu estructuramolecularpor crista- teínade la membranaplasmáticadenominadaconexina.La
lografia de rayosX. Estosinvestigadores, basándoseen la representaciónmuestracuatropicospositivosy ademáspre-
estructuratridimensional detalladade la proteína, tam- dicequela conexinatienecuatrotramosde aminoácidoshi-
bién proporcionaronlasprimeraspistasde cómo seorde- drofóbicosy por lo tanto cuatrosegmentos transmembrana,
nan las moléculasde pigmentospara captarla energíalu- comosemuestraen Ia Figura7.23b.
minosa,un tema sobreel quevolveremosen el Capítulo 11
(véaseFigura 11.11).En reconocimiento a estetrabajoMi-
La biolo$a molecularha contribuidoenormemente
chel,Deisenhofer y Huber compartieron el Premio Nobel sobrelas ptoteínasde memblana
a nuestroconoc¡m¡ento
de Químicaen 1988.
A pesarde estegran avance,la aplicaciónde la cristalo- Lasproteínasde membranano han cedidoantelastécnicas
graffade rayosX paralasproteínasintegralesde membrana bioquímicastan fácilmentecomo otras proteínas,debido
progresólentamentehastafinalesdelos 90,particularmente principalmentea los problemaspara aislary purificar las
en lo querespectaal nivel de resoluciónqueserequierepara proteínashidrofóbicas activasfisiológicamente.Procedi-

la parteumosaicoo
demembranas:
Proteínas delmodelo 195
 otra forma no se habrían apreciado. Thmbién se pueden
+4
utilizar fragmentos de DNA como sondas para aislar e
6
O- n,o
],,0. identificar secuencias que codifican proteínas relaciona-
L :
ñ(u toolco das. Además, se pueden alterar nucleótidos específicos de
",= o
J la secuenciade DNA de una proteína concreta, para deter-
EY
minar los efectos de esos cambios selectivos de la secuen-
¡c cia, sobre la actividad de la proteína mutante para la que
^ codifica. El Anexo 7A describe estos excitantes descubri-
]*" mientos en más detalle.
50 100 150 200
Número
de aminoácidos
Lasproteínasde membrana
t¡enenvat¡asfunciones
(a)
¿Quéfuncionesrealizanlas proteínasde membrana?La
mayoríade lasfuncionesdela membranaquehemosresu-
mido al inicio del capítulosonrelevantesen estepunto de-
bido a que éstasson justamentelas de suscomponentes
químicos,especialmente lasde susproteínas.
Algunasde lasproteínasde la membranasonenzimas,
localizandofuncionesespecíficas en membranasconcre-
tas.De hecho,como veremosen los siguientescapítulos,
cadauno de los orgánulosde una célulaeucariota,se ca-
o racterizapor su propio y distintivo conjunto de enzimas
unidasa membrana.Encontraráun ejemplode estehecho
(b) -é-o=
cuandocomentemosla asociaciónde la glucosafosfatasa
Fituta7,23 Análisis dehidropatía deproteínas integrales de con el RE.Otro ejemplo,esel de la gliceraldehído-3-fosfa-
membrana. Una representaciónde hidropatía es una forma de to deshidrogenasa (GPD),una enzimaimplicadaen el ca-
representarlas regioneshidrofóbicas(valórespositivos)y las tabolismode la glucosaplasmática. La GPD esuna proteí-
regioneshidrofílicas (valoresnegativos)a lo largo de Ia longitud de na perifericade la membranaplasmáticade los eritrocitos
la secuenciade una proteína -la proteína de membrana plasmática
y de otros tipos celulares(véaseFigura7.22,paso7). Las
conexina,en estecaso-. (a) El índice de hidropatía sobre el eje
vertical es una medida numérica de la hidrofobicidad relativa de proteínas transportadoras de electronescomo los citocro-
segmentossucesivosde Ia cadenadel polipéptido, basadaen su mos y lasproteínas ferrosulfuradas, implicadasen los pro-
secuenciade aminoácidos.(b) La conexinatiene cuatro regiones cesosoxidativosen lasmembranasde lasmitocondrias,de
hidrofóbicas distintas, que correspondena cuatro segmentosen a- cloroplastos y en membranasplasmáticas de célulaseuca-
hélice que cruzan la membrana plasmática.(El valor de
hidrofobicidad para un aminoácido dado esla variación de Ia
riotas, están por su función, estrechamente relacionadas
energíalibre estándar,Ad', por la transferenciade un mol de ese con lasenzimas.
aminoácido desdeun medio hid¡ofóbico hacia un medio acuoso. Otrasproteínasde membranafuncionantransportan-
expresadoen kilojulios/mol. Para un aminoácido hidrofílico, el do solutosa travésde ellas.Entre éstasseincluyenlaspro-
procesoesexergónicoy por tanto tiene un Ad', negativo;para un teínastransportadoras, que facilitan el movimiento de nu-
aminoácido hidrofóbico, el procesoes endergónicoy el valor de
A', espositivo.(Paramás detalles,véaseProblemaT.l0).
trientes como azicares y aminoácidos a través de las
membranas,y proteínascanal que proporcionanvías de
pasohidrofílicasa travésde membranashidrofóbicas.En
mientos como la electroforesis con geles de poliacrilamida estacategoríatambiénseencuentranlasATPasas transpor-
y SDSy los análisisde hidropatía han sido útiles, como tadoras,queutilizan Ia energiadelAIP parabombeariones
tambiénlo han sido las técnicasde marcajecon isótopos a travésde las membranas,como veremosen más detalle
radiactivosy anticuerposfluorescentes de las que hablare- en el Capítulo8.
mosmásadelanteen estecapítulo.Sinembargo,en lastres Otras proteínasde membrana son receptores implica-
últimas décadasel estudiode las proteínasde membrana dosen el reconocimiento y mediaciónde los efectosde se-
ha sufrido una revolucióndebidoa lastécnicasde biología ñalesquímicasespecíficas que seunen a la superficiede la
molecular,especialmente por la secuenciación de DNA y célula.Lashormonas,neurotransmisores y sustanciasque
por las tecnologías de DNA recombinante. La secuencia- promuevenel crecimientoson ejemplosde señalesquími-
ción de DNA permitededucirla secuencia de aminoácidos casque interactúancon receptoresproteicosespecíficos si-
de una proteína,un prerrequisitopara el análisishidropá- tuadosen la membranaplasmáticade suscélulasdiana.En
tico que identificarálos segmentostransmembrana.Ade- Iamayoriade los casos, la unión de una hormonao de otra
más,la comparacióndé secuencias entreproteínasrevela, moléculaseñalal receptorapropiadode la superficiede la
con frecuencia,relacionesevolutivasy funcionalesque de membranadesencadena un tipo de respuestaintracelular,

L96 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
 para obtenerel efectodeseado;consideraremos estosme-
canismosde transducciónde la señalen el Capítulo 14.
Lasproteínasde membranatambién estánimplicadas
en la comunicaciónintercelular.Los ejemplosincluyen a
las proteínasque forman los conexones de las unionesgap
entre célulasanimales,y aquellasque ensamblanlosdes-
motúbulosde los plasmodesmos entre célulasvegetales.Es-
tas estructurassetratarán en el Capítulo 17,como proteí-
nas de membrana que median el reconocimiento y
adhesiónintercelular.
Las proteínas de membrana desempeñanun papel
principal,en la captacióny secreción de sustancias por en-
docitosisy exocitosis;en el marcaje,clasificacióny modifi-
cación de proteínasen el retículo endoplásmicoy en el
complejode Golgi;y en la captaciónde la luz, bien por el
ojo humano o por la planta de la semillasegúnemergedel
suelo.En resumen,lasproteínasdemembranasoncompo-
nentes vitales de varias estructuras,incluyendo las co-
nexionesentrela membranaplasmáticay la matriz extra-
celular situada en el exterior de la célula, los poros de
membranasexternastanto de mitocondriascomo de clo-
roplastos,y los poros de la envolturanuclear.Todosestos
temasseveránen capítulosposteriores.
Un grupo final de proteínasasociadasa la membrana
son aquéllascon papel estructural,que estabilizany dan
forma a la membranacelular.Los ejemplosincluyena las
proteínasespectrina, anquirinay banda4.I, proteínaspe-
riféricasde la membranadel eritrocito de lasqueya hemos
habladoanteriormente(véaseFigura7.20b).Existentetrá-
merosde espectrinad y P, @B)rlargosy finos,unidos a
moléculasde glicoforinapor la proteínabanda4.1y por fi-
lamentoscortosde actinay a proteínasbanda3 a travésde
anquirinay por otra protelnadenominadabanda4.2.(De
manerabastanteapropiadaanquirinaderivade la palabra
griegapara <anclar>.)De estaforma, la espectrinay sus
proteínasasociadasforman una red de citoesqueletoque
subyacea la membranaplasmáticay la sujeta.Estared ba-
sadaen la espectrinale da al glóbulorojo de la sangresu
forma bicóncavacaracterística (véaseFigura 7.20a)y le
permite a la célularesistir el estrésque se ejercesobresu
membranaal atravesarlos capilaresestrechosdel sistema
circulatorio.Lasproteínasquesonhomólogasestructural-
mentea la espectrina y lasproteínasasociadas a espectrina
seencuentranjusto por debajode Ia membranaplasmáti-
catambiénen otros muchostipos celulares,indicandoque
una red de citoesqueletode proteínasperiféricasde mem-
branasubyacea la membranaplasmáticade muchasclases
de célulasdiferentes.
La función de una proteínade membrananormalmen-
te sereflejaen el modo en el que la proteínaseasociaa la
bicapa lipídica. Por ejemplo, una proteína que funciona
solamenteen un lado de la membranaes probablemente
una proteínaperiféricao una proteína ancladaa lípidos.
Las enzimasunidas a membranaque catalizanreacciones
sólo en un lado de una membrana,tal como hacela enzi-
ma glucosafosfatasadel RE,estánen estacategoría.Por el
contrario,lastareasde transportarsolutoso de transmitir
señalesa travésde la membranarequierenclaramentepro-
teínastransmembrana.En el Capítulo 8, examinaremosel
papelde lasproteínastransmembrana en el transportede
membrana,y en el Capítulo 14,veremoscómo la trans-
duccióndeseñales estámediadapor receptores transmem-
brana que en el exterior de la membrana plasmáticase
unen a moléculasseñalizadotas, como las hormonasoue
generanseñalesen el interior de celular.
Lasproteínasde membfanaestánot¡entadas
as¡métricamentea travésde la bicapalipidica
Previamente en estecapítulo,hemosapuntadoquela ma-
yoríade los lípidosde membranasedistribuyenasimétri-
camenteentrelasdos monocapasde la bicapalipídica.La
mayoría de las proteínasde membranaexhibentambién
una orientaciónasimétricacon respectoa la bicapa.por
ejemplo,lasproteínasperiféricas, lasproteínasancladasa
lípidos,y las proteínasintegralesmonotípicasestán,por
definición,asociadas con una u otra delassuperficies de la
membrana(véaseFiglra 7.I9); unavezen su sitio, laspro-
teínasno sepuedenmovera travésde Ia membranade una
superficiea la otra.Lasproteínasintegralesde membrana
que cruzanla membranaestánincluidasen ambasmono-
capas,pero orientadasasimétricamente -es decir, lasre-
gionesde la moléculaproteicaque estánexpuestasen un
lado de la membranason estructuraly químicamentedife-
rentesde lasregionesde Ia protelnaexpuestas al otro lado
de la membrana-. Además,todas las moléculasde una
proteínadadaestánorientadassiempredela mismaforma
en la membrana.
Paradeterminarcómo se orientanlas proteínasen Ia
membrana,se han ideado experimentosque mediante
marcajeradiactivopermiten distinguir entreproteínasex-
puestasen Ia superficieinterna y externade vesículasde
membrana.Un enfoquede estetipo utiliza laenzimalacto-
peroxidasa(LP), que catalizaIa unión covalentedel yodo a
p-roteínas. Cuandola reacciónse realizaen presenciade
t"I, un isótoporadiactivo
del yodo,la LP marcalasproteí-
nas.Debidoa quela LP esdemasiadograndeparapasara
travésde lasmembranas, sólolasproteínasexpuestas en la
superficieexternade lasvesículasde membranaintactasse
marcan(Figura7.24a).Paramarcarsóloaquellasproteínas
que estánexpuestas en la superficiede la membranainter-
na,lasvesículas primero seexponena una soluciónhipo-
tónica (debaja fuerzaiónica) que lashagamáspermeables
a moléculasgrandes. En estascondiciones, la LP puedeen-
trar en las vesículas.Cuando las vesículasse transfieren
posteriormente a una soluciónisotónicaque contiene12sI
pero no LP externa,la enzimamarcalasproteínasexpues-
tassobrela superficieinterna de la membranade la vesícu-
la (Figura7.24byc). De estaforma,esposibledeterminar
si una proteínade membranaconcretaestáexpuestasólo
Proteínas la partenmosaicor
demembranas: delmodelo L97
Anexo

REvOTUCIONANDO EL ESTUDIO DE LAS PROTEÍNAS DE MEMBRANA:

EL IMPACTO DE LA BTOTOCÍA MOLECULAR
Lasproteínasde membranamedianuna extraordinaria
variedadde funcionescelularesy ademásson de gran interés
paralos biólogoscelulares.Sin embargo,sólo en los ultimos
años,el estudiode estasproteínasha empezadoa dar respuestas
y resultadosdefinitivos.Algunasde estasrespuestas procedende
la aplicaciónde lastécnicasbioquímicasa lasproteínasde
membrana.Algunasde estasaplicacionessedescribenen este
capítulo,incluyendola electroforesis en gel de poliacrilamida
con SDS,el an¡ílisishidropáticoy los métodospara marcar
proteínasde membranacon radiactividado con anticuerpos
fluorescentes (véaseFiguras7.22,7.23,7.24y 7.28
respectivamente). Paraestudiarproteínasde membrana,se
utilizan otros dos abordajesbioqulmicos,que son,el marcajede
afinidady la reconstituciónde membranas.
El marcajede afinidadutiliza moléculasradiactivasque se
unen a proteínasde membranaespecíficas debido a las
funcionesde esasproteínas.Por ejemplo,de un compuesto
denominadocitocalasinaB, sesabeque esun potenteinhibidor
del transportede glucosa.Además,esprobableque las
membranasexpuestasa citocalasinaB radiactivacontengan
radiactividadunida específicamente a la(s) proteína(s)
implicadasen el transportede glucosa.
La reconstitucíónde membranas implica la formación de
membranasartificialesa partir de componentesespecíficos
purificados.En esteexperimentolasproteínasseextraende las
membranascon solucionesdetergentes y seseparanen sus
componentesproteicosindividuales.En condicionesconocidas
lasproteínaspurificadassemezclan,con fosfolípidos,para
promoverla formación de vesículasde membrana,
denominadasliposomal Estasvesículasreconstituidasse
puedenevaluarpara comprobarsu capacidadpara realizar
funciones,que,sesabeo sesupone,estánmediadaspor
proteínasde membrana.
A pesarde los éxitoscon éstosy otros abordajessimilares,
los biólogosde membrana,a vecessebloqueanen susintentos
de aislar,purificar y estudiarlasproteínasde membrana.A
menudo,lastécnicasbioquímicasque funcionanmuy bien para
proteínassolubles,no son útilesparaproteínashidrofóbicas.Sin
embargo,en lastres últimas décadas,el estudiode lasproteínas
de membranaha sufrido una revolucióngraciasa lastécnicasde
biologíamolecular,especialmente graciasaIa secuenciación del
DNA y alas técnicasde DNA recombinante. Consideraremos
estastécnicasen detalleen los Capítulos18y 20,pero no
necesitamos esperarhastaentoncespara apreciarel enorme
impacto que la biologíamolecularha tenido en el estudiode las
membranasy de lasproteínasde membrana.En la Figura7A.1,
seresumenvariasaproximacionesal problemaque han
demostradoserespecialmente útiles.
Paratodos estosabordajes,ha sido vital el aislamientode un
gen o al menosde un fragmento,que codifiqueparauna
proteínade membranaespecífica(Figura7A.1,parte superior).
Con una moléculade DNA en la mano,la primera prioridad del
biólogo moleculares,casisiempre,determinarsu secuenciade
nucleótidosO. De hecho,Ia secuenciación del DNA esuno de los
triunfos de la biologíamolecular;ahoraesmucho mássencillo
determinarla secuenciade nucleótidosde una moléculade
DNA que la secuenciade aminoácidosde la proteínaa la que
codifica.Además,Ia mayor parte del procedimientode
secuenciación sellevaa acabode manerarápiday automática
por lasmáquinasde secuenciación de DNA. Unavez que seha
secuenciadoel DNA para una proteínaen particular,sedebe
deducir,usandoel códigogenéticoque comparacadaposible
secuenciade tres nucleótidoscon un aminoácidoen particular
(véaseFigura 21.8),la secuencia deaminoácidos predecible
o
probablede esaproteína@. La secuenciade aminoácidosse
puedesometeral anóIisishidropático (véaseFigwa7.23)parc
identificar en la proteína,los segmentostransmembranamás
probables@.
Conocerla secuenciade aminoácidos,tambiénle permite al
investigadorprepararpéptidossintéticosque correspondana
segmentosespecíficos de la proteína@. Los anticuerpos
producidoscontra estospéptidossepuedenmarcar
radiactivamentey usarsepara determiaarqué segmentosestán
expuestosa cadalado de la membrana.La información
conseguidapor estavía, combinadacon los datosde la
hidropatía,a menudo proporcionanpruebasconvincentessobre
la estructuramásprobablede una proteínay su orientaciónen
la membranay tambiénposiblementesobresu mecanismode
acción.Por ejemplo,Ia estructurade la proteínareguladorade
la conductanciatransmembranade la fibrosisquística(CFTR)
que estádañadaen laspersonascon fibrosisqulstica,se
determinóde estamanera(véaseAnexo 8B).
Otra técnicamolecularpotente,denominadamutagénesis
sitio-específica,seutiliza para examinarel efectode cambios

Figura7A-1 (Páglnaopuesta)Aplicación de lastécnicasde biolo$amolecularparael estudiode lasploteinasde membrana.La mayoríade

los abordajesmolecularescomienzancon un fragmentoaisladode DNA que correspondeal gen o a una parte del gende una
proteínay que seobtienepor los métodosque setrataránen el Capítulo 20.O La secuenciade nucleótidosdel DNA sedetermina
normalmentemedianteun secuenciadorautomáticorápido.@ La secuenciade aminoácidosde la protelnasededucefácilmente
utilizando el códigogenético.La secuenciadeducidaseutiliza en @ el análisisde hidropatlapara determinarla frecuenciay
localizaciónde posibles@ segmentostransmembrana.La mutagénesis @ sitio-específicaseutiliza parahacercambiosespecíficos en
la secuenciade DNA y por tanto, en Ia secuenciade aminoácidosde la proteína;laspropiedadesde la proteínamutanteresultantese
estudiaránpara identificar aminoácidoso segmentosde la proteínaimportantesfuncionalmente.@ El DNA aisladosepuedeutilizar
también como sondapara identificar secuencias de DNA relacionadasen el mismo o con otros genomas.Presumiblemente, tales
DNAs correspondena genesde proteínasque estánrelacionadasestructuralmenteo quizástambién funcionaly evolutivamente.

198 7 Membranas:
Capítulo química
estructura, y función
 Fragmentode DNAI
o delgenaislado
I

! Deducciónde la secuencia Usooel

de aminoácidosde la !
DNA como
prolerna sonoa
Tyr

Glr 3ln
Ala Thr
Ile Val Ala
\sr

Separación
de los híbridos
y recuperación
de las hebras
de DNA
relac¡onadas

'k?,
50 100 150 20a 250
Númerode aminoácido Ant¡cuerpos
Proteínainsertadaen la
membranacelularin vivo
! Determinación
de la secuencia
de nucleótidos
del DNA

Información
sobre
la secuencia
Repetición
del proceso I
para varios
I compa,acion
aminoácidos desecuencias
de la proteína I

ldentificación
de la posibleestructuray de la ldentificaciónde los aminoácidos
I
Identificación
de familias
orientaciónde las proteínasen la membrana importantesf uncionalmente de proteínashomólogas

Proteínas la paftenmosaico,
de membranas: delmodelo t99
específicos realizadosen la secuenciade aminoácidosde una
proteína@. La secuenciade DNA que codificaparaun
segmentoespecíficode una proteína,sepuedealterar
Cambiandonucleótidosconcretos.El mRNA que setranscribea
partir de un DNA mutado seinyectaen célulasvivas (en células
de mamíferoen cultivo o en ovocitosde anfibios).Lascélulas
utilizan el mRNA para dirigir la síntesisde una proteína
mutada,de estaforma, sedeterminarácon facilidadsus
propiedadesfuncionales.Asimismo,seidentificaránlos
aminoácidoscon importanciafuncional.
Otra forma de utilizar genesaisladoso segmentosde genes
escomo sondasde DNA, utilizadaspara aislarotrassecuencias
de DNA similaresa esasonda@. El DNA que seidentificade
estaforma, probablementecodificaproteínasque son
estructuralmentesimilaresa la proteínaparala que codificala
sondade DNA. Esprobableque talesproteínasestén
relacionadasentresí,tanto por su origen evolutivocomo,
posiblemente,por su mecanismode acción.
Con Ia llegadade técnicaspara secuenciargenomas
completos,de lasque trataremosen el Capítulo 18,los
investigadores puedenbuscargenomascompletospara
secuencias nucleotídicassimilaresa otras,ya conocidas,que
codificanparaprotelnasespecíficas. De estaforma, sepueden
identificar gruposo familias de proteínasrelacionadas. El uso de
(a)
Lactoperox¡dasa
----.---..------
12sI
Bicapa
li^i¡^
ilprua
(b)
Lactoperoxidasa
lsotónico
125I
(c)
Figuta7.24 Un métodopara marcar proteínasexpuestasen una o en
ambassuperf¡ciesde la membranade unavesícula, (a) Cuandola
12sI
lactoperoxidasa(LP) y el estánpresentesen solución en el
exterior de la membrana de la vesícula,laLP catalizael marcaje de
las proteínas de la superficie externa de la membrana (es decir,
proteínasA y B). Si lasvesículasde membrana(b) seincuban
primero en un medio hipotónico para hacerlaspermeablesa 1aLP y
(c) setransfierena una soluciónisotónicaque contiene"'I pero no
LP externa,las proteínas expuestasen la superficie interna de Ia
membrana (es decir, proteínas B y C) semarcan.
200 7 Membranas:
Capitulo química
estructura, y función
basesde datoscomputerizadas ha sido extraordinariamente
valiosopara sugerirel papelque desempeñan lasproteínas,
basándoseen sussecuencias génicas.
A partir de estudiosque sebasanen estastécnicasy en otras,
ahorasabemosque lascélulasdel cuerpohumano necesitan
másde 30 familiasde proteínasde membranaparafacilitar el
transportede una granvariedadde solutosque semuevena
travésde lasmembranas.Además,lasfamilias,a menudo,
contienenmuchasproteínasdiferentes,aunquerelacionadas.
Incluso,un único miembro de una de estasfamiliaspuedeestar
presenteen variedadde formasque difieren en propiedades
como,tiempo de expresiónduranteel desarrollo,distribución
tisular o localizaciónen la célula.Luego,quizás,no debamos
sorprendernos,al saberque los genesque conocemosque
codificanpara proteínasde transporte¡representan
aproximadamenteel 10o/o del genomahumano!
La mayoriade estosabordajesmolecularesson indirectos,
en el sehtidode que permiten a los científicosdeducir
propiedadesy funcionesde lasproteínasmás que probarlas
directamente.Sin embargo,estastécnicasson armaspotentes
que ya han tenido un gran impacto sobrenuestro
conocimientode lasproteínasde membrana,Casicon certeza,
continuaránrevolucionandoel estudiode las membranasy de
susproteínas.
sobre Ia superficie interna de la membrana, sólo sobre la
superficie externa o en ambas superficies.
En un abordaje similar, la enzima galactosa oxidasa
(GO) se utiliza para marcar cadenas laterales de carbohi-
dratos que están ancladasa proteínas o lípidos de mem-
brana. Las vesículasse tratan primero con GO que oxida
los residuosde galactosade las cadenaslateralesde los car-
bohidratos. Las vesículasse exponen, entonces,a borohi-
drido tritiado (3H-BH4) que reduce los grupos de la galac-
tosa, introduciendo en el proceso, átomos de hidrógeno
marcados.Para explorar estastécnicasen profundidad, in-
tente resolverlos Problemas 7.11 y 7.12 que están al final
del capítulo.
Se puede determinar Ia orientación de una proteína
dentro de una membrana utilizando anticuerpos diseña-
dos para reconocer partes específicasde una proteína. Las
célulasintactas (u orgánulos) se exponen a estosanticuer-
pos y posteriormente se determina si los anticuerpos se
han unido a la membrana. Si lo han hecho, se puede con-
cluir que el sitio de unión del anticuerp o, o epitopo,está en
la superficieexternade la membrana. La orientación de las
proteínas de membrana se crea cuando la proteína se in-
serta en ésta durante la biogénesisde la membrana, y se
mantiene debido a las restriccionestermodinámicas que
impiden la difusión transversal.El resultado es una mem-
brana en donde las moléculas de lípidos y proteínas pre-
sentesen cada lado de la membrana son diferentesde los
del otro lado. Como resultado de todo esto,las membranas
son asimétricas funcionalmente, en el sentido de que las
H-Ñ oH
reaccionesy los procesos que ocurren en un lado de la
membrana son, en general, bastante diferentes de las acti- fr-.r,-8-l-6_o@o@
vidades que se producen en el otro lado. - n
t,
-/u ^ ^ ^ ^ , ^ovil
^rPor ^ ; ñ ^ro
Grupocarbohidrato
K
Muchas proteínas de membranaestán glicosiladas X (a) Unidoen N (al grupo aminode la asparagina)
1..
Además de lípidos y proteínas, la mayoría de las membra-
nas contienen cantidades, pequeñas pero significativas de \
carbohidratos. La membrana plasmática del eritrocito hu- a,/
mano, por ejemplo, contiene alrededor de| 52o/ode proteí-
nas,40o/ode lípidos y un 8olode carbohidratos en peso.Los
9
glicolípidos que hemos comentado previamente represen- H-N
tan una pequeña porción de los carbohidratos de mem- \/-
branaya que la mayoría están en forma de glicoproteínas, óH-+r,-o-O"-@-o@
proteínasde membrana con cadenasde carbohidratosuni- O: C Serina
das covalentementea cadenaslateralesde aminoácidos. ,l
La adición de una cadenalateral hidrocarbonada a una
proteína se denomina glicosilación. Como muestra la Fi-
9
gura7.25,la glicosilaciónimplica el enlacedel carbohidra-
H-N CH.
to al átomo de nitrógeno de un grupo amino (N-glicosila-
\ l"
ción) o al átomo de oxígeno de un grupo hidroxilo CH-CH
(O-glicosilación).Loscarbohidratos ligados a N están an-
cladosal grupo amino de la cadenalateral de una asparagi-
o7J_*".):+"G"@
na (Figura 7.25a) mientras que los carbohidratos ligados a
O están normalmente unidos a los grupos hidroxilo de , o r U n i d oe n o ( a lg r u p oh i d r o x i d
l oe s e r i n a
o treonina)
serina o de treonina (Figura 7.25b). En algunos casoslos
carbohidratos ligados a O están unidos a un grupo hidro- q
\

xilo de hidroxilisina o de hidroxiprolina, que son derivados

de los aminoácidoslisina y prolina, respectivamente(Figu-
ra7.25c).
6
Las cadenasde carbohidratos unidas a las glicoproteí- H-N CH,
nas pueden ser linealeso ramificadasy varían enlongitud \ l-
^u-^u -^u -cH
de 2 a 60 residuos de azucar. Los azúcaresmás utilizados
i" 'o@o@o@
habitualmente para construir estascadenasson galactosa, O:C Hidroxilisina
mznosA,N - acetilgluco samina y ácido siálico(Figura 7.26a). 12
La Figura 7.26b muestra la cadena de carbohidratos pre-
\
sente en la proteína glicoforina, localizada en la membrana
plasmática de los eritrocitos. Esta proteína integral de
membrana tiene 16 cadenas de carbohidratos unidas al N-cf,
(extremo N-terminal) de la molécula que se orienta hacia
J,)óH-o_@"-@o@
el exterior de la membrana del eritrocitol de estas16 cade-
-7"
/ -c'tr^
nas, 1 estáligada a un grupo N y 15 están ligadasa grupos " Hidroxiprolina
O. Fljeseque ambas ramas de Ia cadenade carbohidratos
(c) Unidoen O (al grupo hidroxilode hidroxilisina
terminan en un ácido siálico cargado negativamente.De-
o hidroxiprolina)
bido a estosgrupos aniónicos en su superficie,los eritroci-
tos se repelen,reduciendo de estaforma la viscosidadde la Figura7.25 Glicosilaciónen N y en 0 de las proteinasde membrana.
Los grupos carbohidrato estánunidos a las proteínas de membrana
sangre.
de dos formas distintas. En cada casoel aminoácido que se muestra
Las glicoproteínaspredominan en las membranas plas- esparte de la estructura primaria de una proteína de membrana.
máticas,donde desempeñanun papel importante en el re- (a) Los carbohidratos unidos en N estánancladosal grupo amino
conocimiento intercelular. Consecuentescon este papel, de Ia cadenalateral de la asparaginamediante enlacesamida.
las glicoproteínas están siempre situadas de tal forma que (b) Los carbohidratos unidos en O estánunidos al grupo hidrorilo
de las cadenaslateralesde serina o de treonina mediante enlaces
los grupos carbohidrato sobresalende la superficieexterna
éster.(c) en algunos casos,los carbohidratos unidos en O están
de la membrana celular. Esta disposición que contribuye a ligados al grupo hidroxilo de los aminoácidos modificados
la asimetría de la membrana, se ha demostrado exoeri- hidroxilisina e hidroxiprolina.

la oarte(mosaico,
demembranas:
Proteínas delmodelo 20r
 C H3
I

I
HO HN
I I
c
I
r
il
n
R= H-C-OH

H-C-OH
I cH20H
NH
p-D-galactosa p-o-manosa I Acido siálico
(Gal) (Man) (siA)
II
cH^
N-acetil-P-o-glucosamina
/ l l l ¡ l \ l Av¡ \ r v /
\vrvr

(a) Azúcaresencontradoshabitualmenteen las glicoproteínas

G.
\-
h.

H_N
O
\
-.',-of"]"-
G.
O Hgura 7.26 E¡emplosde caÉohldratospresentesen las
glicopfote¡nas. (a) Los cuatro carbohidratos más comunes

G.

?) de las glicoproteínasson galactosa(Gal), manosa(Man),

N-acetilglucosamina(GlcNAc) y ácido siálico (SiA). (b) Por
ejemplo, 15 de las 16 cadenasde carbohidratos de las

O- glicoforinas estánunidas al aminoácido serina en la porción

hidrofílica de la proteína de la superficie de la membrana
plasmáticadel eritrocito. Cada una de estascadenas
Grupocarbohidrato carbohidratadasconsta de t¡es unidades de Gal y dos unidades
de GlcNAc, dos de Man y otras dos de SiA. Los dos grupos
(b) El grupocarbohidrato
de la glicoforina terminales de ácido siálico estáncargadosnegativamente.

mentalmenteutilizando lectinas,proteínasde plantasque una célulaepitelialintestinal.Losgruposcarbohidratode la

seunen específica y fuertementea azlcares.Por ejemplo,la
aglutinina del germende trigo, una lectina encontradaen
los embrionesdel trigo seune muy específicamente a oli-
gosacáridos que terminanen N-acetilglucosamina, mien-
tras que la concanavalina A, una lectina de las habichuelas
Canavalia ensiformis,reconocelos grupos de manosade
posicionesinternas.Los investigadores visualizanestaslec-
tinasuniéndolasaferritina, una proteínaque contienehie-
rro y que al microscopioelectrónicoseobservacomo una
mancha electrón-densa.Cuando tales lectinas unidas a
ferritina se utilizan como sondaspara localizar cadenas
oligosacáridas de glicoproteínasde membrana,la unión se
realizasiempre,y de forma específica, por la superficieex-
terna de la membranaplasmática.
En muchascélulasanimales,los gruposcarbohidratode
lasglicoproteínas y de los glicolípidosde membranasobre-
salende la superficiecelulary forman una cubiertade su-
perficiedenominadaglicocálix (que significa<cubiertade
azttcar>>).
La Figura7.27muestraelglicocálixprominentede
superficiecelularconstituyenzonasde reconocimientotan-
to paralos receptores de membranaimplicadosen la unión
de moléculasde señaliz¿glón extracelular,
como en reaccio-
nes antígeno-anticuerpo o como en procesosde adhesión
intercelularparala formaciónde tejidos.
Lasploteínasde memblanavatíanen cuantoa su mov¡l¡dad
Preüamenteen el capítulohemoscomentadoquelasmolé-
culas de lípidos pueden difundir lateralmentedentro del
planode la membrana(véaseEigara 7.11).Ahorapodemos
hacernosla mismapreguntacon respectoa lasproteínasde
membrana:¿Semuevenlibrementeenla membrana?De he-
cho,lasproteínasdela membrana,sonmuchomásvariables
que los lípidosen cuantoa su movilidad.Algunasproteínas
pareceque semuevenlibrementedentrode la bicapalipídi-
ca,mientrasqueotrasestánconstreñidas, a menudoporque
estánancladasa complejosproteicosadyacentes localizados
a un lado u otro de la membrana.

202 Gapitulo
7 Membranas: química
estructura, y función
 Mlcrovellosidades Glicocálix
Figwa7.27 Glicocálix de unacélulaepitellalintestinpl-;--Esta
micrografiaelectrónica de una célulaepitelialintestinalmuestralas
microvellosidades (proyecciones conforma de dedoimplicadasen
procesos de absorción)y el glicocrílixsobrela superficiecelular.EI
glicocálixen estacélulatieneun espesor de I 50 nm y consiste
principalmente en cadenas oligosacáridasde entre1,2-1,5nm de
diámetro(MET).
Evidencias experimentales
dela movilidadptoteica. Los expe-
de
rimentos fusión celularcomo los que seresumenen la Fi-
g'sra 7.28 aportan evidenciasparticularmente convincen-
tes con respectoa la movilidad, de por lo menos,algunas
proteínasde membrana.En estosestudiosDavid Frye y
Michael Edidin aprovecharondos técnicaspotentes,una
que lespermitía fusionarcélulasde dos especies diferentes
y otra quelespermitíamarcaro etiquetar,lassuperficiesde
las célulascon marcadoresfluorescentes. Su abordajecon-
sistíaen fusionarcélulashumanasy de ratón para identifi-
car lasproteínasespecíficasde cadaespecieen la superficie
de las célulasfusionadas.Paraello. semarcaroncon anti-
cuerposfluorescentes-anticuerpos que sehabíanunido
con dos clasesdiferentesde marcadoresflu6¡ss6s¡fs5-.
Posteriormente.las célulasfusionadasse observaroncon
un microscopiode fluorescencia, paraver lo quelespasaba
a lasproteínasde la membranaplasmáticaque habíanser-
vido como marcadoresde los dos tipos diferentesde célu-
lasparentales.
Los anticuerposnecesariospara estetipo de experi-
mento se prepararoninyectandopequeñascantidadesde
proteínasde membranapurificadas,humanaso de ratón, a
diferentesanimalesde experimentación.(Losconejosy las
cabrassonlos queseusannormalmenteparaestepropósi-
to.) Losanimalesrespondían inmunológicamente a la pro-
teína extrañaproduciendoanticuerposque reaccionanes-
peclficamentecon lasproteínasde membranautilizadasen
lasinyecciones. Despuésde aislarel anticuerpode la sangre
del animal,seune covalentemente a colorantesfluorescen-
tes de forma que los complejosprotelna/anticuerpo/colo-
rante puedanservisualizadoscon un microscopio.

Tratam¡entocon Exposición
el virusSendai a ant¡cuerpos
fluorescentes Poco tiempo Tiempoprolongado
(5 minutos) (40 minutos)
l/.ñ\(fi)*
@"@"@ l,
^@@
+
l'
Célulahumana

Cerurashumanas y oe Cerurahrorrda Prolernas

oe LasproteÍnasse Proteínas
I I prooucroapor ! O a tos
ratonconantrcuerpos memorana mezctan completamente
para
específicos unafusión marcadascon pocosm¡nutos mezcladas
ratón(m)y inducidaporun anticuerpos a los 40 m¡nutos
anticuerpos vlrus fluorescentes
para
específicos
humano (h)

Figwa 7.28 Demostraciónde la movilidadde las proteinasde membtanapot fusión celular. La movilidad de las proteínas de membrana se
puede demostrar de manera experimental por la mezcla de proteínas de membrana que seproduce cuando célulasde dos especiesdiferentes
(ratón y humano) sefusionan y las proteínas de membrana semarcan con dos juegos de anticuerpos fluorescentes,uno específicopara las
proteínas de la membrana de ratón y ligado a un colorante verde y el otro específicopara las protelnas de la membrana humana y ligadasa
un colorante rojo. Las proteínas empiezan a mezclarseen pocos minutos y se mezclancasicompletamente a los 40 minutos.

Proteínas la parte(mosaicor
demembranas: delmodelo 203
 Frye y Edidin marcaron las proteínasde membrana
plasmáticahumanay de ratón con anticuerposque tenían
unidos marcadoresde dos coloresdiferentes,de tal forma
quelos dostiposde proteínassedistinguiríanpor el color
de su fluorescencia. Lascélulasde ratón reaccionaroncon
anticuerposespecíficos para ratón unidos a un colorante
fluorescenteverdedenominadofluoresceína,mientrasque
las célulashumanasreaccionaron con anticuerposespecí-
ficos para humanos unidos a un colorante fluorescente
r ojo, rodamina(Figura 7.28).
Parafusionarlas célulashumanasy de ratón, las trata-
ron con el virus Sendai,un agenteconocidopor su capaci-
dad parafusionarlascélulaseucariotas,inclusoaquéllasde
especiesdiferentes.Las célulasfusionadasse expusieron
entoncesa los anticuerposfluorescentes rojosyverdesy se
observaronal microscopio de fluorescencia.Cuando las
célulasfusionadas seexpusieronpor primeraveza los an-
ticuerpos,las proteínasde la membranadel ratón con el
colorantefluorescenteverde se localizaronen una de las
dos mitadesde Ia superficiede la célulahíbrida,mientras
que las proteínasde membranacon el colorantefluores-
centerojo derivadasde las célulashumanassemantuvie-
ron restringidasa la otra mitad de la superficiecelular
(véaseFigura 7.28).Sin embargo,a los pocosminutos,las
proteínasde lasdos célulasparentales empezarona entre-
mezclarse, y a los 40 minutos,las regionesseparadas con
fluorescencia verdey roja estabancompletamenté?hbre-
mezcladas. Si sereducíala fluidezde la membrana.dismi-
nuyendola temperaturapor debajode la temperaturade
transiciónde la bicapalipídica,seimpedíala mezcla.Por
eso,Fryey Edidin concluyeronque la mezclade proteínas
fluorescentes habíasido causadapor la difusión lateral de
lasproteínashumanasy de ratón a travésde la bicapalipí-
dicafluida de la membranaplasmática.Sin embargo,com-
paradascon la mayoría de los lípidos de membrana,las
proteínasde membranadifunden mucho máslentamente
a travésde la bicapalipídica.
Si las proteínasfueran completamentelibres para di-
fundir dentro del plano de la membrana,entoncesdebe-
rían estardistribuidasal azar.La microscopíaelectrónica
aplicadaa la criofractura, que directamentevisualizalas
proteínasincluidas en la bicapa,apoyala idea de que al
menosalgunasproteínasde membrana,secomportande
estaforma. Cuandoseexaminanmicrografíasde criofrac-
turas de membranasplasmáticas,las partículasproteicas
incluidas en ella suelen estar,a menudo, distribuidas al
azar.Tálesevidenciascon respectoa la movilidad de las
proteínasno se restringena la membranaplasmática.
Támbiénseha descubiertoque las partículasproteicasde
la membranamitocondrialinternaestánordenadasa\ azar
(Figura7.29a).Siseexponenvesículas de membranamito-
condrial aisladasa un potencialeléctrico,las partículas
proteicasquetengancarganetanegativa, semoveránhacia
uno de los extremosde la vesícula.Si el potencialeléctrico
seelimina,laspartículassedistribuyenotra vezal azar,in-
dicandoquetodasestasproteínassonlibresde moverseen

(a) ' ---' (b)

ozt'^ 0,2 ptm

Figwa 7.29 Evidenciade la movilidadde las ptoteinasde membrana. (a) Micrograffa de criofractura que muestra la distribución aI azarde
partículas proteícasen vesículaspreparadasa partir de la membrana mitocondrial interna. (b) La exposición de las vesículasa un campo
eléctrico causaque las partículas de membrana migren a un extremo de la vesícula(extremo superior derechade la micrografía). Si las
proteínas de membrana no fueran móviles, estemovimiento de las protelnas hacia un lado de la vesículano sucedería).

204 Capitulo
7 Membranas: química
estructura, y función
la bicapalipídica.Volveremosa estaevidenciaen el Capí-
tulo 10,dondeaprenderemos quela transferenciade elec-
tronesen la membranamitocondrialinternadependede
lascolisionesal azarqueseproducenentrecomplejosmó-
vilesde proteínasde membrana.
Evidencia exper¡mental de movilidadrestr¡ngida,Aunquese
ha demostradoque muchostipos de proteínasde mem-
branadifundena travésde la bicapalipídica,susvelocida-
desde movimientovarían.Un abordajeutilizadoamplia-
menteparacuantificarlasvelocidada lasquedifundenlas
proteínasde membranaesla recuperaciónde fluorescen-
cia despuésde un foto-blanqueamiento, técnicaque ya
hemos tratado en el contexto de la movilidad lipídica
(véase Figtra 7.II) . Paracalcularla velocidadde difusión
de distintostipos de moléculasfluorescentes lipídicasy
proteícas,sepuedeutilizarla velocidada la quesemueven
haciael áreablanqueada, moléculasde membranano de-
coloradasprocedentes de partesadyacentes alazonafra-
tada.
Lasproteínasde Ia membranason mucho másvaria-
bles en su velocidadde difusión que los lípidos. Existen
unaspocasproteínasde membranaque difundencasitan
rápidamentecomo los lípidos,pero la mayoríadifunden
máslentamentede lo que cabríaesperarsi fuesencomple-
tamentelibresparamoverseen la bicapalipídica.Además,
la difusión de muchasproteínasde membrandEsfiírestrin-
gidaa un árealimitada,indicandoque,por lo menos,algu-
nasmembranasconstande una seriede dominiosdemem-
branaseparados, quedifierenen sucomposiciónproteicay
por lo tanto en susfunciones.Por ejemplo,lascélulasque
limitan su intestino delgadotienen proteínasde membra-
na que transportansolutostalescomo azicaresy aminoá-
cidos,que sacandel intestinoy los introducenen el cuer-
po. Estasproteínasde transporteestánrestringidasen el
ladodela célulaen dondeserequierecadauno delostipos
de transportecorrespondiente (véaseFigura7.22).Lascé-
lulas en lasque lasproteínasde membranaestánrestringi-
dasa una parteespecífica de la membranacelularsedeno-
minan célulaspolarizadas.
Mecanismos para restringirla movilidadde las proteinas.
Existenvarios mecanismosdiferentesresponsablesde la
restricciónde la movilidadde lasproteínasy por tanto de
la polarizacióncelular.En algunoscasos,las proteínasde
membranaseagregandentro de la membranaformando
complejosgrandesquesemuevenperezosamente, si esque
lo hacen.En otros casos,las proteínasde membranafor-
man estructuras quesetransformanen barrerasqueimpi-
den la difusiónde otrasproteínasde membrana,creando
de este modo, dominios de membranaespecíficos; las
unionesestrechas que secomentaránen el Capítulo17son
un ejemplo.Sinembargo,el impedimentomáshabitualen
la movilidadde lasproteínasde membrana,vieneimpues-
to por la unión o anclajede esasproteínasa estructurasad-
yacentes localizadas
a un lado u otro de Ia membrana.Por
ejemplo,muchasprotelnasde Ia membranaplasmáticaes-
tán ancladaso bien a elementosdel citoesqueleto de la su-
perficieinternadela membranao bien a estructuras extra-
celularestales como la matriz extracelularde las células
animales.Comentaremosambosmecanismosde anclaje
en el Capítulo17.

Lascélulasnecesitanmembranasparade- Ia variedadde membranasreveladapor la esterolesson también componentes im-

finir y compartimentalizar los espacios,
parafacilitary regularel flujo de materia-
les,para detectarseñalesexternasy para
mediar lasinteraccionesentre las células.
Nuestro conocimiento actual de la es-
tructura de la membranarepresentala
culminación de más de un siglo de estu-
dios,que empezócon el reconocimiento
de que los lípidos son un componente
importante de la membrana y que fue
avanzandoprogresivamente desdela idea
de una monocapalipídica a una bicapa
fosfolipídica.Una vez que se reconoció
que las proteínaseran otro componente
importante, Davsony Danielli propusie-
ron su modelode <sándwich> en dondeIa
bicapalipídicaestabarodeadaen los dos
ladospor capasde proteínas. Estemodelo
estimuló las investigaciones y se aplicó a
microscopíaelectrónica.Sin embargo,a
medidaque las membranasy las proteí-
nasdemembranaseexaminaronconma-
vor detalle.el modelo del <sandwich>fue
cadavez más cuestionadoy finalmente
fue desacreditado.
En su lugarsurgióel modelodel mo-
saicofluido de Singery Nicholsonque en
la actualidades la descripciónaceptada
universalmentesobre la estructurade ia
membrana.De acuerdocon estemodelo,
proteínascon diferenteafinidadpor el in-
terior hidrofóbico de la membranaflotan
en y sobreuna bicapalipídica fluida. La
mayoriade lasmembranasincluyenentre
susprincipaleslípidos fosfolípidos(tanto
fosfoglicéridoscomo fosfoesfingolípidos)
y glicolípidos tanto cerebrósidoscomo
gangliósidos. En lascélulaseucariotas,los
portantes de la membrana; entre éstosse
incluye el colesterol en las células anima-
les y varios fitoesteroles relacionados con
él en las células vegetales.Los esterolesno
se encuentran en las membranas de los
procariotas, pero al menos algunas célu-
las bacterianas contienen algunos com-
puestos parecidos denominados hopa-
noides.
En términos de su asociación con Ia
bicapa lipídica, las proteínas de membra-
na se clasifican en integrales, periféricas o
ancladasa lípidos. Las proteínas integra-
les de membrana tienen uno o más seg-
mentos cortos con predominio de ami-
noácidos hidrofóbicos que anclan las
proteínas a la membrana. En la mayoría
de los casos,éstos son segmentostrans-
membrana, de tal manera que porciones

Perspectiva 205
de Ia proteínaestaránexpuestasa ambos
lados. La mayoría de estos segmentos
transmembranason secuencias en a-héli-
cede entre20y 30 aminoácidos predomi-
nantementehidrofobicos. Las oroteínas
periféricasde membranason hidrofilicas
y se mantienen en la superficie de la
membrana.Lasproteínasancladasa lípi-
dos son tambiénde naturalezahidrofílica
pero están unidas covalentementea la
membranapor cualquierade los diferen-
tes anclajeslipídicos que estánincluidos
en la bicapalipídica.
La mayoriade los fosfolípidosy pro-
teínas de la membrana son libres para
moverseen el plano de la membranasi no
estánespecíficamente ancladosa estruc-
turas de la superficieinterna o externade
la membrana.De manerageneral,la difu-
sión transversalo <flip-flop>entremono-
capas,no esposiblepara los fosfolípidos
excepto cuando está catalizadapor enzi-
mas denominadastranslocadoresfosfoli-
pídicos o flipasas.El resultadoes que la
mayoria de las membranasse caracteri-
zan por presentaruna distribución asi-
métricade lípidosentrelasdos monoca-
pas y una orientaciónasimétricade las
proteínasen las membranas,de manera
que los dos lados de la membranason
distintosestructuraly funcionalmente.
Las proteínasde membranafuncio-
nan como enzimas,transportadoresde
electrones,moléculasde transportey re-
ceptoresde señalesquímicascomo neu-
rotransmisores y hormonas.Las proteí-
nas de membrana también estabilizany
dan forma a la membranay median en la
comunicaciónintercelulary la adhesión
intercelular. Muchas proteínas de Ia
membrana plasmática son glicoproteí-
nas,con cadenaslateralesde carbohidra-
tosquesobresalen de la membranapor el
lado externo,en donde desempeñanun
papel importante como marcadoresde
reconocimientoen la superficiecelular.
Con el conocimientode Ia estructura
y función de Ia membranaque hemosad-
quirido en estecapítulo,ya estamospre-
paradospara explorar los mecanismos
por los cualessolutosy señales
semueven
a travésde lasmembranas, Paraestadis-
cusiónrecogemos nuestrasmembranasy
pasamosal Capítulo8.

Problemas
Losproblemas
demayor
dificultad
están conun ..
marcados paramejorarnuestroconocimientosobrela estructurade la
7,1, Función de las membranas.Especifiquea cuái de las membrana.Expliqueel significadode cadauna de ellas,e
cincofuncionesgenerales de la membrana(barrerade indiqueen quédécadadel cronogramaquesemuestraen la
permeabilidad,localizacióny función, regulacióndel Figura7.3esmásprobableque serealizase esaobservación.
transporte,detecciónde señales,o comunicacióncelular)hace (a) Cuandoseobservauna membranaal microscooio
alusióncadauna de lassiguientesaseveraciones. electrónicolasdoslíneasfinasy electrodensas tlenenun
/--
(a) Cuandolascélulassedesorganizan y sefraccionan'en espesor de aproximadamente 2 nm, pero con frecuencia
sus
componentessubcelulares, Ia enzimacitocromo P-450se tienenun aspectoclaramente distinto.
recuperacon Ia fraccióndel retículoendoplasmático. (b) La eti-lureapenetramucho másfácilmenteen una
(b) Lascélulasde un organismomulticelularportan en su membranaque la urea,y la dietilureapenetratodavíacon
superficieexternaglicoproteínasespecíficas mayor facilidad.
de tejido que
sonresponsables de la adhesiónintercelular. (c) La adicciónde fosfolipasaa una célulaviva causauna
(c) El interior de una membranaestáintegrado rápida digestiónde lasbicapaslipídicasde lasmembranas,
principalmente por lasporcioneshidrofóbicasde los lo quesugierequela enzimatieneacceso a los fosfolípidos
fosfolípidosy de lasproteínasanfipáticas. de la membrana.
(d) Losfotosistemas (d) Cuandosesometenbicapaslipídicasartificialesa un
I y II estánincluidosen la membranadel
tilacoidedel cloroplasto. análisiscon criofractura,no seobservanpartículasen
ningunacara.
(e) Todala fosfatasaácidade una célulade mamíferose
(e) La resistividad eléctricade lasbicapaslipídicasartificiales
encuentraen loslisosomas.
esvariosórdenesde magnitudmayorquela de las
(0 La membranade una célulade la níz de una plantatiene
membranasreales.
una bomba de ionesque intercambiafosfatohaciael
(0 Algunasproteínasde membranaseextraencon facilidad
interior celularpor bicarbonatoque saleal exterior.
con NaCl lM, mientrasqueotrasrequierenel usode un
(g) La membranamitocondrial interna contieneuna proteína
solventeorgánicoo de un detergente.
transportadorade AIP y ADP que acoplael movimiento
(g) Cuandolashaiobacteriascrecenen ausenciade oxígeno
del AIP haciael exteriorcon el movimiento del ADP hacia
el interior. producenun pigmentopúrpura que seincluyeen su
membranaplasmáticay que tienela capacidadde bombear
(h) La insulinano entraen la céluladiana,en vezde eso,seune a
protoneshaciael exteriorcelularcuandoseilumina. Si las
un receptorde membranaespecífico situadoen Ia superficie membranaspúrpura seaíslan,serealizauna criofracturay
externade ésta,activandoasía la enzimaadenilatociclasa seobservanal microscopioelectrónicoseencuentran
que estásituadaen la superficieinternade la membrana.
manchasde partículascristalinas.
(i) Lascélulasadyacentes de plantasintercambiancon 7,3 Volver a Gorter y Grendel.Lasconclusionesclásicasde
frecuenciacomponentescitoplasmáticos a travésde canales, Gorter y Grendelde que la membranaplasmáticadel eritrocito
denominadosplasmodesmos, quesurcanlasmembranas. humano consistíaen una bicapalipídica sebasaronen las
7.2 Explicaciónde la estructura de la membrana. Cadauna siguientesobservaciones: (i) los lípidos que extrajeroncon
de lassiguientesobservaciones desempeñaun papelimportante acetonaa partir de 4,74 X 10' eritrocitos,formabanuna

206 Capítulo
7 Membranas: química
estructura, y función
monocapacon un áreade 0,89m'que seexpandíaen una
superficieacuosa;y (ii) el áreasuperficialde un eritrocito era de
aproximadamente 100pm'según susmedidas.
(a) Demuestrea partir de estosdatoscómo llegarona la
conclusiónde que la membranadel eritrocito esuna bicapa.
(b) Ahora sabemosque el áreasuperficialdel-eritrocito
humano esde aproximadamente145pm". Expliquecómo
Gorter y Grentelpudieronllegara la conclusióncorrecta
cuandouna de susmedidasera solamentedos terciosdel
valor correcto.
7.4 Lípidos,proteínasybicapasen los eritrocitos. La
membranade un eritrocito humano tiene un áreasuperficialde
aproximadamente 145pm'y unespesorde aproximadamente 8
nm. Contieneunos0,52picogramosde lípidosy unos0,60
picogramosde proteína.(1 picogramoequivalea 1 x l0-12g.)
Supongaque existencantidadesequimoleculares de colesteroly
de fosfolípidoscon un pesomolecularde 386y de
aproximadamente800,respectivamente. En una monocapa,
cadamoléculade fosfolípidoocupaun áreasuperficialde
0,55nm2por moléculay cadamoléculade colesterol ocupa
0,38nm'por molécula.
(a) Asumiendoque lasproteínasde membranatienen un peso
molecularaproximadode 50.000,¿cuántasmoléculasde
proteínahay en una única membranade eritrocito?
(b) ¿Cuálesla proporciónde moléculasde lípido frentea
moléculasde proteínaen la membranadel eritrocito?
(c) ¿Quéproporción del áreadela superficiedrteritrocito está
ocupadapor loslípidosde la bicapa?
7.5 Acercadel tamaño. Por la química,sabemosque cada
grupometilo (-CH2-) de una cadenahidrocarbonada lineal
alargala longitudde la cadenaaproximadamente 0,13nm. A
partir de estudiossobreestructurade proteínas, sabemos
ademásqueuna vueltade una a-héliceincluye3,6residuosde
aminoácidosy extiendeel ejemayor de la hélice
aproximadamente0,56nm. Utilice estainformación para
contestara lo siguiente:
(a) ¿Cuántomide una únicamoléculade ácidopaimítico(16
átomosde carbono)en su forma completamente
extendida? ¿Yuna moléculade ácidolaúrico(12C)y otra
de ácidoaraquidónico(20)?
(b) ¿Cuántoesel espesordel interior hidrofóbico de una
membranatípica comparadocon la longitud de dos
moléculasde ácidopalmítico puestasextremocon
extremo?¿Ycon respectoa dos moléculasde ácidolaúrico
o ácidoaraquidónico?
(c) ¿Cuántosaminoácidosdebeteneraproximadamenteun
segmentotransmembranacon forma de hélicede una
proteínaintegralde membrana,si el segmentotieneque
cruzarlabicapalipídica definidapor dos moléculasde
ácidopalmítico puestasextremocon extremo?
(d) La proteínabacteriorodopsina tiene248aminoácidos y
sietesegmentostransmembrana.Aproximadamente,¿qué
porciónde los aminoácidos formanpartedel segmento
transmembrana? Asumiendoque la mayoríade los
aminoácidosrestantesestánpresentesen los bucles
hidroftlicosque mantienenunidos los segmentos
transmembrana,¿cuántosaminoácidos,en promedio,están
Dresentes en cadauno de esosbucles?
7.6 Temperaturay composiciónde la membrana. ¿Cuálde
lassiguientesrespuestasprobablementero seobservarácuando
un cultivo bacterianoque crecea37 oCsetransfieraa una sala
de cultivo que semantienea 25 'C? Expliquesu respuesta.
(a) Un descensoinicial de Ia fluidez de la membrana.
(b) Una sustitucióngradualde los ácidosgrasosde cadena
corta por ácidosgrasosmáslargosen los fosfolípidosde la
membrana.
(c) Una sustitucióngradualde ácido esteáricopor ácido oleico
en los fosfolípidosde Ia membrana.
(d) Una mejora de la velocidadde síntesisde los ácidosgrasos
insaturados.
(e) La incorporaciónde máscolesterolen la membrana.
7,7 Fluidez de membranaytemperatura. A menudo se
estudianlos efectosde la temperaturay de la composición
lipídica sobrela fluidez de la membrana,utilizando membranas
artificialesque contienensolamenteuna o unaspocasclasesde
lípidos y ninguna proteína.Suponiendoque ustedy su
compañerode laboratoriohan fabricadolassiguientes
membranasartificiales:
Membrana.l:Fabricadapor enteroa partir de
con ácidosgrasossaturadosde 16carbonos.
fosfatidilcolina
Membrana2: La mismaquela membrana1,exceptoque
cadauno de los ácidosgrasosde 16carbonostieneun
únicodobleenlacecis.
Membrana3; La mismaquela membranal, exceptoque
cadauno de los ácidosgrasossaturados tienesólo 14
átomosde carbono.
Despuésde determi¡ar lastemperaturasde transiciónde las
muestrasque representana cadauna de lasmembranas,
descubreque su compañerode laboratorioseequivocóal
apuntar a qué tipo de membranascorrespondíanlasmuestras.
Lostresvaloresquedeterminófueron - 36 "C,23 "C y 41 "C.
Asignecadauna de estastemperaturasde transicióna la
membranaartificial correctay expliquesu respuesta.
7,8 Popurrí de membrana. Expliquecadauna de las
tan brevementecomo seaposible
siguientesobservaciones
(a) Tantola proteínaA como la B tienen un pesomolecularde
33.000y constande una únicacadenapolipeptídicacon
240 aminoácidoshidrofilicosy 60 aminoácidos
hidrofóbicos;la proteínaA esuna proteínaintegralde
membranay la proteínaB esuna proteínasoluble.
(b) Cuandoserealizaun experimentode fotoblanqueamiento,
utilizando membranasplasmáticasde mioblastos
(precursoresde célulasmusculares),similar al descritoen
la Figura7.11,con glicoproteínasde superficiemarcadas
setarda mucho másen conseguirque la
con fluorescencia,
manchaoscurano fluorescente,adquierafluorescenciaotra
vez,que cuandosemarcanfosfolípidoscon un colorante
Además,sólo un 55% de Ia fluorescenciade
fluorescente.
lasproteínasvuelvefinalmentealazona de la mancha
blanqueadapor el láser.
(c) En laspatasde un reno,lasmembranasde lascélulasque
estánmáscercade laspezuñastienen una mayor
proporción de ácidosgrasosinsaturadosque las
membranasde lascélulasdel restode la pata.
Problemas 207
(d) La mayoríade los agentesutilizadosen medicinacomo
anestésicosson apolaresy acluanaumentandola fluidez de
lasbicapaslipídicasde lasmembranascelulareshastael
punto de que la transmisióndel impulso nerviosose
interrumpey lassensaciones de dolor seeliminan,
7.9 Lasbacteriaspequeñasno pueden.Acholeplasma
laidlawii esuna bacteriapequeñaque no puedesintetizarsus
propiosácidosgrasosy por tanto debeconstruirsu membrana
plasmáticaa partir de los ácidosgrasosdisponiblesen su
entorno.El resultadoesque Ia membranade Acholeplasma
adquierelas característicasffsicasde los ácidosgrasosque estén
disponiblesen esemomento.
(a) Si a lascélulasde Acholeplasmaselesda accesoa una
mezclade ácidosgrasossaturadose insaturadoscrecerána
temperaturaambiente.¿Puedeexplicarpor qué?
(b) Si transfiereuna parte de lasbacteriasa un medio que
contienesólo ácidosgrasossaturadosy no realizaningún
otro cambioen lascondicionesde cultivo,dejaránde
crecerinmediatamente después de habercambiadoel
medio.Expliquepor qué.
(c) ¿Cuálseríala única forma de que lasbacteriasdel apartado
b creciesenotravezsin cambiarles el medio?Expliquesu
respuesta
(d) Si Ud. tuviera que mantenerel cultivo de Acholeplasmadel
apartadob en lascondiciones
queallí sedescriben, durante
un periodode tiempoprolongado,¿quésepuedepredecir
sobrelo quelesocurriríaa lasbacterias? Expliquesr(
respuesta.
(e) ¿Quéresultados esperaríasi transfiriese
una partede las
bacteriasa un medioquesólocontuvieraácidosgrasos
insaturados,sin realizarningún otro cambioen las
condiciones del cultivo?Expliquesu respuesta.
.7.L0 Hidropatía: estosepone interesante.Una
representación de hidropatíaseutiliza para predecirla
estructurade lasproteínasde membranabasándose en su
secuenciade aminoácidosy en los valoresde hidrofobicidadde
éstos.La hidrofobicidadsemide como un cambio en la energía
libre estándarAGo',en kilojulios/mol(kl/mol), debidoa la
transferenciade un residuode aminoácido,desdeun solvente
hidrofóbico haciael agua.El índicede hidropatía,secalcula
promediandolos valoresde hidrofobicidadde una seriede
segmentoscortosdel polipéptido,estandocadasegmento
desplazado, un aminoácidoa partir del extremoN-terminal. El
índicede hidropatíade cadasegmentosucesivo,serepresentaen
función de la localizaciónde esesegmentoen la secuenciade
aminoácidos. La representación seexaminabuscandoregiones
de alto índicede hidropatía.
(a) ¿Porqué los científicosintentan predecirIa estructurade
una proteínade membranapor estosmediosindirectos
cuandola técnicade cristalografíade rayosX revelaríala
estructuradirectamente.
(b) Sabiendocómo sedefine,¿cómoesperaríaque fuera el
índicede hidrofobicidadde un residuohidrofóbico como
valina o isoleucina,positivo o negativo?¿Yde un residuo
hidrofílico como ácido aspárticoy arginina?
(c) Debajohay una lista de cuatro aminoácidosy cuatro
valoresde hidrofobicidad.Relacionelos índicesde
208 Capítulo
7 Membranas: químíca
estructura, y función
hidrofobicidad con los aminoácidos correctos y explique su
respuesta.
Aminoácidos: alanina; arginina; isoleucina; serina
Hidrofobicidad (en kJ/mol): *3,1; * 1,0; -t,t; *7,5
(d) En la Figura 7.30 se muestra una representaciónde
hidropatía para una proteína integral de una membrana
concreta.Dibuje una barra horizontal sobre cada segmento
transmembrana identificado por la representación. ¿Qué
longitud tiene, aproximadamente, el segmento
transmembrana? Comparado con el número que Ud.
calculó en el ProblemaT.5c ¿Elvalor se ajusta?¿Cuántos
segmentos transmembrana, piensa Ud., que tiene la
proteína?¿Puedesuponer de qué proteína se trata?
a
'o + , u
!
* t.' ^u
¿
F
cg0
q)
D
-2'0
I
c)
.: -4,u
z
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240
lndiceaproximado
de hidropatía
Figura7.30 Representación paraunaproteína
de hidropatía integral
dememblana.VéaseProblemaT.l}d.
.7,L1, Dentro o fuera.Por la Figura7.24sabemos quelas
regionesexpu_estas de lasproteínasde membranasepueden
marcarcon t"I mediantela reacciónde la lactoperoxidasa (Lp).
De manerasimilar,lascadenas lateralesde carbohidratos de las
glicoproteínas de membranasepuedenmarcarcon'H
mediantela oxidaciónde lasgalactosas con la galactosaoxidasa
(GO),seguidode una reducciónconborohidridotritiado
('H-BH4).Sabiendoquetanto la LP comola GO sondemasiado
grandescomo parapenetraren el interior de una célulaintacta,
expliquecadauna de lassiguientesobservaciones realizadascon
eritrocitosintactos.
(a) Seincubancélulasintactascon LP en presencia de r2sl,se
extraenlasproteínasde membranay seanalizanen gelesde
poliacrilamidacon SDS,Sedetectaquevariasde lasbandas
del gel son radiactivas.
(b) Seincubancélulasintactascon GO yluego sereducencon
'H-BHr.
Sedetectaquevariasde lasbandasdelgelson
radiactivas.
(c) Todaslasproteínasde la membranaplasmáticaque
contienencarbohidratossemarcancon el método
co/3H-BH4
(d) Ninguna de lasproteínasde la membranaplasmáticadel
eritrocito desprovistade carbohidratossemarcacon el
método LPlr2sr
(e) Si serompe el eritrocito antesdel procedimientode
marcaje,el método de la LP marcaprácticamentetodaslas
proteínasde la membrana.
.7.L2 El interior de la membrana en el exterior.
Técnicamenteesposibleprepaftf vesículasselladasa partir de
membranasde eritrocitosen las que la orientaciónoriginal de la
membranaestéinvertida.Talesvesículastienen,lo que
originalmenteera el lado citoplásmicode la membrana,
mirandohaciael exterior
(a) ¿Quéresultadosesperaríade estasvesículas,que contienen
la parte interna de la membranahaciael exterior,si
fuesensometidas al métodoGO/rH-BH4descritoen el
Problema 7.11?
(b) ¿Quéresultadosesperaríade estasvesículas, que contienen
la parte interna de la membranahaciael exterior,si fuesen
sometidas al métodoLPlr2sIdel Problema7.11?
(c) ¿Qué conclusiones se extraerían si algunas de las proteínas
que se marcan con el método LPI125Idel Apartado b
estuviesen entre las que se habían marcado cuando se
trataron células intactas con el mismo método, en el
Problema 7. 11a?
(d) Sabiendo que a partir de la membrana plasmática de
los eritrocitos es posible preparar vesículas,que contienen
la parte interna de la membrana hacia el exterior, piense
en una manera de marcar una proteína transmembrana
con'H en un lado de la membiana y con 12sIen el otro
Iado.

Bibliografía recomendada
Lasreferencias
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histórica
están con.
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Bibliografa
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