COLEGIO LA SALLE MONTERÍA

“De la mano con la familia construimos sociedad”

GUÍA DE LABORATORIO
BIOLOGIA GRADO – 10°
ADN DE UNA CÉLULA VEGETAL

El núcleo contiene ADN, una molécula que por las características del individuo y la
información necesaria para la transmisión de características de generación en
generación.

MATERIALES

 Semillas de garbanzos
 Sal
 Detergente
 Ablandador de carne (jugo de papaya)
 Alcohol etílico al 95%
 Licuadora
 Colador
 Envase de vidrio
 Palillos
 Tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO

1. Coloca en la licuadora 1/2 taza de semillas de garbanzos, una pizca de sal y

una taza de agua. Licua durante 15 o 20 segundos hasta lograr una mezcla
homogénea. Filtra la mezcla resultante.

2. A la mezcla anterior, agrega 2 cucharadas de detergente líquido y agita sin

formar espuma. Dejar reposar durante 5-10 minutos y coloca la mezcla en el
envase de vidrio.
3. Incorpora, a despacio un poco de jugo de papaya a mezcla. Si se hace rápido
no se logrará ver nada al final del experimento.
4. Inclina el envase de la mezcla y vierte tanto alcohol como mezcla en el tubo de
ensayo, hazlo poco a poco, hasta que se forme una capa sobre ella. Dejar
reposar por cinco minutos.

5. Observa el precipitado blanco y filamentoso en la capa de alcohol. Realiza un

dibujo de lo observado.
6. Introduce en el tubo de ensayo un palillo y extrae unos filamentos y colócalos
en una lámina porta objetos. Observa al microscopio con menor aumento. Dibuja
lo observado.

RESULTADOS
1. Realiza los dibujos y al frente anota tus descripciones.
2. ¿Por qué crees que es necesario licuar las semillas?
3. ¿Qué función crees que cumple el detergente y el jugo de papaya en esta
práctica de laboratorio?
4. ¿A qué corresponden los filamentos que se obtuvieron en la muestra?
5. Realiza un esquema donde representes la lectura de doble hélice del ADN.
 INFORME DE LABORATORIO N°____

TEMA: ADN DE UNA CÉLULA VEGETAL

INTEGRANTES:

RAFAEL AUGUSTO ÁLVAREZ

JESÚS DAVID CASTRO

MARÍA ANDREA DORIA

MELISSA GARCÍA

GRADO: 10°- D

LIZETH DE LA CRUZ

BIÓLOGA

COLEGIO LA SALLE MONTERÍA

MONTERÍA – CÓRDOBA

2016
I. INTRODUCCIÓN

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye

el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los
cromosomas y el material del que los genes están formados. La extracción de
ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la
pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula.
A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el
ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y
para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

Por eso que en este informe de laboratorio mostramos, su definición y algunos

conceptos y conocimientos que debemos tener y están relacionados a este tema;
y también contiene la práctica de laboratorio que realizamos y los cálculos
correspondientes.

II. MARCO TEÓRICO

ÁCIDOS NUCLEICOS

Los Ácidos Nucleicos son las biomoléculas portadoras de la información genética.

Son biopolímeros, de elevado peso molecular, formados por otras subunidades
estructurales o monómeros, denominados Nucleótidos. Desde el punto de vista
químico, los ácidos nucleicos son macromoléculas formadas por polímeros
lineales de nucleótidos, unidos por enlaces éster de fosfato, sin periodicidad
aparente. De acuerdo a la composición química, los ácidos nucleicos se clasifican
en Ácidos Desoxirribonucleicos (ADN) que se encuentran residiendo en el núcleo
celular y algunos organelos, y en Ácidos Ribonucleicos (ARN) que actúan en el
citoplasma. Los ácidos nucleicos están formados por largas cadenas de
nucleótidos, enlazados entre sí por el grupo fosfato. El grado de polimerización
puede llegar a ser altísimo, siendo las moléculas más grandes que se conocen,
con moléculas constituidas por centenares de millones de nucleótidos en una sola
estructura covalente. De la misma manera que las proteínas son polímeros
lineales aperiódicos de aminoácidos, los ácidos nucleicos lo son de nucleótidos.
La aperiodicidad de la secuencia de nucleótidos implica la existencia de
información. De hecho, sabemos que los ácidos nucleicos constituyen el depósito
de información de todas las secuencias de aminoácidos de todas las proteínas de
la célula. Existe una correlación entre ambas secuencias, lo que se expresa
diciendo que ácidos nucleicos y proteínas son colineales; la descripción de esta
correlación es lo que llamamos Código Genético, establecido de forma que a una
secuencia de tres nucleótidos en un ácido nucleico corresponde un aminoácido en
una proteína.

Son las moléculas que tienen la información genética de los organismos y son las
responsables de su transmisión hereditaria. El conocimiento de la estructura de los
ácidos nucleicos permitió la elucidación del código genético, la determinación del
mecanismo y control de la síntesis de las proteínas y el mecanismo de transmisión
de la información genética de la célula madre a las células hijas. Existen dos tipos
de ácidos nucleicos, ADN y ARN, que se diferencian por el azúcar (Pentosa) que
llevan: desoxirribosa y ribosa, respectivamente. Además se diferencian por las
bases nitrogenadas que contienen, Adenina, Guanina, Citosina y Timina, en el
ADN; y Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo en el ARN. Una última diferencia está
en la estructura de las cadenas, en el ADN será una cadena doble y en el ARN es
una cadena sencilla
Los ácidos nucleicos son moléculas constituidas por C, H, O, N y P. Relacionados
con la conservación, constituye el material genético de los organismos. Es el
componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes
están formados. Se componen de un pequeño grupo de unidades monoméricas
denominadas nucleótidos, unidos mediante enlaces covalentes fosfodiester.
Tenemos:

•ARN

•ADN

•El ADN: Está formado por dos cadenas de polinucleótidos complementarios y

dispuestos endoble hélices sus bases nitrogenadas son adenina, timina, citosina,
guanina; carecen de uracilo. La complementación de bases se debe a la formación
de enlaces tipo puente de hidrogeno.

Ácido Desoxirribonucleico (ADN), material genético de todos los organismos

celulares y casi todos los virus. Es el tipo de molécula más compleja que se
conoce. Su secuencia de nucleótidos contiene la información necesaria para poder
controlar el metabolismo un ser vivo. El ADN lleva la información necesaria para
dirigir la síntesis de proteínas y la replicación. En casi todos los organismos
celulares el ADN está organizado en forma de cromosomas, situados en el núcleo
de la célula. Está formado por la unión de muchos desoxirribonucleótidos. La
mayoría de las moléculas de ADN poseen dos cadenas antiparalelas (una 5´-3´ y
la otra 3´-5´) unidas entre sí mediante las bases nitrogenadas, por medio de
puentes de hidrógeno. La adenina enlaza con la timina, mediante dos puentes de
hidrógeno, mientras que la citosina enlaza con la guanina, mediante tres puentes
de hidrógeno. El estudio de su estructura se puede hacer a varios niveles,
apareciendo estructuras, primaria, secundaria, terciaria, cuaternaria y niveles de
empaquetamiento superiores.

•La extracción de ADN de una muestra celular:

Se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas
negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula.
Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para
poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de
enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en
alcohol.
III. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES

 Semillas de garbanzos
 Sal
 Detergente
 Ablandador de carne (jugo de papaya)
 Alcohol etílico al 95%
 Licuadora
 Colador
 Envase de vidrio
 Palillos
 Tubos de ensayo
 METODOLOGÍA:
La extracción de ADN requiere una serie de métodos básicos. En primer lugar
tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder
acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de
enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en
alcohol.

Existen diversos procedimientos para extraer ADN de las células. Estos varían en
la cantidad y pureza del ADN que se obtiene al finalizar el procedimiento, pero la
base de todos ellos es muy similar.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen
que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al
núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear
para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que
puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

La solución con detergente y sal es capaz de romper la pared celular y las

membranas plasmática y nuclear.

El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se
encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el
agua.

IV. DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

PROCEDIMIENTO
 1. Coloca en la licuadora 1/2 taza de semillas de garbanzos, una pizca de sal y
una taza de agua. Licua durante 15 o 20 segundos hasta lograr una mezcla
homogénea. Filtra la mezcla resultante.

2. A la mezcla anterior, agrega 2 cucharadas de detergente líquido y agita sin

formar espuma. Dejar reposar durante 5-10 minutos y coloca la mezcla en el
envase de vidrio.

3. Incorpora, a despacio un poco de jugo de papaya a mezcla. Si se hace rápido

no se logrará ver nada al final del experimento.
4. Inclina el envase de la mezcla y vierte tanto alcohol como mezcla en el tubo de
ensayo, hazlo poco a poco, hasta que se forme una capa sobre ella. Dejar
reposar por cinco minutos.

5. Observa el precipitado blanco y filamentoso en la capa de alcohol. Realiza un

dibujo de lo observado.
6. Introduce en el tubo de ensayo un palillo y extrae unos filamentos y colócalos
en una lámina porta objetos. Observa al microscopio con menor aumento. Dibuja
lo observado.

V. RESULTADOS Y CONCLUSIONES

RESULTADOS
El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro, ya que,
entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción “profesional” se
realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN y que impiden
que se unan al ADN.
Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato
de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la
misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas
(lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el
núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la
célula.
El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y
el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas
(ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan
pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el
ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se
desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.
Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución
ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar
las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución ablandadora de carne
actúa como una enzima.
El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.
El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para
muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología.
Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias
no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se
desnaturalice (que se rompa).
El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es
sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y
jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared
celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El
alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.
 EL ADN
El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las
instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y
mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia
idéntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas
instrucciones y por eso hay células con diferentes formas y funciones.
Está formado por desoxirribonucleótidos (A, G, C, T). Que a su vez están
formados -D desoxirribosa y un ion fosfato.
La proporción y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los poli
nucleótidos.
El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:
Estructura primaria:
Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina,
citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un
esqueleto de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que queda un extremo con -OH 3´
libre y un extremo 5´ con un grupo fosfato libre.
Estructura secundaria:
Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.
Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos:
El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice dextrógira
(forma B). Las dos hebras son anti paralelas es decir si una presenta la dirección 5
´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.
El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre
diferentes regiones de la molécula, hasta adoptar la conformación más estable,
que es la de doble hélice. Este enrollamiento entre las 2 hebras de la doble hélice
es dextrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si estuvieran
trenzadas.
Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia
entre las bases de ambas cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina
y la guanina frente a la citosina. Así las bases púricas están enfrentadas a las
bases pirimidínicas y la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los pares
A=T y tres en los pares G-C
La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la
doble hélice de ADN posean secuencias complementarias.
Además los pares de bases están horizontales y el eje los atraviesa por el centro.
Modelo hélice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas están inclinados
hacia el exterior pero la hélice al igual que la del ADN B es dextrógiro
Modelo hélice z: En este modelo las cadenas de ADN no se enrollan en forma de
doble hélice sino en forma de zig-zag.
ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye
el material genético de los organismos. El ADN es una molécula que se encuentra
en todas las células de los seres vivos y se encarga de codificar todo lo que
nosotros formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las proteínas que
tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que está asociada a
proteínas y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un
núcleo.
El ADN está presente en los indicios biológicos como sangre, semen, saliva,
hueso, pelo, etc.
Es muy importante conocer las condiciones para remisión adecuada de la
muestras.
El Salting- out es uno de los métodos de extracción de ADN mas utilizados por su
fácil implementación, baja toxicidad de los reactivos y permite la visualización del
ADN.
-Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:
 Cantidad de material de partida
 Número de copias de las moléculas de AN
 Cantidad de tejido.
 Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado,
fijado)
 Contaminantes e interferentes en el material biológico
COLOCAR LOS DIBUJOS

EXTRACCIÓN DE ADN DE GARBANZOS

Prepararamos el zumo de papaya, licuando en las papayas en la licuadora.

A la mezcla anterior, le agregamos 2 cucharadas de detergente líquido y agita sin

formar espuma. Dejamos reposar durante 5-10 minutos y coloca la mezcla en el
envase de vidrio.

Agregamos una cucharada de sal, en el vaso precipitado.

Agregamos una cucharada y media de detergente, en el vaso
precipitado.
Filtramos el líquido obtenido con un colador, vertiéndolo en el interior del vaso de
cristal alto y frio, llenado no más de la mitad, seguido de agregar una cucharada
de ablandador de carne (Jugo de papaya).

Agregar al filtrado una cucharada de ablandador

Filtrar lo obtenido, llenar el vaso precipitado no más de de carne (Jugo de papaya)
la mitad.

Añadimos cuidadosamente un volumen de alcohol muy frío equivalente al del

filtrado, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso para que forme una capa
sobre el filtrado, sin mezclarse.

Agregar el alcohol haciéndolo resbalar por las paredes

Mezclar levemente durante 2 o 3 minutos.
del vaso. (Imagen 10)
NOTA: Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero
cuando se encuentra en alcohol precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de
permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son
dejados en la solución acuosa.

Una vez agregado la cucharada de zumo de papaya se mezclara bien con un

agitador, durante 2 o 3 minutos (El agitado debe ser lento).
Añadimos cuidadosamente un volumen de alcohol muy frío equivalente al del
filtrado, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso para que forme una capa
sobre el filtrado, sin mezclarse.

Agregar el alcohol haciéndolo resbalar por las paredes

Mezclar levemente durante 2 o 3 minutos. del vaso.

Dejamos reposar durante 2 ó 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre
las dos capas, para poder observar el ADN.

Observación del ADN de los chicharos. (Imagen 11)

RESULTADO: El zumo de papaya no pudo destruir las proteínas que protegen al
ADN, por la poca cantidad que se suministró en la mezcla, pero el ADN es visible,
aunque muy poco.

¿Por qué crees que es necesario licuar las semillas?

Al licuar las semillas de garbanzos se incrementa el área superficial de las

semillas lo cual ayuda a hacer la superficie de la membrana más fácil de disolver y
también permite una absorción más efectiva del calor y de las soluciones que se
añadirán.

La licuadora ayuda en la rotura de membranas celulares y cubiertas nucleares,

permitiendo la separación del ADN. Rompe las células y expone las paredes
celulares y membranas a la acción del detergente

¿Qué función crees que cumple el detergente y el jugo de papaya en esta

práctica de laboratorio?

Las enzimas son unas sustancias que atacan a las proteínas de las células, lo que
permite romperlas y separarlas del ADN. Si no disponemos de enzimas, podemos
utilizar zumo de papaya (el cual contiene papaína, sustancia que degrada las
proteínas).

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato
de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la
misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas
(lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el
núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la
célula
 Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos con
proteínas transmembrana a través de estas. El detergente ayuda a romper la
bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear
(Imagen 1). Los lípidos de la membrana se descomponen debido al detergente
que deshace las uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el detergente
se pone en contacto con los lípidos éstos se separan de la membrana
rompiéndola. La estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso hace
que se combinen, formando una burbuja de detergente y lípidos (Imagen 2).

Imagen 1. Separación de la membrana plasmática, envoltura

Imagen 2. Formación de burbujas entre el detergente y los
nuclear y la liberación del DNA
fosfolípidos

¿A qué corresponden los filamentos que se obtuvieron en la muestra?

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que,
entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se
realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que
se unan al ADN.
Realiza un esquema donde representes la lectura de doble hélice del ADN.
CONCLUSIÓN

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla
Heterogénea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de ensayo
el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.
En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy
claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.
Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por
lo tanto hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de
poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.
Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así
como si estructura de una forma fácil y sencilla.
 WEBGRAFÍA

 http://www.monografias.com/trabajos91/informe-experimento-extraccion-
adn/informe-experimento-extraccion-adn.shtml#ixzz4EzDAtsVE
 http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/AcidosNucleicos_veronica.pdf
 https://es.scribd.com/doc/20270409/Informe-N%C2%BA2-laboratorio-de-
bioquimicaII
 http://www.monografias.com/trabajos91/informe-experimento-extraccion-
adn/informe-experimento-extraccion-adn.shtml
 http://www.mecd.gob.es/eslovaquia/sk_SK/dms/consejerias-
exteriores/eslovaquia/publicaciones/publicaciones/75experimentos-en-EL-
2014/75experimentos%20en%20EL%202014.pdf
 http://www.bteduc.bio.br/guias_es/69_Extraccion_de_ADN_(procedimiento_basi
co).pdf