Kimika biologica

Fraccionamiento y purificacion de Proteinas

La Solubilidad de las proteinas dep de 4 Factores : T°, PH, F ionica y Prop dielectricas del SV
Relaciones:
• La T° modifica a las Proteinas, si la T° sube a mas de 40° o menos de 0°, las proteinas pierden su
naturaleza.
• El PH,
• F ionica
• Prop. Dielectricas del SV

Fraccionamiento: Separacion de proteinas de otras proteinas

Purificacion: Separacion de Proteinas de otrs Sustancias

Metodos mas usados para el fraccionamiento:

X Fraccionamiento por Tamaño molecular

• Diálisis

• Ultrafiltracion

• Centrifugacion

• Cromatografía

X Fraccionamiento por Solubilidad de la proteina

• Punto isoelectrico
• Precipitado por Sales
• Constante dielectrica
• Por Temperatura
X Carga electrica
• Cromatografía x cambio ionico
• Electroforesis

Bioenergetica
DEF: estudia la transferencia y uso de la ENERGIA por los sistemas biologicos.

1° ley de la termodinamica

La energia del universo es constante (universo=> sistema y el medio), la energia no se pierde, se

conserva/convierte.

la 2° ley de la termodinamica.
 ENZIMAS
Naturaleza quimica= compuesto principalmente por proteinas.

Unidad enzimatica (UE): indemnización

Metabolismo de Hidratos de Carbono

Metabolismo: es el conjunto de procesos bioquímicos que ucurren en los tejidos de un ser vivo para la
obtención de energia. En un sistema como la celula se llama Met. INTERMEDIO (ocurre en el citosol)

el metabolismo se divide en 2 procesos uno cata y anabolico

Catabolismo Anabolismo

vias metabolicas
 GlucoLISIS glucoNEOgene Ciclo de GlucogenoLISI glucogenoGene
sis pentosa S sis
s
Clasificacio Via Catabolica Anabolica Via Catabolica Via Catabolica
n Lineal Lineal Lineal Lineal
Funcion y/o Obj, es obtener Obj, Producir Obj. Higado y
objetivo 2 ATP (energia) glucosa para Forman musculo
por molécula de mantener metabolit
glucosa y glucemia os en 3
metabolitos constante, etapas.
intermedios. X cuando no se sin gasto
otras vias consume en la de ATP
metabolicas dieta.
Sustratos y Proviene de la El pirtuvato Glucosa 6 Glucogeno g-6-p
origen sangre o proviene de Posfato
(precursore degradacion de lactato y Aa
s) glucogeno. Para glucogenicos, al
transformarlo igual q otros
en piruvato Precursores no
glusidicos.
Producto El pirtuvato Son 1- NADPH G-6-P glucogeno
final y forma lactato, transformados 2-ribosa
destino Aa o se OX a en glucosa q 3-
CO2 y H2O pasaran a Fructosa
circulación 6 fostafto
sanguinea y Glicer-
aldehido3
P
a
Gluconeo
Hubicacion Se procude en Las primeras En citosol
celular el CITOLSOL reacciones se
producen en
mitocondria,
luego en citosol,
la lutima en el
RE
Tejido todas las Principalmente Corteza
donde se celulas en Hepatocitos, adrenal,
produce tbn en riñon e gonadas.
instino. Gl
mamaria.
Enzima Las reguladoras Son las Glucosa- Las
reguladora son la 6- fosfatasa (dep Deshidro-
y tipo de hexoquinasa de alta conc. de genasas
regulacion (alosterica) y la glucosa 6 De la
Fosfofructoquin fosfato) y primera
asa (alosterica) Fructosa 1,6- etapa, y
y la bifosfatasa la insulina
PrituvatoQuinas (alosterica) y induce a
a (alosterica en Piruvato estas.
todos los tejidos Carboxilasa Solo
y por modif. (alosterica) cuando
COVA en hay
HIGADO) mucho
G6P
 TP N°3 “Actividad de la lipaza pancreática”

Objetivo: Determinación de la actividad especifica (AE)de la lipasa Pancreática.

Fundamento:
• La lipasa pancreática Catalizar la Hidrólisis de TAG de la leche, dando productos los Ácidos
grasos y glicerol.
• Titilación: se utiliza el agregado (gota a gota) de Base conocida (NAOH) de concentración
conocida (0,005 N) en una neutralidad de PH 8 para este Tp, hasta q se cumpla q los
meq A = meq B .

Enzimas Sustrato Reacción q - Productos

+ Cataliza
Lipasa Leche Hidrólisis Ácidos Grasos
pancreática Triacilglicerido ---------- (para titilación)
(TAG) +glicerol
Titilación

Química Estatica  Estructura Molecular

Biológic (descriptiva)
a
Dinamica  Metabolismo  Enzimas Catalizadores
(Transformaciones  (aceleradores de
Bioquímicas) (proteinas) reacciones)

enzimas participan en:

- Vias Metabolicas (conversiones
 Graduales)
 (transferencia
- Mapas dependiente de
Metabolicos interrelaciones)

- Todos regulados por

hormonas

Donde ocurren el Metabolismo?

Autotrofos  Sintetizan sustancias organicas Complejas (HdeC, Proteinas,
Organismos

(vegtetales) Lipidos, etc) a partir de sustancias inorganicas, obteniendo su

energia del sol para sus reaccines metabolicas.

Heterotrofos Son los animales multi-moleculares dependientes del

 alimento/energia formados por otros (autotrofos)
(animales)
Sus NUTRIENTES son usados por Propio Organismo
-Vitaminas Energia del trabajo mecanico
-H2O
-Minerales

Esos nutrientes sirven Para -Transferencia y conversión de la

Energia (necesita Enzimas)
- síntesis de estructuras quimicas
especificas.

GLUCO GLUCO Glucogeno GLUCOGENO Ciclo de Respiración

LISIS NEOGenesis LISIS GENESIS Krebs Celular
Precursor [S] Glucosa Piruvato (u
otro no
glicosidico)
Productos 2 Piruvato glucosa
Enzimas Hexo q.
regulantes Fosfotructo
q.
Piruvato q.
Modulador
Energia 2 ATP
VIa Aero o
anaeroviotic
a
Tejidos Músculo SOLO
Higado HIGADO y
riñon
(NUNCA
MUSC NI
CEREBRO)
Relaciones -pentosas
con otras -Gluconeo
vias -Krebs
otros
azucares

Via de las Otros Transaminas

PENTOSAS Azucares as
Precursor [S]
Productos
Enzimas
regulantes
Modulador
Energia
VIa
Tejidos
Relaciones
con otras
vias

Referencias:
q. = quinasa

Enzimas Via : Glucolisis (Todas a nivel de CITOSOL)

reguladoras HIGADO:
Hezoquinasa
Fosfofructoquina
sa
Piruvatoquinasa

Enzimas Via : Gluco neo genesis

reguladoras
Piruvato En Mitocondria
Carboxilasa
PEP Carboxi En Citosol-mitocondria
Quinasa
Fructosa 1,6 (CITOSOL)
BifosfatASA
Glucosa 6 (en RE)
FosfaTASA

Enzimas Via : Ciclo de KREBS (todos a nivel de mitocondria)

reguladoras
Isocitrato
DesHidrogenasa
Alfa CETO
glutarato
Deshidrogenasa
MALATO
Deshidrogenasa

Enzimas Cadena Respiratoria (casi todos dentro de MATRIZ mitocondrial)

reguladoras
Complejo I

Complejo II

Coenzima Q
Complejo III
Citocromo C (espacio intermembrana)
Complejo IV

Proteinas Plasmaticas

Quilomicrones VLDL LDL HDL

Composición Tag, PL+colest, Tag, PL+colest, Rica en Colest Discoide, doble
prot. prot. Esterificado, y capa de
APO-B100 fosfolipidos(apo-
proteinas y
colesterol libre)
Sintetizadas en Cel intestinal Cel Hepaticas Producto final de HIgado e intestino
VLDL
Aporte de prot intestinales Hepatocito apo- Receptores en Intestinales APO-A
APO-A y APO-b48 b100 Ensamblado n todas las Hepaticas : Apo-C
RER membranas, en
TAG, PL y Colest, cito; englobadas
REL en lisosomas
Aportes de prot APO-cII y apo-E APO-c y apo-E (HDL) Produce
Sanguine (HDL) HIdrolisis;
as “colesterol
En Endotelio Capilar sanquineo De Tej estarasa” Se le une “lecitna-
capilar Hidrolisis de TAG x extraHepatico Apo-b100 Colesterol Acil
“lipoProteinLipasa” Hidrolisis de TAG x separada de Aa Transferasa” LCAT
(+) apo-CII (HDL) “lipoprotein lipasa” y Colesterol del Cataliza la
(+) apo-CII ester transferencia del
(HDL) AcG de Fosfatidil
colina para
esterificar el
Hidroxilo del
colesterol.(+)
APO-AI
Destino de AC Musc oxidados Con la eliminación Prod, Colesterol Prod;
grasos p/energia de TAG, se libre, usado para Lisolecitina
Adiposoalamecen enriquecen con construccion de albumina
ado para energia Colest. Ester, y membranas. En (plasma)
retorno de apo-c a Cel Suprarenal, Colest ester..>a la
HDL ovario, test y doble capa lipidica
Y forma la IDL: Hormonas p/ LVDL o LDL
TAG, COlest ester, esteroideas. Interfiere la APO-D
apo-100 y apo-E y Colest e exceso;
densidad media Esterificado por
e/VLDL y LDL “ACILCOAColeste
Tiempo de vida <1 h <4hs y 2-5hs de IDL rol
Destino del (apo-b48 esteres de Receptor en Aciltransferasa” Hepatocito lo
lipido residual Colest y PL) Sacado Hepatocito (ACAT) y degrada
de circulación x De apo-E (la mitad almacenado en totalmente..
Hepatocitos x de IDL x endocitosis la celula El colesterol
endocitosis medidada x después de la
 receptores degradacion del
hepatocito es
utilizado x bilis.

Cetogenesis

Sistema q Mecanismo Enzima reguladora

actua
Hiper- (-) glucolisis
HipoGlucemia

glucemiant Glucogeno sintasa (-)GlucogenoGenesi

e s
(-)Via de Pentosas
-Glucagon (-)Lipogenesis
- (+)Lipólisis
Adrenalin Piruvato (+)GlucoNeogenesis
a dehidrogenasa (+)Glucogenolisis
-
Corticoide
Hipo- Llega al receptor, esta subunidad -Glucoquinasa (+) glucolisis
Hiperglucemia

glucemiant produce una autofosforilacion de las -Fosfo Fructo

e subunidad beta, por un cambio Quinasa I
conformacional de alfa. La beta se -Piruvato Quinasa
- Insulina auto fosforila, - Glucogeno Sintasa (+)GlucogenoGenesi
s
- NADP+ (x Ac (+)Via de Pentosas
Grasos)
- LipoProtein Lipasa (+)Lipogenesis
- (Lipasa) –OH (-)Lipólisis
- Piruvato (-)GlucoNeogenesis
Carboxilasa
- PEP carboxi
Quinasa
-Fructosa 1,6 BisP
-Glucosa 6 FostaASA
-Glucosa 6 FostaASA (-)Glucogenolisis

Insulina actua en receptores de memb. Su receptor es Glicoprot ligado a membrana. Es tretamero de 2

unidades 2 alfa (extra membrana)y 2 beta (intramemb) esta subunidades unidas entre si por puentes
disulfuro.
Cuando la insulina se fija a las subunidades alfa, estas provocan CAMBIO CONFORMACIONAL q se
transmite a subunidad Beta, y activa la “Tirosina Quinasa” q se autofosforila y CATALIZA la
FOSFOrilacion de otras prote vecinas. Como:
1. Estimula la Fosfodiesterasa de q cataliza la inactivacion de AMPc
2. produce mediadores con capacidad de (+) las FOSFATASAS y modif. La ACT de otras enzimas
 - Modifica arn y prot (x modulacion alosterica)
- Aumenta la act de glucoquinasa
- Aumenta la act de Fosfofructoquinasa
- Piruvato quinasa
- (-) piruvato Carboxilasa
- Fosfoenol piruvato carboxiquinasa
- Fructosa 1,6 bisp asa
- G-6-Fosfatasa
- X glucolisis, y via de pentosas produce mayor ACETIL CoA y NAD PH Estimula síntesis de
Ac Grasos y glicerolfosfato para TAG en ADIPOSO, HIGADO y gl mamaria.
- (-) “lipoprotein lipasa” en capilares (aumenta AC grasos en tejido. Para síntesis de TAG
lo cual Deprime la Lipólisis. Reduce Ac Grasos en circulantes

Glucagon
Se une a receptores especificos de memb (hepatocitos y higado) y provoca “adenil ciclasa” esto (+)
AMPc
La cascada d AMPc lleva a la activacion de la Fosforilasa e inhibición de la “Glocogeno sintetasa”,
tbn estimula la degradacion de TAG y activa la “Lipólisis”