Identificación Bioquímica del Microorganismo

Klebsiella Oxytocoa

Informe Nº 2

Metabolismo Bacteriano. Identificación Bioquímica de la Familia Enterobacteriaceae

Paola Castellanos Vargas. 1611650

Rachel Juliana Ordoñez Porras. 1611667
Angie Vanessa Orellano Tuta. 1611668

Presentado a: Azula Sanguino

Microbiología Ambiental
Ingeniería Biotecnológica
Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente
Universidad Francisco de Paula Santander
San José de Cúcuta
2021
 Introducción

Un concento sobre la familia Enterobacteriaceae es que es un grupo heterogéneo y extenso de

bacilos gramnegativos cuyo hábitat natural es el intestino del ser humano y de los animales; esta
familia comprende muchos géneros
(Escherichia, Shigella, Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus y otros más).
La familia Enterobacteriaceae son bacilos anaerobios o aerobios facultativos, fermentan una
amplia gama de hidratos de carbono, poseen una estructura antigénica compleja y producen
diversas toxinas y otros factores de virulencia.

Objetivos

Al realizar esta práctica nuestro objetivo es poder reconocer, determinar y analizar todas aquellas
metodologías aplicadas al microrganismo Klebsiella Oxytocoa, tanto sus reacciones en cada una
de las pruebas bioquímicas como los resultados que se dan en cada medio de cultivo, siguiendo las
gráficas como guía de ello.

Metodología General

1. Se selecciona el material 3. Se hace el montaje

2. La Bacteria a trabajar es
biológico, los equipos y correspondiente con cada
rac la KLEBSIELLA
reactivos a emplear en con rac prueba bioquímica y se
ea OXYTOCA
las muestras. ea procede a analizar.
es es
on on
ba ba
rac

cilo cilo
s s
an an
aer aer 4. Se analiza las
obi 5. Se realiza un extendido obi características sobre el
os del cultivo en una lámina os rac cultivo bacteriano.
o limpia y seca para realizar o (tamaño, color, forma,
aer tinción de Gram. aer elevación, aspectos y en
obi obi el medio en que se
os os cultivó).
fac fac
ult ult
ativ ativ
os, os,
fer fer
me me
nta
 Metodología de las pruebas Bioquímicas al Microorganismo

Klebsiella Oxytocoa

1. ÚREA:
Procedimiento: El medio fraccionado
en pico de flauta contiene urea y rojo de
fenol como indicador, el color original
del medio es amarillo (o sea ácido) La
siembra se realiza con ansa de punta
tanto en profundidad como en la
superficie. Se deja incubar 24 hs a 35º
C.

2. INDOL:
Se inocula un tubo del medio con el
asa de platino, transfiriendo una
porción del cultivo puro y se incuba a
37°C por 40 a 48 horas. Luego se
añaden 0,5 mL del reactivo de Kovac y
se agita suavemente.

3. Fermentación de Glucosa:
-Inocular por picadura con hilo de
siembra.
-Se añade parafina estéril y se incuba a
37ºc durante 24 horas
 4. Rojo de Metilo:
-Se usa el mismo caldo de enriquecimiento
para las dos pruebas (2ml), se hace la
inoculación del microorganismo, y se lleva a
incubar a 35ºC durante como mínimo 24-
72hs..
-se agregan 3 gotas del reactivo de metilo, si
en la superficie del medio aparece un color
rojo intenso

5. Voges Proskauer:

A 1 mL de cultivo añada 12 gotas (± 0,6

mL) de α- naftol al 5% en etanol y 4 gotas
(± 0,2 mL) de KOH al 40%, agite y deje
reposar por 5 a 10 minutos.

6. TSI:

Inocular los tubos de TSI con punta

(alambre recto). Para eso introducir la
punta hasta 3 a 5 mm. del fondo del
tubo. Tras retirar el alambre del fondo,
estriar el pico con un movimiento hacia
uno y otro lado. Incubar a 35° durante
24 horas. Posteriormente se debe medir
el pH de los cultivos.
 7. Citocromo Oxidasa:
Se toma una pequeña cantidad de cultivo
bacteriano de 24-48 horas de edad y se
transfiere a un trozo de papel filtro
previamente embebido en n,n-dimetil p-
fenilendiamina Prueba de oxidasa.

Imagen 1. Pruebas bioquímicas para identificación de Klebsiella oxytoca

RESULTADOS

Figura 1. Resultados de identificación de pruebas bioquímicas en Klebsiella oxytoca

NOMBRE DE LA PRUEBA RESULTADO

ÚREA POSITIVO

INDOL POSITIVO

FERMENTACIÓN DE GLUCOSA POSITIVO

ROJO DE METILO POSITIVO

VOGES PROSKAUER POSITIVO

TSI POSITIVO

CICROMO OXIDASA NEGATIVA

Comportamiento metabólico de Klebsiella oxytoca

La denominación Klebsiella oxytoca fue propuesta por Lautrop en 1956 para designar el bacillus

oxytocus perniosus que fue aislada de la leche cortada en el laboratorio Flugge .En 1909 Mac

Conkey describe 8 cepas aisladas en heces, suelo y queso, caracterizadas por la formación de

indol y por la presencia de gelatinasa

Todas las cepas estudiadas poseen las características propias de la familia Enterobacteriaceae:

tipo respiratorio aerobio-anaerobio facultativo, reducción de los nitratos, fermentación de la

glucosa, producción de catalasa y no producción de oxidasa.

Hemos obtenido un resultado positivo en todas las cepas para la producción de beta-

galactosidasa, ureasa, reacción de Voges Proskauer, producción de indol, fermentación de gas en

glucosa.
Resultados para úrea

En esta prueba se puede observar que el medio de cultivo que contiene urea y rojo de fenol como

indicador hace una reacción en la que ocurre el cambio de color, el medio de cultivo pasa de un

color amarillo a rosado, dando como resultado positivo, lo que indica que la Klebsiella oxytoca

posee la enzima ureasa logra degradar la urea, dando origen al amoníaco y bicarbonato.

Para indol

La Klebsiella oxytoca es positiva para indol, en su reacción con el reactivo de kovac hay un

cambio de color, de incoloro a violeta y también formación de anillos, esto indica la capacidad

de esta bacteria para romper el indol del aminoácido triptófano.

Para fermentación de glucosa

La bacteria Klebsiella oxytoca fermenta la glucosa, debido a que esta acidifica el medio de

cultivo y ocurre un cambio de color amarillo en el fondo del tubo.

Para rojo de metilo

Para la reacción del rojo de metilo, la bacteria K. oxytoca da un resultado positivo evidenciando

un cambio de color en el medio de cultivo, de incoloro a un rojo intenso, indicando la producción

de ácidos provenientes de la fermentación de la glucosa.

Voges proskauer
La bacteria en estudio es positiva para este reactivo, dando una coloración rosada indicando

presencia de acetoina que es producida por la fermentación de la glucosa.

Para TSI

La reacción de la Klebsiella oxytoca en el agar hierro triple azúcar ocurre por la capacidad de

esta bacteria para fermentar la glucosa, sacarosa y lactosa, y por la producción de ácido

sulfhídrico(H2S), la reacción se puede evidenciar por la producción de gas en el medio de

cultivo, lo que nos indica una reacción positiva para TSI.

Prueba citocromo oxidasa:

Para la prueba citocromo oxidasa, la Klebsiella oxytoca es negativa como muchas entero

bacterias, lo que quiere decir que no puede usar oxígeno en la producción de energía.

Medios de cultivo selectivos para Klebsiella oxytoca

Imagen 3. Crecimiento
Imagen 2. Crecimiento de
de k. oxytoca en agar
Klebsiella oxytoca en agar
Mac Conkey
sangre.
 Imagen 4. Crecimiento de Klebsiella
oxytoca en agar CLED

Imagen 5. Crecimiento de Klebsiella

oxytoca en agar Mueller-Hinton
Conclusiones

Se logró conocer con más profundidad la enterobacteria Klebsiella oxytoca, corroborando a

través de las pruebas bioquímicas la presencia de algunas enzimas que son vitales para su

identificación, para conocer aspectos como la fermentación de la glucosa y la reacción de esta

bacteria ante los diferentes reactivos ,determinando que esta enterobacteria como muchas otras

enterobacterias, es negativa para citocromo oxidasa por su incapacidad de usar el oxígeno para

producir energía por ser anaerobia facultativa ,y se caracteriza como una bacteria altamente

fermentadora empleada muchas veces para la producción de combustibles como el etanol y es

empleada en procesos de biorremediación.

Bibliografía:

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LACTAMASA SHV-1 EN KLEBSIELLA PNEUMONIAE”. Recuperado de:
https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2381/TOL73.pdf;jsessionid=5EDC576DD01
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 PRODUCCIÓN DE INDOL. Recuperado de:

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/indol.pdf

 María de los Ángeles. Pruebas bioquímicas de identificación. Recuperado de:

https://slideplayer.es/slide/27606/

 Yudy Aranguren (2014) pruebas bioquímicas básicas utilizadas en el laboratorio de

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 Klebsiella oxytoca (2020). Recuperado de: http://bioquimica-
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 MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia

clínica. Recuperado de:
https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=FYWSzy7EjR0C&oi=fnd&pg=PA1&dq=P
RUEBAS+BIOQUIMICAS+DE+KLEBSIELLA+OXYTOCA&ots=